阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c-fos基因表达的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c-fos基因的作用机制。方法将不同浓度的阿仑膦酸钠作用于小鼠破骨细胞,采用Western blot检测小鼠破骨细胞分化中c-fos基因的表达情况。结果阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和c-fos基因的表达显著低于空白对照组;且加入10-4mol/L、10-6mol/L、10-8mol/L浓度阿仑膦酸钠后,c-fos表达受抑制程度依次增强;而在10-8mol/L、10-10mol/L、10-12mol/L浓度中,c-fos表达受抑制程度依次减弱。结论阿仑膦酸钠可使破骨细胞分化中的c-fos基因受到抑制,其抑制程度与阿仑膦酸钠的浓度有关,10-8mol/L浓度时抑制作用最强。     

阿仑膦酸钠对人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成的影响

目的:观察二磷酸盐类药物阿仑膦酸钠对人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成的影响,探讨二磷酸盐防治人工关节无菌性松动的可能机制.方法:体外用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导小鼠骨髓造血干细胞分化为破骨前体细胞(osteoclast precursors,OCPs),然后用核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和M-CSF两种细胞因子协同诱导OCPs向成熟破骨细胞分化,同时在培养体系中加入高分子聚乙烯微粒(103/ml)和不同浓度的阿仑膦酸钠(0.4、2.0、10.0、50.0 μg/ml),对获得的各组破骨细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数阳性破骨细胞(核≥3)的数目;提取总RNA用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRAP mRNA的表达.结果:高分子聚乙烯微粒组TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达显著高于空白对照组(P＜0.05);阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达均显著低于高分子聚乙烯组(P＜0.05),且随着阿仑膦酸钠浓度增高TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达呈递减趋势,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:阿仑膦酸钠可以抑制人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成.     

载阿仑膦酸钠骨水泥抑制骨水泥微粒诱导的骨吸收

目的　观察载阿仑膦酸钠骨水泥对骨水泥微粒诱导的骨吸收的抑制作用。方法　将制作的载阿仑膦酸钠骨水泥微粒和骨水泥微粒分别加入鼠骨髓单核细胞培养体系中 ,经 10 -8mol/L 1α ,2 5 (OH) 2 D3 和 10 -7mol/L地塞米松诱导培养 ,于培养 9、 12d时观察多核、抗酒石酸酸性磷酸酶 (tartrate resistantacidphosphatase,TRAP)染色阳性的破骨样细胞和形成的骨吸收陷窝数量。结果　鼠骨髓单核细胞培养体系中 ,加入载阿仑膦酸钠骨水泥微粒后 ,形成的破骨样细胞以及骨吸收陷窝数量明显少于不加或仅加入骨水泥微粒组 (P <0 0 1)。结论　载阿仑膦酸钠骨水泥能够释放出阿仑膦酸钠 ,抑制骨水泥微粒诱导的破骨样细胞的形成和骨吸收作用。     

帕米膦酸钠对聚乙烯微粒刺激破骨细胞功能的影响

目的：研究帕米膦酸钠对聚乙烯微粒刺激破骨细胞功能的影响，间接探讨帕米膦酸钠防治人工关节无菌性松动的可能性。方法：分离新生新西兰兔长骨中的破骨细胞，与骨片共同培养2、4、6天，试验分3组：对照组、10^9／m1聚乙烯微粒组、10^9／m1聚乙烯微粒和10μg／ml帕米膦酸钠共培养组，观察帕米磷酸钠对破骨细胞骨吸收功能的作用。结果：聚乙烯微粒与破骨细胞共同培养6天可以增强其骨吸收功能，帕米磷酸钠可以抑制聚乙烯微粒对破骨细胞的作用。结论：帕米膦酸钠可以抑制聚乙烯微粒对破骨细胞的刺激作用，可用来防治人工关节无菌性松动。     

