华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

华支睾吸虫成虫抗原纯化及鉴定

用葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析法、三氯醋酸-乙醇提取物DEAE-Cellulose(DE52)柱层析法、尿素提取物Sepharose 4B柱层析法对华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行部分纯化,获得8种不同的抗原活性组分.并用免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)、薄层等电聚焦电泳、微板法动力学酶联免疫吸附试验进行鉴定.认为经纯化的抗原组分较粗抗原更适宜于临床诊断及考核疗效     

华支睾吸虫抗原纯化研究现况

随着华支睾吸虫防治工作的进展 ,其患病率及感染率逐步下降 ,而诊断的难度渐趋加大 ,原主要诊断方法——粪检固有的缺陷 (工作量大 ,工作效率低 ,易漏检 ,群众不乐意接受 )愈加突出 ,免疫诊断在临床辅助诊断和疫区流行病学调查中占据愈来愈重要的地位。诊断抗原的优劣决定着血清抗体检测、皮肤试验等免疫方法的诊断效果。目前所用的抗原主要为粗制成虫抗原 ,严重影响免疫诊断效果 ( 1)。因此 ,已有不少学者用不同方法对华支睾吸虫成虫粗抗原进行纯化研究。现按不同的研究方法综述如下。1　饱和硫酸铵沉淀法　　张夏英等( 2 ) 用 2 5%、50 %…     

华支睾吸虫模拟抗原表位的筛选和鉴定

目的从噬菌体12肽库中筛选华支睾吸虫模拟抗原表位。方法应用噬菌体随机12肽库亲和筛选华支睾吸虫病患者混合血清IgG,经过3轮的淘筛,随机挑取蓝色噬菌斑进行扩增,以ELISA检测其免疫活性,挑选免疫活性较高的克隆进行序列分析及免疫学鉴定。结果8个阳性克隆测得6个DNA序列,Western-bloting显示6个单克隆噬菌体均可与华支睾吸虫患者血清反应,斑点免疫金银染色法有3个克隆可被华支睾吸虫患者血清识别。结论应用噬菌体肽库筛选技术可以获得华支睾吸虫模拟抗原表位。     

华支睾吸虫尿素溶解性抗原的临床应用

采用ＥＬＩＳＡ法，以华支睾吸虫成虫尿素溶解性抗原（ＵＳＡ）和该虫水溶性抗原（ＡＳＡ）检测９８份华支睾吸虫病人血清，阳性率分别为９２．８６％和９４．９８％。用这两种抗原检测日本血吸虫病人血清，假阳性率分别为１１．１１％和３３．３３％，肺吸虫病人血清的阳性率分别为０和２０％。结果表明，ＵＳＡ有与ＡＳＡ相似的敏感性，但特异性显著高于后者，具有更好的实用价值。     

华支睾吸虫成虫三种抗原的免疫学特性比较

对华支睾吸虫成虫代谢抗原(MA)、成虫盐水浸液抗原(SEA)和全虫抗原(AA)的免疫学特性进行了比较研究,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)提示三种抗原在分子量22～128KD的位置上有一些分子量相等的多肽成分。免疫扩散(ID)和免疫电泳(IE)结果表明,MA,SEA和AA有迁移带相等的沉淀带,进一步证实三种抗原有相同的抗原成分,MA的免疫性成分比SEA多。SPA-酶联免疫吸附试验(SPA-ELISA)显示MA与AA血清学敏感性差异有显著性(P<0.05),而与SEA比较则差异无显著性(P>0.05)。     

华支睾吸虫的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜对华支睾吸虫体表微细结构、感觉器的类型和分布等进行了观察。其中发现腹吸盘腔的底部有互相连接比较粗大的枝状物以及具纤毛的环状乳突和无纤毛的扁平乳突,这些都是过去文献未见报道过的。     

华支睾吸虫cDNA表达文库的构建及初步筛选

目的　构建华支睾吸虫cDNA表达文库 ,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。　方法　提取华支睾吸虫总RNA ;用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒操作方法 ,进行反转录合成双链cDNA ;PCR产物纯化后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,回收 0 .4～ 4kb的组分 ,并与λTriplEx2载体连接、体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度及鉴定。　结果　未扩增文库滴度达 7.5× 10 7pfu/ml ,扩增文库滴度达 2 .7× 10 8pfu/ml ;用载体两端的引物进行PCR鉴定 ,显示 :所选噬菌体中均含有重组的cDNA ,大小在 5 0 0bp以上。　结论　已成功地获得一高质量的华支睾吸虫cD NA表达文库     

恒河猴感染华支睾吸虫的初步观察

用恒河猴感染华支睾吸虫获得成功。两只恒河猴获虫率分别为9.9％及31.59％。所得虫体都已发育成熟。感染后30天所得虫体平均长5.15mm,宽1.005mm。感染后48天所得虫体平均长8.0625mm,宽1.34mm。两猴粪便中都发现成熟虫卵。说明恒河猴可作为华支睾吸虫的终宿主。‘ 猴华支睾吸虫病早期表现主要特点有三:嗜酸性粒细胞增多症(感染后30天);慢性炎症时(感染后48天)病灶区内浆细胞显著增多;肝内胆管上皮细胞腺瘤样增生,其分泌功能亢进,经奥辛蓝染色,上皮细胞核上区呈深蓝色,提示富含酸性粘多糖。     

