慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠不同脑区NF200的经时变化研究

目的研究神经丝蛋白200(NF200)在慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠额、颞叶皮质和皮质下白质的经时变化。方法采用双侧颈总动脉永久结扎方法制备慢性前脑缺血动物模型;采用免疫组织化学方法检测痴呆鼠不同脑区NF200的经时变化情况;采用同济大学研制的HPIAS-1000高清晰彩色病理图文分析系统对不同脑区NF200阳性信号的面积密度进行分析。结果实验发现双侧颈总动脉永久结扎后不同脑区NF200的表达随时间变化。缺血1 m,2 m,4 m后NF200的表达阳性面积逐渐减少,与对照组相比有统计学意义。在形态学变化方面,1 m时NF200轻度变化,提示为可逆性损伤。随着缺血时间的延长,NF200免疫组化染色越来越淡。至4 m时,NF200免疫组化染色基本消失,提示为不可逆损伤。结论慢性持续性脑血流量下降致NF200的改变在血管性痴呆的病理生理过程中起一定作用。     

慢性前脑缺血致痴呆大鼠皮质及皮质下白质区病理学变化的对比研究

目的对比研究慢性前脑缺血致血管性痴呆(VD)大鼠额叶、颞叶皮质、海马及皮质下白质区的病理学变化，探讨血管性痴呆发病的病理基础。方法采用双侧颈总动脉永久结扎方法制备慢性前脑缺血致VD大鼠动物模型；通过常规HE及LFB染色，对比观察缺血后不同时间点大鼠额、颞叶皮质、海马区及皮质下白质的形态学改变；应用HPIAS-1000高清晰彩色病理图文分析系统进行图像分析．检测皮质下白质神经纤维脱失情况。结果HE染色结果显示：缺血1个月时额、颞叶皮质及海马区以锥体细胞缺血的改变为主，逐渐转变为锥体细胞凝固性坏死、变性、脱失及星形胶质细胞增生，少数大鼠额叶出现梗死灶；缺血1个月起实验组大鼠皮质下白质神经纤维疏松、断裂、脱失，且有随缺血时间延长而逐渐加重的倾向；图像分析显示缺血1个月实验组大鼠脑白质神经纤维脱失，出现囊泡样改变并逐渐增重。结论进行性的额、颞叶皮质、海马神经元退变以及皮质下白质损害是VD的病理基础，且白质区的损害要早于皮质。     

慢性低灌注大鼠血清及脑组织中MCP-1及IL-8的表达

目的 观察慢性低灌注大鼠的血清及脑组织中单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)及白细胞介素-8(IL-8)的表达,探讨炎性细胞因子在慢性低灌注致血管性痴呆发病中的可能机制.方法 Wistar大鼠180只,随机分为正常对照组、假手术对照组和模型组,通过永久性结扎大鼠的双侧颈总动脉导致前脑缺血建立慢性低灌注动物模型,在术后1d、3d、7d、14d、1个月、2个月、3个月、4个月的时间点,采用免疫组化和ELISA的方法,观察大鼠的血清及脑组织中MCP-1及IL-8的表达水平和演变过程.结果 模型组大鼠学习记忆能力随缺血时间的延长减退越明显.缺血1个月后,白质髓鞘脱失、间质疏松呈空泡样改变逐渐明显,以胼胝体及脑室周围白质明显.免疫组化染色证实MCP-1高表达,缺血早期以皮质及海马等部位多见,后期以白质的表达最为显著,见于脑室周围白质、胼胝体等区域.ELISA显示MCP-1在大鼠脑组织及血清中均出现两次高表达,而IL-8仅出现一次高表达,且脑组织中的表达滞后于血清中的表达,但组织中蛋白的表达量远高于血清中的表达.结论 (1)慢性持续性脑缺血可致大鼠出现进行性认知功能障碍；(2)趋化因子MCP-1及IL-8的慢性持续性高表达可能在慢性缺血致血管性痴呆病理损伤过程中起了一定的作用.     

