头针诱导神经干细胞的增殖分化

目的研究脑缺血再灌注大鼠神经干细胞（neural stem cells,NSCs）增殖、分化情况及头针对其影响。方法将Wistar大鼠70只,随机分为假手术组10只、模型组和头针组各30只;模型组和头针组采用线栓法制作大脑中动脉闭阻（middle cerebralartery occlusion,MCAO）模型,各组大鼠又按照缺血时间（7、14、28d）分为3个亚组,每个时相点10只。头针组大鼠于缺血再灌注成功后即行头针治疗,每日1次,直至处死前;各组大鼠处死前1d腹腔注5-溴脱氧尿核苷（bromodeoxyuridine,BrdU）液;对各亚组大鼠行神经功能缺损评分（neurological severity score,NSS）,免疫荧光法计数各组大鼠海马（dentate gyrus,DG）BrdU阳性细胞和BrdU/NeuN阳性双标细胞。结果第28d头针组的NSS显著低于模型组（P〈0.05）。大鼠缺血再灌注后各组阳性细胞有明显表达,而头针组在不同时相的阳性细胞数较同时相模型组有明显增加。结论头针能促进神经干细胞的增殖和分化,改善神经功能缺损评分,从而促进神经功能的修复。     

神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对Bax表达的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对Bax表达的影响。方法采用栓线法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型,大鼠尾静脉注射NGF。应用免疫组化方法检测脑部神经细胞Bax表达,观察大鼠脑部病理改变。结果缺血再灌注组大鼠缺血侧半球皮质及纹状体Bax阳性细胞数为115.25±15.07,NGF组Bax阳性细胞数为70.00±12.77,两组比较差异有极显著性(P<0.01);光镜及电镜观察发现NGF组梗死区病理变化明显轻于缺血再灌注组。结论NGF对脑缺血再灌注损伤具有明确的保护作用,可减轻脑组织的损伤程度,并可减少缺血脑神经细胞Bax表达。     

成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后海马BDNFmRNA和bFGF mRNA的动态变化研究

目的观察局灶脑缺血/再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)mRNA的动态表达。方法将108只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组),每组再于缺血1h后再灌注于1,3,7,14,21,28d六个时间点进行观察,正常组和假手术组于相应时间点同步观察。采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型。应用原位杂交法检测大鼠缺血再灌注后1,3,7,14,21,28d缺血侧海马BDNF mRNA和b FGF mRNA表达。结果正常海马区可见少量BDNF mRNA和b FGF mRNA的阳性表达。BDNF mRNA阳性反应主要集中于齿状回颗粒细胞以及CA2、CA3中的锥体细胞胞浆中,b FGF mRNA主要位于海马锥体细胞层、CA1、CA2区。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马BDNF mRNA表达增加,主要见于齿状回颗粒细胞层和锥体细胞层。缺血/再灌注后1d时BDNF mRNA阳性反应即有增多,3d时达到高峰(P0.01),阳性产物染色较深,7d后迅速下降(P0.01),28d时接近正常水平。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马可见b FGF mRNA的强阳性表达,1d时开始增加(P0.05),3d即达一小高峰(P0.01),7d开始下降,21d时明显下降,28d时降到正常水平(P0.05)。结论局灶脑缺血/再灌注可上调BDNF mRNA和b FGF mRNA的表达,有利于脑缺血后神经功能恢复,具有神经保护作用。     

尤瑞克林对缺血再灌注大鼠脑神经生长因子表达的影响

目的探讨尤瑞克林对缺血再灌注损伤大鼠脑内神经生长因子(nerve growth factor,NGF)表达的影响及其作用机制。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型,SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(model组)和实验组(test组)。在缺血2 h再灌注48 h后取材,检测各组大鼠大脑皮质NGF的表达情况。结果与假手术组比较,模型组大脑皮质NGF的表达明显增高(P<0.05);与模型组比较,实验组大脑皮质NGF的表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论尤瑞克林可增加缺血再灌注大脑皮质NGF的表达,从而起到脑保护作用。     

