嵌和体水平及供受者基因配型相合程度对小鼠移植物抗宿主病的影响

目的 探讨小鼠半相合、异基因骨髓移植后受体嵌和体水平及供受者基因配型相合程度对小鼠移植物抗宿主病影响.方法 以BALB/C小鼠为受鼠,以CB6F1小鼠为供鼠, A组给予全身照射4.0Gy预处理方案,B组给予全身照射8.0Gy,所有受鼠在第0天经尾静脉注射CB6F1小鼠骨髓细胞细胞悬液(5×106), C组以CB6F1小鼠为供鼠,D组以C57BL/6小鼠为供鼠,均给予全身照射(8.0Gy),观察所有受鼠移植后的嵌合体水平及GVHD的情况.结果 A组形成混合型嵌合体,移植2周达高峰,随后有下降趋势,B、C及D组为完全供者型嵌合体(>90%),且持久稳定;A、B两组间临床GVHD评分有显著差异( P<0.05);D组临床GVHD评分和死亡率明显高于A 、B 及C组(P<0.05).结论 嵌和体水平与移植后GVHD的发生有关;供受者基因配型相合程度对嵌合体水平无影响,但与GVHD的发生有关.     

转化生长因子-β1在小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病中的作用研究

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的意义。方法2005年7月至2007年5月在首都医科大学附属北京友谊医院血液科用C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/C小鼠为受鼠,建立小鼠allo-BMT模型。BABL/C受鼠随机分为4组:空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF-β1实验组。TGF-β1实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF-β11μg/kg。结果TGF-β1实验组小鼠存活时间明显长于移植对照组(P<0.01),TGF-β1实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏移植物抗宿主病(GVHD)病理改变明显轻于移植对照组。移植后7天TGF-β1实验组小鼠血清白介素-2(IL-2)质量浓度较正常水平升高,但远低于移植对照组;TGF-β1实验组小鼠血清白介素-10(IL-10)浓度明显高于移植对照组。结论TGF-β1能够减轻或抑制小鼠allo-BMT后致死性的急性GVHD发生,提高移植后存活率。另外,TGF-β1可能使Th1细胞向Th2细胞偏移,发挥其减轻急性GVHD的作用。     

白血病负荷与胸苷激酶/丙氧鸟苷分离急性GVHD和GVL效应的关系

目的研究白血病负荷与胸苷激酶（TK）／丙氧鸟苷（GCV）分离急性移植物抗宿主病（aGVHD）和移植物抗白血病效应（GVL）的关系。方法选择雄性C57BIJ6小鼠为供鼠,雌性F1小鼠为受鼠,进行H-2半相合CD三细胞和TK^＋T细胞移植。将48只受鼠随机分为3个接种组,接种EL9611红白血病细胞（H-2^d）分别为10^5、10^6、10^7个。每组受鼠经。Co9．0Gy照射后,输入cD三细胞和TK^＋T细胞分别为10^5、10^7;再随机分为对照组和GCV组。GCV组腹腔注射GCV50mg／（kg．d）,连用7d,根据病理结果确定死因。结果第1、2接种组中的对照组均死于急性GVHD;GCV组30％～40％死于白血病,其余长期生存。GCV组生存时间较对照明组显延长（P〈0．05）。第3接种组均死于白血病,其对照组和GCV组生存时间无统计学差异。结论TK^＋T细胞数量不变时,白血病负荷是影响TK／GCV分离急性GVHD和GVL效应的重要因素。     

光敏剂喜泊分对H22肝癌小鼠移植瘤的放射增敏效果

目的观察光敏剂喜泊分对H22肝癌小鼠移植瘤的放射增敏效果。方法建立H22肝癌细胞小鼠移植瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为对照组、放疗1组、联合治疗1组、放疗2组、联合治疗2组、放疗3组、联合治疗3组,观察第14天瘤体积、抑瘤率、增敏系数、小鼠生存时间、病理、细胞凋亡等指标。结果喜泊分联合放疗能够抑制小鼠移植瘤生长,尤其联合治疗2组,第14天瘤体积明显减小、增敏系数1,有最佳增敏效果,能够明显延长小鼠生存时间,病理HE染色显示,联合治疗2组肿瘤细胞坏死数量最多,坏死范围最大,流式细胞仪检测细胞凋亡显示联合治疗2组凋亡率最高。结论喜泊分联合放疗可以有效减小瘤体积,提高抑瘤率,延长小鼠生存时间,促使细胞凋亡,具有良好的放射增敏效果。     

