碘硒对大鼠腹腔巨噬细胞抗原提呈作用的影响

目的 通过观察碘硒对大鼠腹腔巨噬细胞抗原提呈作用的影响,初步探讨两者对自身免疫性甲状腺疾病发病的影响及其免疫学机制.方法 选用雌性Lewis大鼠20只,根据随机抽样的原则,分为4组:低硒适碘组(LSeN1),低硒高碘组(LSeH1),适硒适碘组(NSeN1),适硒高碘组(NSeH1).各组用人工合成的低硒低碘饲料和饮用含不同浓度硒或碘的去离子水(用K103和Na,SeO3配置)喂养3个月.制备各组大鼠腹腔巨噬细胞及卵白蛋白(OVA)致敏的T细胞,将两者共同培养,进行抗原提呈实验,采用ELISA方法测定上清中IL-2水平;采用RT-PCR方法检测各组脾细胞共刺激分子CD86 mRNA的表达水平.结果 NSeH1组培养上清中IL-2水平为(43.22±3.27)pg/ml明显高于NSeN1组IL-2水平(25.74±2.45)pg/ml.LSeN1组IL-2水平为(15.79±2.13)pg/ml明显低于NSeN1组.NSeH1组大鼠脾细胞CD86mRNA表达水平(CD86/βp-actin:0.52±0.10)明显高于NSeN1组(CDB6/13.actin:0.35±0.04).结论 高碘使巨噬细胞的抗原提呈作用呈现高于正常状态,成为诱发甲状腺自身免疫发生的一个重要的因素.低硒可使大鼠腹腔巨噬细胞对OVA抗原识别和提呈作用减弱,维持免疫自稳机制失调,可能也是构成诱发自身免疫病的一个因素.     

Sj 26基因转染树突状细胞抗血吸虫感染作用

目的探讨日本血吸虫Sj26基因转染树突状细胞（DC）抗血吸虫感染保护性免疫作用。方法利用Sj26基因转染、空质粒pcDNA3转染和未处理DC分别免疫BALB／c小鼠3次，攻击感染后计数成虫和虫卵。结果Sj26基因转染DC免疫小鼠诱导34．5％的减虫率和48．5％的减卵率，明显高于空质粒pcDNA3转染DC组（16．8％和15.8％）和未处理DC组（14．6％和14．4％），空质粒pcDNA3转染DC和未处理DC组之间差异无统计学意义。结论Sj26基因转染DC可诱导抗血吸虫感染的保护性免疫作用。     

DNA疫苗抗原提呈机制研究进展

DNA疫苗是基因治疗研究中衍生并发展起来的一个新的研究领域。虽然该疫苗的免疫效应在动物实验及部分临床工作中得到验证,但其免疫效果仍不够理想,免疫效价低于现有疫苗。深入研究DNA疫苗免疫后抗原提呈机制成为近年研究热点内容,此文就近年来这方面的研究进展综述如下。     

DC细胞在辐射损伤抗原递呈及T细胞活化中的作用

目的 利用体外细胞共培养技术模拟体内肺组织微环境,探索树突状细胞（DC）在辐射损伤细胞的抗原提呈作用。方法 60Co γ射线照射的小鼠肺上皮细胞（MLE-12）与骨髓来源DC和/或脾T淋巴细胞培养48 h,流式细胞术检测DC细胞共刺激分子CD80/86和抗原肽识别复合物MHCⅠ/Ⅱ表达水平,T细胞活化标志CD69/28/152表达水平以及CD4+和CD8+亚群细胞数。结果 60Co γ射线照射的MLE-12细胞凋亡率呈剂量依赖性增高,明显刺激DC细胞CD80/86和MHC II表达,但对T细胞无直接活化作用;6 Gy照射的MLE-12细胞与DC细胞和T淋巴细胞共培养48 h,T细胞CD69和CD28表达增加,CD4+和CD8+亚群细胞数均明显高于对照组,同时DC细胞出现CD86和MHCI特异性高表达。结论 辐射损伤细胞可刺激DC细胞抗原提呈功能,并对T细胞进行活化。     

