Tiaml-SiRNA质粒转染HCT116细胞对裸鼠移植瘤淋巴管生成的影响

目的研究Tiaml—SiRNA质粒转染HCT116细胞对裸鼠移植瘤中淋巴管生成的影响。探讨Tiaml与结肠癌淋巴管生成的关系。方法裸鼠10只随机分为对照组（n=5）和Tiaml-SiRNA组（n=5），将含Tiaml—SiRNA质粒的HCT116细胞进行裸鼠皮下接种，5周后处死动物，留取肿瘤标本。利用Western blot和免疫组化SP法检测Tiaml、Racl、VEGFc／D蛋白水平的表达，并进行肿瘤淋巴管染色计数。结果干扰组移植瘤中Tiaml、Racl、VEGF-C、VEGF—D蛋白表达较对照组显著降低（P〈0．01），肿瘤内淋巴管生成也显著减少（P〈0．01）。结论通过RNA干扰技术抑制Tiaml的表达，在裸鼠体内可显著抑制移植瘤组织内淋巴管生成。     

一种新的人结肠腺癌淋巴管生成裸鼠动物模型

目的 探索一种新的人结肠腺癌淋巴管生成裸鼠动物模型.方法 在建立人结肠腺癌皮下移植瘤基础上构建人结肠腺癌裸鼠原位移植瘤裸鼠模型,通过淋巴管内皮细胞标记LYVE-1、D2-40和淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-3的免疫组化、Western blot和荧光定量RT-PCR检测以鉴定是否为肿瘤淋巴管生成.结果 与结肠阴性对照组即无瘤组比较,结肠原位种植瘤中呈LYVE-1、D2-40免疫组化染色强阳性的管道管壁较薄、管腔大而不规则或呈塌陷状,微淋巴管密度(LMVD)高,符合毛细淋巴管形态学特征;而且LYVE-1、D2-40蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);同时,结肠原位种植瘤的VEGF-C,VEGF-D和VEGFR-3蛋白和mRNA表达亦明显高于无瘤组(P<0.01),支持肿瘤淋巴管生成的VEGF-C,-D/VEGFR-3信号调控机制.结论 裸鼠结肠癌原位种植瘤存在淋巴管生成.该肿瘤淋巴管生成模型可作为一种新的人结肠腺癌淋巴管生成动物模型,为深入研究结直肠癌淋巴管生成和转移机制、药物干预及抗淋巴转移治疗提供参考.     

siRNA和携带siRNA重组腺病毒抑制结肠癌移植瘤淋巴管生成的比较

目的研究RNA干扰抑制结肠癌移植瘤模型VEGF-C表达和抗肿瘤淋巴管生成的有效方法。方法建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型并随机分为3组（n=8）：腺病毒（Ad5F35-VEGF-C-siRNA-EGFP）组、siRNA组和PBS组,对肿瘤进行原位注射,记录各组肿瘤体积变化,免疫组织化学法检测肿瘤内微血管密度（MVD）和淋巴管密度（LVD）。结果VEGF-C干扰能抑制肿瘤生长,且腺病毒组比siRNA组生长更慢。同时免疫组化显示各组MVD值的差异无统计学意义（P〉0.05）,siRNA组、腺病毒组和PBS组相比,LVD值的差异有统计学意义（P〈0.05）,LVD值发生不同程度地降低,且腺病毒组降低更显著（P〈0.05）。结论病毒介导siRNA干扰VEGF-C的表达是抗肿瘤淋巴管生成的有效方法。     

RNA干扰对人食管癌裸鼠移植瘤组织中血管内皮生长因子C表达的影响

目的:观察RNA干扰对人食管癌裸鼠移植瘤组织中血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的影响.方法:将转染VEGF-C小分子干扰RNA(siRNA)载体质粒(HX1、HX2和HX3)的EC9706细胞分别注射于裸鼠皮下,以转染无关序列和正常EC9706细胞为对照,SPF环境饲养4周后处死,取移植瘤组织,分别采用RT-PCR和免疫组化SP法检测VEGF-C mRNA和蛋白的表达.结果:5组移植瘤体积、质量及VEGF-C蛋白和mRNA相对表达量差异均有统计学意义(F分别为3.372、3.948、7.621和8.916,P均<0.05).与正常细胞对照组和无关序列组相比,HX1、HX2及HX3转染组移植瘤组织中VEGF-C蛋门及mRNA表达明显降低(P<0.01).结论:VEGF-C siRNA能有效抑制裸鼠食管癌移植瘤组织中VEGF-C mRNA及蛋白的表达.     

