蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤的抗血管生成作用

目的探讨蜂毒素对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响及其抗血管生成作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察蜂毒素对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法,检测肿瘤组织微血管密度（microvessel density,MVD）及碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和核转录因子κB（nuclear factorκB,NF-κB）的水平。结果蜂毒素低、中、高剂量组相对肿瘤增殖率分别为48.78%、38.33%和33.82%。与生理盐水组比较,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小（P〈0.01）。免疫组化结果显示,蜂毒素可降低肿瘤组织MVD,且蜂毒素处理组bFGF、HIF-1α和NF-κB蛋白水平明显低于生理盐水组（P〈0.01）。结论蜂毒素可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,其作用机制可能是降低NF-κB活性,抑制HIF-1α转录,进而下调bFGF表达,最终阻碍肝癌血管生成。     

缺血缺氧对黑色素瘤局部浸润的相关分子机制影响的初步研究

目的：研究缺血缺氧环境下肿瘤生长、血液供应模式及浸润转移相关蛋白表达的变化。方法：建立小鼠缺血后肢黑色素瘤移植瘤模型,观察缺血环境下的肿瘤生长情况,计数各种血液供应模式,免疫组化染色检测HIF-1α、MMP-2、MMP-9及VEGF等在正常和缺氧环境中肿瘤细胞表达。结果：肿瘤生长早期,缺血组的肿瘤生长速度比对照组慢（t=0.858,P=0.039）,但最终两组肿瘤的平均体积比较差异无统计学意义（P=0.431）;缺血组瘤组织内的血管生成拟态（VM）多于对照组（P=0.037）,而内皮依赖性血管的差异无统计学意义;HIF-1α、MMP-2、MMP-9和VEGF也在缺血组瘤细胞内高表达（P分别为0.036,0.015,0.008和0.019）;缺血组内血管生成拟态数量和肿瘤体积与HIF-1α水平呈正相关（r=0.472,P=0.015;r=0.391,P=0.050）。结论：在缺氧环境中,黑色素瘤细胞能够通过HIF-1α上调MMP-2、MMP-9及VEGF等蛋白表达,肿瘤细胞更富有侵袭性,同时促进肿瘤血管生成拟态的形成。     

CTX小剂量化疗在抗肺癌血管生成中的作用

目的：研究小剂量环磷酰胺（CTX）对肺癌血管生成的影响及其机制。方法：培养人肺腺癌A549细胞，建立裸鼠移植瘤模型，随机分为小剂量CTX组、大剂量CTX组和对照组进行化疗，观察裸鼠体重变化和抑瘤效果，免疫组化检测肿瘤微血管密度（MVD）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor 1 alpha，HIF-1α）和VEGF的表达。结果：小剂量组肿瘤生长缓慢，体重减轻等副作用明显小于大剂量组和对照组（P〈0．01或P〈0．05）；与大剂量组、对照组比较，小剂量组MVD、HIF-1α和VEGF表达均明显减少（P〈0．01），且小剂量组移植瘤中HIF-1α和VEGF、HIF-1α和MVD、VEGF和MVD之间均有相关性。结论：与大剂量组和对照组相比，小剂量CTX化疗组能更显著地抑制肺癌血管生成，抑瘤效果更明显，其机制可能与下调HIF-1α蛋白表达有关。     

Cox-2和HIF-1α在骨肉瘤中的表达及其与临床病理的相关性

目的：研究骨肉瘤中环氧合酶-2（cyclooxygenase 2，Cox-2）与缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1 alpha，HIF-1α）的蛋白表达及其与临床病理特征、生存预后的关系；探讨其在肿瘤形成、发展过程中的可能机制。方法：筛选不含硬骨组织，未经脱钙处理的骨肉瘤标本59例，进行临床、病理特征分期，并行术后跟踪。应用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Cox-2与HIF-1α的表达，绘制Kaplan-Meier生存曲线，结果：Cox-2和HIF-1α在骨肉瘤中的表达率分别为69．49％和38．98％，在对照组中的表达均为阴性，差异有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）。Cox-2的表达与骨肉瘤临床分期呈正相关（P〈0．05），HIF-1α的表达与年龄相关（P〈0．01）。Cox-2的表达与HIF-1α的表达呈正相关。在Cox-2阳性组和阴性组中，HIF-1α的阳性表达率分别为56．10％和0，差异有统计学意义（P〈0．01）。组间生存率差异显示术后生存期长短与Cox-2和HIF-1α的表达呈负相关，Cox-2和HIF-1α表达阳性者的术后累积生存率均低于阴性者，差异有统计学意义（P〈0．05和P〈0．01）。结论：Cox-2和HIF-1α在骨肉瘤组织中均为高表达，两者的表达与肿瘤的发生、发展有关，可能共同促进了肿瘤的恶性进展。Cox-2和HIF-1α阳性表达者的术后生存率较低，其表达可以反映骨肉瘤的预后。     