阿仑膦酸钠对体外培养的间充质干细胞成骨能力的影响

目的 探讨阿仑膦酸钠对于体外培养的人间充质干细胞分化与增殖的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法 体外分离与扩增人骨髓间充质干细胞,用不同剂量的阿仑膦酸钠处理72h后,MTY法检测细胞的增殖能力,全自动生化分析仪分析碱性磷酸酶活性以反映成骨分化能力,RT—PCR检测各种重要成骨相关转录因子的表达情况。结果 10^-7M,10^-8M与10^-9M阿仑膦酸钠组的增殖速度明显大于对照组（P〈0．05）,而且碱性磷酸酶与骨钙素的表达量也明显增高（P〈0．05）,转录因子Runx2,Dlx5,Osx表达有所增高。结论 阿仑膦酸钠能够同时促进人骨髓间充质干细胞的增殖与分化,其作用可能与成骨转录因子有关。     

唑来膦酸盐通过p38 MAPK通路调控高糖条件下破骨细胞分化生成及骨吸收功能

目的 探究在高浓度葡萄糖的条件下,唑来膦酸盐（ZOL）对破骨细胞分化及功能的影响,以及p38丝裂原蛋白活化激酶（p38 MAPK）通路在其中的调控机制。方法 将RAW264.7细胞向破骨细胞方向分化诱导,分为4组：低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（16.5 mmol/L葡萄糖）、低糖+ZOL组（5.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）、高糖+ZOL组（16.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）。MTT法测定各组细胞增殖活性,光学显微镜检测RAW264.7细胞的迁移数目,免疫荧光组织化学染色检测各组破骨细胞细胞骨架的清晰程度。增加第 5 组：高糖+ZOL+SB203580（16.5 mmol/L 葡萄糖+0.1 μmol ZOL+10 μmol SB203580）后,TRAP染色鉴定各组阳性破骨细胞数量;将RAW264.7细胞与牙本质磨片共同培养,扫描电子显微镜测定各组细胞骨吸收陷窝的数量及面积;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及Western blotting检测破骨细胞相关因子的mRNA和蛋白的表达情况。结果 细胞增殖实验中各组细胞增殖情况无明显差别。高糖条件对RAW264.7细胞的迁移具有促进作用,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑制细胞骨架的清晰程度及破骨细胞封闭区的形成;下调p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP mRNA和蛋白表达情况从而对破骨细胞的分化及功能发挥抑制作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。加入唑来膦酸盐后,RAW264.7细胞迁移受到抑制,差异具有统计学意义（P<0.05）;细胞骨架的清晰程度进一步下降,破骨细胞封闭区的形成被进一步破坏破;p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP的mRNA和蛋白质表达降低,进一步抑制破骨细胞分化及功能,差异具有统计学意义（P<0.05）;加入SB203580后,破骨细胞分化和骨吸收功能受到抑制,p38 MAPK、p-p38 MAPK表达受到抑制,下游NFATc1、CTSK、TRAP表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 高糖条件抑制破骨细胞的分化生成和骨吸收功能。ZOL通过p38 MAPK信号通路实现了对高糖条件下破骨细胞分化及功能的抑制作用,提示p38 MAPK分子通路可作为唑来膦酸盐调控糖尿病性骨质疏松的新机制。     

阿仑膦酸钠对骨质疏松大鼠骨量及微观结构的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对骨质疏松大鼠骨量及微观结构的影响及其可能的作用机制。方法3月龄雌性SD大鼠30只,随机分为三组,每组10只：A组,假手术组;B组,模型组;C组,阿仑膦酸钠治疗组。B、C组接受双侧卵巢切除术,A组接受假手术。术后6周检测股骨骨密度确认骨质疏松造模成功,同时C组给予阿仑膦酸钠治疗（15μg／kg,2次／周）,B组给予等量生理盐水作为对照。12周后处死所有大鼠,检测左侧股骨骨密度,取左侧胫骨做硬组织切片,骨形态计量学分析松质骨骨量、微观结构,提取右侧股骨和胫骨骨髓基质干细胞体外培养,Realtime PCR检测第三代细胞RANKL表达。结果①卵巢切除术后8周,大鼠骨密度显著低于对照组。②A、C组骨密度显著高于B组,c组显著低于A组（P〈0．05）。③胫骨近端骨小梁相对体积、骨小梁厚度,A组显著高于B、C组,C组显著高于B组（P〈0．05）,A、C组破骨细胞数、骨小粱分离度、骨吸收长度比均显著低于B组（P〈0．05）。④13组RANKL表达显著高于A、C组（P〈0．05）。结论阿仑膦酸钠可通过抑制骨吸收、改善其微观结构部分阻止骨质疏松大鼠骨质量的下降,其机制可能与抑制成骨分化的骨髓基质千细胞RNAKL的表达有关。     

