乙烯硫脲对FRTL-5细胞甲状腺球蛋白合成分泌及摄碘功能的影响

目的探讨乙烯硫脲(ETU)对FRTL-5细胞的甲状腺球蛋白(TG)合成分泌和摄碘能力的影响。方法用30、150和270μg/ml乙烯硫脲处理FRTL-5细胞后,用MTT法和3H掺入法测乙烯硫脲的细胞毒性;放免法和免疫细胞化学法测乙烯硫脲对TG合成分泌的影响;RT-PCR检测乙烯硫脲对nis基因和tg基因的影响;同位素示踪法检测对细胞摄碘能力的影响。结果30～270μg/ml乙烯硫脲对FRTL-5细胞无显著细胞毒性。150μg/ml和270μg/ml乙烯硫脲显著降低培养液中TG浓度,对胞浆内TG无显著影响;使nis基因转录显著降低,对tg基因无显著影响;150μg/ml和270μg/ml乙烯硫脲显著降低细胞摄碘能力。结论乙烯硫脲可抑制FRTL-5细胞分泌TG,对TG合成无显著影响;乙烯硫脲各剂量组显著降低nis基因转录,但仅在高剂量组显著降低细胞摄碘能力。     

甲状腺素干扰物对甲状腺滤泡细胞分泌甲状腺球蛋白功能的影响

目的了解几种典型甲状腺素干扰物对甲状腺滤泡(FRTL-5)细胞分泌甲状腺球蛋白功能的影响,探讨其干扰甲状腺素水平的细胞学机制及建立甲状腺素干扰物甄别方法的可行性。方法将大鼠FRTL-5细胞体外培养后接种于24孔培养板,每孔细胞数2×105个,待细胞贴壁后分别加入受试物丙硫氧嘧啶、叶枯宁[N,N-甲撑-双(2-氨基-5-巯基-1,3,4-噻二唑)]、磺胺二甲嘧啶和杀草强,各设1组溶剂对照,置CO2孵箱培养48h后,每孔取1ml培养液,用放射免疫法测定甲状腺球蛋白的浓度。结果4个实验组的甲状腺球蛋白浓度与对照组相比均降低,差异有显著性(P<0.05),且可能存在剂量-效应关系。结论降低甲状腺细胞合成或分泌甲状腺球蛋白可能是这4种甲状腺素干扰物的作用机制之一。FRTL-5细胞分泌甲状腺球蛋白的功能是一个相对灵敏的指标,与其他体内体外实验结合可用于甲状腺素干扰物的一阶段甄别(初筛)方法。     

应用FRTL-5细胞探索五氯苯酚干扰甲状腺激素作用机制

目的利用FRTL-5细胞,在体外研究五氯苯酚干扰甲状腺激素活性的机制。方法设二甲亚砜溶剂对照组(DMSO);高氯酸钠摄碘阳性对照组;五氯苯酚:0.1μg/ml、0.3μg/ml和0.5μg/ml三个剂量组;五氯苯酚处理FRTL-5细胞24小时,用3H掺入法测其对FRTL-5细胞DNA合成的影响,放免法测其对培养液中甲状腺球蛋白浓度的影响;用五氯苯酚、高氯酸钠处理FRTL-5细胞12和24小时后,用同位素125I测摄碘能力的变化。结果3H掺入法显示五氯苯酚各剂量组对FRTL-5细胞DNA合成无显著影响;放免法显示五氯苯酚0.3μg/ml和0.5μg/ml剂量组显著降低甲状腺球蛋白浓度;五氯苯酚处理FRTL-5细胞12小时后,0.3μg/ml和0.5μg/ml剂量组使FRTL-5细胞摄碘能力显著增强,处理24小时后,FRTL-5细胞摄碘能力无显著改变,但有降低的趋势,高氯酸钠阳性对照组使FRTL-5细胞摄碘能力在12小时和24小时都极显著降低。结论五氯苯酚干扰甲状腺激素作用可能与其使甲状腺球蛋白浓度的改变有关。     

