CRP、IL-6、TNF-α与移植物动脉硬化早期发病的关系

目的探讨血清炎症因子与移植血管动脉硬化早期发病的关系。方法将36只同种异体胸主动脉腹腔移植大鼠分成4个实验组,每组9只。A组术后1周处死;B组术后2周处死;C组术后3周处死;D组术后4周处死。16只同系移植对照大鼠对应每个实验组,每次处死4只。术前及处死时抽血分离留取血清,采用酶联免疫吸附法检测C-反应蛋白（CRP）、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平;处死后留取血管标本,HE染色观察血管病理改变,用免疫组织化学法检测血管外膜炎症细胞浸润及α 肌动蛋白(α-actin)、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、增殖细胞核抗原(PCNA)在血管壁中的表达。对比各组与术前血清炎症因子水平变化及各组间观察指标的变化。结果CRP水平,各实验组及对照组均较术前基础水平明显增高（P＜0.01）,B、C、D实验组较对照组明显升高（P＜0.01）;IL-6水平,B实验组较术前升高（P＜0.05）,A、C、D实验组较术前明显升高（P＜0.01）,A、B、C对照组较术前基础水平升高（P＜0.05）,A、C、D实验组较对照组水平明显升高（P＜0.01）;TNF a水平,A、B、C实验组较术前升高（P＜0.05）,D实验组较术前明显升高（P＜0.01）,各对照组与术前无明显变化,各实验组均较对照组明显增高（P＜0.01）。术后7d,外膜大量炎症细胞浸润;术后14?d,外膜有轻度胶原纤维增生伴炎症浸润;术后28d,外膜明显增厚,内有大量增生的平滑肌细胞、胶原纤维及炎症细胞,血管中层断裂,可见外膜平滑肌细胞迁移至内膜,内膜亦出现明显纤维化及平滑肌细胞增生。在血管外膜平滑肌细胞中,α-actin、PCNA和CDK1表达逐渐升高（P＜0.05）,且早于内膜。结论大鼠同种异体胸主动脉腹腔移植后血清炎症介质水平呈持续升高,说明各种免疫因素导致外膜炎症反应,并参与移植血管动脉硬化的早期发病。     

外膜炎症及炎症因子与大鼠移植物动脉硬化早期发病关系

目的 探讨外膜炎症及血清炎症因子与移植物动脉硬化早期发病的关系.方法 把36只同种异体胸主动脉腹腔移植大鼠及16只同系移植对照大鼠随机分成4组(每组实验组9只,对照组4只):A组,术后1周处死;B组,术后2周处死;C组,术后3周处死;D组,术后4周处死.术前及处死时抽血分离留取血清,使用酶联免疫吸附法检测血清炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平,处死后留取血管标本,HE染色观察血管外膜炎症细胞浸润程度及病理改变;用免疫组织化学法检测α-肌动蛋白(α-actin)、周期蛋白依赖性激酶1(cyclin dependent kinase-1,CDK1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在血管壁中的表达.对比各组与术前血清炎症因子水平变化及各组间观察指标的变化.结果 术后7 d,外膜大量炎症细胞浸润;术后14 d,外膜有轻度胶原纤维增生伴炎症浸润;术后28 d,外膜明显增厚,内有大量增生的平滑肌细胞、胶原纤维及炎症细胞,血管中层断裂,可见外膜平滑肌细胞迁移至内膜,内膜亦出现明显纤维化及平滑肌细胞增生.在血管外膜平滑肌细胞中,α-肌动蛋白、PCNA和CDK.表达愈来愈高(均P<0.05),且早于内膜.移植术后A、B、C、D组血清炎症介质水平均高于术前基础水平.IL-6水平,B实验组高于术前(P<0.05),A、C、D实验组显著高于术前(均P<0.01),A、B、C对照组也高于术前基础水平(均P<0.05);A、C、D实验组显著高于对照组(均P<0.01).TNF-α水平,A、B、C实验组高于术前(均P<0.05),D实验组显著高于术前(P<0.01),A、B、C、D对照组与术前无明显变化,各实验组均明显高于对照组(均P<0.01),差异有统计学意义.结论 大鼠同种异体胸主动脉移植模型建立后,随着外膜炎症加重,移植血管外膜及内膜出现明显动脉硬化;血清炎症介质水平呈持续升高,提示外膜炎症细胞浸润及炎症因子均参与移植物动脉硬化的早期发生.     