舒血宁注射液对脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带水通道蛋白1和水通道蛋白9表达的影响

目的观察舒血宁注射液对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质缺血半暗带(IP)水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白9(AQP9)表达的影响。方法线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型(MCAO),随机分为假手术组、模型组、舒血宁注射液防治组和川芎嗪药物对照组。脑缺血2h,分别再灌注1d、3d、7d,采用免疫组化SABC法检测AQP1和AQP9蛋白表达的阳性总面积和平均吸收光密度。结果在缺血侧额顶叶皮质IP,再灌注各时间点,模型组AQP1和AQP9蛋白表达的阳性总面积和平均吸收光密度显著高于假手术组(P0.05或P0.01),舒血宁注射液和川芎嗪药物对照组再灌注1d、3d、7d,AQP1和AQP9蛋白表达的阳性总面积和(或)平均吸收光密度显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论舒血宁注射液能通过抑制AQP1、AQP9蛋白表达,减轻脑水肿,抗脑缺血再灌注损伤。     

CGRP和NGF对脑局部缺血再灌注大鼠脑组织神经元凋亡及PKCmRNA表达的调节作用

目的研究大鼠脑缺血再灌注后蛋白激酶C信使RNA(PKCmRNA)的表达,探讨降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织缺血再灌注的保护作用及机制。方法采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型,采用TUNEL法、原位杂交方法及显微图像分析检测海马及皮质内神经元凋亡和PKCmRNA的表达。结果大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数及PKCmRNA反应产物较正常组增多(P<0.05),而注射CGRP或NGF后神经元凋亡数及PKCmRNA反应产物明显低于缺血再灌注组(P<0.01),二者联合应用效果更加显著(P<0.05)。结论CGRP和NGF抑制缺血神经元凋亡,参与PKCmRNA的调节,二者对缺血神经元有协同修复作用。     

电刺激小脑顶核对成年大鼠局灶脑缺血再灌注后脑内神经营养因子bFGF mRNA的影响

目的 观察对局灶脑缺血再灌注大鼠进行电刺激小脑顶核(FNS)后,侧脑室和海马神经营养因子bFGF mRNA的动态变化.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组)、小脑顶核假刺激组(I/RFs组)、小脑顶核刺激组(I/RF组),每组于缺血再灌注后1 d,3 d,7 d,14 d,21 d,28 d 6个时间点进行观察(n=6).采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型.应用原位杂交检测缺血侧侧脑室和海马bFGF mRNA随缺血再灌注后的动态变化规律.结果 (1)在侧脑室区域,局灶脑缺血/再灌注后1 d,I/R组缺血侧bFGF mRNA 3 d时达一小高峰(P<0.01),7 d开始下降(P<0.01),14 d后迅速下降,28 d时下降到略高于正常水平(P<0.05);局灶脑缺血/再灌注后再给予FNS,I/RF组1 d时bFGF mRNA即明显增加(P<0.01),3 d时增加更明显(P<0.01),7 d才达到高峰(P<0.01),14 d后缓慢下降,28 d时虽已明显下降,但仍高于其他各组水平(P<0.05).(2)在海马,局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧bFGF mRNA 1 d时开始增加(P<0.05),3 d即达一小高峰(P<0.01),7 d开始下降;局灶脑缺血/再灌注后再给予FNS,缺血侧海马bFGFmRNA的表达更加强烈,1 d时明显增加(P<0.01),3 d后bFGFmRNA继续升高(P<0.01),到7 d时才达高峰(P<0.01),峰值更高,14 d时缓慢下降(P<0.01).结论 FNS能够持续上调bFGF mRNA的表达,使其反应更迅速、表达更高,并使其高峰延迟,表达时程更长,提示FNS对缺血性脑损伤具有较持久的脑保护作用.     

