牙龈卟啉单胞菌表面相关物质通过Fas-FasL途径诱导T淋巴细胞凋亡的体外研究

目的检测Fas/FasL在牙龈卟啉菌表面相关物质（SAM）诱导的T淋巴细胞凋亡中的表达。方法选取10名全身及牙周组织健康受试者,分离外周血中单核细胞（PBMC）,用SAM体外刺激PBMC,用特殊的单克隆抗体（Fas、FasL）标记,并进行流式细胞仪检测。结果 FasFasL的表达量明显上调。实验组Fas表达量在24h为25.38%±3.17,在96h为65.11%±3.58;实验组FasL的表达量在24h为5.23%±1.53,在96h为20.59%±2.68。用抗Fas单克隆抗体阻滞Fas-FasL相互作用导致T细胞凋亡的明显减少,百分比为20.53%±3.26,未加抗体的为48.47%±4.15。但残余的细胞凋亡活动与阴性对照相比仍高。结论 SAM诱导T淋巴细胞凋亡主要通过Fas-FasL途径,并具有时间依赖性,通过数据证明了细胞凋亡的分子机制。     

牙龈卟啉单胞菌表面相关物质对T淋巴细胞凋亡的影响

目的 研究牙龈卟啉单胞菌表面相关物质(SAM)对人外周血中T淋巴细胞活化及凋亡的作用。方法 选取10名全身及牙周组织健康受试者,分离外周血中T淋巴细胞,在有/无SAM情况下培养0～96h,用荧光探针(AnnexinV-FITC、PI、CD69)进行标记,并进行流式细胞仪检测。结果 T淋巴细胞+SAM组AnnexinV+/PI-细胞百分数在48h、72h、96h分别为17.36±2.53,26.48±2.26,46.79±4.53。T淋巴细胞组AnnexinV+/PI-细胞百分数在48h、72h、96h分别为7.15±2.13,6.78±2.15,11.56±2.48,T淋巴细胞+SAM组与T淋巴细胞组之间存在明显差异(P<0.01)。CD69+T淋巴细胞+SAM组和CD69+T淋巴细胞组AnnexinV+/PI-细胞百分数除24h外的4个时间点上都无明显差异(P>0.05)。CD69+淋巴细胞+SAM组AnnexinV+/PI-细胞百分数在各个时间点上都明显高于T淋巴细胞+SAM组(P<0.01)。结论 SAM能够诱导人外周血中T淋巴细胞活化,并且能够通过活化促进其凋亡。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对泡沫细胞凋亡基因的影响

目的 了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在巨噬细胞吞噬氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipopmtein,oxLDL)形成泡沫细胞过程中和形成后对凋亡基因的影响,以期了解Pg影响动脉粥样硬化的可能机制.方法 以oxLDL、oxLDL+Pg-LPS刺激人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1源性巨噬细胞,以及oxLDL诱导巨噬细胞形成的泡沫细胞.采用吖啶橙-溴化乙锭双染色观察细胞凋亡,聚合酶链反应(PCR)芯片检测11种动脉粥样硬化相关凋亡基因的变化,实时PCR检测p53、c-Myc和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3基因的变化.结果 Pg-LPS提高了巨噬细胞吞噬oxLDL形成泡沫细胞过程中和形成后的细胞凋亡率,分别为(5.47±0.93)%、(7.50 4-0.54)%;PCR芯片检测显示泡沫细胞形成过程中Pg-LPS上调了B细胞淋巴瘤-白血病-2相关蛋白Al的转录(>2倍),泡沫细胞形成后上调了B细胞淋巴瘤-白血病-2和B细胞淋巴瘤-白血病-2相关蛋白A1的转录(>2倍);在泡沫细胞形成过程中提高了p53和caspase-3的转录水平[分别为(4.50×10-3±4.02×10-4)和(5.30×10-2±4.58×10-3)],抑制了c-Myc的转录水平(1.53×10-2±5.77×10-4);在泡沫细胞形成后降低了p53转录水平(4.23×10-3±5.85×10-4),促进了caspase-3的转录水平(6.00×10-2±6.08×10-3),P<0.05.结论 Pg-LPS影响了泡沫细胞形成过程中和形成后细胞中多种凋亡基因的转录,促进了凋亡的发生.     