慢性前脑缺血致痴呆大鼠IL-1β、IL-6及TNF-α的研究

目的研究IL-1β、IL-6及TNF-α在慢性前脑缺血致血管性痴呆(VD)发病机制中的作用。方法采用双侧颈总动脉永久结扎方法制备慢性前脑缺血动物模型;采用免疫组织化学方法检测痴呆鼠脑组织中IL-1β、IL-6及TNF-α的经时变化。结果双侧颈总动脉永久结扎后24h颞叶皮质及海马区的神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞即出现IL-1β、IL-6及TNF-α的表达,短期内呈现表达高峰,之后有所下降,至术后4个月时表达仍明显高于对照组,呈持续性高表达。结论炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α可能在慢性缺血致血管性痴呆的发病中起了一定的作用。     

17β-雌二醇对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经突触可塑性的影响

目的探讨突触可塑性在17p雌二醇改善血管性痴呆（VD）大鼠认知功能障碍中所起的作用。方法选用〉16月龄雄性Wistar大鼠,应用Y迷宫进行空间定向学习和记忆训练,将达到标准者随机分为3组：（1）假手术（Sham）组;（2）VD组;（3）VD＋雌二醇腹部皮下注射（E）组。应用免疫组织化学染色及RT—PCR的方法,检测大鼠海马CA1区微管相关蛋白2（MAP-2）和突触素（SYN）蛋白含量和mRNA表达水平的改变。结果术后60d,E组和VD组MAP-2和SYN表达均有下降,但VD组下降更为明显。结论17β-雌二醇相对增加VD大鼠海马CA1区MAP-2、SYN蛋白含量和mRNA的表达。提示相对增加与突触可塑性相关的MAP-2、SYN蛋白含量和mRNA的表达,可能是雌二醇改善VD认知功能障碍的机制之一。     

GCs对慢性低灌注大鼠海马脑组织IL-2及KRT6A蛋白表达影响的实验研究

目的采用免疫组化及蛋白质组学技术观察慢性脑缺血大鼠海马脑组织IL-2及蛋白表达产物变化。方法 BCAO建立慢性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组,GCs低中高剂量组及阳性药物(奥拉西坦)对照组。免疫组化ABC法检测海马脑组织IL-2表达改变;蛋白质组学技术分析鉴定慢性脑缺血大鼠模型及GCs干预后差异蛋白表达改变。结果 (1)模型组大鼠海马脑区IL-2表达量显著上升(2.15±0.45),与假手术组相比差异显著,差异有统计学意义(P0.05),GCs低中高剂量干预后IL-2表达水平出现显著上升,分别是(2.01±0.54、1.76±0.61、1.56±0.31)(P0.01,P0.05);(2)研究发现,慢性脑缺血大鼠海马脑组织Ⅱ型细胞骨架蛋白(typeⅡcytoskeletal 6A,KRT 6A)表达发生显著下降。结论慢性脑缺血病理过程中存在炎性相关蛋白的活化,推测其病理生理机制与炎症反应及细胞活化密切相关。     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠nNOS及SS的影响

目的研究丁苯酞对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠神经元型一氧化氮合酶(nNOS)及生长抑素(SS)的影响。方法采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型,100只老龄大鼠随机分5组,应用免疫组化方法对各组大鼠nNOS及SS表达进行检测。结果丁苯酞不同剂量治疗1个月后,nNOS阳性神经元表达减少(P<0.05),SS阳性细胞表达增加(P<0.05)。结论丁苯酞可抑制nNOS阳性神经元表达,增加SS阳性细胞的表达。     

γ-氨基丁酸对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响

目的观察γ-氨基丁酸（GABA）对慢性脑缺血致血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元形态学的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、GABA组,采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。GABA组术后腹腔注射GABA0.5g.kg-1.d-1,连续注射60d;用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;Nissl染色观察大鼠海马CA1区神经元形态学变化。结果 GABA能明显改善VD大鼠学习记忆能力,也能减轻海马CA1区神经元损伤。结论 GABA能改善慢性脑缺血致VD大鼠的学习记忆能力,减轻海马神经元损伤可能是其机制之一。     