The Origin of Neointimal Smooth Muscle Cells in Transplant Arteriosclerosis from Recipient Bone-marrow Cells in Rat Aortic Allograft

In order to investigate the origin of neointimal smooth muscle cells in transplant arterio- sclerosis in rat aortic allograft, sex-mismatched bone marrow transplantation was performed from male Wistar rats to female Wistar rats. Four weeks after transplantation, the aortic transplant model was established by means of micro-surgery in rats. The recipients were divided into 4 groups: female Wistar-female Wistar aortic isografts, female SD-female Wistar aortic allografts, male SD-male Wis- tar aortic allografts, female SD-chimera Wistar aortic allografts. Eight weeks after transplantation, aortic grafts were removed at autopsy and processed for histological evaluation and immunohisto- chemistry. The results indicated that excessive accumulation of α-SMA-positive smooth muscle cells resulted in significant neointima formation and vascular lumen stricture in rat aortic allografts. Neointima assay revealed that the neointimal area and NIA/MA ratio of transplanted artery were sig- nificantly increased in all of aortic allograft groups as compared with those in aortic isograft group (P<0.01). Neointimal smooth muscle cells were harvested from cryostat sections of aortic allograft by microdissection method. The Sry gene-specific PCR was performed, and the result showed that a dis- tinct DNA band of 225 bp emerged in the male-male aortic allograft group and chimera aortic al- lograft group respectively, but not in the female-female aortic allograft group. It was suggested that recipient bone-marrow cells, as the origin of neointimal smooth muscle cells, contributed to the pathological neointimal hyperplasia of aortic allograft and transplant arteriosclerosis.     

水溶性壳聚糖对腹主动脉球囊损伤大鼠血管狭窄的抑制作用

[摘 要］ 目的:探讨水溶性壳聚糖（WSC）在血管狭窄方面的作用,阐明WSC对大鼠腹主动脉球囊损伤的影响,为开发防治血管狭窄的高效低不良反应药物提供实验依据。方法：75 只雄性 SD大鼠随机分 5 组：50、100和 200 mg/kg 的WSC 组、模型组和对照组（假手术组）,每组15只。采用球囊损伤大鼠腹主动脉内膜方法制备血管狭窄模型,对照组仅分离结扎右髂总动脉。造模后WSC各组经大鼠尾静脉分别注射50、100 和 200 mg/kg浓度的 WSC;模型组和对照组注射生理盐水,每次0.4 mL,每天1次。每组按 7、14 和 21 d 3个时点随机选取 5 只大鼠处死,常规HE染色制作病理切片,观察各组大鼠血管损伤形态,计算相对管腔面积,比较 WSC 对血管狭窄的抑制作用。结果：普通光学显微镜观察,对照组大鼠腹主动脉结构完整,中膜血管平滑肌细胞排列整齐。模型组大鼠在第7天时腹主动脉血管内膜增生明显;第14天时可见内膜、中膜明显增厚,管壁局限性隆起;第21天内膜增厚,以平滑肌细胞为主,中膜细胞排列紊乱,有假腔形成。与模型组比较,实验组第7天时内膜增生明显减轻,以100 和 200 mg/kg WSC组为最好;第14天时可见内膜、中膜增厚均不明显,但200 mg/kgWSC组仍可见大量排列紊乱的血管平滑肌细胞;第21天时各浓度的WSC组均表现正常,其中以200 mg/kg WSC组更为明显。管腔相对面积比较,对照组大鼠管腔面积随术后时间变化不明显（P>0.05）;模型组大鼠管腔面积在第7、14 和 21天时均减小,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。50 mg/kgWSC 组大鼠在第 14 天和第21天时,管腔面积有一定的增加,但与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）;100 mg/kg WSC组大鼠的管腔面积明显大于 50 mg/kg WSC 组,其中在第14 天和第21天时的管腔面积与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;200 mg/kg WSC 组的管腔面积在多于 14 d时为最大,与对照组相比较差异无统计学意义（P>0.05）。各实验组不同天数之间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：WSC对大鼠腹主动脉球囊损伤后的血管狭窄有明显抑制作用,其中以200mg/kg浓度的 WSC作用14 d以上为抑制作用最强。     

