DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β表达的信号转导机制。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测细胞核因子-κB(NF-κB)活性,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果LPS刺激MH-S细胞可导致TNF-α、IL-1β mRNA、p-IκB表达增加及NF-κB活性升高。用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0mg.L-1)预处理细胞30min后再给予LPS刺激,可使TNF-α、IL-1β mRNA表达降低,并呈剂量依赖性;升高的NF-κB活性及p-IκB表达均显不同程度的抑制。单独DATS对TNF-α、IL-1β mRNA表达及NF-κB活性无影响。结论DATS可通过抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达。     

丹参酮ⅡA对EA.hy926细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926 TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;观察丹参酮ⅡA低、中、高剂量组对LPS刺激EA.hy926细胞的保护作用,RT-PCR和Western bolt法检测TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA和蛋白表达。结果 LPS刺激组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA和蛋白表达较正常组明显增加(P<0.05)。与LPS刺激组相比,丹参酮ⅡA低剂量组TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA及蛋白表达无明显差异,而丹参酮ⅡA中、高剂量组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA及蛋白质表达明显降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA抗AS的作用机制之一是通过干预TLR4/NF-κB信号通路来实现的。     

黄芪多糖通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的旨在从TLR4-NF-κB信号转导通路角度探讨黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的作用机制。方法原代培养新生大鼠心肌细胞,以LPS 1mg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度APS及IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082对肥大心肌细胞的影响。以计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液TNF-α的含量。结果 APS及BAY11-7082均能有效抑制LPS诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量降低,体积减小;并能有效减少炎症反应,表现为TLR4 mRNA表达降低,IκBα的蛋白含量升高,细胞外液中TNF-α明显减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

马鞭草苷对口腔扁平苔藓免疫反应的抑制作用及机制

目的 探讨马鞭草苷对口腔扁平苔藓（OLP）免疫反应的抑制作用及机制。方法 用脂多糖（LPS）体外刺激角质形成细胞系HaCaT细胞构建OLP炎症模型,CCK-8法检测细胞活力;实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的基因表达变化;蛋白质印迹法检测细胞中核因子-κB p65(NF-κB p65)和p-NF-κB p65蛋白的表达变化。结果 在HaCaT细胞中,LPS刺激抑制细胞活力,并诱导TNF-α、IL-1β和IL-6基因的表达上调,以及NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达上调;20 mg/L马鞭草苷作用24 h可减轻LPS诱导的HaCaT细胞损伤、抑制炎症因子的表达和NF-κB p65信号通路的活化;同时,经G蛋白偶联受体18(GRP18)抑制剂O1918预处理后,马鞭草苷的保护作用显著减弱。结论 马鞭草苷可以通过激活GPR18受体抑制NF-κB信号通路的活化,进而降低炎症因子的表达和减轻OLP口腔黏膜炎症反应。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的干预作用

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象,以阿托伐他汀钙为阳性对照,经脂多糖(LPS)诱导以复制炎症细胞模型,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量黄连素(5、10、20μmol/L)作用24 h后细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、NF-κB含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中TLR4、MyD88 mRNA的表达水平,采用Western blotting法检测细胞中TLR4、MyD88、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD206蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,LPS诱导组细胞培养液中TNF-α、IL-6、NF-κB含量,细胞中TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量以及TLR4、MyD88、iNOS蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与LPS诱导组比较,阿托伐他汀钙组和黄连素中、高剂量组TNF-α、IL-6含量,TRL4、MyD88 mRNA及其蛋白的相对表达量以及各给药组NF-κB含量和i NOS蛋白的相对表达量均显著降低,且黄连素高剂量组NF-κB含量显著低于阿托伐他汀钙组(P<0.05);阿托伐他汀钙组和黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量均显著升高,且黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量显著高于阿托伐他汀钙组(P<0.05)。结论:不同剂量的黄连素均可不同程度地干预小鼠巨噬细胞极化,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

丹参酮ⅡA对TNF-α诱导的ECV304细胞NF-κB、IκB-α表达及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞株ECV304NF-κB、IκB-α及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响,以阐明其抗动脉粥样硬化作用及机制。方法通过建立TNF-α诱导的ECV-304细胞损伤模型,以抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)做为对照,间接细胞ELISA方法定量检测NF-κB、IκB-α的表达,RT-PCR方法检测各组细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达。结果TNF-α可增加ECV304细胞转录因子NF-κB的表达,同时降低其抑制因子IκB-α的表达,低浓度的丹参酮ⅡA对TNF-α引起的ECV304细胞NF-κB的表达升高无明显抑制作用,但可增加其IκB-α的表达;高浓度的丹参酮ⅡA可明显抑制NF-κB的表达,同时增加其抑制因子IκB-α的表达。同时丹参酮ⅡA抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表达。结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子NF-κB的激活及其相关粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达,这有利于抑制动脉粥样硬化过程中的炎症从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

