银杏叶提取物对发育期戊四氮点燃癫癎大鼠认知功能及海马神经细胞凋亡的影响

目的 建立发育期戊四氮(PIZ)点燃癫(癎)大鼠模型,观察银杏叶提取物(EGb)对发育期点燃癫(癎)大鼠的干预作用,并探讨其干预机制,为拓展EGb的临床应用提供实验依据.方法 40只健康21日龄SD大鼠随机分成5组:正常对照组、PTZ+50 mL·L<'-1>乙醇7 d组、PTZ+50 mL·L"乙醇14 d组、陀+EGb 7 d组、PTZ+EGb 14 d组,每组8只.观察点燃及治疗过程中各组大鼠的发作情况,以Y-型电迷宫及Morris水迷官评价各组大鼠的认知功能,并以病理方法评价海鸟神经细胞凋亡的情况.采用SPSS 16.0软件进行统计学分析.结果 EGb治疗后点燃癫(癎)大鼠癫(癎)发作的次数减少,Y-型电迷官实验中达标次数明显减少,Morris水迷宫实验中逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增多,原位末端标记(TUNEL)显示实验中海马CA3 区神经细胞凋亡明显减少,但是EGb治疗14 d组与7 d组比较差异无统计学意义.结论 EGb治疗7 d和14 d均可改善发育期点燃癫(癎)大鼠的认知功能,但是并未显示出14 d疗程比7 d疗程有明显的疗效优势,此药理作用可能与减少或阻断海马神经细胞凋亡有关.     

人胰岛素样生长因子-1基因修饰的神经干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的治疗作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因修饰神经干细胞(NSCs-IGF-1)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑功能恢复的治疗作用.方法 采用结扎大鼠左侧颈总动脉,低氧箱中缺氧处理的方法,制成新生大鼠HIBD模型,随机分为正常对照组、模型对照组、神经干细胞(NSCs)移植组和NSCs-IGF-1移植组,尾静脉注入法进行干细胞移植.分别于移植1 d、7 d、14 d、21 d 取5只大鼠脑组织进行病理切片,通过5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)、巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色观察NSCs在宿主脑内存活及增殖和分化情况,并通过Y-迷宫实验和运动功能检测对剩余大鼠脑功能恢复情况进行观察.结果 移植7 d后,NSCs移植组和NSCs-IGF-1移植组均可见到BrdU阳性细胞,二组比较差异有统计学意义(P<0.05).在观测时间点内,NSCs-IGF-1移植组Nestin阳性细胞表达量早期升高,移植后14 d达峰值,后逐渐下降;NSE阳性细胞表达量逐渐升高.模型对照组在移植7 d后Nestin及NSE阳性细胞表达量逐渐降低,2组比较差异均有统计学意义(Pa<0.01).移植14 d,NSCs-IGF-1移植组Nestin及NSE阳性细胞表达量均明显高于NSCs移植组(Pa<0.01).大鼠学习记忆功能检测及运动功能检测结果均显示NSCs-IGF-1移植组明显优于模型对照组及NSCs移植组,二者差异均具有统计学意义(Pa<0.01,0.05).结论 NSCs及NSCs-IGF-1可以在脑内存活、增殖及分化,并可部分促进缺氧缺血大鼠脑功能的恢复;NSCs-IGF-1较单独移植NSCs效果好.     