大鼠局灶脑缺血酪氨酸激酶B表达图像分析

目的 观察局灶脑缺血大鼠酪氨酸酶B(TrkB)阳性神经元的表达,探讨脑缺血损伤与TrkB的关系。方法 制作大鼠局灶脑缺血模型,应用免疫组化方法观察不同缺血时间、不同脑区TrkB阳性神经元数的动态改变,并进行图像分析。结果 正常脑组织内即存在着一定数量的TrkB阳性神经元,脑缺血损伤后,在额、顶叶皮质及尾壳核外侧部的变性坏死区中心,TrkB阳性神经元缺失,而变性坏死区周边的半暗带区TrkB阳性神经元自缺血6h开始明显增多,且持续于整个缺血期。其它部位TrkB表达也不同程度增强。方差分析显示,与正常对照组比较,除假手术组外(P>O.05).缺血组各组均差异显著(P<0.01)。结论 脑缺血损伤后TrkB的表达有显著改变,考虑与神经元的损伤修复机制有关。     

脑脉泰对慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠脑血流量及海马神经元凋亡的影响

目的 研究慢性前脑缺血致血管性痴呆大鼠海马区局部脑血流量（rCBF）改变及细胞凋亡情况,探讨脑脉泰治疗血管性痴呆的疗效及可能机制。方法 采用双侧劲总动脉永久结扎法(2VO)制备慢性前脑缺血致血管性痴呆的动物模型,随机分为假手术对照组,模型对照组,给药组（脑脉泰）。手术后4周,HE染色观察神经元形态学改变,免疫组化染色检测海马区Caspase-3,bax蛋白表达变化。应用激光多普勒血流仪检测各组大鼠海马局部脑血流量。 结果 模型组大鼠海马Caspase-3、Bax阳性细胞灰度平均值低于假手术组、给药组,差异均具有显著性（P<0.05）;模型组海马rCBF低于假手术组、给药组,差异均具有显著性（P<0.05）。 结论 VD模型大鼠海马rCBF下降,海马神经细胞凋亡增加;脑脉泰可能通过增加海马局部脑血流量,直接或间接抑制海马神经细胞凋亡从而减轻VD认知功能障碍。     

溶栓治疗对脑梗死大鼠细胞骨架结构微管相关蛋白-2的影响

目的:观察尿激酶溶栓治疗对神经细胞骨架结构微管相关蛋白-2(MAP-2)的影响。方法:用自体血栓法制 作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,在MCAO后30min静脉注射尿激酶(UK)溶栓,通过神经功能评分判断溶栓的疗 效,HE染色进行病理观察,用免疫组织化学的方法研究溶栓对缺血皮层和海马MAP-2蛋白表达的影响。结果:溶栓组 神经功能评分较未溶栓组有显著提高,HE染色见病变范围明显缩小。MCAO后2h缺血区树突MAP-2表达较对照组 即有明显下降(P<0．05),随着缺血时间延长树突及胞体MAP-2降解增加,而溶栓治疗各时间点MAP-2表达较未溶栓 组显著提高(P<0．01)。结论:减少MAP-2的降解可能是溶栓治疗改善神经功能的机制之一。溶栓治疗后早期半暗带 区MAP-2表达在树突减少而在神经元胞体基本正常,这可能是缺血后神经元顿抑的形态学基础。     

siRNA-mediated silence of protease-activated receptor-1 minimizes ischemic injury of cerebral cortex through HSP70 and MAP2

