表皮生长因子受体和环氧化酶-2在前列腺癌中的共同表达和意义

目的:探讨表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和环氧化酶-2(Cyclooxyge-nase-2,COX-2)在前列腺癌(Prostate cancer,PCa)中的共同表达和临床意义.方法:采用免疫组织化学法(SP)测定48例PCa中EGFR和COX-2阳性表达情况,按免疫组织化学结果分为EGFR(-)COX-2(-)、EGFR(-)COX-2( )、EGFR( )COX-2(-)和EGFR( )COX-2( )四组,分析它们表达与临床病理和预后的关系.结果:EGFR、COX-2阳性在PCa中为34例(70.8%)、21例(45.8%),两者的表达在PCa中无相关性(r＝0.04,P＝0.80),EGFR和COX-2共同表达有16例(33.3%),和Gleason评分、PSA水平有关(P<0.05),5年复发率83.1%,显著高于EGFR( )COX-2(-)(27.8%)、EGFR(-)COX 2( )(16.7%)和EGFR(-)COX-2(-)(12.5%)(P<0.05);13例转移PCa中有10例为EGFR( )COX-2( )(62.5%),显著高于其他三组(P<0.05).结论:EGFR和COX-2在PCa中表达无相关性,但其共同表达可以作为判断PCa预后的重要标志.     

低盐诱导的致密斑细胞环氧化酶2表达与p38丝裂素激活蛋白激酶信号通路

目的 探讨低盐(LS)培养对小鼠致密斑细胞 (MMDD1)环氧化酶2 (COX-2)表达、前列腺素E2(PGE2)释放的诱导作用及p38丝裂素激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法 采用RT-PCR和免疫印迹方法检测正常盐(NS)与LS培养对MMDD1细胞COX-2表达的影响。用ELISA法检测上清液PGE2的含量。用免疫印迹检测细胞内p-p38 MAPK表达的变化。 结果 与NS培养相比,LS培养均能诱导MMDD1细胞COX-2 mRNA和蛋白表达增加(16 h时高峰 mRNA 0.94±0.12比0.26±0.09,28 h时高峰蛋白0.59±0.02比0.25±0.07,P均< 0.01);PGE2分泌各时间点均显著升高,于24 h达高峰 [(644.33±26.54)ng/L比(224.0±18.33)ng/L, P < 0.01。LS培养后,MMDD1细胞内p38MAPK的磷酸化程度显著上调,180 min时较高(从0.17±0.01升至0.28±0.01,P < 0.01)。20 μmol/L p38抑制剂SB-203580下调 LS诱导的COX-2蛋白表达(从0.58±0.01降至0.19±0.02, P < 0.01)。 结论 低盐培养促进MMDD1细胞COX-2的表达和PGE2的分泌。p38 MAPK激活介导了低盐诱导的MMDD1细胞COX-2表达。     

环氧化酶2 mRNA在前列腺癌组织中的表达

目的:探讨环氧化酶2(COX-2)mRNA在前列腺癌(PCa)组织中的表达及其意义。方法:采用RT-PCR方法检测32例PCa组织中COX-2 mRNA的表达并测定COX-2/GAPDH的比值,7例正常前列腺组织作为对照。结果:7例正常前列腺组织无COX-2 mRNA表达。COX-2/GAPDH与PCa G leason评分、分期呈正相关(P均<0.05)。结论:COX-2在PCa的发生发展中起重要的正性调节因子的作用。COX-2与PCa的恶性程度和进展有关,可作为判断PCa预后的指标。     

选择性环氧化酶-2抑制剂NS398诱导前列腺癌PC-3细胞系凋亡的研究

目的观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺 (NS398)在诱导COX-2表达阴性的前列腺癌PC-3细胞凋亡中的作用. 方法应用RT-PCR和Western blot的方法对PC-3细胞mRNA和蛋白水平的COX-2表达情况进行检测,四甲基偶氮唑蓝快速比色法观察不同浓度和时间NS398对PC-3细胞生存率的影响,流式细胞术检测100 μmol/L NS398作用24 h PC-3细胞的凋亡情况. 结果 mRNA和蛋白水平PC-3细胞COX-2均呈阴性表达;NS398可以抑制PC-3细胞的存活,并随浓度增加而增强,但无显著的时间依赖性;与对照组(10.563±2.582)%相比,100 μmol/L NS398诱导PC-3细胞早期凋亡比率(19.307±3.773)%显著增加,差异有统计学意义(P=0.01). 结论选择性COX-2抑制剂NS398可以诱导COX-2表达阴性的PC-3细胞凋亡,提示COX-2非依赖性途径的存在.     