银杏叶提取物对发育期癫(癎)大鼠学习记忆的影响

目的 研究银杏叶提取物(EGb)对托吡酯(TPM)引起的发育期癫(癎)大鼠学习记忆功能损害的影响.方法 在徐州医学院实验动物中心对28日龄SD大鼠32只,经初筛后随机分为4组,每组8只,随机选1组,作为正常对照组(NS组),其余3组用戊四氮(PTZ)制作点燃模型,致癫(癎)发作后随机选取1组作为癫(癎)点燃模型组(PTZ组),一组给予TPM为(TPM组),另一组给予EGb和TPM(EGb+TPM组)干预.观察点燃过程及治疗过程中各组大鼠的发作情况,以Y迷宫评价各组大鼠治疗前后的学习记忆能力.结果 TPM组较NS组、PTZ组在Y型迷宫中达标学会天数增多;EGb+TPM组较TPM组在Y型迷宫中达标学会天数减少;EGb+TPM组、TPM组在用药后较PTZ组的癫(癎)发作次数减少.结论 TPM可明显减少癫(癎)大鼠的发作次数与程度,但其对癫(癎)大鼠学习记忆能力有损害;EGb可以改善癫(癎)大鼠的学习记忆能力.     

银杏叶提取物对点燃模型幼鼠学习记忆及海马NMDAR1表达的影响

目的：探讨银杏叶提取物（EGb）对癫癎点燃模型幼鼠学习记忆等认知功能的影响及其可能机制,为临床应用EGb治疗癫癎儿童认知功能障碍提供实验依据。方法：21,35日龄Sprague-Dawley幼鼠各40只,经初筛后随机分为生理盐水对照组(NS)、点燃对照组(PTZ)、EGb大(PTZ+EGb1)、中(PTZ+EGb2)、小(PTZ+EGb3)剂量治疗组,采用戊四氮（PTZ）致幼鼠点燃模型,以Y型电迷宫学习记忆行为训练及免疫组化检测方法,观察用药前后大鼠学习记忆功能和海马NMDAR1表达的变化。结果：①治疗前后大鼠电迷宫试验达标所需电击次数：治疗前不同日龄的各个点燃组与各自NS组相比,达到学会标准所需的电击次数明显增多 (P<0.01)。EGb治疗后不同剂量的各治疗组大鼠达到学会标准的次数均明显少于同龄PTZ组(P<0.01),而同龄EGb 大、中、小剂量治疗组相互比较, 达到学会标准所需的电击次数随治疗剂量的减少逐渐递增(P<0.01)。EGb各剂量治疗组与治疗前比较,达标次数明显减少(P<0.01或P<0.05),而NS组、PTZ组较治疗前没有明显差异(P>0.05)。②NMDAR1免疫组织化学染色: 各日龄PTZ组NMDAR1免疫反应产物COD值较各自NS组明显增强(P<0.01);不同日龄各治疗组与各自PTZ组比较,随治疗剂量的增加,NMDAR1免疫反应产物COD值逐渐降低,差异均有显著性(P<0.01)。结论：EGb可以明显改善发育期不同日龄点燃模型大鼠的学习记忆功能,而且剂量越大,改善作用越明显。这一作用与EGb下调反复癫癎发作后NMDAR1的过度表达有密切关系。     

胰岛素样生长因子-1经鼻给药对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)经鼻靶向中枢给药对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞(NSCs)的保护性治疗作用。方法取90只7日龄SD新生大鼠随机分为假手术组、模型对照组、IGF-1干预组。采用Rice法制作新生大鼠HIBD动物模型。模型对照组于缺氧缺血后1 h鼻腔递送9 g·L-1盐水0.1 mL;IGF-1干预组于缺氧缺血后1 h鼻腔递送IGF-1 2.5μg(溶于9 g·L-1盐水0.1 mL);假手术组仅分离颈总动脉,不结扎不行缺氧处理。术后1、3、5、7、14 d取其脑组织,采用单、双标免疫组织化学方法检测其侧脑室室管膜下区(SVZ)BrdU阳性细胞和巢蛋白(Nestin)阳性细胞、双阳性细胞的表达;并计算BrdU阳性细胞数、Nestin阳性细胞数及BrdU-Nestin双阳性细胞数;HE染色观察其脑损伤组织形态结构变化。结果模型对照组:术后1 d SVZ区BrdU、Nestin、BrdU-Nestin阳性细胞开始增加,第3天达高峰,术后7 d明显减少,术后14 d SVZ仅有少量细胞;IGF-1干预组:术后1 d SVZ 3种阳性细胞明显增多,术后3 d增加急剧,术后5 d达高峰,术后7 d开始减少,术后14 d减少明显,每个时间点IGF-1干预组均高于模型对照组(Pa<0.05);假手术组无明显增殖现象,与其他2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论经鼻腔导入IGF-1对HIBD大鼠内源性NSCs具有明显的保护作用。     

