用抑制性单克隆抗体对恶性疟原虫裂殖体和裂殖子表面抗原的鉴定

根据体外抑制试验证明,94D_1,94C_3,92D:,9_3A_3,9 B和9_3D_4等6株McAb对恶性疟原虫的增殖有明显的抑制活性,为了分析这些McAb相应的靶抗原以及进一步的提取和纯化。我们首先对上述靶抗原的理化特性作了初步鉴定。用葡萄球菌A蛋白(SPA)免疫吸附柱自小鼠杂交瘤腹水中提取纯化抗恶性疟原虫保护性单克隆抗体。纯化后的单克隆抗体与溴氰活化的琼脂糖珠(Sepharose 4B)制备免疫吸附柱。将~(125)I—标记的恶性疟原虫tritonX—100提取物通过上述亲和层析柱,洗脱物经透析浓缩后,用SDS—PAGE—放射自显影鉴定与保护性McAb对应的靶抗原的分子量。同时用提纯后的McAb与恶性疟原     

兔抗单克隆个体基因型抗体的制备鉴定

利用具有抑制恶性疟原虫生长能力的94D_1株单克隆抗体(McAb)免疫家兔。得到抗血清后,经Seharose 4 B—正常BALB/c小鼠IgG固相反复吸附3次以上,以除去其抗同种型和同种异型抗体,然后再经Sepharose4 B—9~4D_1株McAb亲和层析柱提纯,得到抗9_4D_1个体基因型抗体。这种抗体经免疫双扩散、IFA封闭试验、SPRIA等方法鉴定,证明具有较高的特异性。在双扩散中,仅与9_4D_1株McAb产生沉淀线;在IFA封闭试验中,能抑制     

亲和层析一步纯化IgM类单克隆抗体

本文介绍采用免抗鼠IgM血清制备的亲和层祈柱从小鼠腹水中一步提纯单克隆抗体IgM的方法。提纯的IgM应用琼脂糖电泳检测，为一个区带；应用还原条件下的SDS—PAGE检测．分离为分子量～80K的重链和～25K的轻链两条区带，几未见其他杂带；应用免疫印染法鉴引．进一步确证为IgM，不合常见的杂质IgG。实验过程还发现提她的IgM不够稳定，在贮存过程有降解现象。另外厘用同一亲和柱从吸附IgG后的小鼠血清中提取多克隆抗体IgM的效果也是良好的，经用还原条件下的SDS—PAGE检测，同样也只分离为轻，重链两条区带，未见混有其他杂蛋白。     

固相化AchE亲和层析纯化抗AchE单克隆抗体

本文将AchE与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联合成了抗AchE单克隆抗体的亲和凝胶,AchE偶联率50～72％。小鼠腹水经50％饱和废硫酸铵沉淀,对PBS pH7.0以透析去除剩余的硫酸铵上亲和层析柱4℃反应16～20h用PBS洗下不吸附的蛋白质,再用IN乙酸或3M KCNS洗下特异性吸附的IgG,产率约2～3mg/ml胶水。聚丙烯酰胺凝胶电泳检定为一条主带,用     

恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2(MSA-2)基因在卡介苗BCG中的表达

目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (BacillusCalmetteGuerin ,BCG)中的表达情况。方法 :采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG MSA2导入BCG中 ,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组BCG培养于Middlebrook 7H9Broth (M7H9)培养基 ,并添加 10 %M7H9EnrichmentADC和 0 0 5 %Tween80 ,4周后于 4 5℃进行诱导表达 ,表达产物进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS PAGE)及免疫印迹 (Western blot)分析。结果 :SDS PAGE及Western blot分析结果均显示在约 31kDa的位置上可见明显的蛋白条带 ,并与MSA2基因编码序列推断的分子量相符。结论 :恶性疟原虫裂殖子表面抗原 2可在BCG中表达 ,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供科学依据     

抗恶性疟原虫单克隆抗体的分析

在两次细胞融合中,经2—4次克隆化后已建成28株抗恶性疟原虫(FCC—1/HN)的杂交瘤。其中针对裂殖子和分裂体抗原的McAb有9株,仅对裂殖体特异的有4株,对裂殖体和滋养体期原虫产生荧光反应的有15株。 应用间接荧光抗体技术,检查这28株McAb对恶性疟原虫(安徽株),间日疟原虫、食蟹猴疟原虫,诺氏疟原虫、伯氏疟原虫、约氏疟原虫和鸡疟原虫的交叉反应。结果,仅有93D4和94B5属株特异性McAb,其余各株均对恶性疟原虫(安徽株)有明显荧光反应。有5     