华支睾吸虫感染情况调查

目的 :分析肝吸虫的感染情况 ,为肝吸虫的防治提供依据。方法 :皮试法、直接涂片便检法。结果 :皮试法阳性率为 5 6.87% ,男女无显著性差异 ;便检法感染率为 68% ,男女感染率无显著性差异。结论 :吃生鱼是引起该地肝吸虫感染的主要原因 ,今后要加强肝吸虫病的宣传与治疗 ,改善不良饮食习惯     

华支睾吸虫致胆囊结石1例

华支睾吸虫又称肝吸虫,为可感染人和犬、猫等多种动物．肝吸虫病为人兽共患寄生虫病,肝吸虫常寄生于肝胆管内,引起肝胆组织的病理变化,临床上可表现为胆管炎、胆囊炎、胆石症和儿童发育障碍,重者可发生肝硬化,亦可诱发肝癌．目前中国除西北地区外,25个省、市、自治区均报告过肝吸虫病的流行或散发病例,已被卫生部列为中国重点预防与治疗的食源性寄生虫病之一。     

华支睾吸虫重组蛋白应用于ABC-ELISA检测特异性循环抗体的研究

目的 评价重组蛋白在华支睾吸虫病诊断上的价值，探索以重组蛋白替代天然抗原用于ELISA等血清学方法诊断华支睾吸虫感染的可能性。方法 分别使用重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CysB)与华支睾吸虫成虫可溶性抗原(CAA)，以ABC-ELISA检测华支睾吸虫病、其它寄生虫感染及健康人血清特异性IgG．比较两种抗原用于检测的敏感性与特异性。结果 共检测了112份华支睾吸虫感染血清，使用重组抗原CysB与成虫粗抗原CAA的阳性检出率分别为92．9％(104／112)及94．6％(106／112)；分别检测健康人血清56例、日本血吸虫病血清20例及肺吸虫病血清10例．对于两种抗原，华支睾吸虫特异性IgG检测阴性率均相同．上述三类血清的阴性率分别为96．5％(54／56)、95％(19／20)及90％(9／10)。结论 华支睾吸虫重组蛋白CysB用于血清特异性抗体检测具有较高的敏感性及特异性，与成虫可溶性抗原(CAA)的诊断应用价值相近，有望成为应用于华支睾吸虫病诊断的替代抗原之一。     

华支睾吸虫的体壁和肠支的透射电镜观察

本文观察了华支睾吸虫的体壁和肠支的超微结构。体壁皮层表面形成许多突起,突起上有长丝状的微绒毛。基质内含小圆形、圆盘状的分泌颗粒和线粒体,表皮细胞含线粒体,粗面内质网等细胞器,并向皮层发出许多胞质小管。肠上皮的微绒毛为双层片样结构,偶可见分支或汇合成环,肠上皮胞质内可见线粒体,分泌颗粒和内质网。核质内偶可见晶状包涵体。     

华支睾吸虫成虫CsRPEF基因的生物信息学分析

目的筛选华支睾吸虫的功能基因并进行相应的生物信息学分析。方法使用PCGENE软件、Antheprot-5软件、ExPASy在线分析工具、NCBI上的Blastx程序进行华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(CsRPEF)基因的生物信息学分析。结果获得了CsRPEF基因的序列特征,推测到了CsRPEF的同源蛋白并预测出CsRPEF编码蛋白的分子量、等电点、柔曲性、疏水性、功能性位点等二级结构特征。结论华支睾吸虫成虫CsRPEF基因是一新筛选的功能基因,CsRPEF蛋白是可能参与华支睾吸虫基因转录途径的重要因子。CsRPEF基因的生物信息学分析可为其进一步进行生物学功能的实验研究奠定基础。     

华支睾吸吸虫尿素溶解性抗原的临床应用

采用ＥＬＩＳＡ法，以华支睾吸虫成虫尿素溶解性抗原和该虫水溶性抗原检测９８份华支睾吸虫病人血清，阳性率分别为９２．８６％和９４．９８％。用这两种抗原检测日本血吸虫病人血清，假阳性率分别为１１．１１％和３３．３３％，肺吸虫病人血清的阳性率分别为０和２０％。结果表明，ＵＳＡ有与ＡＳＡ相似的敏感性，但特异性显著高于后者，具有更好的实用价值。     

华支睾吸虫分泌/排泄抗原致大鼠肝纤维化

目的 以大鼠为对象,初步探讨华支睾吸虫成虫分泌/排泄抗原(CsESAs)在华支睾吸虫致肝纤维化过程中的作用和可能机制.方法 无菌培养华支睾吸虫成虫,收集CsESAs;腹腔注射CsESAs,Masson染色观察CsESAs对大鼠肝脏胶原纤维增生的影响,HE染色和组织免疫荧光法检测α-SMA(α-smooth muscle actin)的表达以观察CsESAs对大鼠肝星状细胞增生和活化的影响;ELISA法检测实验动物血清中抗CsESAs抗体滴度以探讨抗原-抗体复合物的致病作用. 结果 腹腔注射CsESAs,大鼠肝脏表现出明显的纤维化、肝星状细胞增生和活化,但大鼠肝纤维化程度与注射的CsESAs量有关而与大鼠血清中抗CsESAs抗体存在量无关.结论 CsESAs可以导致肝星状细胞活化和肝纤维化的发生,但抗原-抗体复合物不是CsESAs引起肝星状细胞活化的主要途径.