T细胞比例对大鼠移植物抗宿主反应的影响

目的：研究移植物和受体的T细胞比例与移植物抗宿主反应（GVHD）的关系。方法：受体SD大鼠和供体Wistar大鼠共40对．按移植物与受体的T细胞比例1：1、2：1、4：1和对照组分为4组进行移植，并观察移植后GVHD的发生及其程度。结果：4组大鼠中1：1和2：1组的GVHD最轻，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而4：1组的GVHD与对照组比较差异则无统计学意义（P〉0．05）。结论：移植物内T细胞与受体循环血内的T细胞绝对值之比介于1：1与2：1之间较为合适；按此比例进行的大鼠移植，GVHD较轻。     

经对流离心去除移植物淋巴细胞后的同种骨髓移植用于治疗白血病

去除移植物内 T 淋巴细胞,可减少同种骨髓移植(BMT)后的移植物抗宿主病(GVHD),但又使移植物排斥反应和白血病复发增加。作者在80例白血病作了经对流离心去除移植物淋巴细胞的 HLA 相合的同种 BMT。     

肝组织内序贯注射灭活异体淋巴细胞和自体淋巴细胞治疗小鼠肝癌移植瘤的研究

目的探讨用异体淋巴细胞(heterogeneic lymphocyte,HL)和自体淋巴细胞(autogeneic lymphocyte,AL)序贯注射的抗肿瘤方法。方法取供鼠C3H小鼠脾淋巴细胞,用丝裂霉素灭活制备灭活异体淋巴细胞(inactivated HL,IHL)。在受鼠CB6F1小鼠肝组织内接种hepa1-6瘤细胞。用冻融法从小鼠血浆提取冷沉淀,制成纤维蛋白胶(fibrin glue,FG);用FG与IHL或AL组合成FG-IHL或FG-AL。前阶段:用FG-IHL注射到荷瘤受鼠肝内肿瘤接种部位治疗(实验组);用FG-PBS同法注射受鼠肝内肿瘤接种部位作为对照组。而后检测两组受鼠的脾淋巴细胞杀瘤细胞率和脾淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、NK细胞数量等免疫学指标。后阶段:从实验组、对照组中随机选出部分受鼠,取淋巴细胞制成FGAL,将各组FG-AL分别注射到本组其余受鼠的肝内肿瘤接种部位;治疗后剥出受鼠肝内肿瘤,比较两组的瘤体积和抑瘤率。结果前阶段治疗后,实验组受鼠AL的杀瘤细胞率为(25.7±4.81)%,明显高于对照组AL的相应值(E∶T=60∶1,P0.01);实验组受鼠脾淋巴细胞、CD8~+T细胞和NK细胞数量均明显高于对照组的相应值(均P0.05)。经前、后两阶段治疗后,实验组受鼠的瘤平均体积为(1.15±0.25)cm~3,明显小于对照组的瘤平均体积为(1.91±0.37)cm~3(P0.01);实验组的抑瘤率为39.8%(以对照组作基准)。结论肝组织内肿瘤局部注射IHL,再注射AL的序贯疗法,可明显抑制小鼠移植肝肿瘤生长,有望成为一种抗肿瘤生物疗法。     

癌肿宁对荷肝癌(H_(22))小鼠的抑瘤作用及其对IL-2和NK细胞活性的影响

目的:探讨中药复方癌肿宁治疗实验性肝癌的疗效和机理。方法:建立荷实体型肝癌(H_(22))小鼠模型,观察经癌肿宁治疗对其肿瘤生长、NK细胞活性和IL-2活性的影响。结果:癌肿宁能显著抑制肿瘤的生长,其最高抑瘤率达56.66％,并可明显增强IL-2和NK细胞活性。结论:癌肿宁有明显的抗肝癌作用,并显著提高荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫功能。     

三种来源细胞因子诱导的杀伤细胞对人食管癌裸鼠原位移植肿瘤的转移抑制作用

目的探讨三种来源的细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对人食管癌裸鼠原位移植肿瘤的转移抑制作用。方法建立人食管癌裸鼠原位移植模型。取32只荷瘤裸鼠平分为四组:食管癌患者自体外周血CIK细胞组、健康人外周血CIK细胞组、脐血CIK细胞组及生理盐水对照组。给予20 d对应的注射治疗,停药72 h后处死裸鼠,称量各组原位移植瘤瘤重,计算抑瘤率;观察肿瘤转移情况;免疫组织化学法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。结果与对照组相比,CIK细胞治疗组的肿瘤生长及转移明显受到抑制(P<0.05)。且CIK细胞可抑制肿瘤组织中MMP-9的表达。结论三种来源CIK细胞对人食管癌裸鼠原位移植肿瘤的生长及转移有明显抑制作用,且脐血来源的CIK细胞抗瘤作用最强,其抗转移作用可能与肿瘤组织中MMP-9的表达下降有关。     