单克隆抗体双夹心纸模金银染色法检测疟疾循环抗原的初步研究

本文首次报道用McAb双夹心纸模金银染色法检测疟疾病人血清中的疟原虫循环抗原获得成功。将McAb吸附于硝酸纤维膜上,与待检血清反应后加入胶体金标记的第二McAb,再置银显影液中显影,阳性反应呈黑色斑点。用本法检测间日疟疾和恶性疟疾病人血清各15份,阳性率分别为86.6％和     

抗人白细胞间素-2 McAb亲和力排列及亲和指数的测定

利用蛋白浓度校正的ELISA稀释曲线快速确定了抗人白细胞间素-2(IL-2)单克隆抗体(McAb)的亲和力排列。该排列与用竞争ELISA测定的亲和常数(K_D值)相一致。为了更实际地确定McAb的用途,又用十二烷基磺酸钠(SDS)等解离因素,建立了反映 McAb在实际应用时亲和力变化强度的吸附-解离ELISA,测定McAb的亲和指数(ID)。根据亲和力排列和亲和指数可更准确地取舍McAb,供检测或亲和色谱使用。     

单克隆抗体重氨胶乳快速检测恶性疟原虫红内期抗原实验初报

本实验试用恶性疟原虫单克隆抗体(21E_3、22G_2、92A_3、94B_5株)交联重氮胶乳,快速检测人工培养恶性疟原虫红内期抗原。用盐析粗提的McAb与重氮乳交联,并用盐析粗提 BALB/c鼠γ和生理盐水替代McAb与重氮乳交联。胶乳的工作浓度为1％,待测血球以蒸馏水按1:4稀释溶血,先滴加1滴(约0.05ml)胶乳于无油载物片上、再滴加1滴待测样品,顺着逆时针方向旋摇,3分钟内观察结果。用3种胶乳分别检测人工培养恶性疟原虫红细胞和     

致病性与非致病性钩端螺旋体蛋白电泳及单克隆抗体识别抗原的比较

作者用SDS—PAGE和Western blot分析了三株钩端螺旋体的全细胞蛋白电泳图谱及McAb识别的抗原分子。三株钩体在10％SDS—PAGE中均被分出40多条清晰的区带,其中致病性的问号钩端螺旋体赖型017株,秋季型606株蛋白电泳图谱的平均相似性为90％,与非     

两株抗小鼠胰腺癌McAb特性的初步研究

本文报告用盐析,DEAE纤维素层析或亲和层析法纯化2B6、2B102株抗小鼠胰腺癌McAb杂交瘤培养上清及其小鼠腹水中的McAb,并经SDS-PAGE鉴定,FITC标记后,用直接荧光免疫法分析其在35例人类各     

亲和吸附纯化甲胎蛋白异质体方法的建立

目的 利用小扁豆凝集素(LCA)建立基于微量离心柱的甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)的纯化方法.方法 采用硫酸铵分级沉淀的方法由小扁豆中提取凝集素,偶联到活化的琼脂糖凝胶4B(sephrose 4B)上,灌注离心柱,制备AFP-L3亲和吸附离心管.血清加入离心管后经吸附和洗脱,便可获得纯化的AFP-L3.随机选取10例AFP阳性患者血清,应用亲和吸附纯化法纯化AFP-L3后应用电化学发光法检测,并与传统的亲和免疫电泳方法相比较.结果 10例患者血清经纯化后,AFP-L3检测结果有8例＞5 ng/ml,亲和免疫电泳有6例呈现阳性反应.结论 成功建立基于微量离心柱的亲和吸附纯化AFP-L3的方法,该方法具有较高的灵敏度,重复性好并且操作简便更利于临床实验室应用.     

