羟基喜树碱诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨国产羟基树碱（ＨＣＰＴ）对ＨＬ－６０细胞的作用机制和规律。方法：应用细胞形态学检查，ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果：ＨＣＰＴ１ｍｇ／Ｌ和５ｍｇ／Ｌ作为ＨＬ－６０细胞４ｈ细胞凋亡率分别为５０．６％和６８．６％。光镜检查见细胞核固缩、碎裂；电镜检查见染色质向核周边凝集。ＤＮＡ电泳显示典型的梯状条带。当ＨＣＰＴ浓度超过５ｍｇ／Ｌ或作用超过４ｈ，细胞凋亡率无明显增加，出现饱和现象。ＨＬ     

人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1与肺癌

人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1（hOGG1）功能异常与肺癌等癌症发生发展密切相关,hOGG1基因多态性可能会改变酶的活性,从而影响个体损伤DNA的修复能力,促进癌变.hOGG1等DNA修复基因单核苷酸多态性联合效应提高人群肺癌的易感性.hOGG1参与调节肿瘤细胞的线粒体呼吸功能并影响肿瘤细胞生长.     

α-干扰素联合高温对 HL-60细胞体外杀伤作用的研究

目的：观察42℃高温联合α-干扰素（α-interferon,α-IFN)体外杀伤HL－60细胞的效果。方法：HL－60细胞经42℃高温处理后加入不同浓度α-IFN体外培养,计算清除率。结果：42℃高温或100u/mlα-IFN单独应用60min,体外净化骨髓时分别能清除大约89％或62％的白血病细胞。42℃高温联合α-IFN能协同灭活HL－60细胞,可清除98％以上的白血病细胞。两者联用的最适条件是42℃加α-IFN100u/ml作用60min。对粒单系集落形成单位（colony forming unit-granulocyte/macrophage,CFU-GM)的形成却没有协同抑制作用,且减轻了高温对CFU－GM的抑制作用,CFU－GM的抑制率下降为31．3％,与单独高温净化时的47．8％相比有显著差异。结论：42℃高温联合α-IFN可以协同杀灭体外的HL－60细胞。     

槲皮素对HL-60细胞中c-myc和cyclin D1基因表达的影响

槲皮素(quercetin)是一种天然黄酮类化合物,它能抑制多种癌细胞株的生长,对白血病的治疗具有巨大潜力,其抗增殖的作用机理虽有许多研究[1,2],但对c-myc和cyclinD1的影响却少有报道.本实验以HL-60细胞为靶细胞,研究槲皮素对c-myc和cyclinD1表达的影响.     

羟基喜树碱诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的 :探讨国产羟基喜树碱 (HCPT)对 HL - 6 0细胞的作用机制和规律。方法 :应用细胞形态学检查 ,DNA凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果 :HCPT 1mg/ L和 5 mg/ L作为 HL - 6 0细胞 4h细胞凋亡率分别为 5 0 .6 %和 6 8.6 %。光镜检查见细胞核固缩、碎裂 ;电镜检查见染色质向核周边凝集。 DNA电泳显示典型的梯状条带。当 HCPT浓度超过 5 mg/ L或作用超过 4h,细胞凋亡率无明显增加 ,出现饱和现象。HL - 6 0细胞经 HCPT作用后 ,S期细胞显著减少 ,G0 / G1 期细胞增加。结论 :HCPT诱导 HL - 6 0细胞出现凋亡并具有饱和效应 ,HCPT为 S期特异性药物。临床上 HCPT应与细胞周期非特异性药物联合用药。     

