2005-2007年中国食品中大肠埃希菌0157亚碲酸钾抗性基因簇的分布和抗性水平的研究

目的 了解中国2005-2007年食源性疾病监测网分离的大肠埃希菌0157亚碲酸钾抗性基因簇的分布和抗性水平的关系.方法 运用PCR方法进行基因检测,使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平.结果 在所检测的89株大肠埃希菌0157中,共51株菌携带亚碲酸钾(ter)基因簇:在42株大肠埃希菌0157:H7中,41株菌具有ter基因簇;6株携带flic<,H7>基因、无动力0157:NM(non-mobile)都具有ter基因簇;在41株不携带flic<,H7>基因、无动力0157:NM和0157:hund(具有动力,无法判定H型别)中仅有4株菌具有ter基因簇.ter基因簇阳性的51株大肠埃希菌0157,其亚碲酸钾抗性水平为64～512μg/ml.ter基因簇阴性菌株共有38株,亚碲酸钾抗性水平大多数介于2～16μg/ml,仅1株为128μg/ml.29株携带志贺毒素基因的大肠埃希菌,共有28株具有该基因簇和较高水平的亚碲酸钾抗性.结论 食品来源的大肠埃希菌0157具有不同亚碲酸钾抗性水平,高水平的亚碲酸钾抗性与携带亚碲酸钾基因簇具有很高的相关性.     

2005～2007年中国食品中疑似O157大肠埃希菌的鉴定及毒素基因的检测

目的对中国2005～2007年食源性疾病监测网分离疑似O157大肠埃希菌进行鉴定,了解各种不同类型监测食品中大肠埃希菌O157的分布及毒力基因的携带情况。方法运用API20E生化试剂条进行初步鉴定,使用血清分型和PCR方法确定菌株,并检测毒力基因。结果(1)通过API20E生化初步鉴定共获得154株疑似O157大肠埃希菌。(2)通过血清学方法和特异基因的检测,共确定89株大肠埃希菌O157,其中42株是O157:H7(47%),其余的菌株为O157:NM和O157:hund(未确定型)。(3)毒力基因的检测:42株O157:H7和6株O157:NM携带eaeA+hlyA基因;共29株菌携带stx基因,主要分布在不发酵山梨醇O157:H7菌株中。(4)监测的生羊肉、生牛肉、生猪肉、生鸡肉、蔬菜沙拉等食品中均检出了携带stx基因的O157:H7。结论鉴定结果显示中国部分监测食品中均分离到有一定程度致病力的大肠埃希菌O157。     

大肠埃希菌O157血清型分离株的脉冲场凝胶电泳分型

目的了解杭州地区分离的产志贺毒素和不产志贺毒素大肠埃希菌O157菌株的分子流行病学特征。方法对杭州地区于1997～2005年间自散发腹泻患者和动物中分离的10株大肠埃希菌O157血清型菌株,PCR检测毒力基因stx1、stx2、eae和ehxA,eae阳性者进行eae基因分型;按标准化的脉冲场凝胶电泳法(pulsefieldgelelectrophoresis,PFGE)进行分子分型,并与国内其他省份分离的产志贺毒素大肠埃希菌(Shigatoxin_producingEscherichiacoli,STEC)O157∶H7菌株进行比较。结果杭州分离菌株HZ1_11携带毒力基因stx2、γ型eae和ehxA,为浙江省检获的首株STECO157∶H7;3株杭州O157∶NM分离菌株(2_1、26_1和SR05株)仅携带β型eae基因;其他6株杭州O157∶H?分离菌株中,均未检出毒力基因。PFGE揭示,在杭州人源O157菌株中,STECO157∶H7HZ1_11株与近年江苏和安徽分离STECO157∶H7菌株密切近缘,且其图谱与江苏菌株几乎完全相同;3株eae阳性的O157∶NM分离菌株聚类成与STECO157∶H7菌株较远的一簇,杭州1株stx阴性的O157∶H?(1_68株)则处于另一独立的一簇。5株杭州O157∶H?动物分离菌株与其他人源菌株图谱差异极大。结论浙江省首株STECO157∶H7可能是源自近年在江苏流行的STECO157∶H7菌株。β型eae阳性的大肠埃希菌O157∶NM菌株可能具有引起散发腹泻的能力。     