血吸虫Sj23基因转染对树突状细胞功能影响

目的 探讨日本血吸虫23kDa膜蛋白(Sj23)基因转染对树突状细胞(DC)功能的影响。方法 利用脂质体介导的基因转染技术将Si23基因转染DC,流式细胞术(FCM)检测Sj23基因转染的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应(MLR)检测Sj23基因转染的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用。结果 Sj23基因转染后Sj23蛋白在DC中高表达,与pcDNA3转染的DC和未转染的DC相比,Sj23基因转染的DC摄取抗原的能力降低,能明显刺激混合淋巴细胞反应。结论 Sj23基因转染DC后能促进DC的活化,增强DC的生物学活性。     

基因转染树突状细胞联合免疫抗血吸虫感染作用

目的 探讨日本血吸虫Sj26和Sj23基因转染树突状细胞(DC)联合免疫抗血吸虫感染保护性免疫作用.方法 利用Sj26-Sj23基因转染、Sj26基因转染、Sj23基因转染、空质粒pcDNA3转染和未处理DC分别免疫BALB/c小鼠3次,攻击感染后计数成虫和虫卵.结果 Sj26-Sj23基因转染DC联合免疫小鼠诱导40.5%的减虫率和58.9%和减卵率,高于单独Sj26基因转染DC免疫组(34.5%和48.5%)和Sj23基因转染DC免疫组(32.6%和40.6%),亦明显高于空质粒pcDNA3转染DC组(16.8%和15.8%)和未处理DC组(14.6%和14.4%),Sj26基因转染DC免疫组和Sj23基因转染DC免染组的减卵率有差异有统计学意义.结论 Sj26-Sj23基因转染DC联合免疫可增强抗血吸虫感染的保护性免疫作用.     

SEA致敏树突状细胞免疫小鼠Th1/Th2细胞因子

目的 探讨Th1／Th2细胞因子在日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）致敏树突状细胞（DC）免疫小鼠抗感染中的作用。方法采用SEA致敏DC免疫BALB／c小鼠，ELISA分别检测免疫前、后小鼠血清干扰素（IFN）-γ和白细胞介素-4（IL-4）的含量，脾细胞培养法检测经刀豆蛋白A（ConA）和SEA刺激后，小鼠脾细胞分泌IFN-γ和IL-4的水平。结果SEA致敏DC免疫后血清IFN-γ的水平无明显变化，而IL-4的含量明显增加（P〈0．01）；经ConA、SEA刺激，SEA致敏DC免疫组脾细胞产生较高水平的IL-4（P〈0．01），而IFN-γ水平与其他组无明显变化。结论SEA致敏DC免疫主要诱导Th2免疫反应，在抗血吸虫感染保护性免疫中起主要作用。     

日本血吸虫循环抗体及循环抗原研究概况

血吸虫病免疫学诊断技术经过不断改进和发展,具有较高的敏感性、特异性及可行性而成为当今研究和应用的热点。检测循环抗体成本低、操作简单、受宿主免疫状态影响小、可行性强,但治疗后抗体可多年维持较高水平,疗效考核价值不高。目前的研究方向是寻找治疗后消失较快的抗体,即短程抗体,以提高检测循环抗体的疗效考核价值。检测循     

日本血吸虫分子诊断抗原(抗体)研究进展

日本血吸虫病的实验室诊断尽管可采用病原学方法,但其敏感性低,操作复杂,现多以更敏感、简便的血清学诊断方法来替代或补充病原学方法的不足。文中就血吸虫分子诊断抗原(抗体)主要研究进展作了综述。     

日本血吸虫尾蚴及童虫可溶性抗原蛋白质组研究

应用免疫蛋白质组研究方法筛选、鉴定日本血吸虫尾蚴、童虫可溶性抗原蛋白质。方法日本血吸虫尾蚴可溶性粗抗原(SCAP)、童虫可溶性粗抗原(SLAP)分别用双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白质,每样本同时制3块胶,1块胶进行银染,2块胶通过电转印后再分别用感染兔和正常兔血清作Western印迹分析,确定特异性阳性反应点,再从相...     