移植性人骨肉瘤OS-732裸鼠模型的建立

目的建立移植性人骨肉瘤裸鼠模型，为骨肉瘤的提供研究实验模型。方法采取皮下细胞悬液注射法与组织块植入接种法，建立人骨肉瘤裸鼠模型。人成骨肉瘤OS-732细胞株体外传代培养后，将l×10^7细胞悬液注入裸鼠腋后皮下（10只裸鼠），或将已成瘤的瘤组织块接种于裸鼠腋后皮下（10只裸鼠），观察肿瘤生长情况。接种后4周处死裸鼠，剥瘤称重，行病理鉴定。比较两种方法的成瘤率、终末瘤体积及瘤重、肿瘤相对增长率；大体观及病理组织学。结果两组裸鼠接种2周后均有局部肿瘤形成，细胞悬液组成瘤率70％，组织块组成瘤率100％，两组成瘤率差异无显著性（P〉0．05）；两组终末瘤体积及瘤重差异具有显著性（均P〈0．05）。细胞悬液组相对增长率高于组织块组，接种后第16天开始两组肿瘤增长率具有显著性差异（P〈0．05）。病理组织学鉴定符合骨肉瘤镜下特点。结论成功建立了移植性人骨肉瘤裸鼠模型，为临床研究提供了可靠方法。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bcl-2表达及凋亡的影响

背景与目的：本实验研究缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonueleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响，进一步探讨HIF-1α在缺氧诱导肿瘤细胞凋亡的过程中的作用机制。方法：设计针对HIF-1α RNA亚基的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynueleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相（8、16、24h）5μmol／L的HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α、P53和Bcl-2 mRNA的转录水平，免疫组化（SP法）和免疫印迹（Western Blot）检测HIF-1α、P53和Bcl-2蛋白表达情况。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：HIF-1α转录水平（8～24h）单纯缺氧组（22．0％～22．6％）及SODN缺氧组（22．0％～22．8％）与常氧组（20．2％～20．9％）比较未见明显改变，而在ASODN缺氧组（16．8％～18．5％）显著降低（P〈0．01）。其蛋白表达单纯缺氧组（33．1％～88．9％）、SODN缺氧组（32．5％～88．7％）随缺氧时间延长明显升高；而P53、Bel-2 mRNA水平单纯缺氧组、SODN缺氧组较常氧组均显著增强（3．4～7．5倍不等）（P〈0．05）。其蛋白的表达这二组也较常氧组均显著增强（2～大于37倍不等）（P〈0．05）。然而在ASODN缺氧组P53、Bel-2 mRNA活性明显减弱（11．5％～13．9％）（P〈0．05），蛋白表达水平也显著降低（13．6％～35．4％）（P〈0．05）：细胞凋亡率其他三组未见明显变化，但ASODN缺氧组显著增加（P〈0．05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型P53的突变使HIF-1α和Bcl-2的过表达，从而抑制肿瘤细胞的凋亡。而HIF-1α反义寡核苷酸抑制HIF-1α活性后，可以抑制野生型P53的突变，降低Bcl-2的表达，导致细胞凋亡的增加。     

生存素基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和放射敏感性的影响

背景与目的：生存素基因是近年来肿瘤研究的焦点之一,本研究旨在观察生存素基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和放射敏感性的影响。方法：随机选择雌性BALB／c—nu／nu裸小鼠24只,细胞接种法建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,每天观察裸鼠一般状况及肿瘤生长情况,通过绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长抑制率,观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;通过免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中生存素蛋白表达情况,Ⅷ因子相关抗原（factor Ⅷ related antigen,FⅧRAg）表达情况并计算微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响;当肿瘤体积达0．2cm^3时予X线放射治疗观察生存素基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤放疗敏感性的影响。结果：成功建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积在每个检测点均明显小于接种HeLa组。观察结束时,接种HeLa—s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为（0．369±0．043）g和（1．150±0．136）g（P〈0．05）;接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤生长抑制率为67．9％。免疫组化结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠生存素蛋白表达显著下降;接种HeLa—s2组裸鼠FⅧRag表达亦显著下降,MVD值降至23．4±3．1。HE染色、TUNEL染色结果显示：接种HeLa—s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,AI值达（22．7±1．4）％。X线放疗后不同检测点接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤体积明显小于接种HeLa组,肿瘤生长明显受抑。观察结束后,接种HeLa～s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为（0．41±0．06）g和（1．38±0．29）g（P〈0．05）。接种HeLa—s2组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多,与接种HeLa组AI比较,接种HeLa—s2组AI明显升高,分别为（30．06±0．98）％和（4．17±0．64）％（P〈0．05）。结论：生存素基因RNAi可通过下调移植瘤组织生存素蛋白表达降低其MVD,从而抑制移植瘤生长并促进其凋亡,并通过增加X线放射治疗诱导的细胞凋亡,增强放射治疗对移植瘤的生长抑制,进而提高移植瘤的放射敏感性。     

