流动注射化学发光法测定硫脲的探讨

本文基于 Fe( )氧化硫脲生成 Fe( )的反应和 L uminol- O2 - Fe( )化学发光反应相偶合 ,建立了流动注射化学发光测定硫脲的新方法。方法检出限为 4× 10 - 7mol/ L,RSD=2 % (C=5× 10 - 7mol/ L,n=11) ,方法用于白葡萄酒中硫脲的分析测定 ,结果满意。     

糖基化白蛋白液中糖含量的不同定量方法比较

目的探讨测定糖基化白蛋白反应液中葡萄糖含量的适宜方法。方法对3熏5-二硝基水杨酸法、邻甲苯胺法和苯酚-硫酸法三种不同测定糖含量方法进行研究比较。结果3熏5-二硝基水杨酸法、邻甲苯胺法、苯酚-硫酸法测定糖的线性范围分别为:2.5×10-5～3.0×10-4mol/L,3.0×10-5～3.0×10-4mol/L,2.5×10-5～2.5×10-4mol/L;直线回归方程为:y=0.01780x-0.05400穴r=0.9991雪,y=0.006029x+0.004286穴r=0.9988雪,y=0.01554x-0.001905穴r=0.9994雪;摩尔吸光系数为:6.5×103L/mol·cm,2.4×102L/mol·cm,2.4×104L/mol·cm;回收率分别为:101.9%～108.0%,92.3%～109.1%,94.3%～104.5%。结论苯酚-硫酸法具有操作简便、准确、灵敏、快速、显色后颜色稳定等优点,适用于测定糖基化白蛋白样品中的糖含量。     

HPLC-UV-ELSD联用测定黄花蒿叶片中青蒿素及相关倍半萜的含量

目的HPLC-UV-ELSD联用建立黄花蒿叶片中青蒿素及其生合成相关倍半萜的含量测定方法。方法采用Venusil XBP-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水梯度洗脱,检测波长:203 nm,流速:1.0 mL.min-1,ELSD载气压力:0.35 MPa,喷嘴温度:35℃,漂移管温度:60℃,检测器:UV-ELSD联用,测定黄花蒿叶片中青蒿素、青蒿素B、3α-羟基-1-去氧青蒿素含量。同一色谱柱条件下流动相改为乙腈-水-甲酸(体积比为60.00∶40.00∶0.08),检测波长:215 nm,流速:1.0 mL.min-1,检测器:UV检测器,测定黄花蒿叶片中青蒿酸含量。结果4种倍半萜在各自的线性范围内线性关系良好(r≥0.9990),RSD<3%,平均加样回收率分别为98.5%(RSD=2.3%)、96.5%(RSD=1.8%)、97.5%(RSD=3.6%)、95.4%(RSD=2.5%)。结论该方法可作为黄花蒿中青蒿素及其生合成相关倍半萜的含量测定方法。     

比色法测定丁胺卡那霉素、卡那霉素、新霉素和妥布拉霉素

本法是基于五氰亚硝酰铁酸二钠(diso—dium pentacyanonitrosylferrate与脂肪族伯胺和仲胺的Rimini反应,可用以测定丁胺卡那霉素、卡那霉素、新霉素和妥布拉霉素;但对该四个抗生素没有分辨能力。该四种抗生素的浓度与反应后在540nm时的吸收峰值符合Beer定律:其适当浓度分别为2.8×10~(-4)～1.7×10~(-3)mol/L、2.6×10~(-4)～2.0×10~(-3)mol/L、1.7×10~(-4)～1.9×10~(-3)mol/L和2.5×10~(-4)～1.6×10~(-3)mol/L。     