Cerebral ischemic stroke is a prevalent disease in senior individuals. The anticoagulation and thrombolysis to recover blood supply as well as the diminution of neural excitotoxicity to protect brain cells have not shown to fully improve stroke patients. The comprehensive mechanisms and medication specificity remain to be addressed. The silence of specific mRNAs by RNA interference provides revenues for such goals. We examined whether the silence of protease-activated receptor-1 (PAR-1) by siRNA protects brain tissues from ischemic injury. In three groups of Wistar rats, their lateral ventricles received the injections of lentiviral vectors carrying siRNA for PAR1, small RNA in mismatching PAR1 or saline. A week after the injections, these rats were treated by one side of middle cerebral artery occlusion (MCAO). The scores of neurological deficits, the volume of ischemic infarction and the expressions of PAR-1, HSP-70 and MAP-2 were measured in 24h of MCAO. Our results show that the silence of PAR-1 significantly reduces neurological deficits and infarction volume, as well as elevates HSP-70 and MAP-2 expressions. Thus, the knock-down of PAR1 minimizes the ischemic impairments of cerebral cortex via HSP70 and MAP-2 pathways.     

电刺激治疗对脑梗死大鼠运动功能和脑组织微管相关蛋白-2及存活素表达的影响

目的探讨电刺激对脑梗死大鼠运动功能和脑组织微管相关蛋白-2(MAP-2)及存活素表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑梗死模型。制模后24h起,分别给予大鼠瘫痪侧(单侧)或双侧肢体电刺激治疗3d、7d、14d和21d。电刺激前、后各时间点用平衡木试验(BWT)检测大鼠的肢体运动功能,用免疫组化染色检测梗死灶周围大脑皮质MAP-2和存活素的表达水平,并与脑梗死对照组和假手术组大鼠比较。结果治疗第7d起电刺激组大鼠瘫痪肢体的BWT评分明显高于对照组(均P<0.05),治疗14d起双侧电刺激组BWT评分明显高于单侧电刺激组(均P<0.05)。治疗第7d起,电刺激组梗死灶周围脑组织MAP-2表达水平明显高于对照组(均P<0.05);治疗14d起,双侧电刺激组MAP-2的表达水平明显高于单侧电刺激组(均P<0.05);治疗21d时与假手术组MAP-2表达水平比较差异无统计学意义。电刺激组治疗后各时间点梗死灶周围脑组织存活素表达水平明显高于假手术组(均P<0.05),治疗7d、14d存活素表达水平明显高于对照组(均P<0.05),达到高峰;而双侧电刺激组明显高于单侧电刺激组(均P<0.05);治疗21d时,电刺激组和...     

rhG—CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的　 研究重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白 (macrotubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )mRNA表达的关系。 方法　 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,观察rhG CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,测定rhG CSF用药组和非用药组的MAP 2mRNA表达水平的改变。 结果　 比较rhG CSF治疗组与非用药组 :治疗组大鼠 ,局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低 ,神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP 2mRNA表达明显提前恢复正常。结论　一定剂量的rhG CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤 ,保护神经元 ,改善功能预后。     

rhG-CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的 研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor，rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白(macrotubule-associated protein2，MAP-2)mRNA表达的关系。方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，观察rhG-CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，测定rhG-CSF用药组和非用药组的MAP-2 mRNA表达水平的改变。结果 比较rhG-CSF治疗组与非用药组：治疗组大鼠，局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低，神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP-2 mRNA表达明显提前恢复正常。结论 一定剂量的rhG-CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤，保护神经元，改善功能预后。     

Phosphorylation of rat brain cytoskeletal proteins is increased after orally administered aluminum

In rats, administration of 0.3% aluminum in the drinking water for 4–5 weeks significantly increased the in vivo incorporation of 32-phosphorus (³Pi) into proteins with apparent molecular weights of 300 and 210 kDa in the brainstem and cerebral cortex. The identities of these two phosphoproteins as microtubule-associated protein-2 (MAP-2) and the 200 kDa neurofilament subunit (NF), respectively, were established using immunoprecipitation techniques with monoclonal antibodies. Aluminum treatment did not significantly change the amount of MAP-2 or 200 kDa NF in the cerebral cortex and brainstem. Phosphorylation of MAP-2 in aluminum-treated rats in the brainstem and cerebral cortex was 163 and 155% of control values, respectively. The phosphorylation of 200 kDa NF in the brainstem and cerebral cortex of aluminum-treated rats was 148 and 209% of control values, respectively. These results demonstrate that chronic oral aluminum administration to rats increases the phosphorylation of certain cytoskeletal proteins. This treatment regimen may provide a model system with which the mechanisms and consequences of altered in vivo phosphorylation of cytoskeletal proteins can be studied.     