鲎血细胞多肽诱导HL-60细胞凋亡

目的：研究鲎血细胞多肽（下称鲎血多肽）诱导HL－60细胞凋亡的作用。方法：MTT法测定鲎血多肽对HL－60细胞的毒性和HL－60细胞的相对存活率,荧光显微镜观察HL－60细胞形态的变化,流式细胞仪鉴定细胞凋亡和分析细胞周期,扫描电镜观察细胞膜的改变。结果：鲎鱼多肽对HL－60细胞有明显的细胞毒性,IC50值为24μg/ml;荧光显微镜观察到凋亡细胞主要表现为细胞体积缩小,核染色质固缩,荧光染色增强。50－100μg/ml的鲎血多肽处理6h,HL－60细胞主要表现为细胞凋亡;而鲎血多肽浓度为200μg/ml时的主要为细胞坏死。50μg/ml鲎血多肽处理HL－60细胞0－12h,流式细胞仪检测到凋亡细胞亚二倍体峰出现,细胞周期分析G1期细胞减少,G2期细胞增加。鲎血多肽浓度为25－100μg/ml时,细胞凋亡率随浓度增加而增加,鲎血多肽为200μg/ml时,则主要为细胞坏死,凋亡细胞减少。扫描电镜观察发现,HL－60细胞用鲎血多肽处理后,细胞膜损伤,出现空洞。结论：鲎血细胞多肽能诱导HL－60细胞凋亡;凋亡的发生较早,与细胞膜受损有一定的关系;G1期细胞对鲎血多肽更敏感。     

番荔枝内酯化合物squamocin诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究番荔枝内酯化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ诱导白血病ＨＬ－６０细胞凋亡作用。方法：采用ＭＴＴ法检测番荔枝内酯单体化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ对白血病细胞株ＩＬ－６０细胞增殖的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１,磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的蛋白水平变化。结果：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞５天后,细胞生长受到明显的抑制,ＩＣ５０为０．１７μｇ／ｍｌ。ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的ＤＮＡ梯形带。ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果呈现ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白表达无明显变化,而磷酸化的ＭＡＰＫ量显著减少。结论：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,且与ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白     

雷公藤多甙诱导HL-60细胞凋亡

目的：探讨雷公藤多甙对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。方法：应用细胞形态学检查,ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果：ＨＬ－６０细胞加上雷公藤多甙１０ｍｇ／Ｌ孵育７２ｈ,流式细胞仪检测细胞凋亡率为２９．４％（与空白对照组比较,Ｐ〈０．０１）。电检查和光镜检查均可见细胞核固缩、碎裂等。ＤＮＡ电泳显示明显的梯状条带。结论：雷公藤多甙能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,提示雷公藤多甙可能具有抗白血病作用。     

细胞中特异识别8-羟基鸟嘌呤的修复酶

DNA受到氧化攻击后产生具有潜在突变可能性的修饰碱基 :8-羟基鸟嘌呤 (8-dihydro - 8-oxoguanine ,8-OH -G) ,修复这一普遍存在的氧化损伤是抑制细胞突变的关键。Escherichiacoli中存在着一类特异识别 8-羟基鸟嘌呤的修复酶 :甲酰胺嘧啶 -DNA糖基化酶 ,这类酶可以将 8-羟基鸟嘌呤从DNA中清除 ,以保证细胞遗传信息的稳定性 ,人与Sacharomycescerevisiae同样存在这类修复酶。研究这类酶的基因结构及其表达有助于了解细胞中阻止突变 ,预防癌变的发生的机制。     

bcl-2反义寡核苷酸抑制HL-60细胞增殖的研究

目的研究bcl-2反义寡核苷酸在抑制HL-60细胞增殖和下调细胞内bcl-2蛋白表达水平的作用。方法将人工合成的bcl-2反义寡核苷酸片段与HL－60细胞共培养,在作用的第0天、1天、3天、5天通过细胞计数和锥虫蓝染色法检测细胞的生长、存活情况,同时通过免疫组化法（APAAP法）检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化情况。结果bcl-2正、反义寡核苷酸均可抑制HL-60细胞增殖,但bcl-2反义寡核苷酸的作用更为显著。bcl-2反义寡核苷酸可下调HL－60细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,而bcl-2正义寡核苷酸及对照无此作用。结论bcl-2反义寡核苷酸可以有效地抑制HL-60细胞的增殖和降低细胞内bcl-2的蛋白表达水平。     