杀草强诱导人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞肿瘤相关基因表达谱变化

目的以人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞为受试对象,通过差异性表达谱芯片分析,探索杀草强致人甲状腺肿瘤的相关机制。方法以1~100μg/m L杀草强处理Nthy-ori-3-1细胞24 h后,用MTT法检测其对细胞增殖的影响。以100μg/m L杀草强处理细胞24 h后,做基因表达谱分析,并用GO(Gene Ontology)分析和pathway分析芯片结果,用实时定量PCR验证芯片结果。结果 MTT结果显示,所有检测浓度杀草强对Nthy-ori-3-1细胞增殖均无显著影响。芯片结果显示,有90个基因表达显著变化,55个上调,35个下调;GO分析显示,43个基因与生物过程相关(37个上调,6个下调),42个与分子功能相关(37个上调,5个下调),44个与细胞组分相关(38个上调,6个下调)。Pathway结果显示差异基因共影响45条信号通路,其中10条与肿瘤发生发展密切相关。实时定量PCR验证差异基因表达与芯片结果一致。wnt5b、arnt2和bmp2基因在多条肿瘤相关通路中均有显著变化。结论杀草强可能通过多信号通路导致甲状腺肿瘤,其中wnt5b、arnt2和bmp2等基因可能是其主要靶基因。     

杀草强致甲状腺增生的量效关系初探

[目的]研究杀草强(Amitrole)致甲状腺增生的量效关系,为杀草强的体内短期甄别甲状腺激素干扰物的标准化实验提供剂量设计依据.[方法]SD大鼠40只,随机分为1个对照组和4个实验组.对照组用蒸馏水灌胃,实验组用不同剂量的杀草强溶液灌胃.于实验期11d麻醉后股动脉放血处死动物,甲状腺组织称重后进行组织病理学观察及PAS染色观察.[结果]在100mg/(kg.day)剂量组,大鼠甲状腺脏器系数高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在200mg/(kg.day)剂量组甲状腺增生以实心继发滤泡为主.[结论]杀草强可作为短期甄别甲状腺激素干扰物实验体系的验证药物,200mg/(kg.day)可作为验证实验的中心剂量.     

甲状腺过氧化物酶免疫染色在甲状腺细针抽吸细胞学检查中的诊断作用

目的 评价甲状腺过氧化物酶(TPO)在甲状腺细针抽吸细胞学检查中对良恶性甲状腺肿瘤的鉴别价值.方法 采用免疫染色法观察TPO的单克隆抗体MoAb47在71例甲状腺肿瘤患者的甲状腺细针抽吸标本涂片中的表达,免疫染色结果的阳性判定根据两种不同方法进行:(1)De Micco法:80%以上甲状腺细胞染色为阳性,反之为阴性.(2)常规病理学法:5%或以上甲状腺细胞染色为阳性,低于5%甲状腺细胞染色为阴性.结果 TPO在恶性甲状腺肿瘤细胞中的表达明显低于良性甲状腺肿瘤细胞.De Micco法和常规病理学法的敏感度和特异度分别为95.74%和91.67%、100.00%和58.33%;阳性及阴性预测值分别为95.74%和91.67%、82.46%和100.00%.结论 TPO免疫染色用于甲状腺细针抽吸细胞学检查,可以提高甲状腺肿瘤的正确诊断率,而结果判定的方法不同可能影响TPO对甲状腺肿瘤的诊断价值.     