多重PCR方法快速检测E.coli O157毒力及rfbEO157基因

[目的]探索一种快速、特异的检测大肠埃希菌O157的多重PCR(multiplex PCR)方法。[方法]选用针对大肠埃希菌O157志贺样毒素1、2(stx1、stx2)基因、溶血素(hlyA)基因、粘附抹平因子(eae)基因和O157特异性基因(rfbEO157)的5对引物，在同一扩增体系中进行PCR，检测9株不同来源的O157和其他大肠埃希菌21株。[结果]通过优化多重PCR反应条件和循环参数，5对特异性引物只扩增相应的基因片段，检测结果与应用常规PCR获得的结果一致。[结论]该多重PCR方法能够在一次扩增中同时反应待测菌株是否为大肠埃希菌O157及其携带毒力基因的情况，可为大肠埃希菌O157的诊断及流行病学调查提供一种简便、经济、快速的检测手段。     

基于量子点和磁珠的大肠埃希菌O157∶H7检测研究

目的构建一种基于量子点和磁珠的大肠埃希菌O157∶H7的检测方法。方法以亲和素化磁珠结合生物素化的抗体制备修饰有大肠埃希菌O157∶H7抗体的磁珠,该磁珠可从检测体系中捕获大肠埃希菌O157∶H7,依次加入生物素化大肠埃希菌O157∶H7抗体、亲和素化Cd Se量子点后,分别经磁分离弃去未结合的分子,通过溶液的荧光吸收光谱的改变定量检测该菌。结果该方法特异性好,只有大肠埃希菌O157∶H7呈阳性反应,其余对照菌株均无明显反应;随着大肠埃希菌O157∶H7浓度的增大,655 nm处荧光值也逐步升高;并在1 h内实现对104cfu/ml的菌液的检测。结论本实验建立的这种方法检测时间短,结果易于判断,具有良好的临床应用前景。     

大肠埃希菌O157∶H7携带stx2::IS1203v基因研究

目的了解中国部分地区大肠埃希菌O157：H7菌株携带志贺毒素基因变异状况。方法采用聚合酶链反应扩增志贺毒素基因，使用核苷酸序列测定判断是否存在志贺毒素的新变种，用HeLa细胞毒性实验研究其细胞毒性的变化。结果1992—2002年中国部分地区分离到的289株产志贺毒素的大肠埃希菌O157：H7中有3株菌携带的志贺毒素2（stx2）基因有1．3kb的插入序列（IS）插入，且这段IS和IS1203变种（IS1203 variant，IS1203v）有100％的核苷酸序列同源性。IS1203v插入到3株大肠埃希菌O157：H7 stx2基因的位置及开放性读码框（ORF）方向有所不同。除此之外，3株菌原有的stx2基因序列完全一致且为Stx2原型毒素。和Stx2原型毒素相比，这3株携带stx2：：IS1203v基因的菌株对HeLa细胞的毒性明显降低。结论分离到IS1203v插入stx2基因的大肠埃希菌O157：H7菌株；IS1203v的插入可导致对HeLa细胞的细胞毒性降低。     

呼和浩特市食品中大肠埃希氏菌O157∶H7污染状况调查

目的 本次研究旨在通过对呼市居民主要的消费食品进行大肠埃希氏菌O157∶H7的污染调查,从而掌握该菌对食品的污染情况.方法 随机抽取超市、农贸市场、酒店、食品店出售的食品共计15种307份,采用国标法进行检测.结果 349份食品中,检测出2株大肠埃希氏菌O157∶H7,检出率为0.57％.其中生畜肉检出1株,检出率1.32％;米粉、盒饭类食品检出1株,检出率3.57％;其余食品均未检出.结论 生畜肉,米粉、盒饭类食品中均检出大肠埃希氏菌O157∶H7.提示存在发生食源性大肠埃希氏菌O157∶H7病的潜在危险.     

大肠埃希菌O157:H7嵌合荧光RAM检测分析

目的建立大肠埃希菌O157：H7的嵌合荧光法（SYBR Green I）实时网状分枝扩增（RAM）检测技术.方法将产志贺样毒素大肠埃希菌O157：H7靶基因递比稀释确定SYBR Green I实时RAM的灵敏度,并进一步检测临床分离的菌株.结果SYBR Green I实时网状分枝扩增技术最低能检测10个产志贺样毒素大肠埃希菌O157：H7,检测信号出现的时间与靶基因的浓度成正比,临床分离3株产志贺样毒素大肠埃希菌O157为阳性,而非致病性大肠埃希菌为阴性.结论SYBR Green I实时RAM是一种快速、灵敏、准确、实时、环保的检测大肠埃希菌O157：H7的新核酸扩增技术.     