巨噬细胞移动抑制因子siRNA对肺泡上皮细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子siRNA对脂多糖刺激的肺泡上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号转导通路的影响和作用机制.方法:用LPS刺激A549细胞,脂质体法分别将巨噬细胞移动抑制因子(MIF) siRNA和非特异性siRNA加入A549细胞进行干预.RTPCR法检测MIF和TLR2、TLR4 mRNA的表达,Western Blot法分析TLR下游信号转导通路元件髓样分化因子88 (MyD88)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NF-κB核迁移,ELISA法测定细胞培养上清炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6,免疫介质IFN-β分泌水平.结果:MIF siRNA对LPS刺激诱导的MIF和TLR2、TLR4 mRNA高表达有显著的下调作用和部分阻断NF-κB(p65)核迁移.LPS刺激诱导后,MIF siRNA显著降低MyD88蛋白表达和炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平,但MIF siRNA对IRF3蛋白表达和免疫介质IFN-β分泌水平无影响.结论:MIF siRNA能抑制A549细胞的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6过度分泌,其机制可能是MIF siRNA降低了LPS刺激A549细胞诱导的MIF和TLR2、TLR4高表达,及阻断TLR下游信号转导通路元件MyD88和NF-κB核迁移.     

丹参酮II-A通过调控TLR4/IκBα/NFκB信号通路抑制LPS诱导的细胞炎症

目的建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,探究丹参酮II-A(Tan IIA)的抗炎活性及其机制。方法CCK-8法测定Tan IIA对细胞活力的影响;迁移小室测定Tan IIA对LPS诱导细胞迁移能力作用;ELISA法测定细胞上清液中小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、IL^-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量;Western blot法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)、MMP-9、Toll样受体-4(TLR4)、IκB-α、p-IκB-α、NFκB和p-NFκB蛋白的表达。结果Tan IIA对LPS诱导的RAW264.7细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL^-1β和MCP-1的分泌有明显的抑制作用;明显下调MMP-2、MMP-9、TLR4、p-IκB-α和p-NFκB的蛋白的表达,抑制IκB-α磷酸化和NFκB的入核和活化。结论Tan IIA可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达以及TLR4/κB-α/NF-κB信号通路,调控TNF-α、IL-6、IL^-1β等炎症因子的释放而发挥抗炎活性。     

黄芪甲苷通过抑制NF-κB活化减轻棕榈酸诱导脂肪细胞炎症因子的表达

目的探讨黄芪甲苷对棕榈酸诱导脂肪细胞炎症因子分泌的作用及其机制。方法 3T3-L1脂肪细胞分为空白对照组、模型组、黄芪甲苷组。黄芪甲苷(100μmol·L~(-1))预孵育3T3-L1脂肪细胞4 h后,再用500μmol·L~(-1)的棕榈酸处理24 h。Real-time PCR测定炎症因子IL-6和TNF-αmRNA的相对表达量;ELISA法测定细胞培养上清液中IL-6和TNF-α的分泌量,Western blot测定IκBα和p-IκBα蛋白的相对表达量;免疫荧光检测NF-κB的核转位。结果与空白组相比,棕榈酸可使脂肪细胞炎症因子IL-6、TNF-α的mRNA和蛋白表达增加。黄芪甲苷可缓解棕榈酸诱导的炎症因子表达升高。免疫印迹检测发现黄芪甲苷降低IκBα表达,增加IκBα的磷酸化;免疫荧光发现黄芪甲苷可降低棕榈酸诱导的NF-κB核转位。结论黄芪甲苷可降低棕榈酸诱导脂肪细胞炎症因子的表达,其机制与降低细胞内NF-κB的激活有关。     

柴胡陷胸汤含药血清对高脂血清致人脐静脉内皮细胞损伤的影响及机制

目的 探究柴胡陷胸汤含药血清对高脂血清致人脐静脉内皮细胞ECV304损伤的影响及机制。方法 制备高脂血清和柴胡陷胸汤含药血清。以高脂血清诱导ECV304细胞损伤,并以低、中、高浓度（3.47、6.94、13.88 g/kg,以生药量计）的柴胡陷胸汤含药血清进行干预,检测各组细胞增殖率和细胞上清液中相关炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)]、血管内皮功能指标[内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、一氧化氮（NO）、内皮素1(ET-1)]水平,检测细胞中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达水平以及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表达水平和磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB p65比值。结果 与对照组比较,模型组细胞增殖率,TNF-α、IL-6、ET-1水平,ICAM-1 mRNA表达水平,TLR4、p-IκBα蛋白表达水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均显著升高（P<0.05）,e NOS、NO水平,TGF...     