毛细管电泳/柱端安培检测血清中谷氨酰胺

目的建立毛细管区带电泳/柱端安培检测血清中谷氨酰胺的方法。方法通过研究谷氨酰胺柱前衍生化反应条件以及缓冲液pH值、缓冲液浓度、分离电压和检测电势对分离检测谷氨酰胺衍生产物的影响,确定了最佳实验条件。结果毛细管电泳/柱端安培检测谷氨酰胺的最佳条件是:衍生反应时间为30min,缓冲液为2.00×10-2mol/LNa2B4O7-8.57×10-3mol/L NaOH(pH=9.7),分离电压为20kV,检测电势为1.10V。谷氨酰胺的检测限为1.0×10-6mol/L即1.08fmol(S/N=3),线性范围为1.0×10-6mol/L～1.0×10-4mol/L,迁移时间及峰电流的相对标准偏差分别为2.2%、3.1%。结论所建立的毛细管电泳/柱端安培检测法灵敏、快速、准确,适用于血清样品中谷氨酰胺的测定。     

抗痫灵的电化学行为及吸附伏安法研究

抗痫灵在0.20 mol/L H₂SO₄底液、富集电位-0.70 V(vs Ag/AgCl)、扫速100 mV/s等条件下,用吸附伏安法得一灵敏的还原峰,峰电位-0.94 V,峰电流与抗痫灵浓度在3.0×10^-9～1.0×10^-8mol/L(富集时间t_ac=120 s),1.0×10^-8～7.0×10^-8mol/L(t_ac=90 s),7.0×10^-8～7.0×10^-7mol/L(t_ac=60 s),7.0×10^-7～3.0×10^-6mol/L(t_ac=45 s)范围内成线性关系,检测限可达1.0×10^-9mol/L,并用于片剂及病人尿样的测定,得到满意的结果。以多种电化学手段研究抗痫灵的电化学行为及反应机理。实验表明属不可逆吸附波。测得扩散系数D为7.7×10^-6cm²/s,电极反应速率常数k₁为1.5×10^-3cm/s,电极反应电子数n为2,电子转移系数α=0.52。抗痫灵的还原基团为分子中碳碳双键。     

氯霉素在汞膜电极上的伏安行为及其测定

目的:建立测定氯霉素滴眼液含量的方法。方法:氯霉素在浓度为0.1mol/L的HAc-NaAc(pH4.5)溶液中,汞膜电极上有一还原峰,峰电位为-0.24V(vsAg/AgCl),用方波伏安和循环伏安法研究了体系的性质。结果:氯霉素的浓度在1.0×10-7~5.0×10-5mol/L范围内与峰电流成正比。检出限为5.0×10-8mol/L。结论:在汞膜电极上氯霉素的还原为不可逆过程,该方法用于氯霉素滴眼液含量的测定结果满意。     

荧光猝灭法研究二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白的相互作用

目的 研究二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。方法 运用荧光光谱法结合Stern-Volmer方程和Line Weaver-Burk双倒数函数计算出BSA与二氢槲皮素和二氢杨梅素相互作用的猝灭常数和结合常数,通过反应前后热力学参数如焓变ΔH和熵变ΔS的大小对作用力类别进行判断。结果 测得二氢槲皮素与BSA在不同温度下的结合常数293 K为2.27×10⁴ L·mol-1,298 K为2.06×10⁴ L·mol-1,303 K为1.89×10⁴ L·mol-1,二氢杨梅素与BSA在不同温度下的结合常数293 K为2.43×10⁴ L·mol-1,298 K为2.39×10⁴ L·mol-1,303 K为2.13×10⁴ L·mol-1。确定其使牛血清白蛋白荧光猝灭的过程为静态猝灭过程,通过热力学参数确定其结合力主要为疏水作用。结论 应用荧光猝灭法了解二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白之间有较强的结合反应,结合力以疏水作用力为主。     

黄花蒿发根的液体培养及青蒿素合成的动态特征研究

目的:探讨黄花蒿发根生长及青蒿素生物合成的动态特征,建立高效、稳定的黄花蒿发根液体培养体系。方法:测定不同培养基以及MS培养基中不同营养元素对黄花蒿发根生物量和青蒿素含量的影响。结果:筛选出优化的黄花蒿发根液体培养基,获得拟合的黄花蒿发根生长和青蒿素合成的Logistic方程。结论:在优化的MS培养基中黄花蒿发根生长迅速且能稳定合成青蒿素,为工业化大规模生产青蒿素提供了可能。     