曲古抑霉素Ａ通过HIF-2α途径抗肿瘤作用的体内外实验研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制剂曲古抑霉素Ａ （trichostatin A,TSA）通过HIF-2α途径抗肿瘤作用机制。方法 体外模拟低氧环境培养骨肉瘤MG-63细胞,RT-PCR、western blot检测不同浓度的TSA对骨肉瘤MG-63细胞HIF-2α、VEGF及Glut-1 mRNA、蛋白表达的影响。使用蛋白酶体抑制剂MG132处理MG-63细胞和VHL基因缺陷的786-0细胞,western blot检测TSA对HIF-2α表达的影响。骨肉瘤MG-63细胞注入裸鼠皮下,待肿瘤体积长至20 mm3时,分为TSA组（N＝6）和生理盐水组（N＝6）,每３天给药１次,17天后镜下观察肿瘤组织形态;裸鼠处死后肿瘤组织提取蛋白,western blot检测HIF-2α表达情况。结果 体外低氧状态下,在培养的MG-63细胞系中,TSA呈浓度依赖性抑制HIF-2α蛋白及靶基因VEGF和Glut-1mRNA的表达;在蛋白酶体抑制剂MG132存在的情况下,可以逆转TSA对HIF-2α的抑制作用。在VHL基因缺陷的786-0细胞系中,TSA呈浓度依赖性抑制HIF-2α蛋白表达,MG132可以逆转TSA的作用。在动物移植瘤中,TSA抑制HIF-2α的表达。结论 实验表明,TSA通过一个VHL非依赖性的蛋白酶体依赖的途径抑制HIF-2α表达,TSA的抗肿瘤作用有一部分是通过抑制HIF-2α介导的,这为研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗肿瘤作用的分子机制提供了一个新的方向。     

HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢（P〈0.05）。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为（0.59±0.28）g,明显轻于空白对照组[（1.90±0.18）g]和无意义序列转染组[（1.66±0.24）g,P〈0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.45±0.04）%和（24.56±5.83）%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.32±0.02）%和（29.08±3.99）%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组（P均〈0.05）。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。     

基质金属蛋白酶-9与骨肉瘤鸡胚移植瘤血管生成的关系

目的 建立人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型，探讨基质金属蛋白酶-9（Matrix Metalloproteinase-9，MMP-9）在移植瘤模型中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法 人骨肉瘤细胞接种于鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryo chorioallantoic membrane，CAM），建立人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型，观察移植瘤生长特性和生物学性状；采用免疫组化法检测移植瘤组织中MMP-9的表达及微血管密度（microvessel density，MVD）。结果 建立了人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型，移植瘤具有较强的诱导血管生成作用，骨肉瘤鸡胚移植瘤中，MMP-9的表达水平与MVD呈显著性正相关（P〈0．001，r=0．855）。结论 人骨肉瘤鸡胚移植瘤模型易于复制、操作简单、适用范围广，是研究骨肉瘤诱导血管生成的较好动物模型；人骨肉瘤鸡胚移植瘤中MMP-9表达水平与骨肉瘤诱导的血管生成密切相关。     

砷化物治疗肿瘤的研究近况

近年来临床研究表明 ,三氧化二砷 (As2 O3 )和四硫化四砷 (As4S4)对急性早幼粒细胞白血病有显著的疗效 ;有机砷美拉砷醇也试用于治疗难治或耐药的白血病患者。大量研究资料表明 ,As2 O3 、美拉砷醇、二硫化二砷 (As2 S2 )和As4S4等砷化物对各种血液肿瘤细胞和许多实体瘤细胞均有诱导凋亡和 或抑制其生长作用。As2 O3 治疗多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征、原发性肝癌等某些实体瘤Ⅱ期临床研究均获得一定疗效。     