大肠埃希菌质粒介导的bla_(NDM-1)基因耐药及传播性研究

目的探讨某院携带bla_(NDM-1)基因大肠埃希菌的流行现况及传播机制。方法收集2016年1—12月南昌大学某附属医院对碳青霉烯类抗生素不敏感的大肠埃希菌92株,对其进行bla_(NDM-1)基因筛查,并对bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌进行其他常见碳青霉烯酶基因检测。将bla_(NDM-1)基因阳性的大肠埃希菌(供体菌)与大肠埃希菌J53(受体菌)进行接合试验,采用药敏试验及mCIM试验对接合子进行表型验证,提取供体菌及接合子的质粒采用Southern blot技术对bla_(NDM-1)基因进行基因定位,并验证其水平转移的能力。结果在对碳青霉类抗生素不敏感的92株大肠埃希菌中发现2株携带bla_(NDM-1)基因,携带率2.2%。此2株大肠埃希菌未发现同时携带其他常见碳青霉烯酶基因。接合试验及Southern blot发现此2株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因均位于菌株的质粒上,且有1株大肠埃希菌的bla_(NDM-1)基因可以通过质粒向大肠埃希菌J53转移。药敏试验结果显示,此2株大肠埃希菌对临床使用的多种抗菌药物耐药,且接合子获得了与供体菌相似的药敏结果。mCIM试验表明,此2株大肠埃希菌及接合子均产NDM-1型碳青霉烯酶。结论该院存在携带bla_(NDM-1)基因而产NDM-1型碳青霉烯酶的大肠埃希菌,携带bla_(NDM-1)基因的大肠埃希菌对临床使用的大多数抗菌药物耐药,质粒可介导bla_(NDM-1)基因的水平传播。     

2009年贵港市出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻监测结果分析

目的 动态观察O157大肠埃希菌的分布特征,掌握贵港市O157大肠埃希菌的来源,为制定本市肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻的防治策略与措施提供依据.方法 通过采集腹泻病人粪便、动物粪便、苍蝇、肉类等标本,采用国标 GB/T4789.36-2008大肠埃希菌O157:H7/NM法检测O157:H7.结果 采集各类标本953份检测O157:H7,检出菌株29份,阳性率为3.04%.结论 该市在动物粪便、苍蝇、肉类中均检出了O157:H7菌,说明目前该市虽未发现人感染O157大肠埃希菌的病例,但发生人间散发流行乃至暴发的条件仍存在,需重视此病的防控.     

MPCR-DHPLC检测大肠杆菌O157研究

目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-PerformanceLiquid Chromatography,DHPLC)检测大肠杆菌O157的方法,并了解食品中分离的O157毒力基因携带情况。方法:针对大肠杆菌O157的rfbE、flicH7、eaeA、stx1、stx2基因设计引物,其单一PCR扩增产物在DHPLC上出现的色谱峰为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC检测方法。结果:MPCR扩增产物在DHPLC上的色谱峰,在位置和峰型上与标准色谱峰有较好的对应性。DHPLC能分离大小4个碱基差异的DNA片段。4株分离株检测结果,O157-1出现rfbE、flicH7、eaeA基因色谱峰,O157-2、O157-3、O157-4只出现rfbE基因色谱峰。结论:建立的MPCR-DHPLC方法可用于大肠杆菌O157及其毒力基因的检测。     

Sorbitol-fermenting, β-glucuronidase-positive, Shiga toxin-negative Escherichia coli O157:H7 in free-ranging red deer in South-Central Spain

We investigated the prevalence of Escherichia coli O157:H7 in free-ranging red deer in south-central Spain, to assess their potential as reservoir hosts of sorbitol-fermenting (SF) E. coli O157:H7 strains, which are emerging causes of hemolytic uremic syndrome in Europe. Fecal samples from 264 hunter-harvested Iberian red deer (Cervus elaphus) were collected in 25 different game estates and examined for E. coli O157:H7 by culture and PCR. E. coli O157:H7 was detected and isolated in 4 of the 25 game estates sampled (16%) and the isolates obtained (four in total) were further phenogenotypically characterized. One of them was biochemically typical of E. coli O157:H7, that is, neither fermented sorbitol nor exhibited β-glucuronidase (GUD) activity, and carried genes encoding Shiga toxins (Stx) 1 and 2, the intimin subtype γ1, the enterohemorrhagic E. coli (EHEC)-hemolysin, and the ter gene cluster. The rest of the isolates (three of four) fermented sorbitol, exhibited GUD activity after 18-24?h incubation, and carried genes encoding the intimin subtype γ1 and the EHEC-hemolysin, although no Stx-encoding genes were detected. All these atypical isolates carried the sfp gene cluster, lacked the ter gene cluster, and were unable to grow on cefixime tellurite sorbitol MacConkey agar, which are typical features of SF E. coli O157:H7 strains isolated from patients. In total, SF, GUD-positive, Stx-negative E. coli O157:H7 strains were isolated in 3 of the 25 game estates sampled (12%), with an overall sample-level prevalence of 1.1% (3/264). Our findings indicate that free-ranging red deer may be one of the possible reservoir hosts of Stx-negative derivatives of SF E. coli O157:H7.     