黄芪抗脂质过氧化作用的研究

目的:探讨黄芪抗脂质过氧化作用.方法:实验小鼠给予黄芪浓缩液后,检测肝匀浆、脑匀浆、血清中过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、硒(Se)的含量变化,心肌组织中脂褐素的含量变化.结果:黄芪对小鼠肝匀浆、脑匀浆中脂质体外生成以及对小鼠血清中LPO水平、心肌脂褐素含量有显著抑制作用(P＜0.05).而对SOD活性有明显的激活作用(P＜0.05).并能增强机体组织中硒含量.结论:黄芪能阻止自由基引起的过氧化反应,减少自由基对生物膜的损害,因而具有抗衰老作用.     

黄芪注射液佐治小儿病毒性心肌炎疗效观察

目的：观察黄芪注射液佐治小儿病毒性心肌炎的临床疗效。方法：80例患儿随机分为对照组和治疗组,治疗组在对照组基础上加用黄芪注射液,观察治疗前后症状、体征、心电图、心肌酶谱和肌钙蛋白I的变化。结果：与对照组比较,治疗组心肌酶谱、肌钙蛋白I降低更明显（P〈0．01）,心电图恢复更快（P〈0．05）。结论：黄芪注射液结合传统治疗药物治疗小儿病毒性心肌炎安全有效。     

黄芪注射液辅助治疗小儿肺炎支原体肺炎疗效观察

目的：观察黄芪注射液辅助治疗小儿肺炎支原体肺炎的疗效。方法：将120例小儿肺炎支原体肺炎患儿随机分为两组,对照组60例采用常规阿奇霉素治疗,治疗组在常规阿奇霉素治疗基础上加用黄芪注射液静脉滴注,疗程为2周。观察两组患儿在治疗过程中的症状、体征、胸片及不良反应情况,比较两组的疗效。结果：治疗组和对照组的总有效率分别为96.67%和83.33%,治疗组疗效优于对照组（P〈0.05）;治疗组退热时间、咳嗽、肺部体征持续时间及X线阴影消失时间、住院时间均较对照组明显缩短（P〈0.05）。结论：黄芪注射液辅助治疗小儿肺炎支原体肺炎,临床症状、体征消失快,治愈率高,疗效显著。     

Effect of Astragali radix extract on lipopolysaccharide-induced inflammation in human amnion

The effects of Astragali radix extract on interleukin (IL)-6 and tumor necrosis factor (TNF)-alpha productions, prostaglandin E2 (PGE2) biosynthesis, and leukotriene C4 (LTC4) production from lipopolysaccharide (LPS)-stimulated human amnion cells were investigated. Amnion cells produced detectable amounts of both IL-6 and TNF-alpha under LPS-stimulated conditions. Astragalus extract inhibited the production of IL-6. However, TNF-alpha production was not inhibited by the extract on L929 cytotoxicity assay. Treatment of amnion cells with LPS for up to 24 h resulted in an increase in PGE2 release in a concentration- and time-dependent manner. The extract (150 mg/ml) significantly inhibited the output of PGE2 by amnion cells (p<0.01). The arachidonate lipoxygenase metabolite (LTC4) was increased by LPS treatment of amnion cells. Astragalus extract (30 mg/ml) inhibited LTC4 production by approximately 65% throughout the culture period. These results suggest that Astragali radix extract may have a role in inhibiting bacterial infection-associated preterm labor by suppressing the productions of IL-6, PGE2, and LTC4 by human amnion cells.     

中西医结合治疗慢性肾炎41例疗效观察

目的通过中西医结合的治疗方法,探讨黄芪与丹参注射液在治疗慢性肾炎中的疗效。方法将住院治疗的慢性肾炎患者79例,随机分为观察组41例和对照组38例。对照组采用常规对症治疗,观察组在对照组治疗基础上加用黄芪注射液与丹参注射液静脉滴注,观察2组病例的尿蛋白、血浆白蛋白、肾功能（BUN、Scr）的变化。结果观察组的尿蛋白与血浆白蛋白的变化与对照组比较有明显改善（P〈0．01）;观察组总有效率87．80％显著高于对照组的65．79％,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论黄芪与丹参注射液治疗慢性肾炎有其独特的理论基础和实用价值,对减少蛋白尿的发生、提高血浆白蛋白、改善肾脏功能,具有较好的疗效,且无不良反应,临床使用安全。     