用单克隆抗体和抗生物素-生物素,过氧化物酶抗过氧化物酶和免疫过氧化物酶法检测由SDS PAGE转至硝酸纤维素纸上的弓形体膜抗原

本文介绍了检测弓形体(Tp)膜抗原的敏感方法。抗原用SDS聚丙酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)分离,转移至硝酸纤维素纸上。以单克隆抗体(McAb)为试剂,分     

三株抗恶性疟McAb的鉴定

利用McAb寻找保护性抗原是疟疾疫苗研究的重要手段。为此,我们对15株抗恶性疟McAb进行了恶性疟体外生长抑制试验,不同种(株)疟原虫的交叉免疫萤光反应(IFA)及免疫沉淀和SDSPAGE等一系列鉴定。结果表明,其中3株McAb可能作为筛选保护性抗原的候选抗体。 1)M26-32,为一株可与不同种(P.5,P_(.v),P_0)及不同地区P.f分离株的红内期及     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒结构蛋白

用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)5H5与CNBr活化的Sepharose 4B偶联,制成免疫吸附柱,并使粗纯化HFRS病毒抗原(从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取)遗过免疫吸附柱。用3M硫氰酸钾洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个高而窄的蛋白洗脱峰,用McAb-ELISA间接夹心法从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴     

大鼠抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性定鉴

将人血红蛋白(Hb)免疫LOU/M(IgK-1a)大鼠,取脾细胞与IR983F大鼠骨髓瘤细胞融合,制备了3株大鼠抗Hb单克隆抗体(McAb)2A10、9B5,4F12杂交瘤细胞株。3种McAb腹水效价分别为1:16×10~4、1:3.2×10~4、1:323×10~4。培养上清效价分别为1:256、1:16、1:8。亚类测定分别为IgM、IgG2_a、IgG2_4、染色体记数2A10为60±5,9B5为72±6。3种McAb的亲和常数分别为1.28×10~6M~(-1)、6.35×10~7M~(-1),3.64×10~8M~(-1)。特异性检测表明3种McAb与人Hb及人红细胞的亲和力明显高于其它种类动物的红细胞,与无关蛋白无结合活性。用这些McAb检测Hb最低可测到1υg水平,检测人红细胞可检测到4～8个RBC/ml(相当于90～190ngHb/ml)。大大高于目前临床常用的测定潜血方法。     

恶性疟原虫多表位疫苗M.RCAg-1在大肠杆菌中的表达和纯化

在大肠杆菌中表达和纯化恶性疟原虫随机重组多表位蛋白疫苗M.RCAg-1,将目的蛋白纯度最高化,回收率最大化。从工程菌BL21(DE3)-M.RCAg-1/pDS-eX提取重组质粒进行测序验证,用IPTG诱导表达,分别采用Ni亲和纯化,阴离子交换层析和凝胶过滤层析等不同组合方式的5种纯化方案进行纯化,根据最终纯度和回收率选择最佳纯化方案。Ni-NTA Agarose特异性好,一步纯化后M.RCAg-1纯度可达79.98%,后续的两步阴离子交换和分子筛纯化能显著提高M.RCAg-1的纯度,最终纯度可超过99%,回收率大于15%。试验确立了恶性疟原虫多表位蛋白疫苗M.RCAg-1在大肠杆菌中的表达和纯化方案,为下游放大生产和进一步研究M.RCAg-1的效果奠定了基础。     

羟基氟磷酸钙层析从腹水中一步纯化小鼠单克隆抗体

一种理想的单克隆抗体(McAb)纯化方法应简单、迅速、有效,既能处理大量腹水,又能对IgG和IgM两类McAb进行纯化.A蛋白-Sepharose亲和层析、DEAE纤维素离子交换层析、DEAE Affi-gel blue层析及免疫亲和层析等方法都不能满足上述全部标准.本文作者用羟基氟磷酸钙柱高压液相层析对小鼠腹水中的单克隆抗体进行了纯化.首先,将小鼠腹水20,000×g离心30分钟,加入预先用柱缓冲液A(0.01M     

抗人AFP单抗及多抗与丝裂霉素联接物对肝癌细胞的杀伤作用

用本室制备的分泌IgG AFP McAb的杂交瘤株G2及G10,接种于BALB/c小鼠腹腔,取其腹水经硫酸铵及Sepharose 4B柱亲和层析纯化,获得抗人AFP单抗。将马抗人AFP血清经硫酸铵及Sepharose 4B柱亲和层析提取AFP抗体IgG,得到AFP多抗。将纯化     

McAb亲和层析纯化HFRS病毒50K结构蛋白及其鉴定

先用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取出粗制病毒抗原。再选择一株的抗HFRS病毒的McAb(5H5)与CNBr活化Sepharose 4B相偶联,制成免疫吸附柱, 并以上述粗制病毒抗原通过免疫吸附柱。用3M KCNS洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个明显的蛋白洗脱峰,用ELISA从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴度。而用从正常乳鼠脑提取的对照抗原通过该免疫吸附柱,同样洗脱,结果洗脱物中未捡出抗原活