大蒜素抑制人急性早幼粒白血病细胞生长的体外实验

本实验采用体外直接杀伤测定法，荧光偏振技术，ＭＴＴ比色分析法，ＤＮＡ合成的［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法，微量量热法五种测定技术从细胞膜流动性改变、线粒体功能，ＤＮＡ合成速率、细胞总代谢率变化等细胞和分子生物学方面的变化研究大蒜素对ＨＬ－６０细胞的作用，结果表明，大蒜对对ＨＬ－６０细胞的增殖有抑制作用，高浓度（＞３０ｍｇ／Ｌ）时还有较明显的直接杀伤作用。     

小剂量As_2O_3体外诱导HL-60细胞发生非终末分化分子机制的研究

目的探讨增强子结合蛋白C／EBPs在小剂量三氧化二砷(As_2O_3)诱导HL-60细胞发生非终末分化中的作用。方法采用瑞式染色观察细胞形态,WST1实验测定细胞增殖变化,测定和分析细胞周期,NBT还原实验测定细胞分化状态,RT-PCR方法检测C／EBPα和C／EBPε的 mRNA表达。结果HL-60细胞经全反式维甲酸(ATRA)作用24 h后,随着细胞分化的发生, C／EBPε mRNA的表达明显增加,C／EBPα mRNA的表达降低。HL-60细胞经As_2O_3作用24 h后, C／EBPα mRNA的表达降低,C／EBPε mRNA的表达轻微增加。结论经As_2O_2和ATRA诱导后不同分化状态HL-60细胞,C／EBPα mRNA的表达降低,二者差异无显著意义;C／EBPε的表达差异较大(P<0．05),二者差异有显著意义。小剂量As_2O_3诱导HL-60细胞发生非终末分化可能是由于C／EBPε不能持续表达升高引起的。     

Cell Cycle-Independent Down-Regulation of BCL-2 Protein Expression in Differentiating HL-60 Cells

To understand the relationship between bcl-2 protein expression and the cell cycle during the processes of differentiation, we examined bcl-2 protein levels expressed during cell cycle phases in differentiating HL-60 human leukemia cells by using a two-color flow cytometric method. In exponentially proliferating HL-60 cells bcl-2 protein was constitutively expressed throughout the cell cycle phases, but a small population of G0/G1 cells expressed decreased levels of protein as compared with other cell cycle phases. HL-60 cells can be induced to differentiate to granulocytic pathway by retinoic acid or dimethylsulfoxide, and to monocytic/macrophagic pathway by 1, 25 dihydroxyvitamin D3 or 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate. During treatment with any of these inducing agents, bcl-2 protein expression was time-dependently down-regulated after 24h. A two-color flow cytometric analysis revealed that this down-regulation occurred throughout cell cycle phases, indicating that bcl-2 protein expression was down-regulated in cell cycle-independent manner during induction of differentiation in HL-60 cells. To our knowledge, this is the first demonstration suggesting that the regulation of bcl-2 protein expression is not related to the cell cycle during induction of differentiation in HL-60 cells.     

c-Myc和Fas在三氧化二砷体外诱导HL-60细胞凋亡中的变化与作用的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在体外诱导急性早幼粒白血病(acute promyelo-cytic leukemia,APL)细胞HL-60凋亡的分子机制。方法:采用MTT方法检测As2O3对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和Fas蛋白表达,RT-PCR检测c-Myc和Fas的mRNA表达。结果:4.0μmol/L的As2O3作用96h可抑制70%的HL-60细胞,并使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡,P&lt;0.01;Fas蛋白表达升高,作用72h后阳性率由对照组的9.63%增加为32.84%,P&lt;0.01;Fas mRNA表达升高,c-Myc的mRNA表达降低,P&lt;0.01。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Fas蛋白及mRNA表达,下调c-Myc的mRNA表达。     