阿司匹林与人血清白蛋白的相互作用研究

目的以光谱技术研究阿司匹林分子与人血清白蛋白(HSA)间结合作用机制。方法通过荧光光谱法确定阿司匹林对HSA的荧光猝灭机制。由Lineweaver-Burk双倒数作图法确定反应的解离常数。根据热力学方程讨论两者间主要的作用力类型。结合同步荧光技术考察阿司匹林对人血清白蛋白构象的影响。结果阿司匹林对HSA的荧光猝灭机制为静态猝灭。在37℃和25℃时阿司匹林与HSA的解离常数分别为KD37=1.44×10-3mol.L-1,KD25=1.96×10-3mol.L-1。结合反应热力学参数为ΔH=-19.73kJ.mol-1,△G=-16.21kJ.mol-1,ΔS=-11.77kJ.mol-1。结论两者结合的主要作用力类型是范德华力。阿司匹林与白蛋白结合后使蛋白质构象发生变化。     

柱前衍生化反相高效液相色谱法检测巯基化合物

目的：建立检测含巯基的化合物柱前衍生化反相高效液相色谱法。方法：以半胱氨酸作为含巯基的模型化合物与N-苯基马来酰亚胺进行衍生化反应,得到半胱氨酸浓度与衍生物色谱峰面积的线性关系,然后将该反应应用到青霉素V钾降解产物的检测。采用Hypersil ODS2（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱,乙腈-水（60：40）流动相为,流速0．5ml／min,检测波长223nm。结果：半胱氨酸在5．7143×10^-5～2×10^-4mol／L范围内线性关系良好（r=0．9983）,平均回收率为99．71％,RSD为2．94％（n=4）,所测青霉素V钾降解产物中巯基化合物的浓度为1．4069×10^-4mol／L。结论：所建立的方法灵敏、快速,可用于巯基化合物检测与抗生素降解产物中巯基化合物的代谢与降解的跟踪分析。     

新化合物结构蜕皮甾酮衍生物TAPA降糖作用与机制的初步研究

目的:评价新化合物结构蜕皮甾酮衍生物TAPA的体内降糖作用,并对其作用机制从细胞水平上进行初步研究。方法:取大鼠随机分为正常对照组、模型组、TAPA-1(1 mg/kg)组、TAPA-5(5 mg/kg)组、TAPA-25(25 mg/kg)组和罗格列酮(2 mg/kg)组,每组10只,除正常对照组外其余各组大鼠建立2型糖尿病模型,后4组即为给药组,每日灌胃1次,连续给药28 d,给药期间每周测定大鼠摄食量、体质量、饮水量及随机血糖水平,末次给药5 h后灌胃葡萄糖测定2 h内的血糖浓度,计算血糖-时间曲线下面积(AUC)考察糖耐量。建立胰岛素抵抗肝癌细胞Hep G2,采用3H-d-葡萄糖掺入实验评价在1×10-9、1×10-7mol/L胰岛素环境下,1×10-5mol/L的TAPA和罗格列酮分别对Hep G2细胞和胰岛素抵抗Hep G2细胞的葡萄糖掺入率。取胰岛β细胞瘤细胞系3(βTC3)细胞,随机分为空白对照组、TAPA-Ⅰ(1×10-10mol/L)组、TAPA-Ⅱ(1×10-8mol/L)组、TAPA-Ⅲ(1×10-6mol/L)组和格列齐特(1×10-5mol/L)组,给药孵育24 h后测定各组细胞液中胰岛素含量。结果:与正常对照组比较,给药组大鼠的摄食量、体质量、饮水量均无明显变化;与模型组比较,给药组大鼠血糖水平在给药结束时均明显降低、糖耐量均降低(P<0.05),且降糖效果、糖耐量与TAPA剂量和给药时间均呈正相关。TAPA和罗格列酮对Hep G2细胞的葡萄糖掺入率无明显影响,能明显提高对胰岛素抵抗Hep G2细胞的葡萄糖掺入率(P<0.01)。与空白对照组比较,TAPA各剂量组βTC3细胞的胰岛素释放量无明显变化,格列齐特组βTC3细胞的胰岛素释放量明显增加(P<0.01)。结论:TAPA可降低2型糖尿病模型大鼠的血糖水平和糖耐量,体外试验认为其可增加胰岛素敏感性,但不促进胰岛素分泌。     