可溶性成纤维细胞生长因子受体基因转染在抑制慢性排斥所致血管病变中的作用

目的　通过阻断成纤维细胞生长因子 (FGF)作用 ,抑制慢性排斥反应所致血管内膜增生 (AGA)。方法　通过克隆并构建可溶性FGF受体sFGFR 1、cDNA质粒构建腺病毒Adv5 sFGFR 1,转基因载体。体外检测sFGFR 1及FGF 2对STS培养的成纤维细胞增殖抑制作用。采用大鼠腹主动脉转染 5× 10 9pfuAv3 sFGFR 1,分别用等量Av3 Nall及生理盐水做实验及空白对照组。将转染后DA大鼠腹主动脉长约 1 5cm ,原位移植于PVG大鼠体内。于移植后分批定期活杀大鼠 ,取移植腹主动脉进行组织形态学、免疫组化、RT PCR检查 ,观察sFGFR 1表达以及AGA改变。结果　 ( 1)构建sFGFR 1、cDNA质粒可以在大鼠血管内皮细胞获得稳定表达。其分泌型sFGFR 1蛋白可与FGF 2交联并有效抑制FGF 2刺激的培养成纤维细胞的增殖。 ( 2 )体内主动脉移植实验结果显示与空病毒Av3 Nall及生理盐水对照 ,Adv 3 sFGFR 1转染主动脉通过免疫组化及RT PCR显示sFGFR 1基因表达及蛋白分泌。至移植后 90d实验组sFGFR 1转染显著抑制移植主动脉AGA(P =0 0 13)。结论FGF在慢性排斥所致血管病变AGA中具有重要作用。通过sFGFR 1阻断FGF可显著抑制慢性排斥反应所致AGA。     

S108结合丹参对抗异品系大鼠腹主动脉移植硬化的作用

目的　在大鼠腹主动脉移植硬化模型上,探讨Ｓ１０８、丹参对抗移植动脉硬化的作用。方法　大鼠３５ 只随机分为：Ａ组为非移植ＳＤ组,Ｂ组为同品系移植缺血＜ ３０ ｍｉｎ 组,Ｃ 组为异品系移植缺血＜ ３０ ｍｉｎ 对照组,Ｄ组为异品系移植缺血＜３０ ｍｉｎ Ｓ１０８ 加丹参处理组,术后６０ ｄ 切取植入的腹主动脉行光镜、电镜检查,并采用ＭＩＡＳ－ ３００ 计算机图象分析系统,自动测量移植腹主动脉管腔面积、内膜面积及中膜面积。结果　Ｂ组和Ａ组比较,术后６０ ｄ 时动脉内膜未见明显增厚（Ｐ＞０－０５） ,Ｃ组内膜明显增厚（ 与Ａ组、Ｂ组比较,Ｐ＜ ０－０５） 。Ｄ组与Ｃ组比较,内膜增厚有所减轻（Ｐ＜０－０５）。病理观察表明,Ｃ 组、Ｄ 组增生的内膜均由单核／ 巨噬细胞与平滑肌细胞构成。Ｃ组动脉有较严重的细胞浸润,中膜平滑肌细胞坏死,弹力纤维膜断裂。Ｄ 组动脉病理改变明显减轻。结论　Ｓ１０８ 加丹参可以延长异品系大鼠腹主动脉移植硬化的进展。     