牙龈卟啉单胞菌膜泡诱导牙龈上皮细胞炎性反应的体外研究

目的建立牙龈卟啉单胞菌膜泡诱导牙龈上皮细胞炎性反应的体外模型，探讨牙龈卟啉单胞菌在牙周炎中的致病作用。方法用酶联免疫吸附法检测牙龈卟啉单胞菌膜泡对牙龈上皮细胞前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）分泌的影响，以实时反转录聚合酶链反应法检测牙龈卟啉单胞菌膜泡对牙龈上皮细胞环氧化物酶（cyclooxygenase，COX）-2和白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8基因表达的作用。结果牙龈卟啉单胞菌膜泡浓度依赖性地促进了牙龈上皮细胞PGE2的分泌，并使COX-2、IL-6、IL-8的mRNA表达水平显著上调。结论牙龈卟啉单胞菌膜泡诱导牙龈上皮细胞发生的细胞炎性反应，可能是牙周炎发生、发展的重要因素。     

DHA对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导巨噬细胞炎症的抑制作用

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)对牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症的抑制作用.方法 用CCK-8方法检测DHA对P.g-LPS诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞的毒性.将P.g-LPS与RAW264.7细胞共培养24 h后,更换含有DHA的培养基培养24 h,实时荧光逆转录定量PC...     

牙龈卟啉单胞菌与免疫细胞凋亡

牙周病是口腔的常见病和多发病。大量研究证实，牙周病是由口腔微生物所引起，微生物与宿主之间的相互作用同时会影响牙周病的发展与严重程度。近年来，口腔疾病与细胞凋亡的关系的研究日益受到普遍重视，牙周病与免疫细胞凋亡的关系已成为研究热点。本文就成人牙周炎主要致病菌——牙龈卟啉单胞菌与免疫细胞凋亡的关系作一综述，意在探讨其在牙周病病因中的作用。     

牙龈卟啉单胞菌与免疫细胞凋亡

牙周病是口腔的常见病和多发病。大量研究证实,牙周病是由口腔微生物所引起,微生物与宿主之间的相互作用同时会影响牙周病的发展与严重程度。近年来,口腔疾病与细胞凋亡的关系的研究日益受到普遍重视,牙周病与免疫细胞凋亡的关系已成为研究热点。本文就成人牙周炎主要致病菌———牙龈卟啉单胞菌与免疫细胞凋亡的关系作一综述,意在探讨其在牙周病病因中的作用。     

B7-1、B7-2在牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的T淋巴细胞反应中的作用

目的：研究B7?1、B7?2分子对牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis,P． g）脂多糖诱导的T淋巴细胞反应的影响。方法：分别从基因敲除小鼠（ B7?1 KO组、B7?2 KO组、B7?1／2 KO组）和野生小鼠（ WT组）骨髓培养获得原代树突状细胞（ dendritic cell,DCs）并经P． g脂多糖刺激后,与T细胞混合培养。 CCK8试剂盒评价T细胞增殖,ELISA检测培养液中IFN?γ、IL?4及IL?17的水平,荧光定量PCR检测T细胞IFN?γ、IL?4、IL?17、GATA?3、T?bet及RORγt的转录水平。结果：CCK8检测显示各组T细胞增殖水平无差异。 ELISA及荧光定量PCR显示与WT组比较,B7?1 KO组IFN?γ降低,IL?4升高,IL?17无变化,T?bet降低,GATA?3升高,RORγt无变化;B7?2 KO组IFN?γ升高,IL?4降低,IL?17降低,T?bet升高,GATA?3降低,RORγt降低;B7?1／2 KO组各因子变化趋势介于B7?1 KO组和B7?2 KO组之间。结论：B7?1及B7?2分子对P． g脂多糖刺激的T细胞增殖无明显影响。但B7?1分子可促进T细胞向Th1型分化,抑制Th2型分化,与Th17型分化相关性不大;而B7?2分子抑制T细胞向Th1型分化,促进Th2型及Th17型分化。     

牙龈卟啉菌表面相关物质诱导外周血中淋巴细胞凋亡的体外研究

目的 :将牙龈卟啉菌表面相关物质和外周血中淋巴细胞共同培养 ,观察淋巴细胞的凋亡情况。方法 :通过流式细胞仪对 2 0名健康人外周血中淋巴细胞培养组 (对照组 )与牙龈卟啉菌表面相关物质和淋巴细胞共同培养组 (实验组 )进行比较研究 ,观察淋巴细胞的凋亡情况。结果 :实验组与对照组相比 ,淋巴细胞凋亡数明显增多 (P <0 .0 5 )。结论 :牙龈卟啉菌表面相关物质诱导外周血中淋巴细胞凋亡 ,细菌诱导细胞凋亡在牙周可疑致病菌的致病机制中可能具有作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对多形核白细胞凋亡的影响