裸鼠肝癌模型中miR-20a的作用

目的探讨microRNA-20a(miR-20a)对人肝癌细胞系HepG2裸鼠皮下荷瘤模型中肿瘤生长的影响,并探讨其可能的机制。方法于瘤体内分别注射miR-20a agomir、阴性片段和生理盐水。观察荷瘤裸鼠体重变化、裸鼠皮下形成瘤体的大小并计算抑瘤率。接种35 d后处死裸鼠并取出肿瘤组织,计算肿瘤体积大小,并采用免疫组化法检测肿瘤组织中VEGFA的表达。结果 3组裸鼠皮下接种肿瘤细胞7 d后均有瘤体形成,实验组瘤体生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);实验结束时,实验组裸鼠体重显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01);实验组肿瘤体积显著小于其他两组体积(P<0.01)。实验组肿瘤组织中VEGFA表达量显著低于其他两组(P<0.01)。结论 miR-20a可能通过抑制VEGFA表达,而抑制肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长。     

甲泼尼龙联合大剂量丙种球蛋白治疗半相合骨髓移植术后视神经脊髓炎1例

患者,男,13岁。确诊为淋巴瘤细胞白血病(T淋巴细胞型),经VDLP方案达完全缓解。2004年4月移植其母半相合骨髓。预处理采用CyTBI加Ara-C方案,多种免疫抑制剂联合预防移植物抗宿主病(GVHD)。移植顺利。因发热半月、抗炎无效2005年1月入院。体检:口唇及颊黏膜增生发     

人蛔虫提取物对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用北大核心CSCD

为探讨人蛔虫提取物对肿瘤的作用及其免疫学机制,将45只C57BL/6小鼠随机分为A、B、C、D和E等5组,每组9只,其中B、D组分别为A、C组的实验对照组,E组为阴性对照组,不做任何处理。A组每鼠隔天腹腔注射0.1 ml蛔虫提取物(BEAL),10 d后每鼠右前肢腋下皮下接种0.1 ml Lewis肺癌细胞(LLC),进行肿瘤造模;B组小鼠注射等量生理盐水,10 d后进行肿瘤造模。C组每鼠注射0.1 ml LLC细胞悬液进行肿瘤造模,2 d后腹腔注射0.1 ml BEAL,隔天1次,共注射5次;D组小鼠肿瘤造模2 d后,注射等量生理盐水,隔天1次。记录各组小鼠成瘤时间,称瘤重,计算抑瘤率。结果显示,A、B、C和D组小鼠的成瘤时间分别为(7.0±1.1)、(6.0±0.7)、(9.0±1.2)和(7.0±0.9)d。BEAL提前干预的A组小鼠肿瘤重量为(722.2±413.5)mg,显著重于其对照组B组[(338.9±282.2)mg](P<0.05)。小鼠荷瘤后BEAL干预的C组抑瘤率最强,为33.3%,其肿瘤重量[(237.8±101.8)mg]明显轻于对照组D组[(356.7±176.9)mg](P<0.05)。提示BEAL可影响肿瘤的形成,在一定条件下具有明显的抑瘤作用。     

急性移植物抗宿主病的预防与治疗

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是治疗多种血液系统疾病以及非血液系统疾病如实体瘤、自身免疫病、遗传性疾病等的重要手段.尽管近年来移植后免疫抑制的措施已经明显改善,但仍有许多接受移植的患者可能发生移植物抗宿主病(GVHD).GVHD是一个涉及多种细胞及细胞因子的免疫反应.     