p38 MAPK在LPS诱导内皮细胞表达ICAM-1中的作用

目的 研究p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达细胞间粘附分子-1(ICAM—1)中的作用。方法 脐静脉内皮细胞培养后分为两组：(1)刺激组,设不同时相点分别用LPS刺激内皮细胞;(2)预处理组,在LPS刺激前2h,用SB203580预处理内皮细胞。观察ICAM—1蛋白和mRNA表达的变化,检测内皮细胞p38MAPK活性变化。结果 LPS刺激后,内皮细胞表面ICAM—1分子在8～36h显增加,胞浆中mRNA在2h即有显增加;LPS刺激HUVEC后15min,p38MAPK活性即有升高,30～60min达高峰。p38抑制剂SB203580可显抑制LPS的诱导作用。结论 LPS可能通过激活p38MAPK信号转导通路,调节HUVEC的ICAM—1基因和蛋白表达。     

环氧化酶2在不同前列腺癌细胞系中的表达

目的:研究环氧化酶2(COX-2)在不同前列腺癌细胞系中的表达,探讨COX-2在前列腺癌侵袭进展及转移潜能获得机制中的可能作用。方法:应用Western印迹及RT-PCR鉴定LNCaP及其亚细胞系C4-2和AR-CaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3细胞中COX-2的表达情况,并初步分析其在不同特性前列腺癌细胞系转移侵袭过程中的作用。结果:Western印迹结果显示:COX-2蛋白在PC-3细胞中表达相对较高,在IF11、IA8、LNCaP和C4-2细胞中表达缺失,差异具有统计学意义(P<0.05)。COX-2mRNA表达结果同蛋白一致。结论:不同来源、不同转移潜能的前列腺癌细胞株中COX-2表达存在差异。高表达COX-2可能在PC-3细胞高侵袭转移潜能获得方面起着一定作用,而与其他细胞系转移作用无关。     

PI3K／PKB信号转导通路在重症急性胰腺炎胰腺损伤中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/PKB）信号转导通路对重症急性胰腺炎胰腺损伤的作用。方法 健康成年雄性SD大鼠30只，随机分为对照组、SAP组（S组）和SAP＋wortmannin（S＋W）组，每组10只。胆胰管内逆行注射法制作SAP模型。制模6h后取胰腺组织，检测各组含水量、MPO水平及病理改变；采用酶联免疫吸附法（ELISA）及RT-PCR技术检测胰腺组织TNF-α和IL-1β的蛋白及mRNA的变化、蛋白印迹（Western Blot）法检测p-PKB的活性变化。结果 制模6h后S组和S+W组较对照组胰腺组织含水量增加（P<0.01），MPO水平明显升高（P<0.01）；病理学发现胰腺明显出血、坏死和炎性细胞浸润；胰腺组织TNF-α和IL-1β的蛋白及mRNA水平明显增加（P<0.01），p-PKB水平明显升高（P<0.01）。S＋W组较S组胰腺组织水肿及病理改变减轻（P<0.01）、MPO水平降低（P<0.01），同时TNF-α和IL-1β的蛋白含量及mRNA表达减少（P<0.01），p-PKB水平降低（P<0.01）。结论 PI3K/PKB信号传导通路被激活是重症急性胰腺炎胰腺损伤的重要发病机制之一。     