日本血吸虫p 50亲免素基因克隆、表达及纯化

目的扩增、原核克隆和表达日本血吸虫（Sj）p50亲免素基因全长cDNA，并进行表达产物的纯化。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框后，将其克隆入pET 30a（＋）原核表达载体中，异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导高表达后用亲和层析柱对表达产物进行纯化。结果将Sjp50亲免素基因成功克隆入pET 30a（＋）表达载体中；诱导表达并成功纯化出重组Sjp50亲免素蛋白。结论成功克隆sjp50亲免素基因，并表达和纯化得到了p50亲免素蛋白，为研究Sip50亲免素的功能及其进行疫苗等研究奠定了基础。     

重组日本血吸虫抗原诱导小鼠抗卵免疫的研究

目的 探讨重组日本血吸虫31／32kDa抗原(rSj31／32)诱导小鼠产生抗卵免疫的效果。方法 采用rSj31／32抗原免疫小鼠，攻击感染后42d，定量检测粪卵、肝肠组织内虫卵及雌虫子宫内虫卵数。结果 与对照组比较，rSj31／32抗原免疫小鼠肝、肠组织内总卵数和粪卵数分别减少46．0％，76．0％和83．0％，其中肝、肠组织内成熟虫卵数明显减少(69．0％和91．0％)，而肝组织内死亡虫卵数显增加(242．5％)。此外，雌虫子宫内虫卵数亦明显下降(49．8％)。结论 rSj31／32抗原能诱导小鼠产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的免疫，可望作为抗卵疫苗的候选抗原。     

血水草生物碱杀灭钉螺及日本血吸虫尾蚴的实验研究

目的 探讨血水草生物碱杀灭钉螺及日本血吸虫尾蚴的效果。方法 配置不同浓度的血水草生物碱溶液，观察在20℃、25℃、30℃时浸泡24h、48h、72h、96h的钉螺死亡率；不同浓度溶液螺卵孵出率、尾蚴存活情况及对小鼠感染的保护率。结果 (1)浸泡72h钉螺死亡率100％的血水草生物碱溶液的浓度及温度分别为：1．25mg/L、30℃；2．5mg/L，25℃；5mg/L、10mg/L均为25℃。10ml／L、20℃钉螺死亡率为60％。(2)5mg/L溶液螺卵浸泡72h孵出率为0-10％。(3)2．5mg/L、5mg/L溶液尾蚴接触60min死亡率为97．71％、100％。尾蚴接触5mg/L、10mg/L药液30min，小鼠对血吸虫感染的保护率分别为94．53％、l00％。结论 血水草生物碱确有杀灭钉螺、螺卵及血吸虫尾蚴的效果。     

感染血吸虫小鼠肝脏中一氧化氮合酶动态探讨

目的探讨感染血吸虫小鼠肝脏中一氧化氮合酶(iNOS)与热休克蛋白(HSP)-70表达的动态变化. 方法日本血吸虫尾蚴经皮肤感染小鼠后第0,21,28,38和45d分别取其肝脏,用RT-PCR半定量法检测iNOS表达的动态变化;用Western-blot方法检测HSP-70表达的动态变化.结果感染后第21d起能检测到iNOS的表达,感染后第38d达峰值,第45d时表达水平有所下降;HSP-70在未感染小鼠肝脏内有微弱的表达,在感染后21d的肝脏其表达显著增强,38d达峰值,45d后表达下降.结论血吸虫感染可诱导iNOS和HSP-70在肝脏的协同表达,且两者表达的动态变化趋势一致.     

日本血吸虫组织蛋白酶L家族1个新基因的克隆与序列分析

目的克隆与分析日本血吸虫组织蛋白酶L样(SjCLs)基因全长cDNA序列,为进一步研究其功能奠定基础。方法提取日本血吸虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增获得cDNA序列;将目的片段连接至pMD18-T Simple载体上,连接产物转化大肠埃希菌,通过酶切和测序鉴定重组质粒;利用生物信息学软件分析序列的开放阅读框、蛋白序列的同源率和功能区。结果以成虫总RNA为模板进行RT-PCR,得到一段长为996 bp的cDNA片段,该片段含有完整读码框,该阅读框编码的蛋白含有331个氨基酸残基,分子量为38.3 kDa,命名为SjCLs;序列比对分析发现该蛋白氨基酸序列与SjCL2同源率最高,达到89.1%;进化树分析发现SjCLs与SjCL2亲缘关系也最近;SjCLs具有类似于SjCL2的N端信号肽,可能经加工后分泌到细胞外;两者所预测的功能基序及三维构象也基本相同。结论 SjCLs具有组织蛋白酶L的基本特征,从而证明研究获得组织蛋白酶L基因家族的一个新成员。     