尼莫地平的电化学性质研究及其应用

目的研究尼莫地平在非水溶液中的电化学行为,建立检测方法并应用于尼莫地平片中尼莫地平含量的测定。方法采用循环伏安（CV）法及差分脉冲（DPV）法。结果在0．5mol／L高氯酸四丁铵（TBAP）的乙腈溶液中,尼莫地平在铂电极上有一灵敏的氧化峰,其浓度在1．0×10^-7～5×10^-3,mol／L范围内与峰电流呈良好的线性关系（DPV）,线性回归方程为,I=0．00138±59．61C（r=0．9985）,检出限为1×10^-7mol／L。结论该方法准确可靠,操作简便,重现性好,可用于尼莫地平的检测。     

脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠脑主动脉血管平滑肌细胞胞内钙浓度上升的影响

目的研究脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）胞内钙离子浓度上升的作用,并初步探讨其机制。方法采用细胞培养的方法获得大鼠胸主动脉VSMCs,经Fluo-4-AM染色后,采用激光共聚焦显微镜技术分别检测加入AngⅡ后,1×10^-7mol·L^-1和1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin对胞内钙荧光强度（FI）的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536对Ghrelin作用的影响。结果①2×10^-8mol·L^-1的AngⅡ可以使得VSMCs胞内钙FI上升到静息状态的（165±76）％;②随后加入1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（117±34）％（P〈0．01vs①）;③加入1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（87±22）％（P〈0．01vs①,P〈0．05vs②）;④预先以1×10^-5mol·L^-1的Sq22536孵育,再加入2×10^-8mol·L^-1AngⅡ和1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin,胞内FI为原来的（143±24）％（P〈0．01vs②）。结论Ghrelin能够降低AngⅡ引起的大鼠胸主动脉VSMCs胞内钙离子升高作用,其机制可能与激活胞内cAMP／PKA信号通路有关。     

UV法与HPLC法测定青蒿中青蒿素含量的比较

目的:分别以高效液相色谱(HPLC)法与紫外分光光度(UV)法测定青蒿中青蒿素的含量,比较2种方法分析结果的差异。方法:HPLC法中色谱柱为Kromasil ODS C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(75:25),流速为1.0mL·min-1,检测波长为203nm,柱温为30℃。UV法中样品溶液用0.2%NaOH衍生后,在292nm波长处测定。结果:HPLC法标准曲线的线性范围为0.025～0.400mg·mL-1(r=0.9999),平均加样回收率为97.18%(RSD=3.58%,n=9);UV法标准曲线的线性范围为4～20μg·mL-1(r=0.9998)。UV法含量测定结果比HPLC法平均高出2.05倍。结论:HPLC法的精密度、稳定性、加样回收率都较好,对青蒿中青蒿素含量的分析较为准确。UV法不宜单独用于青蒿中青蒿素的含量分析。     

荧光光度法研究不同药物载体制成5-FU纳米粒的靶向性

目的：研究抗癌药物五氟尿嘧啶用不同的药物载体制成的纳米粒在小鼠体内的靶向性分布。方法：应用荧光分光光度法测定包裹钙黄绿素的纳米粒的钙黄绿素量,选择激发波长和发射波长分别为365nm,513nm,测定小鼠组织中的钙黄绿素荧光强度。结果：线性回归方程为：C=0．4935I＋0．9879（R^2=0．9998）,浓度在1×10^-7mol／L-1×10^-6mol／L范围内线性良好。结论：抗癌药物的靶向载体叶酸偶联白蛋白靶向性优于白蛋白。     