加载野生型p53基因鼠树突细胞的抗肿瘤作用

目的 观察加载了野生型p53基因的树突细胞(DC)对不同位点p53基因突变肿瘤得庖咧瘟谱饔?方法通过锥虫蓝染色、同种异体混合白细胞反应及流式细胞仪检测DC细胞表面分子,评估腺病毒(Ad)-p53感染DC是否影响DC的免疫功能.以Ad或转导了野生型p53基因的Ad分别感染骨髓De(Ad-DC和Ad-p53-DC)后,静脉注射免疫C57BL/6小鼠各5只,分离脾细胞,采用标准6 h51 Cr释放试验测定其诱导不同肿瘤细胞系(MethA、D459和P815)细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性;效应细胞(Ad-p53-DC免疫后的小鼠脾细胞)和靶细胞(Ad-p53-P815和D459)孵育时分别加入抗CD4抗体或抗CD8抗体,观察CTL的活性变化.使用MethA和D459肿瘤细胞系得到不同的荷瘤鼠,于肿瘤形成前后分别使用Ad-p53-DC免疫,Ad-DC对照,当实体瘤三维直径之和＞20 cm时处死小鼠,用生存曲线评估Ad-p53-DC免疫的预防或治疗作用.结果 (1)Ad-p53-DC免疫诱导的抗Ad-p53-P815、D459和MethA的CTL反应(效应细胞:靶细胞=50:1)分别为(27.8±3.4)%、(23.5±2.7)%及(58.3±9.2)%,与Ad-DC免疫诱导的反应[(9.3±1.8)%、(4.6±1.0)%及(23.5 ±3.7)%]相比,差异有统计学意义(td值分别为5.79、3.68、5.02,均P＜0.05).Ad-p53-DC免疫小鼠T淋巴细胞与靶细胞Ad-p53-P815或D459的CTL活性,抗CD4组[(59.8 ±4.6)%、(18.9±2.4)%]与无抗体组[(64.4±6.3)%、(22.2±3.0)%]相比,差异无统计学意义(td值分别为0.84、0.91,均P＞0.05),而抗CD8组[(26.7±2.8)%、(6.1±1.2)%]差异有统计学意义(td值分别为9.03、7.67,均P＜0.05).抗CD8组与抗CD4组比较,差异有统计学意义(td值分别为8.79、9.18,均P＜0.05).(2)Ad-p53-DC和Ad-DC静脉注射2次免疫小鼠后,分别以D459细胞或MethA肉瘤细胞荷瘤20只小鼠.在Ad-p53-DC免疫组分别有14只和16只小鼠肿瘤的生长得到完全抑制,与Ad-DC免疫组比较差异有统计学意义(x2值分别为6.72、5.86,P＜0.05).皮下接种小鼠D459后,Ad-p53-DC免疫治疗组的小鼠肿瘤生长速度比Ad-DC组延缓2周左右,二组比较差异有统计学意义(x2 值为9.48,P＜0.05).结论 Ad-p53-DC可诱导抗MethA、P815和D459靶细胞的由CD8+T淋巴细胞介导的CTL反应,并抑制鼠体内肿瘤细胞的形成和生长.     

膈下逐瘀汤加减方对肝癌H22荷瘤小鼠的作用

[目的]研究膈下逐瘀汤加减方对肝癌H22荷瘤小鼠的作用。[方法]以肝癌H22荷瘤小鼠为模型,观察膈下逐瘀汤加减方的抗肿瘤作用,并分别计算抑瘤率和观察瘤体组织学形态及检测甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰氨转肽酶(γ-GT)值。[结果]相当于生药0.4、0.8、1.2 g/kg的膈下逐瘀汤加减方对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤率均在48%以上,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),与复方斑蝥胶囊(阳性对照)组比较差异无统计学意义(P>0.05);瘤体组织形态学变化及瘤体AFP、γ-GT值与模型组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。[结论]膈下逐瘀汤加减方对肝癌H22荷瘤有明显抑制作用。     

吉西他滨对Lewis肺癌放射增敏的实验研究

目的　吉西他滨是一种核苷类似物,能够掺入到肿瘤细胞的DNA分子中,有效抑制DNA合 成。本实验观察联合应用吉西他滨和放疗治疗荷Lewis肺癌实体瘤C57BL小鼠的疗效,以明确吉西他滨 对Lewis瘤的放射增敏作用。方法　建立小鼠Lewis肺癌实体瘤模型后,分对照组、单纯放疗组、吉西他滨 组及吉西他滨联合放疗组。对照组给予腹腔注射生理盐水0.1ml,单纯放疗组荷瘤鼠右下肢肿瘤局部以 34Gy射线照射,吉西他滨组分两个亚组,分别以25mg/kg、50mg/kg吉西他滨腹腔注射,联合放疗组则以 25mg/kg吉西他滨腹腔注射加荷瘤鼠右下肢肿瘤局部34Gy射线照射。然后每两天测量肿瘤的长、短径, 比较各组瘤体积、肿瘤生长延缓天数、荷瘤鼠存活数和肺转移率等。结果　与对照组比较,25mg/kg和 50mg/kg的单剂量吉西他滨都对Lewis实体瘤生长有抑制作用(P<0.05);联合放疗组局部肿瘤生长受 到明显抑制,抑瘤率为86.6%,明显高于单纯放疗组(64.7%,P<0.05)和吉西他滨组(47.3%,P< 0.05);联合放疗组肿瘤生长延缓天数(瘤体积0.3～1.0cm3)超过9天,高于单纯放疗组(5天,P<0.05) 和吉西他滨组(3天,P<0.05);联合放疗组60天内存活的鼠最多(4个),单纯放疗组为2个,其他两组鼠 全部死亡。联合放疗组平均肺转移为0.5个/叶肺,单纯放疗组为1.5个/叶肺,吉西他滨组     