成人和3种成体哺乳动物血管组织动力学研究

目的:观察正常成人、犬、大鼠和家兔大中血管壁组织结构及其演化关系,探讨血管的组织动力学过程.方法:5例成人尸检大动脉和中动脉标本、5只家犬主动脉和股动脉标本、12只大鼠大动脉至髂动脉标本、3只家兔大动脉标本,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成人与成体犬、大鼠、家兔大中血管壁一般包括内膜、中膜、外膜和鞘膜4层.血管内膜内皮表面可见成血-血管干细胞归巢和内化与血液沉积物及其表面内皮化;内膜与中膜之间可见内膜细胞与膜平滑肌细胞演化序列;中膜与外膜之间可见平滑肌退变序列;外膜外有神经源的鞘膜.植物神经末端可演化形成滋养血管.结论:正常成人、犬、大鼠和家兔大中血管壁主要由归巢和沉积方式来源于成血-血管干细胞形成的内膜细胞演化而成,内膜细胞演化形成中膜平滑肌,平滑肌退化而成外膜.     

紫杉醇防治移植动脉硬化作用的实验研究

目的采用大鼠胸腹主动脉移植模型,探讨紫杉醇防治移植动脉硬化的作用。方法Wistar大鼠40只,SD大鼠16只,按供、受鼠不同分为4组：A组为假手术组;B组为同品系移植（Wistar to Wistar）组;C组为单纯异品系移植（Wistar to SD）组;D组为异品系移植（Wistar to SD）紫杉醇干预组。移植术后30天切取移植动脉,采用光镜和电镜定性观察,并用计算机图像分析系统定量观测紫杉醇对移植动脉的影响。结果与A组比较,术后30天B组动脉壁无增厚、血管内膜未见明显增生;C组内膜增生明显,内外膜有大量炎症细胞浸润。紫杉醇则显著抑制移植动脉内膜增生,并减轻移植动脉内外膜炎症细胞浸润,防止管腔狭窄。结论紫杉醇可明显抑制异品系大鼠移植动脉内膜增生和炎症细胞浸润,防治移植动脉硬化。     

Pathologic effect of lipid-lowering and vessel-softening medication in adult and aged rats

The Wistar's male rats of six months and fifteen months of age were divided randomly into three groups: the Lipid-lowering and Vessel-softening medication (LVM) group, the vitamin E group and the control group. The rat aorta in morphology was observed to study the effects of these medication. The results showed that in the LVM group, the thickening of aorta intima with age was postponed, the thickening ratio of intima to tunica media was reduced, the reduction of smooth muscle cells was inhibited, while the synthesis of collagen fibril and the formation of plaque were also inhibited and the perfection of artery intima was protected.     

受体骨髓源性内皮祖细胞(EPC)对小鼠移植性动脉硬化的影响

 目的 探讨输入受体骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)对移植性动脉硬化的影响。方法 密度梯度离心法联合贴壁诱导法分离培养小鼠骨髓源性EPC,并对其进行鉴定。利用小鼠同种异体腹主动脉移植(以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体)建立移植性动脉硬化模型,术后通过尾静脉将体外培养的EPC输入模型体内,2周后观察移植动脉内膜损伤修复情况及病理改变;术后4周用计算机图像分析系统测量移植动脉新生内膜增生情况。 结果 骨髓源性单个核细胞(mononuclear cell,MNC)体外可诱导培养出EPC,其细胞表面既表达干细胞标记,又表达内皮细胞特异性标记,并具有内皮细胞的生物学功能。小鼠腹主动脉移植术后2周,EPC输入组移植动脉内膜损伤较对照组明显加重。术后4周,EPC输入组移植动脉新生内膜厚度及管腔狭窄程度较对照组显著增加。 结论 受体骨髓源性EPC参与移植动脉新生内膜形成。输入外源性EPC加重移植动脉内膜损伤,对移植性动脉硬化起促进作用。     

