Toll样受体4和9基因在宫颈病变的表达和意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)和Toll样受体9(TLR9)基因在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和宫颈癌组织中的表达及意义。方法采用qRT-PCR法检测正常宫颈、CIN及宫颈癌各30例组织中TLR4和TLR9基因表达水平及其下游分子NF-κB和IFN-γ表达。分析TLR4和TLR9基因表达与NF-κB和IFN-γ表达的相关性。结果CIN、宫颈癌组织的TLR4、TLR9、NF-κB和IFN-γ表达水平均高于正常宫颈(P<0.01或P<0.05),且宫颈癌组织的TLR4、TLR9、NF-κB和IFN-γ表达水平均高于CIN组织(P<0.01)。TLR4与NF-κB、IFN-γ表达呈正相关(r=0.905、r=0.873,P<0.01),TLR9与NF-κB、IFN-γ表达亦呈正相关(r=0.953、r=0.976,P<0.01)。结论 TLR4和TLR9可能参与宫颈病变的恶性转变过程。     

青心酮对小鼠动脉粥样硬化斑块中主要细胞TLR4表达的影响

目的:研究青心酮对小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块中主要细胞(平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞)Toll样受体4(TLR4)表达的影响。方法:取小鼠胸主动脉,进行平滑肌细胞、内皮细胞的原代培养,RAW264.7细胞株传代培养。实验分5组,即对照、脂多糖(LPS)、辛伐他汀和青心酮高、低剂量组。应用RT-PCR及Western-blot方法检测TLR4mRNA表达及蛋白含量。结果:青心酮高剂量组血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白含量显著低于LPS组(P<0.01)。结论:青心酮可下调LPS活化的小鼠平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,其机制可能与通过TLR4途径发挥抗炎作用有关。     

基于TLR4介导的细胞焦亡通路研究红景天苷预防心肌纤维化的作用机制

目的 探讨红景天苷对小鼠心肌纤维化和焦亡的影响及潜在的作用机制。方法 将小鼠随机分为对照组、模型组和红景天苷低、中、高剂量组，每组各10只。除对照组外，其余各组小鼠皮下注射异丙肾上腺素5 mg/（kg·d）造模。自造模之日起，红景天苷低、中、高剂量组小鼠每日灌胃红景天苷10、30、50 mg/kg，对照组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水10 mL/kg，连续14 d。末次给药后处死小鼠，以苏木素-伊红染色法观察小鼠心肌组织病理变化并计算心肌细胞横径，Masson、Sirius Red染色法观察小鼠心肌组织纤维化程度并计算心肌胶原容积分数（CVF），实时荧光定量PCR法检测小鼠心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、消皮素D(GSDMD)的mRNA表达水平，Western blot法和免疫组织化学法检测小鼠心肌组织中ColⅠ、α-SMA、TLR4、NLRP3、caspase-1、GSDMD的总蛋白表达水平及蛋白阳性细胞积分。结果 与对照组比较，模型组小鼠心肌细...     

Toll样受体4促进宫颈上皮内瘤变进展的机制研究

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、宫颈癌中的表达情况,分析TLR4与CIN及宫颈癌的相关性,并研究其对临床诊断的影响及评价。方法将2018年4月至12月期间来我院进行宫颈检查女性,随机选取正常宫颈组织6例,CIN 17例以及宫颈癌7例,检测3组TLR4阳性表达情况,分析影响其表达的相关因素。结果 TLR4在正常宫颈组织、CIN以及宫颈癌组织中的表达强度呈递增升高,差异有统计学意义(P<0.05);TLR4的表达与患者年龄及细胞分化程度无明显关系(P>0.05);与肿瘤分期和人乳头瘤病毒(HPV)感染具有明显的相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR4在正常宫颈组织、CIN、宫颈癌组织中的表达逐渐升高,TLR4的表达与HPV感染、CIN及宫颈癌发病具有相关性,能够为临床疾病的诊疗情况提供较优的参考价值。     

TLR4介导的神经炎性在甲基苯丙胺引起神经损伤中的作用

目的 探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)介导的神经炎性在甲基苯丙胺(Methamphetamine,M eth)引起神经损伤中的作用.方法 51只C57BL/6J雄性小鼠随机分为3个剂量组,分别是对照(Saline)组、低剂量Meth组(10 mg/kg·bw)和高剂量Meth组...     