安阳市首次分离到产毒O157:H7菌株的PCR鉴定

目的:鉴定从生羊肉中分离到的大肠杆菌O157:H7菌株的毒性基因和rfbO157、flicH7特异性基因。方法:PCR技术同时检测大肠杆菌O157:H7的四种毒性基因和rfbO157、flicH7特异性基因。结果:可疑菌株含有鞭毛H7基因(fli-cH7),志贺毒素2(stx2)基因,溶血素基因(hlyA),肠上皮细胞纤毛清除素基因(eaeA)和O157:H7特异性基因(rfbO157),但不含有志贺毒素1(stx1)基因。结论:菌株为产志贺毒素大肠杆菌O157:H7血清型。     

Prevalence, structure and expression of urease genes in Shiga toxin-producing Escherichia coli from humans and the environment

A component of the ure gene cluster in E. coli, ureC, encodes a subunit of urease. We have investigated the distribution of ureC in 202 Shiga toxin-producing E. coli (STEC) strains from Austria belonging to 61 different serotypes. These strains were of human (n=150), animal (n=38), and food (n=14) origin. ureC was present in all 72 E. coli O157:H7 and O157:NM (non-motile) strains, as well as in all 29 strains of serotypes O26:H11/NM, O111:H8/NM and O145:NM. In contrast, none of eight sorbitol-fermenting E. coli O157:NM were ureC-positive. ureC occurred significantly more frequently among STEC that carry eae (113 of 132; 85.6%) than among eae-negative STEC strains (four of 70; 5.7%; p<0.0001). However, only 4 (2%) of the 202 strains (3.4% of ureC positive strains) expressed urease activity. There was no significant association (p=0.56) between urease expression and the source of the isolates (humans vs. animals). Nucleotide sequence analysis of PCR amplicons derived from all seven genes of the ure cluster in STEC of 10 different serotypes demonstrated a high degree of homology (>or=99%), indicating a recent acquisition of not necessarily expressed ure genes.     

四川省大肠杆菌O157∶H7分子流行病学、耐药性及对消毒剂抗性研究

目的研究从四川省分离的大肠杆菌O157∶H7菌株流行病学特征。方法用多重PCR测定67株大肠杆菌O157∶H7的slt、eaeA、hly毒力基因;对不同来源的大肠杆菌O157∶H7进行质粒和PFGE分型;测定67株大肠杆菌O157∶H7的耐药性和对消毒剂的抗力。结果62.7%的株菌(42/67)携带有毒力基因,毒力图谱类型主要为slt1+slt2+eaeA+hly。67株菌共有6种质粒谱型和7种PFGE谱型。64.2%(43/67)的菌株分别对7种不同的抗生素耐药,其中有23、35、34株菌分别对氨苄青霉素、四环素和SMZ耐药。不同来源的大肠杆菌O157∶H7抗性谱不同,80.6%(54/67)的菌株对酒精和季铵盐产生了抗性,所有菌株对洗必泰敏感。结论四川省不同来源的大肠杆菌O157∶H7带毒率相似,但毒力基因谱型不完全相同。细菌有较高的耐药性。菌株对常用消毒剂有很高的抗性,在消毒灭菌时需要用较大剂量的消毒剂才能将其杀灭。不同来源的大肠杆菌O157∶H7耐药性、质粒和PFGE谱型有一定的相似性,提示菌株可能在人、动物、食品以及外环境之间相互传播并存在流行的可能。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的耐药性及其机制研究

目的 探讨大肠埃希菌(ECO)对氟喹诺酮类药物的耐药率及耐药机制.方法 K-B法测定100株ECO对5种氟喹诺酮抗菌药物的耐药性,试管稀释法测定耐环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);错配PCR技术检测耐环丙沙星ECO gyrA基因和parC基因的突变.结果 100株ECO中耐环丙沙星有65株;环丙沙星MIC50、MIC90分别是32、128 μg/ml,左氧氟沙星MIC50、MIC90是16、64 μg/ml;基因位点结果显示,耐环丙沙星的65株中,有60株发生gyrA、parC一个或多个基因位点的突变,有5株未发生突变.结论 gyrA、parC基因突变是该地区ECO,对氟喹诺酮类药物耐药的重要机制,且基因突变位点越多其耐药程度越高.     

