荧光PCR检测副溶血性弧菌

[目的]建立荧光PCR检测副溶血性弧菌的快速方法。[方法]根据基因库公布的副溶血性弧菌的耐热直接溶血素基因（TDH）的保守序列,设计一对引物,用FAM荧光剂标记探针的5＇,进行特异性和灵敏性分析,使用于食物中毒样品的快速检测。[结果]检测灵敏度为170.8fg/μl,菌液的灵敏度为30~70cfu/ml。用此反应体系检测53株副溶血性弧菌均出现特异的荧光信号,未见与其它试验种属细菌交叉。对3起食物中毒样品45份用荧光PCR法和国标法检测副溶血性弧菌,荧光PCR检测阳性22份,国标法阳性20份。荧光PCR检测从样品处理到结果只需8h。[结论]荧光PCR检测副溶血性弧菌灵敏度高、特异性强、简便快速,可用于副溶血性弧菌引起食物中毒的快速诊断和海产品副溶血性弧菌的快速检测。     

TaqMan-实时荧光PCR快速检测副溶血性弧菌

[目的]建立TaqMan-实时荧光PCR快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)的方法,用于食物中毒快速诊断和食品中VP的污染状况调查。[方法]根据GenBank公布的VP tdh基因序列,设计引物和探针,建立TaqMan-实时荧光PCR快速检测体系,应用于食品中VP检测。[结果]TaqMan-实时荧光PCR快速检测体系灵敏度为1.3×104cfu/ml(33 cfu/PCR反应体系),特异性好,无交叉反应。[结论]TaqMan-实时荧光PCR检测体系灵敏度高,特异性强,能提高VP的检出率和准确性,可应用于VP食品污染状况调查和食物中毒的快速诊断。     

食物中毒中副溶血性弧菌和沙门菌双重荧光PCR检测方法的建立

目的建立双重荧光PCR用于检测食物中毒中副溶血性弧菌和沙门菌。方法设计特异性引物和探针用于扩增副溶血性弧菌tlh基因和沙门菌invA基因(invA),采用倍比稀释法检测方法的DNA灵敏度和菌液灵敏度,采用9株其他肠道致病菌验证方法的特异性。结果两种病原菌DNA检测灵敏度分别为65 fg/PCR和56 fg/PCR体系,菌液检测灵敏度分别为11 cfu/ml和9 cfu/ml,特异度100%。用建立的方法对4起食物中毒进行检测,共检出副溶血性弧菌15株和沙门菌8株。结论该方法高效并具有很高的灵敏性和特异性,在副溶血性弧菌和沙门菌引起的食物中毒的快速检测中具有广阔的应用前景。     

基于toxR基因的PCR检测副溶血性弧菌的方法建立

目的建立基于toxR基因的PCR检测副溶血弧菌的方法,并通过实验条件摸索,优化反应体系条件,验证PCR方法检测副溶血弧菌的优势。方法应用基于toxR基因的环引物PCR法和已报道的PCR法对副溶血性弧菌和食品样品进行检测,并优化反应条件。对两种检测方法的灵敏度、特异度和检测时间进行比较。结果环引物PCR法可以使副溶血性弧菌扩增出大小180 bp的toxR基因片段,两种方法检测副溶血性弧菌的特异度均为100%,检出限分别为4×103CFU/mL和5×104CFU/mL,检测所需时间分别为2 h 50 min和3 h10 min。结论基于toxR基因的环引物PCR法检测副溶血性弧菌的特异性更强,检出限更低,检测所需时间更短,能够较好地满足卫生防疫机构快速检测副溶血性弧菌的需要。     

