Fmoc 策略固相合成磷酰化肽研究进展

蛋白质的磷酰化和去磷酰化对多种生命活动的调节起着关键的作用,磷酰化肽是研究这些生命调节过程中一类非常重要的物质。自 20 世纪 40 年代人类首次成功地合成出磷酰化肽以来,磷酰化肽的研究就引起了化学家和生物学家的广泛关注。由于Fmoc 固相合成策略在多肽的合成中被普遍应用,因此,Fmoc 固相合成策略也已经成为目前磷酰化肽最主要的合成手段。该文对近年来采用 Fmoc 固相合成策略进行磷酰化肽合成的方法（包括整体磷酰化法和磷酰化单体合成法）进行了总结,并对各种合成方法的优缺点进行了讨论。     

Fmoc法固相合成普兰林肽

以Fmoc保护的氨基酸为原料,Amide Rink MBHA树脂为载体,按照氨基酸序列进行耦合制得普兰林肽,同时考察了裂解条件.应用反相高效液相色谱得到纯度98%以上的样品.     

脊髓肽MP1的固相合成工艺及其免疫活性的研究

目的：对脊髓肽MP1的固相合成工艺进行优化，并研究其免疫活性。方法：采用Fmoc法对脊髓肽MP1进行固相合成，利用反相高效液相、质谱和氨基酸分析的方法对其进行性质鉴定，并采用MTT法对其进行免疫活性检测。通过探索不同的缩合时间、氨基酸用量和切割条件对合成效率的影响，由此找出适宜的合成条件。结果：以DMF为反应溶剂、HBTU／HOBt为缩合剂、缩合时间50min和氨基酸过量两倍进行多肽MP1的合成，并采用配方为：TFA-水-EDT-TES（90：6：3：1）的切割剂进行常温切割3．5h，此条件下粗品纯度可达到83．20％。质谱分析的分子离子峰[M＋H]＋是681．4与脊髓肽MPl的理论分子量680．80基本一致，氨基酸分析结果表明：脊髓肽MPl的氨基酸残基的实测摩尔比与理论摩尔比基本一致。纯化后的MP1具有明显的促进ConA刺激脾淋巴细胞增殖的作用。结论：本实验建立的固相合成工艺条件可以成功地合成具有免疫活性的脊髓肽MP1。     

47肽的微波辅助固相合成工艺研究

目的合成一长链肽47肽。方法采用Fmoc/t-Bu正交保护多肽固相合成策略,使用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护氨基酸的α-氨基,用Liberty微波多肽合成仪,每个耦合循环用20%哌啶脱除Fmoc保护基团,连续添加氨基酸,并用茚三酮法检测反应终点,有效检测反应的进度,最后用82.5%的三氟乙酸将多肽从树脂上切割下来,得到47肽粗品。经过反相高效液相制备系统纯化得到多肽纯品,用反相高效液相分析仪和傅里叶高分辨质谱仪验证该产物。结果高分辨质谱仪验证了该产物,纯品质量分数达98%。结论微波可促进多肽特别是长链肽的合成。     

青霉属生物中分离出的抗真菌四肽的固相合成

目的以固相合成法合成抗真菌四肽D-Phe-Val-D-Val-Tyr-OH。方法采用固相合成法通过4步反应顺利获得目标四肽,所得化合物的结构通过MS、1H NMR等光谱确证。结果合成得到了抗真菌四肽D-Phe-Val-D-Val-Tyr-OH,总收率为47.0%。结论合成方法具有可行性,操作简便、总收率高,目标化合物可用于抗真菌药物研究。     

维拉卡肽的固液相结合合成及其活性检测

目的 研究维拉卡肽固液相结合合成方法,并检测其钙敏受体激动活性。方法 选用Rink-Amide-AM氨基树脂,固相合成中采用HOBt/DIC缩合体系,液相形成二硫键采用TFA∶PhSMe∶H₂O∶TIS(V∶V)=91∶3∶3∶3条件裂解,经2,2′-二硫二吡啶活化后,偶联L-半胱氨酸。通过测试其钙敏受体激动活性来评估多肽活性。结果 合成粗肽经高效制备色谱纯化与RP-HPLC分析,纯度为99.9%(HPLC法,220 nm),合成收率为79.5%。目标化合物对钙敏受体激动活性的EC₅₀=12.75μmol·L^-1,与文献报道相当。结论 该合成方法优化了二硫键形成条件,适合工业化生产。     

荔枝核对小鼠S180、EAC肿瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响研究

目的:研究荔枝核对小鼠S180、EAC肿瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:采用小鼠腋下接种瘤株的方法,复制EAC、S180及肝癌荷瘤动物模型。小鼠EAC、S180细胞与肝癌细胞混悬液分别用生理盐水按1∶1进行稀释,制成含瘤腹水混悬液。小鼠在给药前24h进行腋窝皮下接种,每只0·2mL,整个操作在无菌条件下60min内完成。连续给药10d,观察EAC、S180肿瘤和肝癌肿瘤细胞的生长情况。结果:荔枝核能够显著抑制EAC、S180肿瘤和肝癌肿瘤细胞的生长。结论:荔枝核具有抑制小鼠EAC、S180、肝癌细胞的作用;具有抑制小鼠S180、EAC体内、外细胞生长的作用;并能促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

HPLC法同时测定人血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷的浓度

目的:建立一种同时测定人体血浆中5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷浓度的HPLC法。方法:以肌苷为内标,血浆样品用硝酸银(10%)沉淀蛋白质,采用C_(18)柱,检测波长为266nm,流动相:0.01mol·L~(-1)磷酸盐(用2mol·L~(-1)氢氧化钠溶液调pH为7.0)-甲醇(96∶4),流速1.0mL·min~(-1),柱温为45℃。结果:5-氟尿嘧啶和5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷分别在0.1～20μg·mL~(-1)(r=0.9997)和0.2～40μg·mL~(-1)(r=0.9997)浓度范围内线性关系良好,最低检测浓度分别为5和10ng·mL~(-1),方法回收率分别为98.2%～101.2%、99.5%～102.3%,日内、日间RSD均小于6%。结论:方法灵敏、快速、准确,适用于临床上测定5-氟尿嘧啶及其活性代谢物5-氟-2′-脱氧尿嘧啶核苷的血药浓度及药动学的研究。