福建省O157大肠杆菌调查

目的 探索Ｏ１５７大肠杆菌在福建省人兽及食物中的存在情况,并了解这些检出菌的生物学特性。方法 １９９７～１９９８年选莆田、福州等地检查腹泻患粪便、畜食粪便标本及肉类标本２７２５份,以血清学方法检测Ｏ１５７大肠杆菌。结果 先从猪、鸽、牛、鸡、鸭等动物及腹泻中检出７６株Ｏ１５７大肠杆菌。据血清学及动力试验结果分类,３３株Ｏ１５７：Ｈ７,２１株Ｏ１５７：ＮＭ,２２株Ｏ１５７：Ｈ？,其中以猪检出率最高     

A one year study of Escherichia coli O157 in raw beef and lamb products

Between April 1996 and March 1997 we examined 5093 samples of raw beef and lamb products for the presence of E. coli O157. Samples were purchased from 81 small butchers' shops in south Yorkshire. In March 1997 we also examined five samples of dried mint for the presence of E. coli O157. Strains of E. coli O157 were isolated by enrichment culture in modified buffered peptone water followed by immunomagnetic separation and culture of magnetic beads onto cefixime tellurite sorbitol MacConkey agar. Strains were characterized by phage typing, toxin genotyping and plasmid analysis. Strains of E. coli O157 were isolated from 72 (1.4%) of 5093 samples; it was isolated from 36 (1.1%) of 3216 samples of beef products and from 29 (2.9%) samples of lamb products. The highest prevalence was found in lamb sausages and lamb burgers where E. coli O157 was isolated from 3 (4.1%) of 73 and 18 (3.7%) of 484 samples respectively. Strains of E. coli O157 were isolated most frequently during early summer. Strains of E. coli O157 were also isolated from 2 of 5 samples of dried mint although we did not determine how the mint had become contaminated. All isolates of E. coli O157 were Verocytotoxin-producing as determined by both Vero cell assay and DNA hybridization for the genes encoding Verocytotoxin and all were positive for the eaeA gene. A combination of phage typing, toxin genotyping and plasmid profile subdivided the 72 strains of E. coli isolated into 20 different subtypes, of which 18 were indistinguishable from strains isolated previously from cattle and sheep; of these 18 strains, 8 were indistinguishable from strains isolated from human cases of infection during the study period.     

上海市闵行区家禽畜大肠杆菌O157∶H7带菌状况监测

[目的 ]　了解闵行区家禽畜中大肠杆菌O15 7∶H7的带菌情况。　 [方法 ]　对采集的禽畜粪便应用免疫磁珠富集分离法进行大肠杆菌O15 7∶H7分离和鉴定。　 [结果 ]　 3 5 4份样品中检出 2 2份大肠杆菌O15 7∶H7,检出率为6.2 1% ,经鉴定均非产毒株。　 [结论 ]　闵行区家禽畜粪便中大肠杆菌O15 7∶H 7检出率较高 ,应引起重视     

几种肠道菌中细胞致死性肿胀毒素的检测及其细胞毒性初步研究

目的了解肠出血性大肠杆菌、非典型致泻性大肠杆菌、志贺菌及部分肠杆菌中CDT毒素基因存在情况及其细胞毒性。方法用PCR方法检测cdt基因,并将阳性菌株培养上清与HeLa细胞共同孵育检测细胞形态的改变,初步评价CDT毒素的表达及其细胞毒性。结果在肠出血性大肠杆菌O157∶NM中,cdt基因检出率为16.28%（7/43）,其中3株为cdt-Ⅲ型,其他4株为cdt-Ⅰ型;携带HPI毒力岛的非典型致泻性大肠杆菌中cdt基因检出率为6.25%（5/80）;在志贺菌中,cdt基因检出率为2.67%（4/150）,非典型致泻性大肠杆菌和志贺菌检出的cdt基因全部为cdt-Ⅰ型。而在O157∶H7大肠杆菌、枸橼酸杆菌和沙门菌未检出cdt基因。所有cdt基因阳性菌株均使HeLa细胞出现典型的细胞肿胀变化,效应滴度介于1∶2到1∶16之间。结论CDT毒素只在肠出血性大肠杆菌O157∶NM、携带HPI毒力岛的非典型致泻性大肠杆菌和志贺菌中检出,且检出率均比国外同类菌株低,其存在是否与疾病严重程度相关及其细胞毒性机制尚须进一步研究予以证明。