鱼藤酮对小鼠小胶质细胞 BV-2存活率及一氧化氮含量的影响

目的：研究鱼藤酮对小鼠小胶质细胞BV-2存活率及一氧化氮含量的影响。方法 BV-2细胞以5×10^7/L密度接种到细胞培养板中,分别加入鱼藤酮0、1×10^-11、1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5 mol/L后0、6、12、24、48、72 h等测定细胞存活率。另以1×10^-8 mol/L鱼藤酮干预BV-2细胞48 h,测定上清液中超氧化物歧化酶、过氧化物酶、总巯基、超氧阴离子和NO含量并与未给予鱼藤酮干预的对照组比较。结果5×10^7/L BV-2细胞于0、6、12、24、48、72 h细胞增殖活力分别为0．035±0．001、0．132±0．006、0．334±0．017、1．073±0．044、2．272±0．172、0．776±0．032,可见48 h达到细胞生长曲线的峰值。鱼藤酮（1×10^-6 mol/L ）干预 BV-2细胞24、48、72 h 细胞存活率分别降低至（63．4±10．1）％、（51．7±12．2）％、（33．9±11．2）％;鱼藤酮（1×10^-7 mol/L）干预BV-2细胞72 h细胞存活率降低至（50．8±2．9）％。1×10^-8 mol/L 鱼藤酮干预48 h 后 BV-2细胞上清液一氧化氮水平达（27．6±6．2）μmol/L,明显高于对照组的（13．3±2．5）μmol/L （t＝-2．135, P＝0．044）。结论鱼藤酮在一定浓度范围内可激活小胶质细胞,但是超出此浓度范围时则可能导致小胶质细胞存活率降低。     

离子选择性电极法测定卡托普利片含量

目的：建立离子选择性电极法测定卡托普利片含量的新方法。方法：卡托普利结构含有-SH,呈酸性,与碱作用生成RS-硫离子选择性电极对其产生响应。结果：电极响应的电位值与-lg[RS-]符合能斯特方程。能斯特响应范围为1．0×10^-6～1．0×10^-2mol／L（r=0．9998）,平均回收率为99．4％,RSD=0．29％（n=6）。结论：本法设备仪器简单,分析快速,专属性强。     

依那普利对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制

目的：观察依那普利对血管的直接作用，并探讨其机制。方法：采用Powerlab生物信号采集系统记录依那普利对去甲肾上腺素（NE）和KCl预收缩的离体大鼠胸主动脉环舒张作用，观察左旋硝基精氨酸甲酯（L—NAME，10^-4mol／L）和吲哚关辛（10^-8mol／L）对其作用的影响。结果：在内皮完整的大鼠离体胸主动脉环，依那普利（10^-9～10^-4mol／L）对NE（10^-5mol／L）或KCl（20mmol／L）引起的收缩具有浓度依赖性的舒张作用。去内皮后，依那普利的舒血管作用显著减弱。在内皮完整的血管环，L—NAME（10^-4mol／L）和吲哚美辛（10^-8mol／L）对依那普利的舒血管作用具有明显的抑制作用。结论：依那普利对大鼠离体胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用，此作用具有内皮依赖性，与内皮产生的NO和前列环素（PGI2）有关。     

荧光分光光度法测定大山楂丸中黄酮类化合物的含量

设定荧光激发/发射波长为281/352 nm,激发和发射光狭缝宽度为5 nm,在300~500 nm波长范围内测定荧光光谱。对酸度、表面活性剂、温度、反应时间及铝离子浓度等影响因素进行考察,优化试验条件。结果：在盐酸酸性介质中、无表面活性剂、常温下、反应时间30 min、铝离子浓度为2×10-4mol/L时,体系的荧光强度最大且稳定。当槲皮素的浓度范围在0.2×10-5~1.5×10-5mol/L之间时,荧光强度（F）和槲皮素浓度（c）呈良好的线性关系;检测限为2.4×10-8mol/L。3批大山楂丸中总黄酮的平均含量分别为24.56、27.85、25.13 mg/g,与《中国药典》方法测定结果基本一致。结论：本方法操作简便、快速、准确,可用于测定大山楂丸中总黄酮的含量。