早期干预对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响

目的 探讨早期干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞(NSCs)增殖的影响.方法 健康7日龄SD新生大鼠随机分为3组:假手术对照组、HIBD组和干预组.各组又根据干预后的时间(3d、7d、14 d、28 d)随机分为4个亚组(n=10).采用Rice - Vannucci法制成HIBD模型,采用早期触摸和丰富环境刺激进行早期干预,应用免疫组织化学法检测其侧脑室外侧壁的室下带( SVZ)区BrdU、Nestin阳性细胞数.结果 干预组3d、7d、14 d和28 d组左侧SVZ区BrdU阳性细胞数[(91±12)个·mm-2、(118±17)个·mm-2、(135±24)个·mm-2、(152±31)个·mm-2]明显多于假手术对照组[(35±8)个·mm-2、(30±5)个·mm-2、(27±7)个·mm-2、(31±5)个·mm-2]和HIBD组[(62±11)个·mm-2、(59±12)个·mm-2、(34±9)个·mm-2、(36±7)个·mm-2](Pa＜0.01).干预组7d、14 d和28 d组左侧SVZ区Nestin阳性细胞数[(54±8)个·mm-2、(63±7)个·mm-2、(81±9)个·mm-2]显著高于假手术对照组[(17±3)个·mm-2、(18±2)个·mm-2、(16±3)个·mm-2]和HIBD组[(37±6)个·mm-2、(25±4)个·mm-2、(28±5)个·mm-2](Pa＜0.05,0.01).结论 早期干预可促进HIBD新生大鼠内源性NSCs的增殖.     

不同疗程高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨不同疗程高压氧(HBO)对缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生大鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法 7日龄SD大鼠随机分为正常对照组(CON组)、HIBD组、HBO组,其中HBO组义分为HBO l疗程组[HBO-1,在HIBD 2 h开始HBO治疗,HBO压力为0.1 MPa(2 ATA),稳压60 min,1次/d,7次为1疗程],2疗程组(HBO-2,予2个疗程HBO)和3疗程组(HBO-3,予3个疗程HBO).疗程结束后(鼠龄35 d)取脑组织标本,采用5-溴-2-脱氧嘧啶核昔(BrdU)/神经巢蛋向(Nestin)免疫荧光双标法检测缺血侧侧脑室室管膜下区(SVZ区)和海马齿状回区(DG区)的内源性NSCs的变化.Western blot法检测缺血侧大脑半球Nes-tin蛋白变化.BrdU/神经元特异性烯醇化酶(NSE)和BrdU/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标法检测大脑皮层神经元和星形胶质细胞数量;TUNEL法检测皮层神经细胞凋亡;并进行T迷宫试验、放射臂迷宫测试、足错误等行为学测试.结果 1.HBO治疗后SVZ区BrdU+/Nestin+细胞随疗程增加而逐渐增加,以HBO-3组的阳性细胞数最多;2.各组大鼠的海马DG区均仅有极少垦的BrdU+/Nestin+细胞表达,且随着HBO疗程的增加,BrdU+/Nestin+细胞表达无增加;3.大脑皮层BrdU+/NSE+细胞表达随HBO疗程增加逐渐增多,其中以HBO-3组的阳性细胞数最多;4.HIBD组可见较多GFAP+细胞,高于CON组和HBO组;且各组均仅有个别BrdU+/GFAP+细胞表达;5.Western blot显示HBO-3组Nestin蛋白表达高于其余各组;6.T迷宫、放射臂迷宫和足错误测试结果 均表明随着HBO疗程的增加,疗效愈加显著.结论 增加HBO疗程可促进HIBD新生大鼠SVZ区内源性NSCs皮层神经元细胞的增殖和分化.     