氧氟沙星壳聚糖膜剂并用阿奇霉素治疗女性生殖道沙眼衣原体、解脲支原体感染的疗效观察

目的:观察氧氟沙星壳聚糖膜剂(OC膜剂)治疗女性生殖道沙眼衣原体(Ct)、解脲支原体(Uu)感染的疗效。方法:门诊治疗144例患者,试验组(A组) 5 0例OC膜剂阴道给药,并口服阿奇霉素;对照组1(B组) 4 6例红霉素片阴道用药,口服药同A组;对照组2 (C组) 4 8例,仅口服阿奇霉素。10d为一疗程,共二疗程。结果:二疗程后,A组、B组和C组Ct和/或Uu的转阴率分别为90 .0 %、73.90 %和5 0 .0 %。结论:氧氟沙星壳聚糖膜剂治疗Ct、Uu感染,疗效可靠,使用方便、经济实用。     

Toll样受体4在胎膜早破中的表达及意义

目的：探讨Toll样受体4（TLR4）在胎膜早破中的表达及意义。方法选择100例早产胎膜早破孕妇设为PPROM组,100例足月胎膜早破孕妇设为PROM组,100例足月正常孕妇作为对照组,采用免疫组织化学法检测胎膜破裂口处胎膜组织TLRs的分布与表达。结果胎膜组织中TLR4的表达, PPROM组与PROM组比较差异无统计学意义;PROM组与对照组比较差异有统计学意义;PPROM组与对照组比较差异有统计学意义。结论 Toll样受体4在胎膜早破孕妇中高表达,为胎膜早破的早期诊断提供更敏感的信号指标。     

TLR4在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用

目的:探讨Toll样小体4(TLR4)在糖尿病肾病足细胞损伤中的作用.方法:分别以TLR+/+和TLR4-/-小鼠为动物模型,检测尿蛋白/肌酐比值和血肌酐水平,透射电镜观察肾小球足细胞的形态,采用荧光实时定量PCR法测定足细胞相关标志物mRNA表达.结果:与TLR4+/+非糖尿病组相比,TLR4+/+糖尿病组小鼠尿白蛋白/尿肌酐比值明显升高,透射电镜可见足突融合现象,足突消失,足细胞相关标志物Podocin表达量明显下调;TLR4基因敲除的糖尿病小鼠较TLR4+/+糖尿病组尿白蛋白/尿肌酐比值显著下调,足细胞损伤减轻,Podocin表达量上调.结论:TLR4基因敲除可以降低糖尿病小鼠蛋白尿水平,减轻足细胞损害,这种足细胞保护作用与上调足细胞标志物Podocin的表达水平有关.     

结肠癌TLR4信号促进免疫逃逸

目的研究结肠癌Toll样受体4(TLR4)信号对机体免疫功能的影响。方法用流式细胞术检测结肠癌细胞TLR4的表达、RT-PCR检测TLR4活化对肿瘤细胞和树突状细胞(DC)的影响。结果结肠癌细胞表面存在TLR4的表达。肿瘤TLR4信号促进了结肠癌细胞分泌TNF-α和趋化因子20(CCL20)表达(P<0.05)。肿瘤TLR4信号明显增加了DC免疫抑制因子白细胞介素10和吲哚胺2,3-二加氧酶(IDO)的表达(P<0.05)。结论结肠癌TLR4信号抑制了机体的免疫功能,从而促进了肿瘤的免疫逃逸。     

青心酮对载脂蛋白E缺陷小鼠主动脉粥样硬化形成及斑块中主要细胞的TLR4表达的影响

目的观察青心酮对小鼠动脉粥样硬化（AS）斑块中平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞Toll样受体4表达（Toll-like receptor 4,TLR4）的影响,及对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样硬化病变的影响。方法取小鼠胸主动脉,进行平滑肌细胞、内皮细胞的原代培养,RAW264.7（小鼠巨噬细胞）细胞株传代培养。实验分4组：空白对照组,脂多糖（LPS）组,青心酮组,辛伐他汀组。收集各组细胞总mRNA及蛋白,应用RT-PCR及Western-blot方法检测TLR4 mRNA及蛋白。取30只8周龄雄性ApoE（-/-）小鼠,随机分成3组：模型组（n=10）,每天生理盐水灌胃;青心酮治疗组（n=10）经胃管灌注青心酮10mg·kg^-1·d^-1,辛伐他汀治疗组（n=10）经胃管灌注辛伐他汀10mg·kg^-1·d^-1。所有实验小鼠均饲以＂西方类型膳食＂饲料12周。剪取主动脉根部切片及HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况。结果1×10^-7mol·L^-1青心酮组血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4 mRNA和蛋白含量明显低于未处理组（P〈0.01）;与辛伐他汀组比较无显著性差异;青心酮组AS病灶形成减少。结论青心酮可下调LPS活化的小鼠平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,在一定程度上能减少AS病灶的形成,可能通过TLR4途径发挥其作用。     