选择性环氧化酶2抑制剂塞来昔布对人前列腺癌PC-3细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过观察选择性环氧化酶2抑制剂塞来昔布对人前列腺癌PC-3细胞株增殖与凋亡的影响,初步探讨塞来昔布对前列腺癌的体外抗肿瘤效应。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验观察塞来昔布对人前列腺癌PC-3细胞株增殖的抑制效应,利用Annexin V/FITC染色和流式细胞术检测塞来昔布诱导肿瘤细胞凋亡的作用。结果:MTT比色法结果显示塞来昔布随着作用浓度和时间增加,对PC-3的抑制率不断增加且表现出良好的量效关系和时效关系(P<0.05);划痕损伤实验显示100μm/L塞来昔布随着作用时间增加PC-3细胞的迁移距离均低于对照组(P<0.05);细胞迁移实验显示100μm/L塞来昔布作用于PC-3时PC-3细胞侵入下室的细胞数比对照组有明显减少(P<0.05);AnnexinV-FITC/PI染色检测实验表明塞来昔布可以诱导PC-3细胞凋亡(P<0.05),细胞周期实验结果表明,100μm塞来昔布作用于PC-3细胞后G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例比对照组明显减少(P<0.05)。结论:本研究表明塞来昔布对人前列腺癌PC-3细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可以诱导细胞凋亡,是治疗前列腺癌的一种可供研究的新途径。     

p38MAPK信号转导通路在脑组织fractalkine诱发小鼠痛觉过敏中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在脑组织fractalkine诱发小鼠痛觉过敏中的作用.方法 雄性昆明小鼠225只,体重30～40 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组:正常对照组(C组,n=55)、fractalkine组(F组,n=60)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)抗体anti-CX3CR1+ fractalkine组(CF组,n=55)及p38MAPK抑制剂SB203580+ fractalkine组(SF组,n=55).F组、CF组及SF组经侧脑室注射fractalkine 100 ng,CF组及SF组给予fractalkine前1h时分别经侧脑室注射anti-CX3CR1 1μg和SB203580 1μg,C组给予等容量生理盐水.分别于侧脑室给药前30min、给予fractalkine后30、60、120、240 min时取10只小鼠,测定热缩爪潜伏期(PWL),然后于上述时点各处死小鼠5只,取脑组织,采用Western blot法测定p38 MAPK磷酸化水平.分别于侧脑室给药前30min、给予fractalkine后6、12、24h时处死小鼠5只,取脑组织,采用ELISA法测定IL-1β和TNF-α的含量.F组注射fractalkine后4h时处死5只小鼠,采用免疫荧光法确定fractalkinc作用于小胶质细胞或星形胶质细胞.结果 与C组比较,其他3组PWL缩短,脑组织p38MAPK磷酸化、IL-1β和TNF-α水平升高(P＜0.05)；与F组比较,CF组及SF组PWL延长,脑组织p38MAPK磷酸化、IL-1β和TNF-α水平降低(P＜0.05).fractalkine作用于小胶质细胞.结论 p38MAPK信号转导通路参与了脑组织fractalkine诱发小鼠痛觉过敏的形成.     

磷脂酰肌醇3-激酶p110α/β在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与预后的相关性

目的 检测甲状腺乳头状癌病人癌组织中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)p110α、PI3Kp110β表达水平及其与预后的关系.方法 2008年1月～2013年7月我院收治的甲状腺乳头状癌病人60例(甲状腺乳头状癌组),结节性甲状腺肿60例(结节性甲状腺肿组),其他...     

表皮生长因子对PC-3细胞内皮素-1及其受体mRNA表达的影响

目的:探讨表皮生长因子(EGF)对激素非依赖性前列腺癌(HRPC)PC-3细胞中内皮素1(ET-1)及其受体mRNA表达的影响。方法:EGF作用不同时间(0、8、16、24、32、48h)后,RT-PCR法测定PC-3细胞中ET-1及其受体ETAR mRNA、ETBR mRNA表达;EGF干预24h后,RT-PCR法测定ET-1及其受体ETAR mRNA、ETBR mRNA表达变化。结果:在PC-3细胞中可检测到ET-1及ETAR mRNA表达,但无ETBR mRNA表达;EGF可上调ET-1及ETAR mRNA表达,与对照组比较,差异具有显著性;ET-1及ETAR mRNA表达随EGF干预时间增加而增加,EGF作用不同时间对PC-3细胞ET-1、ETAR mRNA表达的影响不同,差异具有显著性(P<0.05)。结论:EGF可上调PC-3细胞中ET-1及ETAR mRNA表达,为HRPC的治疗提供了分子生物学基础。     