杀草强对人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞全基因表达谱的影响

目的研究杀草强对人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞全基因表达谱的影响。方法以100μg/ml杀草强处理Nthy-ori-3-1细胞24 h后,进行全基因表达谱分析,采用实时定量PCR验证芯片结果,并用GO分析和pathway分析芯片结果。结果实时定量PCR验证差异基因表达与芯片结果一致。GO和pathway分析结果显示共检测了41 001个基因,按P0.005和FC≤0.5或FC≥2的标准筛选,共有20个差异基因涉及44条通路。Agt、cd70、bmp2、arnt2和wint5b基因出现在多条信号通路中。结论杀草强主要影响Nthy-ori-3细胞肿瘤发生相关基因,即上调cd70和wint5b基因表达及下调bmp2和arnt2基因表达,可能是其导致甲状腺肿瘤的机制之一。     

甲状腺过氧化物酶免疫染色在甲状腺细针抽吸细胞学检查中的诊断作用

目的评价甲状腺过氧化物酶（TPO）在甲状腺细针抽吸细胞学检查中对良恶性甲状腺肿瘤的鉴别价值。方法采用免疫染色法观察TPO的单克隆抗体MoAb47在71例甲状腺肿瘤患者的甲状腺细针抽吸标本涂片中的表达，免疫染色结果的阳性判定根据两种不同方法进行：（1）De Mieeo法：80％以上甲状腺细胞染色为阳性，反之为阴性。（2）常规病理学法：5％或以上甲状腺细胞染色为阳性，低于5％甲状腺细胞染色为阴性。结果TPO在恶性甲状腺肿瘤细胞中的表达明显低于良性甲状腺肿瘤细胞。De Mieeo法和常规病理学法的敏感度和特异度分别为95．74％和91．67％、100．00％和58．33％；阳性及阴性预测值分别为95．74％和91．67％、82．46％和100．00％。结论TPO免疫染色用于甲状腺细针抽吸细胞学检查，可以提高甲状腺肿瘤的正确诊断率，而结果判定的方法不同可能影响TPO对甲状腺肿瘤的诊断价值。     

壳聚糖对人子宫内膜癌细胞影响的实验研究

目的:研究壳聚糖对人子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响,为将壳聚糖做为宫内节育器材料提供依据。方法:以添加不同浓度壳聚糖培养的细胞为实验组,正常培养的细胞为空白对照组,使用添加20%胎牛血清和添加阿霉素培养的细胞为阳性对照组。各组细胞处理48h后,噻唑蓝法测定细胞增殖活性及毒性,5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法测定DNA合成情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:与空白对照组比较,在壳聚糖浓度≤10μg/ml时各实验组细胞增殖能力无明显变化(P﹥0.05),细胞DNA合成速率无明显影响(P﹥0.05);壳聚糖浓度≤100μg/ml无明显的细胞毒性产生;在10μg/ml浓度壳聚糖组细胞周期分析时G1期、G2期、S期均无明显变化(P﹥0.05)。结论:壳聚糖浓度在<10μg/ml对Ishikawa细胞的增殖生长、DNA合成与细胞周期均无明显影响,≤100μg/ml未见细胞毒性产生。壳聚糖具有作为宫内节育器的生物缓释材料使用的前景。     

IL-1β和瘦素在胚胎着床中对ICAM-1和MMP9的影响

目的:建立体外胚胎和子宫内膜共培养体系,观察不同浓度的IL-1β和瘦素(leptin)对ICAM-1、MMP9的影响,进而探讨IL-1β和leptin对胚胎早期着床的调节作用。方法:采用免疫细胞化学法检测子宫内膜中ICAM-1和MMP9的表达;采用ELISA方法分别检测经IL-1β、leptin和IL-1ra干预共培养模型后培养液中ICAM-1和MMP9的表达。结果:免疫组化结果显示,ICAM-1主要在腺体细胞中表达,基质细胞仅有少量的表达,而MMP9在子宫内膜基质细胞和腺体细胞中均有表达;ELISA结果显示,与对照组相比,ICAM-1分别经10 ng/ml的IL-1β,100 ng/ml的leptin干预后表达上调(P<0.05),而经0.1ng/ml、1ng/ml的IL-1β,1 ng/ml、10 ng/ml的leptin,0.25μg/ml、2.5μg/ml、25μg/ml的IL-1ra干预后表达无明显变化(P>0.05);MMP9分别经1 ng/ml、10 ng/ml的IL-1β,1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml的leptin干预后表达上调(P<0.05),而经0.1 ng/ml的IL-1β,0.25μg/ml、2.5μg/ml、25μg/ml的IL-1ra干预后表达无明显变化(P>0.05)。结论:一定量的IL-1β和leptin可以增加共培养模型中ICAM-1和MMP9的表达。     