“芩部丹”中三种单体对结核分枝杆菌作用下TLR2表达的影响

目的观察"芩部丹"中3种单体对巨噬细胞TLR2的调节作用,以探寻其抗结核的可能作用机制。方法取黄芩苷、对叶百部碱、丹参多酚酸盐单体作用于感染结核杆菌的U937单核巨噬细胞,分别采用RT-QPCR、FACS方法检测用药前后巨噬细胞表面TLR2的表达差异。结果与模型组相比,黄芩苷、对叶百部碱、丹参多酚酸盐均具有上调TLR2表达的作用。结论 "芩部丹"中3种单体抗结核作用可能通过纠正TLR2的表达而发挥作用。     

Baicalin prevents LPS-induced activation of TLR4/NF-κB p65 pathway and inflammation in mice via inhibiting the expression of CD14

Previous studies have shown that baicalin,an active ingredient of the Chinese traditional medicine Huangqin,attenuates LPS-induced inflammation by inhibiting the activation of TLR4/NF-κBp65 pathway,but how it affects this pathway is unknown.It has been shown that CD14 binds directly to LPS and plays an important role in sensitizing the cells to minute quantities of LPS via chaperoning LPS molecules to the TLR4/MD-2 signaling complex.In the present study we investigated the role of CD14 in the anti-inflammatory effects of baicalin in vitro and in vivo.Exposure to LPS(1μg/mL)induced inflammatory responses in RAW264.7 cells,evidenced by marked increases in the expression of MHC II molecules and the secretion of NO and IL-6,and by activation of MyD88/NF-κB p65 signaling pathway,as well as the expression of CD14 and TLR4.These changes were dose-dependently attenuated by pretreatment baicalin(12.5–50μM),but not by baicalin post-treatment.In RAW264.7 cells without LPS stimulation,baicalin dose-dependently inhibit the protein and mRNA expression of CD14,but not TLR4.In RAW264.7 cells with CD14 knockdown,baicalin pretreatment did not prevent inflammatory responses and activation of MyD88/NF-κB p65 pathway induced by high concentrations(1000μg/mL)of LPS.Furthermore,baicalin pretreatment also inhibited the expression of CD14 and activation of MyD88/NF-κB p65 pathway in LPS-induced hepatocyte-derived HepG2 cells and intestinal epithelial-derived HT-29 cells.In mice with intraperitoneal injection of LPS and in DSS-induced UC mice,oral administration of baicalin exerted protective effects by inhibition of CD14 expression and inflammation.Taken together,we demonstrate that baicalin pretreatment prevents LPS-induced inflammation in RAW264.7 cells in CD14-dependent manner.This study supports the therapeutic use of baicalin in preventing the progression of LPS-induced inflammatory diseases.     

Baicalin and its nanoliposomes ameliorates nonalcoholic fatty liver disease via suppression of TLR4 signaling cascade in mice

As a natural flavonoid compound, baicalin(BA)has been reported to exhibit hepatoprotective and anti-inflammatory properties. However, the characteristic of poor solubility and low bioavailability greatly limits its application. In addition, the effects and underlying mechanisms of BA in nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) remain elusive. In this study, Methionine and choline deficient diet (MCD)-induced NAFLD mice were treated with baicalin or baicalin-loaded nanoliposomes (BA-NL), then hepatic histopathological changes, biochemical parameters and inflammatory molecules were observed. We found that mice in MCD group showed significant increases in plasma transaminase, hepatocyte apoptosis, hepatic lipid accumulation, liver fibrosis, and infiltration of neutrophils and macrophages compared with control group, however, BA and BA-NL markedly attenuated MCD-induced the above changes. Besides, further analysis indicated that BA and BA-NL also inhibited the up-regulation of toll-like receptor 4 (TLR4) signal and the production of inflammatory mediators in MCD mice. Importantly, BA-NL was found to be more effective than baicalin on MCD-induced NAFLD in mice. These data suggested that BA and its nanoliposomes BA-NL could effectively protect mice against MCD-induced NAFLD, which might be mediated through inhibiting TLR4 signaling cascade.     