碱性成纤维细胞生长因子对癫(癎)持续状态大鼠海马谷氨酸和γ-氨基丁酸的影响

目的 通过戊四氮癫(癎)持续状态大鼠模型,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对海马组织内主要的兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸--谷氨酸和γ-氨基丁酸动态变化的影响.方法 建立60 d大鼠戊四氮(PTZ)诱导癫(癎)持续状态模型,生理盐水(NS)注射作为对照,皮下注射bFGF进行干预,分4组:即NS组、NS+bFGF组、PTZ组、PTZ+bFGF组.选择处理后第3、7、14天三个时间点进行观察,采用高效液相法检测海马组织谷氨酸和γ-氨基丁酸含量.结果 发作后3、7、14 d PTZ组海马组织谷氨酸较NS组有显著升高(P<0.01),以发作后14 d升高更为明显,PTZ+bFGF组各时间点谷氨酸较PTZ组下降(P<0.05);γ-氨基丁酸含量在PTZ组各时间点亦大于NS组(P<0.05),以发作后14 d升高较为显著;PTZ+bFGF组发作后各时间点γ-氨基丁酸较PTZ组差异无统计学意义(P>0.05).结论 大鼠癫(癎)持续状态后一定时间内海马谷氨酸和γ-氨基丁酸增加,bFGF能够降低大鼠癫(癎)发作后异常增加的谷氨酸含量.     

神经生长因子对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经再生的影响

目的 探讨外源性神经生长因子(NGF)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经再生的影响.方法 通过7日龄新生Wistar大鼠制作HIBD模型,设置假手术组、HIBD对照组、NGF治疗组,应用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记新生神经细胞,免疫组化方法和计算机图像分析技术检测不同时点(术后4、7、14、21 d)海马齿状回(DG)巢蛋白(nestin)表达、BrdU阳性细胞数的变化.结果 各时点HIBD对照组nestin、BrdU阳性细胞数较假手术组增加(P均＜0.05);各时点NGF治疗组nestin、BrdU阳性细胞数较假手术组和HIBD对照组增加(P均＜0.01).结论 早期给予外源性NGF治疗可促使新生鼠脑缺氧缺血后中枢神经系统nestin、BrdU的表达增加,NGF治疗可促进受损神经细胞的增殖再生,在神经细胞损伤的修复巾发挥一定的保护作用.     

戊四氮反复点燃对发育鼠海马神经元发生的影响

目的探讨戊四氮(PTZ)反复点燃对发育鼠海马神经元发生的影响。方法10日龄Wistar大鼠48只,随机分为PTZ组和对照组,每组各24只。5-溴,2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记新生细胞。二组分别于模型制备完成后24 h、3 d及1个月时各处死8只大鼠;观察其惊厥行为学改变,海马区细胞形态、细胞计数,免疫组织化学法检测海马各区核因子-κB(NF-κB)表达及BrdU阳性细胞数,Timm染色法观察苔藓纤维发芽。结果1.模型制备完成后24 h,PTZ组海马CA1、CA3、DG区NF-κB表达均显著高于对照组(t=9.081,12.044,11.002 Pa<0.01);2.模型制备完成后3 d,PTZ组齿状回(DG)颗粒细胞数及BrdU阳性细胞数明显高于对照组(Pa<0.05),CA1、CA3及门区无明显神经元变性坏死现象;3.模型制备完成后1个月,PTZ组有苔藓纤维发芽,对照组无明显苔藓纤维发芽。结论PTZ反复点燃可诱发发育脑海马神经元的发生。     