猪胰肾联合移植动物模型的建立

目的　研究胰肾联合移植的手术方法。方法　经猪腹主动脉原位灌注 ,大块联合切取供体胰、节段十二指肠、双肾、脾脏。以供肾动、静脉分别与受体左髂总动、静脉吻合 ;供肾输尿管内置“J”形管后与膀胱左顶侧壁吻合。供胰门静脉与受体右髂总静脉吻合 ,包含腹腔动脉和肠系膜上动脉的腹主动脉袖片与右髂总动脉吻合 ;十二指肠节段与膀胱吻合。结果　手术成功 ,术后移植肾、胰均迅速恢复功能 ,术后 3d因排斥反应及体内代谢紊乱受体死亡。结论　良好的外科技术是胰肾联合移植成功的基础 ,是减少术后早期并发症的关键     

大鼠异位心脏移植模型的建立

目的建立一种快速、有效的大鼠异位心脏移植模型.方法以雄性SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,将供心的升主动脉与受体的腹主动脉行端侧吻合,切除受体的左肾,将供心的肺动脉与受体的左肾静脉以自制聚乙烯管直接插入法连接.结果35例实验成功32例,成功率91.4%,供心平均缺血时间为（37.8±1.8）min.失败的原因：吻合口出血,血栓形成.结论本术式操作简单实用,不需手术显微镜,易于推广.     

肾静脉套管法建立大鼠腹部心脏移植模型

目的建立一种快速、有效的大鼠异位心脏移植模型。方法以雄性SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,将供心的升主动脉与受体的腹主动脉行端侧吻合,切除受体的左肾,将供心的肺动脉与受体的左肾静脉以自制聚乙烯管直接插入法连接。结果35例实验成功32例,成功率91．4％,供心平均缺血时间为（37．8±1．8）。失败原因是吻合口出血,血栓形成。结论本术式操作简单实用,不需手术显微镜,易于推广应用。     

Marfan氏综合征的心血管病变(附2例尸检报告)

Marfan氏综合征是一较罕见的家族遗传性疾病。国内有关尸检资料报道不多。今报告我们尸检诊断的2例,并对本征病因机理、病理变化、并发症和预后等加以分析。     

肝硬化门脉高压患者肝动脉与门静脉病理变化分析

目的 研究肝硬化后门静脉高压病例大血管血管壁的组织结构改变,探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝硬化发生进程中的作用.方法 收集肝硬化肝移植病例的门静脉左支、左肝动脉和肝左静脉27例作为病例组,同期外伤性肝切除相应血管15例为对照组.分别予以HE染色、Masson染色,肝动脉加用弹力纤维染色和兔抗人 iNOS 多克隆抗体免疫组织化学. 结果 病例组门静脉内膜、中膜增厚,中膜平滑肌细胞增生、肥大,部分突出至内膜下;肝动脉内膜不规则增生,动脉管腔变窄,动脉壁内弹力膜变平、甚至断裂,中膜平滑肌向内膜增生;肝静脉壁组织结构没有明显改变.iNOS在肝动脉平滑肌细胞胞质呈高表达.结论 肝硬化患者肝动脉与门静脉血管壁会继发组织结构重建,这是人体自身代偿机制的结果,iNOS的高表达加速了该组织结构重建的发生、发展.     

Mice aorta loop grafting： A new model which separate vascular rejection and neointimal formation in chronic rejection

To study the cause and mechanism of transplantation vasculopathy which characterized by accelerated graft arteriosclerosis ( AGA), we estabfished a mouse aorta graft model. Methods: A segment of thoracic aortas of B10. A (2R) mice were transplanted to C57BL/10 mice abdominal aorta by end to side anastomoses. The different time point collected grafts were analyzed by morphological, histochemical and electro microscopic methods. Results:Rejection was manifested as a concentric progressive destruction of the smooth muscle cells. In contrast, the endothelial inflammation and subsequent ncointimal proliferation characteristic of AGA was localized to the regions of turbulent flow, i.e. the junction of the graft with the recipient aorta. Conclusion: This model separates the processes of rejec-tion and neointimal formation which usually manifested together in the lesion of AGA, elucidate that different mecha-nisms control vascular rejection and neointimal formation in chronic rejection.     