肿瘤表观遗传学研究热点的聚类分析

[目的]以Web of Science中的SCIE数据库为数据来源,分析肿瘤表观遗传学热点研究问题以及研究趋势.[方法]从SCIE数据库收录的肿瘤表观遗传学研究文献提取了相关的题录信息和研究关键词,利用SPSS18.0软件进行共词聚类分析,提取高频主题词,生成共现矩阵、共词聚类.[结果] 2003～2007年的聚类前5类类团分别为肿瘤表观遗传、继承、DAN甲基化、表观遗传过程和组蛋白修饰;而2008～2012年的聚类前7类类团分别肿瘤表观遗传、非编码RNA、DAN甲基化、组蛋白修饰、低甲基化、表观遗传过程和组蛋白乙方酰化,说明表观遗传、低甲基化与肿瘤表观遗传、肿瘤表观遗传过程以及组蛋白修饰与肿瘤表观遗传已经成为肿瘤表观遗传学研究领域的研究热点,也是肿瘤表观遗传学研究学者比较关注的内容.[结论]肿瘤表观遗传学的研究目前除了对肿瘤表观遗传过程、印记丢失等方面进行分析之外,主要侧重于肿瘤表观遗传学的形成原因分析,具体包括低甲基化与肿瘤的发生、组蛋白修饰与肿瘤的发生以及非编码RNA与肿瘤的发生研究.肿瘤表观遗传学的研究正由原来单一化、表面化的研究逐渐转向深层次、复杂化的研究.     

索拉非尼治疗原发性肝癌的研究进展

原发性肝癌是我国高发常见的恶性肿瘤，起病隐袭，早诊困难，确诊时大多数已达局部晚期或远处转移，治疗棘手，预后很差；常规化疗药物的作用有限，没有证据显示有明显的生存获益。已知肝癌的发病机制十分复杂，其发生、发展和转移与多种基因突变、细胞信号传导通路和新生血管增生异常密切相关，其中存在着多个关键性环节，正是采用分子靶向治疗的理论基础和潜在的靶点。近年来，应用分子靶向药物治疗肝癌的研究逐渐受到重视，正在成为新的热点，而多靶点、多激酶抑制剂索拉非尼（多吉美）作为代表性药物，已经取得突破性成果，能够有效地延长晚期患者的生存时间，开创了肝癌靶向治疗的新时代。为了尽快地熟悉了解有关动态，本文全面而系统地综述了索拉非尼治疗肝癌的实验研究、临床上单药和联合治疗研究的新进展，并讨论展望了未来的发展方向。     

三氧化二砷作用机制研究进展

砷化合物在我国作为药物应用已有2400多年的历史了。自从20世纪90年代,我国学者应用三氧化二砷（As2O3）治疗急性早幼粒细胞性白血病并获得成功以来,人们对砷化合物进行了深入的研究,发现As2O3不仅对各型白血病有效,对其他多种恶性肿瘤也有良好的治疗效果。As2O3主要是通过抑制肿瘤细胞生长和肿瘤新生血管形成、诱导肿瘤细胞部分分化和凋亡等发挥抗肿瘤作用的。本文不仅对上述问题进行总结,还展望了新发展起来的基因表达谱分析技术--基因芯片技术在研究As2O3作用机制方面的应用前景。     

开展以遗传学类型分类骨髓增生异常综合征的针对性治疗研究

 骨髓增生异常综合征（MDS）是一组起源于造血干（祖）细胞的克隆性异质性疾患,其异质性不仅表现在外周血和骨髓象上,也表现在细胞遗传学、病程、转归和对治疗的反应上。MDS遗传学分型应是一种能反映疾病本质的分型方法。国内应开展MDS遗传学分型的生物学特征研究,以MDS遗传学分型指导MDS的临床分型治疗,提高其临床疗效。     

奥沙利铂抗肿瘤作用的研究

观察奥沙利铂抗肿瘤作用。方法采用药物学体内实验法及体外人癌细胞培养药杀伤法，观察了奥沙利铂抑瘤活性并与顺铂相比较。结果奥沙利铂（９ｍｇ／ｋｇ－２．２５ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，３次）用药的３组小鼠，在体内接种Ｌ１２１０后，观察３０天均无腹水出现，全部存活，达到治愈水平。在相同剂量下（９ｍｇ／ｋｇ－２．２５ｍｇ／ｋｇ，腹注射，３次）败类沙利铂的毒性明显低于顺铂，每剂量组小鼠体重增加都高于顺铂组。结论体外