中药黄芪辅治小儿病毒性心肌炎临床研究

目的:观察中药黄芪辅治小儿病毒性心肌炎的临床疗效.方法:50例患儿随机分为对照组和治疗组,观察治疗前后临床症状、体征、左室射血(LVEF)、心电图,心肌酶CK-mB、肌钙蛋白I(cTnI)、病毒抗体及免疫功能的变化.结果:与对照组比较,治疗组患儿CK-mB、cTnI降低更明显(P＜0.01),心电图恢复更快(P＜0.05),心功能改善显著,病毒抗体转阴明显(P＜0.05),T淋巴细胞亚群CD3、CD4/CD8较对照组明显升高(P＜0.05),CD8较对照组降低(P＜0.05),血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)较对照组明显升高(P＜0.05).结论:中药黄芪结合传统治疗药物治疗小儿病毒性心肌炎疗效显著,值得临床推广.     

黄芪药材HPLC特征图谱研究(2)黄酮类成分

目的:建立黄芪中黄酮类成分的HPLC、UPLC特征图谱。方法:优化HPLC液相条件确定特征性成分,以HPLC为基础实现HPLC、UPLC条件转换。结果:5个特征性成分在HPLC及UPLC条件下均分离良好。结论:本方法简便易行,所选特征性成分可用于黄芪中黄酮类成分的检查。     

黄芪降低糖尿病大鼠心肌黏附分子表达并保护心肌细胞超微结构

目的观察黄芪对糖尿病大鼠心肌细胞间黏附分子(ICAM)-1、血管黏附分子(VCAM)-1表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型。实验分正常对照组(n=8)、糖尿病对照组(n=11)、黄芪组(n=11,4.2g·kg-1·d-1),用药8周。测血糖、体重、糖化血红蛋白(HbA1c)、心脏重量;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化;免疫组织化学检测心肌ICAM-1、VCAM-1表达,图像分析软件对其结果进行半定量分析。结果糖尿病组心重指数明显高于正常组(P<0.05);与糖尿病组比较,黄芪组心重指数下降(P<0.05)。正常组大鼠心肌细胞器完好;糖尿病组心肌细胞内线粒体水肿、肌原纤维溶解、肌浆网扩张、肌纤维间水肿等变化;黄芪组大鼠心肌细胞肌原纤维排列整齐,肌节较完整,线粒体量多,偶见肌原纤维断裂及线粒体肿胀。免疫组织化学显示:与正常组比较,糖尿病组心肌ICAM-1、VCAM-1强着色(P<0.05),胞质均呈棕黄色颗粒强,心肌组织间微动脉壁、毛细血管基底膜有棕黄色物质沉积;而黄芪组呈中等度染色,毛细血管基底膜着色,ICAM-1、VCAM-1表达明显下降(P<0.05)。结论黄芪降低糖尿病大鼠心肌ICAM-1、VCAM-1表达,同时保护糖尿病心肌细胞超微结构。     

黄芪活性成分对膜损伤的防护作用

目的　了解黄芪活性成分对人体细胞膜损伤的防护作用。方法　采用 2种活性氧产生体系诱发膜脂质过氧化为实验模型 ,观察了黄芪活性提取成分对膜脂质过氧化作用的防护效能。结果　黄芪活性提取成分对多种自由基均有良好的清除作用 ,其中黄芪总黄酮和黄芪总皂甙的作用最佳。结论　黄芪的活性成分对氧自由基造成的细胞膜损伤具有明显的防护作用。     

参附对脐静脉内皮细胞Toll样受体4/NF-κB途径的影响

目的观察参附注射液对内毒素介导的人脐静脉细胞Toll样受体4/NF-κB途径及细胞间黏附分子、E-选择素表达的影响。方法健康产妇分娩后的新鲜婴儿脐带,应用胶原酶消化,收集内皮细胞进行培养。实验分为对照组、内毒素组、内毒素+参附组。对照组:M199培养基中不加任何物质。内毒素组:M199培养基中加入脂多糖1 mg/L。内毒素+参附组:预先加入参附注射液10 mL/L,30 min后加入脂多糖1 mg/L。干预1h收集细胞,提取核蛋白测定NF-κB活性,干预12 h后收集细胞检测Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平。结果内毒素组的Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平、NF-κB活性均显著高于对照组,内毒素+参附组的Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平、NF-κB活性均明显低于内毒素组。结论参附注射液可以通过抑制NF-κB活化,减弱Toll样受体4/NF-κB途径,抑制了脂多糖介导的黏附分子表达,从而减轻机体的炎症反应。