TaqMan探针双重荧光PCR法检测副溶血性弧菌毒力基因

目的建立同时检测副溶血性弧菌毒力基因tdh和trh的双重荧光PCR方法。方法筛选副溶血性弧菌tdh和trh毒力基因的特异性引物和探针,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度实验,并对本实验室保存的54株副溶血性弧菌进行tdh、trh毒力基因的检测,以了解不同来源的副溶血性弧菌携带毒力基因的状况。结果建立的双重荧光PCR方法特异度强(100%),最低检测浓度达到20 cfu/ml,对本实验室保存的副溶血性弧菌进行毒力基因的检测结果显示,从临床分离的10株副溶血性弧菌和海产品样品中分离的1株副溶血性弧菌均为tdh扩增阳性,trh扩增阴性。结论所建立的方法特异性好,灵敏度高,适用于副溶血性弧菌的毒力基因检测。     

多重荧光定量PCR同时检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的方法研究

目的:利用多重荧光定量PCR技术检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌。方法:以溶藻弧菌等17种相关试验菌株做特异性检测;并将标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。结果:与传统的检测方法相比,该方法有很好的特异性且灵敏度高,检测时间短并可节省人力,具有快速方便等优点。结论:适用于样品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的快速检测。检测限分别为:霍乱弧菌为280 cfu/ml;副溶血性弧菌为:100 cfu/ml;创伤弧菌为:450 cfu/ml。     

Taqman MGB探针实时PCR快速检测副溶血性弧菌

[目的]建立一种对食品中副溶血性弧菌的快速检测方法。[方法]根据GenBank公布的副溶血性弧菌的toxR基因的保守序列,设计1对引物和Taqman MGB探针,建立基于Taqman MGB探针的实时PCR快速检测副溶血性弧菌方法。[结果]通过对20种细菌的DNA进行扩增,结果6株副溶血性弧菌均可产生特异性扩增,与其他细菌无交叉反应;对纯菌而言,菌液灵敏度为23／ml,DNA浓度为130Pg。定量关系式为：y=3．353151Ln（x）＋43．797989,R^2=0．947952。67份冷冻海产品中2份副溶血性弧菌实时PCR检测结果阳性,相对应的有1份样品副溶血性弧菌培养阳性,检测时间仅需2h。[结论]该反应体系具有高度的灵敏度和极高的特异性,可用于食品和食物中毒样品中副溶血性弧菌的快速检测。     

双重PCR检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因方法建立与初步应用

目的 建立同时检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因的双重聚合酶链式反应(PCR)法. 方法 根据副溶血性弧菌的tlh、tdh基因序列设计引物,进行PCR扩增及电泳检测.同时优化反应体系,测定稳定性、重复性、特异性及灵敏度. 结果 本实验设计的引物能特异性地扩增副溶血性弧菌的450、269 bp的片段,而对其它种类的菌物无特异性扩增,结果表明该方法特异性好,双重PCR检测灵敏度为100 cfu/ml.并进行了肛门拭子样品的检测. 结论 初步建立能在8h内快速、灵敏、特异地检出副溶血性弧菌毒力菌株的双重PCR技术.     

3种食源性致病菌的多重PCR检测方法研究

目的建立一种快速、经济、实用的多重PCR方法,期望能同时检测3种常见致病菌。方法根据沙门氏菌的侵袭蛋白A（invasion protein A,invA）、志贺氏菌的侵袭性质粒抗原H基因（invasion plasmid antigen,ipaH）、副溶血性弧菌的不耐热肠毒素基因（thermolabile hemolysin,tlh）分别设计了3对引物,预计PCR扩增的目的片段依次为284、450、606bp。对单个基因PCR和单管多重PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立快速检测沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌的单管多重PCR方法。结果含沙门氏菌：42cfu/g,志贺氏菌：36cfu/g,副溶血性弧菌：116cfu/g的肉陷样品经过增菌、DNA提取、扩增、电泳,在16～18h内应用多重PCR体系能够检出。通过对10株目的菌和15株非目的菌检测,提示该体系特异性高。结论初步建立能快速,灵敏,特异地检测沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌的多重PCR体系,可以作为食物中毒病原菌检测的有效方法。     