神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注海马神经细胞损伤的影响

目的 :观察神经生长因子 (NGF)对脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞损伤的影响。方法 :采用大鼠脑缺血再灌注模型 ,在光镜和透射电镜下观察NGF治疗组和缺血再灌组动物脑缺血 3 0min再灌注 2 4h和 72h时海马组织学及超微结构的改变。结果 :在缺血 3 0min再灌注 2 4h和 72h时 ,NGF治疗组海马CA1区神经细胞的结构损伤与缺血再灌组比较显著减轻 ;NGF可以减轻海马迟发性神经细胞死亡 (DND)性损伤。结论 :NGF对缺血再灌注所致的神经细胞损伤可能具有一定的保护作用     

干细胞移植对大脑中动脉闭塞模型鼠脑组织miR-34a及survivin表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注损伤后大鼠脑组织miR-34a和survivin表达的影响,探讨BMSCs移植的抗凋亡和神经保护作用机制。方法将192只大鼠随机分为空白组、模型组、PBS液移植组和干细胞移植组;采用改良Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO)模型;通过尾静脉注射法行干细胞移植;改良大鼠神经功能缺损评分(m NSS)评估神经功能缺损;免疫组化检测survivin的表达;实时荧光定量PCR技术检测miR-34a的表达。结果干细胞移植组的神经功能缺损评分在12 h、1 d时与模型组比较无明显差异(P0.05);3 d、7 d时明显低于模型组(P0.05)。干细胞移植组的survivin阳性细胞率在各时间点均显著高于模型组(P0.05)。干细胞移植组的miR-34 a表达量在各时间点均显著低于模型组(P0.01)。结论大鼠脑缺血-再灌注损伤可致病灶区miR-34 a的表达上调;干细胞移植可明显改善脑缺血-再灌注大鼠的神经功能;移植干细胞可能通过下调病灶区miR-34a和上调survivin的表达发挥抗凋亡及神经保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血预处理后XBP-1表达的变化

目的 观察缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后X盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠60只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)3组,每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d4个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用实时荧光定量PCR和Western blot法观察再缺血后各个时间点XBP-1 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12h开始明显上升,24h达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降,但仍保持较高表达水平(P ＜0.01);BIP组较MCAO组XBP-1 mRNA及其蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 脑缺血预处理可能通过诱导XBP-1表达发挥其神经保护作用.     

奥扎格雷钠对大鼠局灶性脑缺血血小板内皮细胞黏附分子-1、Bcl-2、Bax表达的影响

目的 观察大鼠局灶性脑缺血后脑组织中血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1、CD31)、Bcl-2、Bax表达的改变及奥扎格雷钠对其表达的影响. 方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型,制模成功大鼠随机分为奥扎格雷钠组和生理盐水组,脑组织切片免疫组化染色检测不同时间点PECAM-1、Bcl-2、Bax在各组大鼠脑组织中的表达变化. 结果大鼠大脑中动脉闭塞后脑组织PECAM-1、Bcl-2、Bax的表达明显增高(均P＜0.01).奥扎格雷钠组缺血12h、24h、36h表达PECAM-1较生理盐水组增高,缺血12h、24h 表达Bcl-2较生理盐水组增高,缺血24h、36h表达Bax较生理盐水组增高,均P＜0.01. 结论 脑组织表达的PECAM-1、Bcl-2、Bax分别参与了脑缺血不同时期的病理生理作用;奥扎格雷钠可促进PECAM-1和Bcl-2的表达,抑制Bax的表达.     

人脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的 探讨人脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型.60只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组(6只),假手术组(6只),缺血对照组(24只)和移植治疗组(24只);后2组又分为再灌注7 d、14 d、21 d、28 d组(各6只).体外培养脂肪基质细胞,诱导分化为神经干细胞.造模成功后24h,移植治疗组经尾静脉移植人脂肪组织来源的神经干细胞悬液(细胞浓度为2×106/ml),缺血对照组经尾静脉注射生理盐水,假手术组不做任何处理.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测Bcl-2、Bax表达.结果 与缺血对照组比较,移植治疗组各时间点的细胞凋亡数均明显减少(均P＜0.01),Bcl-2阳性细胞数明显增高(均P＜0.01),Bax阳性细胞数明显减少(P＜0.05～0.01).结论 人脂肪组织来源的神经干细胞可能通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,减少局灶性脑缺血细胞凋亡;对脑缺血再灌注损伤后的神经细胞起保护作用.     