高龄妊娠对子鼠海马神经干细胞发育的影响

目的 探讨高龄妊娠对子鼠海马神经干细胞发育的影响。方法 将3月龄（n=10）与12月龄（n=10）的雌性大鼠分别与3月龄雄性大鼠（n=20）合笼,以其子鼠为研究对象,分为适龄子代组和高龄子代组,每组40只。分别采用免疫荧光及Western blot法定位及定量检测生后第7天两组海马组织巢蛋白（Nestin）、双皮质素（DCX）及生后第28天成熟神经元标志物NeuN、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达水平;采用免疫荧光法定位检测生后第14天两组海马组织多聚唾液酸神经细胞黏附分子（PSA-NCAM）表达情况;每组各检测指标随机取8只大鼠。结果 Western blot检测结果发现高龄子代组海马DCX蛋白的表达明显低于适龄子代组（P < 0.05）,Nestin、NeuN及GFAP蛋白表达在两组间比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。免疫荧光检测结果显示,高龄子代组海马齿状回（DG）区Nestin、DCX及PSA-NCAM的表达均明显低于适龄子代组（P < 0.05）,而上述指标分别在两组海马CA1区、CA3区的表达比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。高龄子代组海马CA1区NeuN的表达高于适龄子代组（P < 0.01）,两组CA3区和DG区NeuN的表达比较差异无统计学意义（P > 0.05）。高龄子代组海马CA1区、CA3区、DG区GFAP的表达均低于适龄子代组（P < 0.05）。结论 高龄妊娠可能引起子鼠海马神经干细胞的增殖、存活及迁移受到抑制,并影响其向神经元和星形胶质细胞的分化,最终导致子鼠海马神经干细胞发育障碍。     

高龄妊娠对子鼠海马神经干细胞发育的影响

目的 探讨高龄妊娠对子鼠海马神经干细胞发育的影响。方法 将3月龄（n=10）与12月龄（n=10）的雌性大鼠分别与3月龄雄性大鼠（n=20）合笼,以其子鼠为研究对象,分为适龄子代组和高龄子代组,每组40只。分别采用免疫荧光及Western blot法定位及定量检测生后第7天两组海马组织巢蛋白（Nestin）、双皮质素（DCX）及生后第28天成熟神经元标志物NeuN、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达水平;采用免疫荧光法定位检测生后第14天两组海马组织多聚唾液酸神经细胞黏附分子（PSA-NCAM）表达情况;每组各检测指标随机取8只大鼠。结果 Western blot检测结果发现高龄子代组海马DCX蛋白的表达明显低于适龄子代组（P < 0.05）,Nestin、NeuN及GFAP蛋白表达在两组间比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。免疫荧光检测结果显示,高龄子代组海马齿状回（DG）区Nestin、DCX及PSA-NCAM的表达均明显低于适龄子代组（P < 0.05）,而上述指标分别在两组海马CA1区、CA3区的表达比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。高龄子代组海马CA1区NeuN的表达高于适龄子代组（P < 0.01）,两组CA3区和DG区NeuN的表达比较差异无统计学意义（P > 0.05）。高龄子代组海马CA1区、CA3区、DG区GFAP的表达均低于适龄子代组（P < 0.05）。结论 高龄妊娠可能引起子鼠海马神经干细胞的增殖、存活及迁移受到抑制,并影响其向神经元和星形胶质细胞的分化,最终导致子鼠海马神经干细胞发育障碍。     