水体污染中常见致病菌的多重PCR分子检测研究

[目的]建立同时检测沙门氏菌、志贺氏菌、绿脓杆菌、肠出血型大肠杆菌和副溶血弧菌等5种水体常见致病菌的多重PCR检测技术,为这些致病菌感染的快速诊断提供实验依据。[方法]筛选设计5对特异引物,建立优化的多重PCR扩增体系和条件。[结果]对5种致病菌的检测,多重PCR灵敏度分别为：肠出血型大肠杆菌O157102 cfu、志贺氏菌102 cfu、副溶血弧菌102 cfu、绿脓杆菌101 cfu、沙门氏菌102 cfu。应用于人工污染水样及天然水样的检测,均有清晰、特异的预期条带产生,并与传统检测结果一致,每个样品所需时间为6～8 h,相对于传统检测方法,极大地缩短了检测时间,提高了检测灵敏度。[结论]该方法适用于大通量样品的检测研究,可推广应用于食品检测、环境监测等领域。     

实验教学对药学专业学生综合成绩影响的调查分析

[目的]分析实验教学因素对药学专业学生综合成绩的影响,为指导实验教学、提高授课质量提供理论依据.[方法]运用自行设计的问卷对药学专业本科学生进行调查,用结构方程模型方法估计各因子间的相互关系.[结果]学习兴趣因子对学生综合成绩有显著影响,其他因子与综合成绩相关性均不显著.[结论]内在学习动机是影响学生综合成绩的关键因素,外部学习环境对其成绩影响不显著.     

皮肤点刺试验在变应性鼻炎中的诊断价值

[目的]探讨皮肤点刺试验在变应性鼻炎中的诊断价值.[方法]用丹麦ALK公司的安脱达点刺液进行皮肤点剌1 884例性变应性鼻炎的病人.[结果]1 437例病人皮肤点刺试验呈阳性,其阳性率达77.93%.[结论]皮肤点剌试验在变应性鼻炎中具有重要诊断价值.     

重庆市主要交通干道机动车尾气污染状况

目的：探讨重庆市机动车尾气污染状况,为研究其对人群健康的影响提供依据.方法：测定重庆市主要交通干道空气中铅含量、苯并（a）芘[B（a）P]浓度、总悬浮颗粒、PM10、PM2.5和PM1浓度并进行相关分析.结果：重庆市各主要交通干道尾气污染物浓度均超过国家环境卫生标准.结论：该市应采取措施控制机动车尾气污染环境.     

离不开男人的女VS让男人离不的女人

做情感咨询,越来越觉得,大部分女人不幸和痛苦的根源,说穿了,就是离不开男人.她们跟我抱怨那个男人如何如何之花心如何如何之冷酷如何如何之无情,而她们对他又是如何如何之情真意切如何如何之义薄云天如何如何之恩重如山,等她们诉说完了,问我怎么办的时候,我往往会说,既然这样,就分手吧.离开-个不爱你的对你不好的冷酷残忍的坏男人总不是坏事啊.她们听了,就会泪落连珠子,说:可是我离不开他!     

运动对骨密度的影响分析

[目的]研究运动对身体成分和骨密度的影响。[方法]随机选取体育专业并有规律运动学生50名为运动组,非体育专业并无规律运动学生50名为对照组,检测研究对象身体成分和骨密度相关指标值。[结果]性别和运动分别是影响BMI、体脂百分比、腰臀比、骨强度值、t值和Z值的因素。并且运动对体脂百分比和骨密度各指标影响差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]有规律的运动对人体骨密度有一定的影响,并起到积极作用。     