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤脑Caspase-3与细胞色素C表达的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用机制。方法将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、G-CSF治疗组,每组12只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,于脑缺血2 h再灌注0 h及24 h给予G-CSF治疗组G-CSF(按体质量50μg/kg)腹部皮下注射,给予假手术组和缺血再灌注组等量生理盐水。采用Longa评分法进行神经功能评分,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织细胞色素C、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平,应用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况,TTC染色检测脑梗死体积。结果假手术组大鼠未发现脑梗死病灶,细胞色素C和Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞亦少见。G-CSF治疗组细胞色素C、Caspase-3阳性细胞数及凋亡细胞数均较缺血再灌注组明显减少(P<0.01);缺血再灌注组和G-CSF治疗组均可见大脑中动脉供血区梗死灶,但G-CSF治疗组梗死灶较缺血再灌注组明显缩小(P<0.01),神经功能明显改善。结论 G-CSF对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其作用机制可能通过阻断线粒体/细胞色素C途径抑制细胞凋亡。     

Notch信号在肢体远程预处理诱导脑保护机制研究

目的探讨Notch信号通过在肢体远程预处理脑缺血中的神经保护作用。方法将大脑中动脉阻闭120分钟(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血模型,将36只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、MCAO组和肢体远端缺血预处理(RIPC)组+MCAO组(n=12),分别观察各组大鼠脑梗死灶的大小和神经功能学评分,并用免疫组织化学染色检测再灌注2 h、24 h、72 h大鼠脑组织纹状体区Notch信号通路胞内活化片段NICD(Notch intracellular domain)表达的变化。结果 RIPC组脑梗死容积小于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05),其神经功能学评分也明显优于MCAO组(P<0.05)。各时相点RIPC组Notch表达明显少于MCAO组(P<0.05)。结论肢体远程预处理所诱导的脑缺血耐受的机制可能与Notch信号表达的降低有关。     

rTMS促进大鼠局灶性脑缺血海马内源性神经干细胞分化的研究

目的探讨重复经颅磁刺激（rTMS）对局灶性脑缺血大鼠海马内源性神经干细胞分化的影响。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,随机分为脑缺血自然恢复组和rTMS治疗组,用荧光显微镜和共聚焦显微镜观察缺血14d、28d后各组大鼠海马中5-溴脱氧尿核苷（BrdU）与神经元特异核蛋白（NeuN）、神经胶质酸性蛋白（GFAP）共同标记的阳性细胞,并在高倍荧光显微镜下对双标阳性细胞计数。结果脑缺血后14d、28d,rTMS治疗组大鼠海马BrdU／NeuN双标阳性细胞数量分别为17．12±2．91、23．20±5．97,较相应自然恢复组12．96±2．79、15．92±2．52明显增加,两组同一时间点组间比较有统计学差异（P〈0．01）。而脑缺血后14d、28d,rTMS治疗组大鼠海马BrdU／GFAP双标阳性细胞数量分别为30．48±4．58、36．48±4．90,较相应自然恢复组37．44±3．58、43．60±5．96减少,两者相比有统计学差异（P〈0．05）。结论局灶性脑缺血大鼠海马增殖的内源性神经干细胞,可分化为神经元或神经胶质细胞,而rTMS可促进海马内源性神经干细胞向神经元的分化。     