不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响

目的 探讨不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑内源性神经干细胞（NSCs）增殖及远期组织学的影响,以寻求褪黑素治疗的较优方案。方法 将96只7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组、单剂量即刻褪黑素治疗（SDIT）组及7日连续褪黑素治疗（7DCT）组（n=24）。HIBD大鼠模型采用分离并电凝大鼠右侧颈总动脉,低氧舱（氧气浓度为8%±0.01%）内缺氧2 h的方法建立。造模后7 d,采用增殖细胞核抗原（PCNA）/巢蛋白（Nestin）免疫荧光双标法检测各组大鼠侧脑室室管膜下区（SVZ）及海马齿状回（DG）区内源性NSCs的增殖情况（n=8）;采用Western blot法检测各组大鼠脑Nestin蛋白的表达水平（n=8）。造模后28 d,采用苏木精-伊红染色（HE）和尼氏染色法观察海马CA1区的组织病理学及锥体细胞数的变化（n=8）。结果 免疫荧光染色结果显示：SDIT组和7DCT组PCNA⁺Nestin⁺DAPI⁺细胞数均较HIBD组增加,且7DCT组显著多于SDIT组（P < 0.01）;Western blot结果显示：SDIT组与7DCT组Nestin蛋白的表达水平均显著高于HIBD组,且7DCT组显著高于SDIT组（P < 0.05）;HE染色结果显示：SDIT组及7DCT组细胞损伤减轻;尼氏染色结果显示：SDIT组和7DCT组锥体细胞数均较HIBD组增加,且7DCT组显著高于SDIT组（P < 0.01）。结论 SDIT和7DCT均可促进HIBD新生大鼠脑内源性NSCs的增殖,减轻远期组织学损伤,且7DCT疗效优于SDIT。     

托吡酯对戊四氮致(癎)大鼠认知功能及海马5-羟色胺、乙酰胆碱酯酶的影响

目的 探讨托吡酯(TPM)对戊四氮(PTZ)致(癎)大鼠认知功能及海马组织5-羟色胺(5-HT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响.方法 28日龄健康Wistar 大鼠60只,随机分为空白组、TPM一般剂量(0.018 g/kg)对照组(TPM对照A组)、TPM大剂量(0.036 g/kg)对照组(TPM对照B组)、PTZ(0.035 g/kg)点燃模型组(PTZ组)、TPM一般剂量(0.018 g/kg)治疗组(TPM治疗A组)和TPM大剂量(0.036 g/kg)治疗组(TPM治疗B组),每组10只.PTZ和TPM连用4周.模型组完全点燃后各组进行Y-型迷宫学习记忆测试,免疫组织化学检测其海马组织5-HT阳性神经元的表达,化学比色法检测其海马内AChE活性.结果 TPM 对照A、B与空白组比较,TPM对照B组与A组比较,PTZ与空白组比较,大鼠学习能力及记忆能力均明显降低(Pa<0.001),5-HT免疫阳性神经元数量明显减少(Pa<0.001),AChE活性明显增加(Pa<0.001); TPM治疗A、B组与PTZ组相比,TPM治疗A组与TPM 对照A组相比,TPM治疗B组与TPM对照B组相比,大鼠学习能力及记忆能力显著提高(Pa<0.001),5-HT免疫阳性神经元数量明显增加(Pa<0.001),AChE活性明显降低(Pa<0.001).结论 TPM可引起正常大鼠认知功能障碍,其机制可能与大鼠海马5-HT水平降低和AChE活性增加有关,其程度与TPM剂量有关; TPM良好的治疗效果掩盖了药物本身对认知功能的影响.     

碱性成纤维细胞生长因子对胚胎大鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的探讨分离、培养及鉴定胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)方法，观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NSCs增殖、分化的影响。方法从大鼠胚胎脑组织中分离出NSCs，用bRGF和胎牛血清诱导其增殖和分化，予BrdU以标记分裂细胞，采用免疫细胞化学鉴定NSCs和分化神经细胞。结果大鼠胚胎脑NSCs在无细胞因子和胎牛血清的培养基中无新生细胞形成，但能在bFGF和血清诱导下形成克隆，并产生nestin和BrdU阳性细胞，贴壁后分化为神经元和星形胶质细胞。结论该方法从大鼠胚胎大脑分离出的细胞具有NSCs特性，即自我更新和多向分化潜能;bFGF是NSCs增殖必须的丝裂原。