娱乐活动对大学生生命价值观影响的研究

[目的]研究娱乐活动对大学生生命价值观的影响。[方法]采用生命价值观测验工具和调查问卷对在校本科学生进行调查,通过Logistic回归分析娱乐活动对大学生生命价值观的影响。[结果](1)男生更偏爱于动作类电影、冒险类电影、恐怖类电影、动作格斗类游戏、竞技类游戏、时政类电视节目、体育类电视节目,女生则更倾偏爱于剧情类电影,娱乐类电视节目、情感访谈类电视节目、综艺类电视节目和电视剧,且差异有统计学意义。(2)在针对男性大学生的Logistic分析中,恐怖影片(β=0.865)、格斗类电子游戏(β=1.271)纳入回归方程;在针对女性大学生的Logistic分析中,未有娱乐活动纳入方程。[结论]娱乐活动对男女大学生生命价值观形成的影响不同,观看恐怖影片有助于男大学生构建积极的生命价值观,而格斗类电子游戏则产生消极的影响,各类娱乐活动对女性大学生影响均不明显。     

腹腔镜胆囊切除术硬膜外阻滞复合静脉全麻效果分析

目的探讨硬膜外阻滞复合全麻用于腹腔镜胆囊切除手术的可行性、安全性,以及与插管全麻对比,麻醉诱导前、后,气腹时,苏醒时病人的血液动力学变化。方法50例腹腔镜胆囊切除手术病人,随机分为A组(硬膜外阻滞复合静脉全麻组)、B组(插管全麻组),记录诱导前、后,气腹即时,气腹后10min,术中及苏醒时HR、MAB、SPO2。结果①SPO2变化无显著性差异(p>0.05)。②HR、MAP变化a、与麻醉诱导前比较,诱导后明显下降,有显著性差异(p<0.05),与诱导前比较,气腹时,明显升高,有显著性差异(p<0.05)而组间无显著性差异。b、苏醒前,与A组比较,B组明显升高,有显著性差异(p<0.05)。结论硬膜阻滞复合静脉全麻用于腹腔镜胆囊切除手术更有利于血液动力学的稳定,是安全的,可行的。     

紫菜粉对小鼠肠道排便功能的影响

目的研究不同紫菜粉含量的饲料的润肠通便、抑制肠道有害菌以及对粪便挥发性成分的影响。方法以小鼠为实验对象,随机分为空白组、低、高剂量3组,给予含不同紫菜粉的配合饲料30d,测小鼠体重、粪便持水量、粒数、重量、排首黑便时间、pH、大肠杆菌含量以及挥发性成分。结果在连续喂食30d后,紫菜组小鼠粪便持水量、排便粒数、重量都显著增加(P<0.05),首黑便时间缩短,其中以5%的喂食量效果较好。另外,粪便pH值随紫菜添加量的增加而升高,大肠杆菌的含量也呈浓度趋势减少,包括醇类、酚类、烃类、酮类等的挥发性臭气化合物含量下降,同样以5%的功效较好。结论动物实验表明紫菜粉中的膳食纤维具有通便、改善肠道功能和减少粪便臭味的作用。     

牛磺酸防治酒精性脂肪肝作用机制的探讨

[目的]研究牛磺酸防治酒精性脂肪肝的作用机制。[方法]将小鼠随机分为5组,包括正常对照组、酒精性脂肪肝模型组、牛磺酸高中低3个剂量组。30d后分别检测肝脏中脂褐质LF、血清MDA、SOD以及GSH-Px等指标。[结果]牛磺酸能显著降低小鼠血清MDA和肝脏中脂褐质LF的含量,并增强血清中SOD以及GSH-PX的活性。[结论]牛磺酸可能通过抗氧化的途径来减轻酒精性脂肪对小鼠的损伤。     

双岐杆菌活菌液对肠道菌群调节效果的研究

[目的]研究双岐杆菌活菌液调节肠道菌群的效果.[方法]通过动物实验和人体试验检测肠道菌群.[结果]双岐杆菌活菌液能增殖人体内双歧杆菌数量;在高剂量时,双歧杆菌活菌液能使动物体内的乳杆菌增殖,在中、高剂量时,能使动物体内的双歧杆菌增殖.采用双歧杆菌和肠杆菌的比值(B/E)作为指标进行分析发现,该制品可提高人体肠道微生物的定植抗力(P<0.01).[结论]所检双岐杆菌活菌液对肠道菌群有较好的调节效果.