局灶性缺血预处理对脑缺血大鼠血管内皮生长因子表达及血管形成的影响

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在脑缺血耐受中的作用及其与血管形成的关系。方法：Wistar大鼠线栓法阻塞大脑中动脉建立局灶性缺血预处理模型,并进行神经功能评分。随机分为假手术（对照组）、非缺血预处理（NIP）组和缺血预处理（IP）组,NIP和IP组再根据不同时间窗随机分成5个亚组。分别在缺血预处理后1、3、7、14和21 d进行再次缺血2 h再灌注22 h,然后取脑检测：TTC染色测定脑梗死体积,计数微血管密度,免疫组化检测CD34和VEGF蛋白表达,原位杂交法检测VEGF mRNA表达。结果：①组间比较：IP 1、3和7 d亚组脑梗死体积较NIP组明显减小（P〈0.01）,其神经行为缺损评分也明显降低（P〈0.05）;IP 3和7 d亚组脑微血管密度明显增高（P〈0.05）;IP 1、3和7 d亚组VEGF蛋白及mRNA表达明显增高（P〈0.05,P〈0.01）。②组内比较：IP 7 d亚组微血管在缺血灶周边区分布最为密集,脑微血管密度明显高于同组内其他亚组（P〈0.05）;IP 3和7 d亚组VEGF蛋白表达明显增高,VEGF mRNA表达在IP 1 d即开始升高,高峰出现在IP 3 d,持续至7 d。结论：缺血预处理诱导了脑缺血耐受,缺血预处理诱导的VEGF表达增加以及血管形成在脑缺血耐受中发挥重要作用。     

磁共振在大鼠脑缺血再灌注模型中的应用研究

【摘要】
目的 利用磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）筛选合格的大鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,分析大鼠脑缺血再灌损伤后表观弥散系数（apparent diffusion coefficient,ADC）及部分各向异性（fractional anisotropy,FA）指标的变化特征。
方法 制作SD大鼠MCAO模型,根据是否再灌注分为永久闭塞组和缺血再灌组,每组各9只,另设假手术组2只作为对照。对大鼠行磁共振T2、弥散加权成像（diffusion weighted imaging,DWI）、弥散张量成像（diffusion tensor imaging,DTI）和磁共振血管成像（magnetic resonance angiography,MRA）扫描,重建脑血管及计算相对ADC值和FA值,比较两组的相对ADC值和FA值。
结果 MRA可以显示大鼠脑血管的堵塞与再通,T2加权像可以观测到蛛网膜下腔出血。永久闭塞组比缺血再灌组的相对ADC值高,差异有显著性（0.657±0.140 vs 0.588±0.132,t＝2.27,P=0.048）;相对FA值高,差异有显著性（1.010±0.143 vs 0.915±0.111,t＝2.89,P=0.02）。
结论 利用MRA和T2加权像扫描可以筛选出合格的MCAO模型,MCAO永久闭塞组相对ADC值和FA值均高于缺血再灌注组。     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

缺血后海马高迁移率族蛋白与星形胶质纤维酸蛋白表达及相关性

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注星形胶质纤维酸蛋白(GFAP)与高迁移率族蛋白(HMGB1)在海马CA1区表达变化,探讨二者之间的关系。方法采用大脑中动脉栓塞2h制备SD大鼠脑缺血模型,60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组,按1d、3d、7d、14d、28d时间点再分5个亚组,各时间点处死取脑,用免疫组化和荧光双标结合共聚焦扫描的方法来检测高迁移率族蛋白和星形胶质纤维酸蛋白在脑内海马CA1区表达变化。结果不同时间点缺血再灌注组GFAP、HMGB1表达均高于同时期的假手术组(P<0.05)。缺血再灌注组星形胶质细胞1d、3d、7d逐渐激活增生,7d达到高峰,14d开始下降;HMGB1在1d、3d、7d、14d是表达增加,14d达高峰,28d下降(与前一时间点比较P<0.05)。缺血再灌注组GFAP和HMGB1表达具有相关性(P<0.05),存在HMGB1和GFAP共定位细胞。结论脑缺血再灌注后,海马CA1区HMGB1增加与星形胶质细胞激活成正相关,过度表达的HMGB1和增殖的星形胶质细胞可能与缺血再灌注后神经元的迟发性损伤有关。