醋酸铅染毒对TK6细胞氧化损伤作用及亚硒酸钠的保护效应

目的 研究亚硒酸钠对醋酸铅致TK6细胞氧化应激损伤的保护效应。方法 培养TK6细胞,调整细胞密度为1×106/ml,试验分3组,正常对照组、醋酸铅染毒组和亚硒酸钠干预组,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,硫代巴比妥酸（TBA）法检测细胞内丙二醛（MDA）含量和高度水溶性四唑盐（WST-1）法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 在醋酸铅染毒和0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,3组细胞内ROS含量、MDA含量和SOD含量的比较,差异均有统计学意义(F 分别为36.706,0.050,23.051,均P＜0. 01),其中醋酸铅染毒后,TK6细胞内ROS含量和MDA含量增高,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,细胞内ROS含量和MDA含量下降,与醋酸铅染毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;醋酸铅染毒后,TK6细胞内SOD含量降低,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,0.01 μg/ml的亚硒酸钠干预后,SOD含量上升,与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）,而与醋酸铅染毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 醋酸铅染毒对TK6细胞有氧化损伤作用, 0.01 μg/ml亚硒酸钠对醋酸铅氧化损伤毒性具有拮抗作用。     

桑椹提取物对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤保护作用的初步研究

目的观察桑椹提取物(ME)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)致PC12细胞损伤的保护作用,并初步探讨相关机制。方法将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及(25、50、100、200、400和800μg/ml)ME预孵育组(ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用MTT法确定ME的干预浓度。在此基础上,将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、ME组(200μg/ml ME作用24h)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及ME预孵育+Aβ25-35组(200μg/ml ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用分子探针DCFH-DA及Hoechst33342染色法分别进行细胞内活性氧(ROS)含量及细胞凋亡的测定。结果 (1)与对照组相比,Aβ25-35组细胞存活率显著降低(P<0.05);与Aβ25-35组相比,100、200μg/ml ME预孵育组细胞存活率显著提高(P<0.05)。(2)与对照组相比,200μg/ml ME组细胞ROS的生成及细胞凋亡率无显著变化(P>0.05),而Aβ25-35组细胞内ROS的生成显著升高(P<0.05)、细胞凋亡率也明显增加(P<0.05);与Aβ25-35组相比,200μg/ml ME预孵育组细胞内ROS的生成显著减少(P<0.05)且细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论桑椹提取物对Aβ25-35致PC12细胞损伤有明显的保护作用,机制与其抗氧化及抑制凋亡作用有关。     

富含anthocyanin的水果提取物对血管内皮细胞产生PGE_2的影响研究

目的研究富含anthocyanin的水果提取物对血管内皮细胞产生PGE2的影响。方法将人类正常的血管内皮细胞CRL-2606在Kaighn’sF12K培养基中(补加有10%FBS,0.1mg/ml肝素,0.03mg/ml的ECGS,50μg/ml链霉素和500U/ml青霉素)37℃、5%CO2的条件下培养至接近融合,然后在含有从水果中提取出的anthocyanin的F12K培养基中添加或不添加100ng/mlLPS,继续培养18小时,测定细胞生存率,并将培养液离心,收集上清液,用STAT-ProstaglandinE2EIAKit试剂盒测定培养基上清液中的PGE2浓度。结果当CRL-2606细胞暴露于300μg/ml或以上的Chokeberry提取物中时,细胞的生存率低于60%,且表现出一定的剂量效应关系。而50~400μg/ml的蓝莓提取物和100~700μg/ml的黑醋栗提取物未显示细胞毒性。LPS刺激可使细胞PEG2释放量增加一倍以上,蓝莓提取物可明显抑制由于LPS刺激引起的PGE2释放增加,100μg/ml的蓝莓提取物可完全抑制此作用而使其含量维持于正常水平。700μg/ml的黑醋栗提取物对处于LPS刺激下的CRL-2606细胞具有一定的抑制PGE2释放作用。而对于处于LPS刺激下的细胞,500μg/ml以上的Chokeberry提取物能抑制PGE2的释放。结论富含anthocyanin的黑醋栗、蓝莓以及Chokeberry提取物可以抑制由LPS刺激引起的血管内皮细胞释放PEG2增加的作用,具有一定的抗炎、抗氧化作用。     