目的　研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人的外周血中多形核白细胞的凋亡作用。方法　通过流式细胞仪对10名健康人外周血中多形核白细胞培养组(对照组)与不同浓度的牙龈卟啉单胞菌脂多糖和多形核白细胞共同培养组(实验组)进行比较研究,观察多形核白细胞的凋亡情况。结果　实验组和对照组相比,多形核白细胞凋亡数明显减少(P<0．05)。结论　牙龈卟啉单胞菌脂多糖以浓度依赖的形式延缓多形核白细胞的凋亡,细菌延缓细胞凋亡在牙周可疑致病菌的致病机制中可能具有重要的作用。     

牙龈卟啉单胞菌表面相关物质刺激淋巴细胞分化效应T细胞的研究

目的探讨牙龈卟啉单胞菌表面相关物质（SAM）刺激淋巴细胞活化后效应T细胞的表达及意义。方法选取10名全身及牙周组织健康受试者静脉血,分离外周血单核细胞（PBMC）,体外刺激PBMC：实验组加入SAM冻干产物（浓度为25μg/mL）;阳性对照组加入刺激抗原PMA（25μg/mL）＋ionomycin（1μg/mL）;阴性对照组不加任何刺激抗原。流式细胞仪检测T细胞内细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的表达。结果 SAM刺激淋巴细胞后上述四种细胞因子呈低水平表达;SAM诱导IL-4、IL-10表达的能力相对较强。结论 SAM刺激可造成T淋巴细胞免疫缺陷,导致IL-2、IFN-γ等功能障碍,激发TH2细胞活性,可导致机体免疫功能受损和牙周组织的继发性损伤。     

阳离子诱导牙龈卟啉单胞菌FtsZ的聚合

在细菌细胞分裂过程中 ,一系列的相关蛋白质参与这一过程 ,其中FtsZ(filamentoustemperature sensitiveproteinZ)通过在未来细菌细胞分裂的中点处聚合成FtsZ环发挥着极其重要的作用。在本实验中 ,我们探讨了牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)的FtsZ(PgFtsZ)的体外聚合特性 ,以期为研制和开发干扰Pg菌细胞分裂的抗菌剂奠定实验基础。1.材料和方法 :(1)PgFtsZ的C末端缺失变异型质粒 pYW 1和 pYW 4在以前的实验中构建。(2 )PgFtsZ的N末端缺失变异型质粒的构建 :使用相同的downstream引物和两个不同的upstream引物 ,通过PC…     

N-乙酰半胱氨酸抑制牙龈卟啉单胞菌脂多糖引起的成骨细胞氧化应激与凋亡

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis, P.g）脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）对成骨细胞氧化应激与凋亡的影响及N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine, NAC）对其保护作用,为临床运用NAC预防和治疗牙周炎提供理论基础和实验依据。方法 CCK-8法检测不同浓度P.g LPS和NAC对小鼠成骨细胞增殖影响,确定最佳刺激浓度和时间。将细胞分为对照组、LPS组、NAC组、LPS+NAC组。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-PCR法检测各组Foxo1、Sod2、Bax基因表达水平,荧光显微镜下观察各组细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）荧光强度,检测各组超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量变化。结果 与对照组相比,LPS组成骨细胞内ROS,MDA含量增多,SOD活性下降,细胞凋亡率明显升高,Foxo1、Sod2 mRNA基因表达量降低,Bax基因表达水平上升。与LPS组相比,LPS+NAC能够...     

牙龈卟啉单胞菌研究进展

牙周炎是常见的口腔疾病之一,是中国成年人失牙的主要原因.牙龈卟啉单胞菌在引发牙周组织破坏过程中发挥着重要的作用,成为国内外学者研究的热点之一.本文就牙龈卟啉单胞菌与口腔疾病和其他全身性疾病的关系、牙龈卟啉单胞菌全基因组,牙龈卟啉单胞菌与牙龈上皮细胞的相互作用等研究作一综述,以拓宽牙龈卟啉单胞菌的研究思路,进血为牙周炎的...     