黄芩总黄酮对金葡菌肺感染模式识别受体TLR2/Nod2及其相关炎性因子表达的影响

目的观察黄芩总黄酮对金葡菌感染后肺脏模式识别受体TLRs和Nods及其相关炎性因子表达的作用,探讨其抗炎药理可能的作用靶点和机制。方法通过构建体外金葡菌感染鼠肺上皮细胞和体内金葡菌急性小鼠肺感染模型,利用RT-PCR技术,通过多种给药形式观察TLR2/Nod2和下游相关炎性因子的mRNA的表达,金葡菌的增殖数量,以探讨其可能的作用靶点和机制。结果黄芩总黄酮不能减少侵入到胞内的活菌数目,但可以下调由于金葡菌侵入导致的TNF-α的大量合成。金葡菌侵入后Nod2表达大幅升高,黄芩总黄酮有明显的抑制作用,并且和TNF-α的变化呈现一定的相关性。TLR2/MyD88的表达无变化。结论黄芩总黄酮的抗炎作用可能与其下调Nod2受体表达进而抑制下游炎性因子表达相关。     

TLR4在阻塞性黄疸患者肝损伤中的作用

目的通过观察阻塞性黄疸患者肝损伤程度与TLR4的相关性,探讨TLR4信号通路在阻塞性黄疸患者肝损伤中的作用。方法择期手术患者40例,梗黄组(Ⅰ组)20例,胆囊及胆管结石,有明显梗阻性黄疸及肝功能障碍,拟行胆囊切除胆总管探查手术的患者,ASAⅢ级;对照组(Ⅱ组)ASAⅠ～Ⅱ级20例肝功能正常,有胆囊及胆管结石但无梗阻性黄疸的患者,拟行胆总管探查术。两组患者均于术前1d早晨重新抽取静脉血用全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBI)等肝功能指标。术中取约3～5g肝组织保存于-20°冰箱,酶联免疫吸附法检测肝脏组织TLR4浓度。结果①两组病例一般情况比较:两组之间年龄、性别、体质量、病程方面差异无统计学意义。②Ⅰ组血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBI)明显高于Ⅱ组(P<0.01);而血浆白蛋白,白蛋白/球蛋白(A/G)明显低于Ⅱ组(P<0.05)。③ALT与肝组织TLR4的变化呈正相关(R=0.992,P<0.01)。结论梗阻性黄疸患者均存在较严重的肝功能损害,其发生机制可能与肝组织中TLR4表达增高有关。     

血清TLR2、PGE2、IL-6对自发性早产的预测价值研究

目的　探讨血清TOLL样受体2（TLR2）、前列腺素E2（PGE2）、白细胞介素-6（IL-6）对自发性早产（SPB）的预测价值。方法　收集2019年3月至2020年3月于济南市妇幼保健院产检具有早产高危因素的孕妇289例,其中有21例SPB、263例足月产、3例治疗性早产、1例晚期流产、1例失访,最终纳入284例。研究组21例（SPB）,分娩孕周（34.08±2.16）周;对照组263例（足月产）,分娩孕周（39.25±1.11）周。比较两组临床资料,行TLR2、PGE2及IL-6检测。计量资料符合正态分布,以均值±标准差（x±s）描述,采用独立样本t检验,计数资料比较采用χ²检验,采用多因素logistic回归模型分析SPB的独立预测因子,应用受试者工作特征曲线（ROC）评估血清TLR2、PGE2及IL-6对SPB的预测价值。结果　研究组血清TLR2、PGE2、IL-6水平均高于对照组（t=8.971、5.813、5.228,均P<0.05）。logistic回归分析显示,TLR2、PGE2和IL-6的比值比分别为1.590、1.714、1.501,是SPB的独立预测因子（均P<0.05）。ROC分析显示,TLR2、PGE2和IL-6预测SPB的曲线下面积分别为0.895、0.807和0.900,以IL-6的预测价值最大（灵敏度为90.48%,特异度为77.78%）。结论　血清TLR2、PGE2、IL-6均是SPB的独立预测因子,以IL-6的预测价值较高。     

HMGB1/TLR4介导狼疮性肾炎肾小球细胞增殖和细胞外基质沉积

目的探究高迁移率族蛋白1(high mobility group protein B1,HMGB1)和其受体Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)介导狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)肾小球细胞增殖和细胞外基质沉积机制。方法采用免疫组化、免疫细胞化学技术检测LN患者肾穿标本和MRL/lpr小鼠肾小球细胞中TLR4表达水平;重组HMGB1刺激人肾小球系膜细胞(human mesangial cell,HMC),运用Western blot技术检测TLR4和髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,Myd88)表达水平;LN患者置换血浆刺激HMC,采用CCK8试剂盒检测细胞增殖水平,Western blot技术检测纤连蛋白(fibronectin,FN)表达水平,ELISA技术检测HMC培养上清中FN水平。结果与对照组相比,LN患者及小鼠肾小球细胞中TLR4水平均上调;与对照组相比,重组HMGB1刺激HMC后,TLR4和Myd88水平上调;而抑制HMGB1及TLR4均可改善LN患者置换血浆介导的HMC增殖水平升高及FN合成和分泌增加(均P<0.05)。结论HMGB1可能通过激活其受体TLR4介导LN系膜细胞的增殖活性增强及细胞外基质沉积增加。