糖尿病和非糖尿病动脉粥样硬化兔模型的建立

目的建立兔动脉粥样硬化和糖尿病动脉粥样硬化模型并比较其动脉粥样硬化病变的特点。方法四氧嘧啶静脉推注诱发糖尿病后,行腹主动脉球囊损伤术拉伤内皮并饲高脂饲料建立糖尿病动脉粥样硬化兔模型,非糖尿病动脉粥样硬化兔模型静脉推注生理盐水,余处理相同。喂养10周做腹主动脉造影和腹主动脉内超声后处死,取腹主动脉横切片做HE染色和免疫组化,比较两组兔主动脉内膜/中膜比值及巨噬细胞、平滑肌细胞含量,以评价动脉粥样硬化病变的程度和性质。结果所有兔胸主动脉粥样硬化病变明显轻于腹主动脉;糖尿病动脉粥样硬化兔腹主动脉壁特别是近血管腔处巨噬细胞浸润明显多于动脉粥样硬化兔,而平滑肌细胞含量显著减少。结论糖尿病动脉粥样硬化兔的腹主动脉粥样硬化病变内有更加活跃的炎症细胞浸润,提示病变性质更加不稳定。     

大鼠胸主动脉中膜的细胞构筑

应用血管银染铺片和计算机图像分析等技术，对大鼠胸主动脉中膜肌层构筑进行了研究。结果显示，正常大鼠胸主动脉中膜两弹力膜间，平滑肌一般我成三层，肌层间呈相互交错的网络状结构，环形、螺旋形走向的肌纤维共存，由近内膜部向近外膜部，各层平滑肌细胞的交角逐渐减小。这一构筑有助于增强动脉壁的应力张力，以适应血压的变化。     

病毒载体对大鼠移植静脉的影响

目的探讨腺病毒载体转染后对大鼠移植静脉的影响。方法选用Wistar大鼠间置移植颈静脉于同侧颈总动脉,术后移植静脉行HE染色和VG染色,观测血管内膜厚度。应用免疫组织化学染色,观察血管内膜平滑肌细胞（SMC）内增殖细胞核抗原（PCNA）表达及增殖情况。于倒置荧光显微镜,以紫外光激发观察测定腺病毒转染率。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western蛋白印迹检测细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）水平。结果术后3d,GFP表达较高;术后10d,GFP表达有所下降;术后30d,GFP几乎没有表达。移植术后10d试验组及对照组可见明显内膜增生。移植术后30d试验组及对照组内膜增生减轻。试验组及对照组与正常非移植静脉相比,内膜增生明显（P〈0．05）,试验组较对照组内膜增生稍明显,但差异无统计学意义。实验中正常静脉平滑肌细胞PCNA阳性细胞极少,对照组与试验组术后10d,内膜与中膜SMC的PCNA阳性细胞增多,增殖达到高峰。术后30d中膜SMC的PCNA阳性细胞明显减少。试验组及对照组与正常非移植静脉相比,PCNA阳性细胞增高明显（P〈0．05）。试验组较对照组PCNA阳性细胞稍多,但差异无统计学意义。正常静脉ICAM-1、VCAM-1的mRNA和蛋白表达很少,对照组移植后3d部分细胞即出现阳性表达,10d表达最强,30d仍较高。与正常静脉组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。试验组较对照组表达更高,但与对照组比较,差异无统计学意义。结论腺病毒载体能高效地进行体内基因转移,作用时间短暂。腺病毒载体促进移植静脉的血管内SMC活化、增多、血管内膜增生、ICAM-1、VCAM-1的表达的增加,腺病毒转染到移植静脉血管壁后产生炎症、内膜增生等效果,混淆了目的基因的效果。     

大鼠胰腺移植模型的建立

目的 建立大鼠胰腺移植模型。方法 采用经膀胱引流全胰腺十二指肠６主式,带腹腔动脉和肠系膜上动脉的腹主动脉段与受体腹主动脉端侧吻合,供体门静脉以体下腔静脉端侧吻合,胰腺外分泌经膀胱引流。结果 １８只大鼠移植成功,早期胰腺血供良好。结论 此处模型方法是可行的。