表皮生长因子对PC-3细胞内皮素-1及其受体mRNA表达的影响

目的：探讨表皮生长因子（EGF）对激素非依赖性前列腺癌（HRPC）PC-3细胞中内皮素1（ET-1）及其受体mRNA表达的影响。方法：EGF作用不同时间（0、8、16、24、32、48h）后，RT-PCR法测定PC-3细胞中ET-1及其受体ETBR mRNA、ETBR mRNA表达；EGF干预24h后，RT-PCR法测定ET-1及其受体ETAR mRNA、ETBR mRNA表达变化。结果：在PC-3细胞中可检测到ET-1及ETAR mRNA表达，但无ETBR mRNA表达；EGF可上调ET-1及ETAR mRNA表达，与对照组比较，差异具有显著性；ET-1及ETAR mRNA表达随EGF干预时间增加而增加，EGF作用不同时间对PC-3细胞ET-1、ETAR mRNA表达的影响不同，差异具有显著性（P〈0．05）。结论：EGF可上调PC-3细胞中ET-1及ETAR mRNA表达，为HRPC的治疗提供了分子生物学基础。     

环氧化酶2及其抑制剂与前列腺癌

环氧化酶2在前列腺癌细胞中呈高表达,通过促炎症反应、抑制细胞凋亡、刺激血管生成和氧化损伤等作用参与前列腺癌的发生和发展,选择性环氧化酶2抑制剂可以通过多种途径抑制前列腺癌的生长。应用选择性环氧化酶2抑制剂治疗前列腺癌是当前研究的热点,具有重要价值。     

环氧化酶2和血管内皮细胞生长因子在前列腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨环氧化酶2(COX2)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在前列腺癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测40例前列腺癌和10例良性前列腺增生(BPH)组织中COX2和VEGF的表达。结果:前列腺癌组织中COX2和VEGF的阳性表达均明显高于BPH(P<0.01);COX2和VEGF在前列腺癌中的表达水平与其病理分级和临床分期均呈正相关(P均<0.05);前列腺癌中COX2表达水平和VEGF的表达水平相关(χ2=4.768,P=0.01)。结论:COX2可能诱导VEGF的表达而促进前列腺癌肿瘤血管的生成和侵袭转移。COX2和VEGF是检测前列腺癌的较好分子标志物,可望用于前列腺癌的辅助诊断和预后判断。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的：研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞体外作用及其对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：分别用0、6．25、12．5、25、50μmol／L浓度的姜黄素作用于PC-3细胞，12、24、36、48、72、96h后台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长活性；24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化，透射电镜观察细胞超微结构变化；半定量RT-PCR法检测PC-3细胞内VEGF mRNA的表达；ELISA检测细胞上清液中VEGF浓度。结果：姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖，呈剂量与时间依赖性，不同浓度姜黄素组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义（P〈0．01）。不同浓度姜黄素诱导PC-3细胞出现剂量依赖性G2／M期阻滞（P〈0．01），且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组（P〈0．01），差异有统计学意义；姜黄素作用24h后PC-3细胞出现凋亡的形态学改变；PC-3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中VEGF呈剂量依赖性降低。结论：姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的生长，并促进其G2／M期阻滞和凋亡，VEGF mRNA及蛋白的表达也明显降低，可能是其抑制肿瘤和血管生长的机制之一。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的:研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞体外作用及其对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:分别用0、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度的姜黄素作用于PC-3细胞,12、24、36、48、72、96h后台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;半定量RT-PCR法检测PC-3细胞内VEGFmRNA的表达;ELISA检测细胞上清液中VEGF浓度。结果:姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖,呈剂量与时间依赖性,不同浓度姜黄素组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。不同浓度姜黄素诱导PC-3细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01),且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组(P<0.01),差异有统计学意义;姜黄素作用24h后PC-3细胞出现凋亡的形态学改变;PC-3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中VEGF呈剂量依赖性降低。结论:姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其G2/M期阻滞和凋亡,VEGFmRNA及蛋白的表达也明显降低,可能是其抑制肿瘤和血管生长的机制之一。     