重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗的免疫保护作用研究

目的初步研究重组耻垢分枝杆菌疫苗rMc-Sj26GST(recombinant M.smegmatis mc2155-Sj26GST)对小鼠的免疫保护作用.方法用耻垢分枝杆菌重组疫苗rMc-Sj26GST免疫雄性BALB/c小鼠,检测小鼠淋巴细胞刺激指数(SI),腹腔巨噬细胞培养上清释放NO量,小鼠血清IFN-γ、IL-2的含量,并计数小鼠肝、肺活细菌数.结果小鼠脾淋巴细胞刺激指数(SI)为2.64±1.37,与Mc组(载体组)1.28±0.41相比,差异具有显著性;小鼠血清IFN-γ为196.43 pg*ml-1,与Mc组112.57 pg*ml-1相比,差异有显著性,较对照组高41%;小鼠血清中IL-2的浓度较对照组高.经rMc-Sj26GST疫苗免疫的小鼠受结核杆菌攻击后其肺、肝脏结核杆菌数较对照组少.结论耻垢分枝杆菌重组疫苗rMc-Sj26GST增强了小鼠细胞免疫功能,并使小鼠能抵抗结核杆菌的攻击.     

Effect of mite antigens on antigen presenting cells/macrophages in mice

The effect of mite antigens on murine lymphocytes and macrophages was studied in vitro. Antigens prepared from Dermatophagoides farinae bodies (Dfb) or recombinant Mag3, glutathione-S transferase (GST)-fused mite antigen, stimulated murine spleen cells to proliferate. The responder cells were B cells, because the response was sensitive to anti-Ig antibody and C treatment, but not to anti-Thy 1 antibody and C treatment. The response was not due to lipopolysaccharide contamination, a representative B-cell mitogen, because polymyxin B column-passed Dfb significantly stimulated B cells, and GST protein alone did not stimulate them. Alloantigen presenting activity was increased in mite antigen-treated B cells and spleen adherent cells. Mite antigens stimulated CD80 and the major histocompatibility complex (MHC) class II molecule expression, but suppressed CD86 expression on B cells and spleen adherent cells that were detected by a flow cytofluorometer. Antibodies to the MHC class II molecules, CD80 and CD86 blocked the alloantigen-presenting activity. Furthermore, mite antigens stimulated B cells and spleen adherent cells to produce cytokines. These results suggest that mite antigens have a stimulating activity on antigen-presenting cells/macrophages and modulate immune responses.     

碘对小鼠骨髓树突状细胞前体表型及功能影响

目的 探讨碘对小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)前体表型及功能的影响.方法 选雌性C57BL/6 J小鼠40只,按碘摄入量随机分为适碘组(NI)、低碘组(LI)、10倍碘过量组(10H I)、50倍碘过量组(50H I)4组,喂养8个月后检测小鼠DC表面分子表达和培养上清中白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)水平以及DC刺激T细胞的增殖能力.结果 LI组小鼠DC表面分子CD40⁺CD11 c⁺、CD80⁺CD11 c⁺、CD86⁺CD11 c⁺、MHC-Ⅱ⁺CD11 c⁺在CD11 c⁺细胞中所占比例均低于NI组小鼠,差异均有统计学意义(P<0.05);50H I组小鼠DC表面分子CD40⁺CD11 c⁺、CD80⁺CD11 c⁺、CD86⁺CD11 c⁺、MHC-Ⅱ⁺CD11 c⁺在CD11 c⁺细胞中所占比例均高于NI组小鼠,差异均有统计学意义(P<0.05);LI组小鼠DC培养上清中细胞因子IL-12浓度为(275.8±32.6)pg/mL,低于NI组小鼠的(548.7±51.3)pg/mL(P<0.01);50H I组小鼠DC培养上清中细胞因子IL-12浓度为(963.2±83.4)pg/mL,高于NI组小鼠(P<0.01);LI组的刺激指数(SI)为(5.23±1.96),低于NI组小鼠的(8.61±2.15)(P<0.05);50H I组小鼠的SI为(12.38±2.61),高于NI组小鼠(P<0.05).结论 摄入一定水平的碘可诱导小鼠DC前体的增殖和成熟,提高机体的免疫功能.