甘草酸对牙龈卟啉单胞菌生长影响的体外研究

目的研究甘草酸对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的抗菌活性。方法采用微量液体稀释法测定甘草酸对牙龈卟啉单胞菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最低杀菌浓度（minimal bactericidalconcentration,MBC）。用不同浓度的甘草酸培养牙龈卟啉单胞菌,分别于培养0、4、8、12、24、48 h测定细菌悬液600 nm波长处的光密度值,绘制牙龈卟啉单胞菌的生长曲线。结果甘草酸对牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC分别为1.57 g/L和12.5 g/L,甘草酸对牙龈卟啉单胞菌生长的抑制作用随药液浓度的增加而增强。结论甘草酸对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的生长有抑制作用。     

microRNA-146a对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的调节作用

目的探讨microRNA-146a (miR-146a)对牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)脂多糖(LPS)刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的作用。方法从小鼠脾脏收集淋巴细胞。实时定量聚合酶链反应和酶联免疫反应用于检测淋巴细胞在P. gingivalis LPS、miR-146a模拟物或抑制剂处理后细胞因子的表达。结果与P. gingivalis LPS未刺激组相比,P. gingivalis LPS能促进白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和IL-10表达(P<0.05),虽抑制骨保护素(OPG) mRNA水平(P<0.05),但分泌水平差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组相比,P. gingivalis LPS处理的淋巴细胞中miR-146a模拟物抑制IL-1β、IL-6和RANKL表达(P<0.05),促进IL-10和OPG表达(P<0.05),miR-146a抑制剂对这些细胞因子产生相反的效果(P<0.05)。结论 miR-146a可通过抑制淋巴细胞IL-1β、...     

牙龈卟啉单胞菌的研究进展

牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis,P. gingivalis)是牙周感染最重要的致病菌,与慢性牙周炎的发生发展密切相关。其致病性归因于一系列毒力因子如菌毛、荚膜、脂多糖、牙龈蛋白酶等。相关毒力因子的致病机制引起了国内外学者的广泛关注和重视。本文就牙龈卟啉单胞菌表面结构菌毛、荚膜及菌体分泌脂多糖、牙龈蛋白酶等重要致病因子的致病机制研究进展做一综述,以期为牙周炎的防治提供新的靶点和思路。     

牙龈卟啉单胞菌牙龈蛋白酶的研究进展

牙周炎是一种牙齿支持组织的慢性炎症性疾病,能引起结缔组织和牙槽骨的破坏而导致渐进性附着丧失,最终可能导致牙齿脱落.革兰氏阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周炎的重要致病菌,具有包括脂多糖、菌毛、血细胞凝集素和胞外蛋白酶在内的多种毒力因子,其中牙龈蛋白酶提供的蛋白水解活性占该生物体产生的一般蛋白水解活性的大部分(85％),...     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞EphA2表达的调控

目的：研究小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1在成骨分化过程中,牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）对EphA2表达的影响。方法：使用终浓度1mg/L的Pg-LPS与MC3T3-E1共培养,分别在第3、7、14天3个时间点,采用RT-PCR和Western-Blot技术测定EphA2的表达和成骨相关基因的表达,并通过PNPP法测定碱性磷酸酶活性。结果：RT-PCR结果提示,在第3天和第7天,实验组比对照组EphA2基因表达分别增高4.5倍和1.3倍,两组之间存在显著差异（P〈0.05）。同时成骨标志物ALP和Sp7基因表达降低,与对照组相比差异有显著性,但Runx2和ColⅠ基因的表达则无明显差异。但是在第14天,实验组和对照组之间EphA2和成骨相关基因表达均无显著性差异。Western-Blot结果提示,在第7天实验组比对照组EphA2蛋白表达增加。结论：Pg-LPS对前成骨细胞系MC3T3-E1细胞,在成骨分化的早期和中期能够促进EphA2的表达,但是在成骨分化晚期对EphA2的表达则无明显作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖引起牙周炎症的机制和特点

革兰阴性厌氧菌牙龈卟啉单胞菌和牙周炎密切相关,脂多糖是革兰阴性菌外膜中的主要结构成分,具有广泛的生物学活性,被认为是革兰阴性菌的主要毒力因子之一。本文就牙龈卟啉单胞菌脂多糖的化学组成和结构,所启动炎症信号通路及其起始受体,引起牙周炎症的机制和特点作一综述。