As2O3对人乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管新生的作用及其机制研究

目的:研究三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)对人乳腺浸润导管癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的作用及其可能机制.方法:建立人乳腺浸润导管癌裸鼠移植瘤模型,随机分成阴性对照组(NS)、阳性埘照组(5-FU 30 mg/kg)、处理组1(As2O3 1.5mg/kg)和处理组2(As2O3 3.0 mg/kg).采用免疫组化法检测移植瘤组织中微淋巴管密度(Microlymphatics density,MLD)及VEGF-C.NF-κ Bp65和Her2的表达;半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测VEGF-CmRNA的表达.结果:两处理组癌组织中MLD低于阴性和阳性对照组(P<0.01),处理组2癌组织MLD低于处理组1(P<0.05).对照组中VEGF-C表达高于两处理组(P<0.01),处理组1高于处理组2(P<0.05);VEGF-C mRNA的表达与其蛋白表达一致.各组中p65与Her2的表达与VEGF-C mRNA的表达呈正相关(r=0.782和r=0.848).结论:As2O3对人乳腺癌裸鼠移植瘤淋巴管新生具有抑制作用;通过抑制p65和Her2的表达,从而降低vEGF-CmRNA的转录水平是其可能的作用机制.     

应用小干扰RNA技术阻断VEGF-C基因体内抑制乳癌细胞增殖

目的 应用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)阻断裸鼠乳癌移植瘤中血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因, 探讨其对人乳癌MCF-7裸鼠移植瘤生长的影响.方法 于雌裸鼠皮下种植MCF-7细胞,将成瘤阳性的裸鼠随机分为VEGF-C siRNA处理组、脂质体组和对照组,每组5只.VEGF-C siRNA处理组肿瘤局部注射VEGF-C siRNA 1 mg/kg和PEITM,脂质体组肿瘤局部注射PEITM和PBS,对照组仅注射PBS,每3 d注射1次,连续注射8次.22 d后拉颈处死全部动物, 取肿瘤,采用半定量 RT-PCR 分析VEGF-C mRNA水平,Western blotting检测VEGF-C蛋白表达水平.结果 VEGF-C siRNA处理组瘤组织的增长受到明显抑制,VEGF-C基因的mRNA和蛋白表达水平显著降低(F=73.64～197.15,q=8.74～25.56,P＜0.05).对照组各指标无显著变化.结论 化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内能成功下调人乳癌裸鼠移植瘤中VEGF-C基因的表达, 抑制肿瘤的生长,是潜在的肿瘤基因治疗新方法.     

Tiam1基因沉默降低结肠癌细胞VEGF-C/-D的表达

目的 探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiaml)的表达与结肠癌淋巴管生成的关系.方法 将实验细胞分为3组,分别为未干扰组(HCT116)、空质粒载体对照组(HCT116/CN)和干扰组(HCT116/siRNA-Tiaml).应用siRNA使Tiaml基因表达下调,通过RT-PCR检测Tiaml mRNA表达抑制率,并用RT-PCR和Western blot方法检测Tiaml基因干扰前后VEGF-C/-D mRNA和蛋白的表达情况.结果 通过筛选后稳定表达的情况下,siRNA组的Tiaml、VEGF-C/-DmRNA和蛋白的表达明显低于未干扰组.结论 Tiaml参与了VEGF-C/-D表达的调节,推测Tiaml可能通过诱导VEGF-c/一D的表达影响结肠癌淋巴管的生成.Tiaml可作为结肠癌淋巴转移过程中一个有价值的指标.     

VEGF基因沉默抑制HCT116裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的 应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响.方法 将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6 27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6 27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型.通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(microvessel density,MVD)改变.结果 C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P＜0.05).A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色.C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P＜0.05).C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P＜0.05).VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关.     

Effects of 5-LOX siRNA on growth and ERK signal transduction pathway of HepG2 cell xenografts in nude mice

目的 研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响.方法 将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制.再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型.裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2).接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积.Western blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达.结果 转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01).结论 抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖.     

胃癌裸鼠移植瘤生长过程中反义血管内皮生长因子-C的作用

目的:通过观察胃癌裸鼠移植瘤的生长过程,研究反义血管内皮生长因子-C(Anti-sense vascular endothelial growth factor-C,Anti-sense VEGF-C)基因转染胃癌细胞后对其在裸鼠的成瘤性和肿瘤脉管生成中的作用.方法:将30只裸鼠随机分成3组,将转染了anti-sense VEGF-C基因、转染空白质粒及未转染质粒的人胃癌细胞系SGC-7901 3种细胞的细胞悬液,分别接种于3组裸鼠皮下,使之在裸鼠皮下产生肿瘤结节,观察肿瘤生成的速度并对肿瘤组织中的微淋巴管及微血管进行检测.结果:转染anti-sense VEGF-C基因裸鼠肿瘤生长速度明显减慢且瘤体较小(P＜0.05).第1、2、3周,转染anti-sense VEGF-C组肿瘤组织中微淋巴管密度较其他2组明显减少(P＜0.05):转染anti-sense VEGF-C组分别为4.0±2.2/HF、6.0±3.1/HF和9.0±2.7/HF;转染空白质粒组分别为6.0±8.7/HF、9.0±3.5/HF和18.0±7.2/HF;未转染质粒组分别为7.0±4.9/HF,9.0±6.4/HF和19.0±6.5/HF.但新生血管生成的数量3组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:anti-sense VEGF-C转染对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠成瘤性及肿瘤淋巴管生成有明显的抑制作用,但对肿瘤新生血管的形成影响不大.VEGF-C可能参与了胃癌新生淋巴管的形成过程.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。