同种异基因骨髓移植中控制移植物抗宿主病和保留移植物抗白血病的新策略

同种异基因骨髓移植(allo-BMT)对白血病的治疗效果已得到广泛承认，然而移植物抗宿主病(GVHD)和白血病复发是移植成功的两个主要障碍。积累的研究已证明异基因骨髓移植物中的T淋巴细胞是GVHD重要效应细胞，同时具有移植物抗白血病(GVL)、抗感染和预防宿主抗移植物效     

五味子乙素联合顺铂诱导H22肝癌移植瘤细胞凋亡过程中caspase-3,8,9表达的研究

目的 观察五味子乙素(schisandrin B,SchB)联合顺铂诱导H22荷瘤小鼠细胞凋亡过程中caspase-3,8,9蛋白表达变化.方法 SchB和顺铂单独或联合作用于H22荷瘤小鼠,计算各组抑瘤率,用免疫组化法检测瘤组织中caspase-3,8,9蛋白表达.结果 顺铂组、SchB组及联合治疗组抑瘤率分别为42.00%、36.40%和68.80%;联合组caspase-3,8,9阳性表达明显高于对照组和单纯用药组.结论 联合组对H22荷瘤鼠实体瘤生长抑制作用较单独用药明显增强;联合组可能通过促进caspase-8和caspase-9表达,进而促进caspase-3表达诱导H22肿瘤细胞凋亡.     

抗hnRNPB1单克隆抗体结合~(131)Ⅰ对肺癌小鼠靶向治疗的实验研究

目的观察131I-抗hnRNP B1MAb、抗hnRNP B1MAb对肺癌小鼠移植瘤的靶向治疗作用。方法用常规氯胺-T法合成131I-抗hnRNP B1MAb,皮下接种肺癌细胞7d后,将肺癌小鼠随机分成5组,每组6只。分别经尾静脉注射,Ⅰ组:131I-抗hnRNP B1MAb11.1MBq/只单次治疗,Ⅱ组:131I-抗hnRNP B1MAb2×11.1MBq/只强化治疗,Ⅲ组:Na131I11.1MBq/只,Ⅳ组:抗hnRNP B1MAb50μg/只,Ⅴ组:生理盐水0.12ml作为对照组。干预后每周测量一次小鼠肿瘤的长径及短径,4周后处死小鼠,分离肿瘤并称其质量,计算抑瘤率,肿瘤组织做苏木素伊红(HE)染色检查。结果治疗结束时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组小鼠肿瘤的平均体积分别为(3869±192)mm3、(1987±149)mm3、(6922±532)mm3、(6962±509)mm3、(6957±521)mm3,其中I组、Ⅱ组与Ⅴ组肿瘤平均体积相比差异具有统计学意义(P<0.05),而I组、Ⅲ组治疗结束时肿瘤平均体积与Ⅴ组相比较无统计学意义(P>0.05)。治疗结束时各组小鼠平均体质量差异无统计学意义(P>0.05)。I组强化组及Ⅱ组的抑瘤率分别为69.88%和41.35%。各治疗组小鼠未发现明显的不良反应。结论抗hnRNP B1MAb结合131I对小鼠肺癌的生长具有显著抑制作用,抑制作用呈量效关系,未发现明显的毒副作用。单纯抗hnRNP B1MAb及Na131I未出现明显抑制肿瘤生长的作用。     

间充质干细胞在治疗移植物抗宿主病中的应用

移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)是在临床移植过程中,供体移植物以T细胞为主的淋巴细胞识别宿主抗原致敏,从而导致其直接或间接攻击宿主器官产生病理损伤的疾病。临床上根据患者病情严重程度将GVHD分为4度,主要涉及皮肤、肝脏和肠道反应(见表1)。此外,临床上还根据GVHD在移植后发生的时间将其分为