蛋白激酶抑制剂H-7降低局灶性脑缺血半暗带和核心区半胱氨酸蛋白酶的活化

目的 研究蛋白激酶抑制剂H-7对局灶性脑缺血半暗带和核心区半胱氨酸蛋白酶Calpain和Caspase-3活性的影响.方法 采用动脉腔内插线法建立大鼠局灶性脑缺血模型,在缺血前15min经脑室给予H-7(125μg/大鼠),测定缺血1h再灌注23h(R23h)时,半暗带和核心区Calpain和Caspase-3的活性、Calpastatin和微管相关蛋白-2(MAP-2)的含量及梗死体积.结果 H-7明显降低R23h时半暗带和核心区μ-和m-Calpain及Caspase-3的活性,升高核心区Calpastatin的含量及半暗带和核心区MAP-2的含量,缩小梗死体积.结论 H-7通过抑制半暗带和核心区Calpain和Caspase-3的活性,降低局灶性脑缺血损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of protein kinase inhibitor H-7 on the activation of calpain and caspase-3 in penumbra and core after focal cerebral ischemia in rats. Methods Rats received 1h focal cerebral ischemia by intraluminal filament. H-7 ( 125 μg/rat) was administered intracerebroventricularly 15 min before ischemia. The activities of calpain and caspase-3, the levels of calpastatin and microtubule-associated protein-2 ( MAP-2 ) , and the infarct volume were assessed by casein zymography,fluorometry, Western blot analysis,and staining the brain sections with 2,3 ,5-tripheny-ltetrazolium chlorides,respectively. Results Compared with ischemic control, H-7 markedly reduced the activities of μ-and m-calpain, and caspase-3 , increased the levels of MAP-2 in penumbra and core, and enhanced the levels of calpastatin in core. Moreover, animals treated with H-7 showed a significant reduction in infarct volume. Conclusions These data demonstrate the protection of H-7 against focal cerebral ischemia through inhibiting the activation of calpain and caspase-3.     

Calpain inhibitor A-558693 in experimental focal cerebral ischemia in rats

OBJECTIVES: Calpains are intracellular proteases, which are activated in various cerebral injuries. We studied the expression of mu-calpain in a model of focal cerebral ischemia/reperfusion and the efficacy of the calpain inhibitor A-558693. METHODS: A transient occlusion of the middle cerebral artery was produced in male Wistar rats by using the suture model with 3 hours of ischemia and 24 hours of reperfusion. Six animals were given the calpain inhibitor and six animals were treated with placebo. The infarct size was determined by the loss of the calpain substrate microtubule-associated protein-2 (MAP-2) immunohistochemistry using volumetry in serial slices of the brains. Furthermore mu-calpain positive-stained cells were detected by immunohistochemistry and western blotting. RESULTS: In placebo-treated animals the mu-calpain expression was significantly increased in the ischemic hemisphere compared with the contralateral non-ischemic hemisphere (88.6 versus 10.5% in the basal ganglia, 60.7 versus 10.7% in the cortex, p < 0.001, respectively) with a subsequent loss its substrate MAP-2. However, the use of the calpain inhibitor A-558693 did not significantly change the mu-calpain expression, nor significantly reduce the infarct volume. DISCUSSION: The present data indicate that mu-calpain proteolysis plays an important role in the chain of events following cerebral ischemia. However, the calpain inhibitor A-558693 failed to prevent these changes.