角质细胞生长因子和环氧化酶-2在胃癌中的表达及其与血管生成的关系

目的检测角质细胞生长因子(KGF)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白在胃癌组织中的表达及微血管密度(MVD),探讨KGF与COX-2在胃癌发生、发展中的作用及其机理。方法采用免疫组化SP法检测64例胃癌组织及30例正常胃黏膜组织中KGF和COX-2蛋白表达,并采用CD34抗体染色检测MVD。结果 KGF和COX-2蛋白在胃癌组织中的表达阳性率分别为65.6%(42/64)和79.7%(51/64),分别高于其在正常胃黏膜组织中的表达阳性率〔23.3%(7/30)和13.3%(4/30)〕,P=0.046、P=0.008。胃癌组织MVD为31.8±8.0,明显高于正常胃黏膜组织的14.3±6.1(P=0.000);KGF与COX-2蛋白均表达阳性者MVD为35.9±5.7,明显高于两者表达均为阴性者的25.7±7.0(P=0.000)。胃癌组织中KGF和COX-2蛋白表达均与淋巴结转移、浆膜浸润及TNM分期有关(P<0.05、P<0.01),MVD与淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.01),但均与患者年龄、性别以及肿瘤分化程度无关(P>0.05)。KGF与COX-2联合表达者与胃癌的浆膜浸润、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05),与患者年龄、性别以及肿瘤分化程度无关(P>0.05)。胃癌组织中KGF与COX-2蛋白表达呈正相关(r=0.610,P=0.000);胃癌组织MVD与KGF和COX-2蛋白表达均呈正相关(r=0.675,P=0.000;r=0.657,P=0.000)。结论 KGF和COX-2蛋白在胃癌组织中高表达,可能通过促进肿瘤新生血管的生成协同参与胃癌的浸润、转移。     

靶向沉默核干因子对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:检测前列腺癌PC-3、LNCaP及DU145细胞中核干因子(Nucleostemin,NS)基因的表达,研究NS基因沉默后对PC-3细胞增殖能力的影响。方法:采用免疫细胞化学法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测NS蛋白及mRNA在3种前列腺癌细胞中的表达。用NS特异性小发夹RNA表达质粒转染PC-3细胞,分别用RT-PCR及Western印迹方法检测转染后细胞(简称NS-shRNA-PC-3)中NSmRNA及蛋白的变化。比较NS基因沉默前后PC-3细胞体外、裸鼠体内增殖能力及凋亡情况的变化。结果:3种细胞中均显示NS基因高表达。转染后NS-shRNA-PC-3细胞中NS表达显著降低,细胞增殖速度减慢,G0/G1期细胞百分率显著升高,早期凋亡细胞增多。体内致瘤实验显示,NS基因沉默后,PC-3细胞在裸鼠体内增殖能力显著降低。结论:NS在前列腺癌细胞系中呈高表达,RNA干扰沉默NS基因后PC-3细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞增多。     

环氧化酶-2和血管内皮生长因子在胰腺癌组织中的表达及其相关性研究

目的　探讨环氧化酶 2 (COX 2 )和血管内皮生长因子 (VEGF)在胰腺癌组织中的表达及与其生物学行为的相关性。方法　采用免疫组织化学Envision法对 5 1例胰腺导管癌组织中COX 2和VEGF的表达进行检测。结果　该 5 1例胰腺导管癌组织中COX 2和VEGF的表达阳性率分别为 74.5 %和 68.6% ,而二者在 11例癌旁胰腺组织中均未见阳性表达 ;COX 2和VEGF的表达阳性率在临床Ⅲ～Ⅳ期明显高于临床Ⅰ～Ⅱ期 ,淋巴结转移阳性组明显高于淋巴结转移阴性组 ,其差异均有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;COX 2和VEGF的表达与胰腺癌的组织学分级、患者的性别、年龄以及肿瘤的大小和部位无关 (P>0 .0 5 ) ;COX 2的表达与VEGF的表达呈正相关 (r =0 .411,P<0 .0 1)。结论　COX 2和VEGF可能在胰腺癌的发生、发展过程中起着关键性作用 ,二者在血管生成过程中密切相关 ,可能为胰腺癌的治疗提供新的靶点 ,值得深入探讨。