巨噬细胞培养上清液对HL-60细胞端粒酶活性的影响研究

目的　探讨影响端粒酶活性因素及可能机理。方法　使用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法半定量检测端粒酶活性,并进行细胞周期、形态学观察。以人类早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０（Ⅰ）和全反式维甲酸（ＡＴＲＡ５μＭ）处理７２ ｈ 的ＨＬ－６０细胞（Ⅱ）为实验对象。再用一定浓度的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清液（ＭＣＳ）体外刺激实验细胞。结果　实验细胞Ⅱ在５％ ＭＣＳ作用下,较对照无明显差异;受２０ ％ ＭＣＳ作用４８ ｈ,端粒酶活性可明显上调（Ｐ＜ ０．０５）,在第３ 天酶活性下降;在２０％ 、４０％ ＭＣＳ作用下较对照均明显增高（Ｐ＜ ０．０５）,但两者（２０％ 与４０％ ）间无明显差异;ＭＣＳ直接作用实验细胞Ⅰ、Ⅱ的端粒酶提取物,未见端粒酶活性明显变化。实验细胞Ⅱ在持续的ＭＣＳ作用下培养２ 周,恢复恶性增殖能力。端粒酶活性变化受细胞群主体分布影响不大。ＭＣＳ作用于具有高端粒酶活性的实验细胞Ⅰ,未发现明显促进作用。无ＭＣＳ的培养体系中,小牛血清浓度不影响实验细胞Ⅰ、Ⅱ的端粒酶活性。结论　ＡＴＲＡ处理的ＨＬ－６０ 细胞的端粒酶是可调节的,未活化的巨噬细胞培养上清液可对其活性进行有效上调,而对ＨＬ－６０ 细胞高水平表达的端粒酶活性影响不大。     

bcl-2 siRNA的设计、合成及其对HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用

 目的 应用RNA干扰技术研究bcl-2 siRNA对白血病细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用。方法 扫描bcl-2 mRNA的全序列,记录从AUG启动子的AA及下游19个核苷酸肽作为潜在作用靶点。GC含量控制在30 % ~ 65 %之间。由BLAST分析排除与其他基因有高度同源性的序列。由体外转录合成法合成双链bcl-2 siRNA,将bcl-2 siRNA转染入HL-60细胞。收集转染48 h后的细胞,流式细胞术检测蛋白表达情况,筛选出最佳作用序列进一步作各项指标检测。从mRNA水平、蛋白质水平等观察bcl-2 siRNA对细胞HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用。结果 收集转染48 h后的细胞,经细胞免疫荧光、RT-PCR、MTT及Hoechst33258荧光染色等指标检测,可见转染bcl-2 siRNA阳性组的细胞bcl-2基因表达降低及HL-60细胞凋亡等现象。而转染GAPDH siRNA组的细胞对bcl-2表达无影响。结论 采用生物信息学的方法设计出有效siRNA靶位点;bcl-2 siRNA可通过降低bcl-2 mRNA水平特异性抑制bcl-2蛋白质的表达。     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

水杨酸钠诱导HL-60细胞凋亡及其与胞内游离Ca~(2+)浓度的关系

 目的　目的研究水杨酸钠对HL 6 0细胞的促凋亡活性及其与胞内游离Ca2 + 浓度的关系。方法Annexin V结合分析检测靶细胞磷脂酰丝氨酸外化 ;琼脂糖凝胶电泳检测断裂DNA ;激光共聚焦显微镜分析细胞内游离Ca2 + 浓度变化。结果　HL 6 0细胞经 5mmol/L(IC50 )水杨酸钠分别作用 10h、16h后 ,靶细胞的磷脂酰丝氨酸外化率显著高于对照组 (0 .2 4vs 0 .0 3) ,其基因组DNA在琼脂糖凝胶电泳中呈典型的梯状带型 ;此间 ,HL 6 0细胞内游离Ca2 + 浓度进行性升高。结论　水杨酸钠触发的HL 6 0细胞凋亡与胞内游离Ca2 + 浓度升高密切相关。