牛乳骨桥蛋白对大鼠成骨细胞的影响

目的观察乳中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对体外培养大鼠成骨细胞的影响。方法采用二次酶消化法体外培养成骨细胞,MTT比色法测定骨桥蛋白对成骨细胞的增殖影响,ALP检测试剂盒测定细胞的ALP活性,RT-PCR法检测细胞中OPG/RANKL mRNA的表达。结果在细胞增殖实验中,OPN2.5μg/ml与对照组比较,成骨细胞的增殖不显著(P>0.05),5.0μg/ml组和10.0μg/ml组增殖显著(P<0.05),20μg/ml组和40μg/ml组增殖作用极显著差异(P<0.01);在成骨细胞ALP活性检测中,OPN10μg/ml组和20μg/ml组在第3、5、7和9d可提高ALP的活性(P<0.05),40μg/ml组在各个时期均能提高ALP的活性(P<0.01),2.5μg/ml组和5.0μg/ml组提高ALP的活性不显著;OPN能提高OPG/RANKL mRNA的表达。结论骨桥蛋白能够促进成骨细胞增殖、ALP活性和OPG/RANKL mRNA的表达。     

抗生素杂质头孢呋辛内酯的遗传毒性研究

目的研究抗生素杂质头孢呋辛内酯的遗传毒性。方法采用一套筛选和检测遗传毒性的方法分别从基因突变、染色体畸变、DNA损伤与修复3个不同遗传学终点研究头孢呋辛内酯的遗传毒性。结果 (1)细菌回复突变试验:在加与不加大鼠肝微粒体酶(S9)的条件下,头孢呋辛内酯在不同测试浓度下各菌株回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍。(2)昆明种小鼠骨髓细胞微核试验:阳性对照组的微核率(19.74‰)显著高于阴性对照组(1.82‰)(P<0.05),而头孢呋辛内酯在125、250和500mg/kg剂量组所诱发的微核率分别为3.06‰、2.83‰和3.24‰,与阴性对照组(1.82‰)相比差异无显著性(P>0.05)。(3)中国仓鼠肺细胞染色体畸变试验:在加S9与不加S9两种测试条件下,并于24h和48h后收集细胞进行染色体畸变分析,发现阳性对照组所诱发的染色体畸变发生率明显高于阴性对照组(P<0.05),而受试物各剂量组的染色体畸变率与阴性对照组相比差异无显著性(P>0.05)。(4)小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验:各剂量组的相对存活率(RS)、相对生存率(RV)、相对悬浮生长(RSG)和相对总生长(RTG)均随着头孢呋辛内酯剂量的升高而下降,但各剂量组的TK基因位点总突变频率(TMF)与阴性对照组相比差异无显著性(P>0.05)。(5)小鼠淋巴瘤细胞彗星试验:阳性对照组的彗星率为94.5%,明显高于阴性对照组(7.0%)(P<0.05),而受试物各剂量组的彗星率与阴性对照组相比,差异无显著性(P>0.05)。结论该实验条件下,头孢呋辛内酯未见遗传毒性,表明其不具有致突变作用。