去亚甲基小檗碱抑制破骨分化减轻钛颗粒诱导的骨溶解

目的 探讨去亚甲基小檗碱(demethyleneberberine,DMB)对破骨细胞和骨溶解的抑制作用。方法 将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、钛(Ti)颗粒组、低剂量组(1mg/kg DMB)和高剂量组(10mg/kg DMB),2周后收集标本行显微计算机断层扫描和组织学分析;CCK-8法检测不同浓度DMB对小鼠骨髓巨噬细胞的毒性;抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测成熟破骨细胞形成;实时荧光定量聚合酶法检测各组破骨细胞分化基因的表达情况。结果动物实验表明,与钛颗粒组比较,DMB能够明显抑制钛颗粒诱导的骨溶解,减轻骨破坏;细胞实验表明DMB在无明显细胞毒性的浓度下能抑制破骨细胞的形成和破骨细胞分化相关基因的表达。结论 去亚甲基小檗碱可以通过浓度依赖的方式抑制破骨细胞的分化与成熟,有望成为治疗磨损颗粒诱导的假体周围骨溶解的潜在药物。     

荜茇酰胺抑制破骨细胞分化的机制研究

目的探讨荜茇酰胺对破骨细胞分化的影响及机制。方法通过CCK-8法评估荜茇酰胺对小鼠骨髓来源单核巨噬细胞（BMMs）增殖活性的影响,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色评估其对BMMs破骨分化的影响,利用OsteoAssaySurface骨细胞表面培养板研究其对破骨细胞骨吸收能力的影响,并采用qRT-PCR法验证荜茇酰胺处理下BMMs破骨分化过程中核心转录因子活化T-细胞核因子1（NFATc1）和相关破骨特征基因在转录水平的变化。结果2μmol/L及以下浓度的荜茇酰胺对BMMs增殖无明显毒性反应,并且荜茇酰胺可浓度依赖性地抑制BMMs破骨分化过程,在1μmol/L荜茇酰胺干预下几乎无成熟破骨细胞生成。与此同时,荜茇酰胺可显著抑制破骨细胞的骨吸收功能。在机制上,荜茇酰胺可通过抑制NF-κB受体活化因子配体（RANKL）刺激BMMs破骨分化过程中核心转录因子NFATc1的表达,从而下调下游耐酒石酸酸性磷酸酶（ACP5）、破骨细胞相关受体（OSCAR）、组织蛋白酶K（CTSK）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）等破骨特征基因的转录,抑制破骨分化过程。结论荜茇酰胺可通过下调RANKL刺激BMMs破骨分化过程中NFATc1的表达,抑制BMMs破骨分化过程及破骨细胞的骨吸收能力。     

唑来膦酸影响单个核细胞向破骨细胞分化及RANK表达的研究

目的 研究唑来膦酸(zoledronate,ZLN)对破骨细胞分化及相关信号分子组织蛋白酶K (capthsin K)、细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa-B,RANK)表达的影响,初步探讨唑来膦酸对破骨细胞分化的影响和机制。 方法 采用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。在诱导开始时即分成2组:G1组为空白对照组,采用50 ng/ml RANKL诱导;G2组为实验组,从诱导开始就加入1×10-6 mol/L唑来膦酸处理,诱导4 d后收获并进行抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色观察、计算破骨细胞数量并检测TRAP酶活性;采用Real-Time PCR和Western Blot分析组织蛋白酶K、RANK的表达水平。 结果 唑来膦酸组生成的TRAP阳性的破骨样细胞较对照组少且核的数目也较少,唑来膦酸组较对照组破骨细胞生成的数目下降[(62.0±10.2)%,P＜0.05];唑来膦酸组TRAP活性较对照组下降[(31.0±4.1)%,P＜0.05];唑来膦酸组的组织蛋白酶K、RANK基因表达较对照组分别下降[(78.0±4.2)%、(49.0±1.9)%,P＜0.05]。 结论 唑来膦酸通过抑制破骨前体细胞RANK的表达来抑制体外破骨细胞分化。      

醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43的影响

目的：观察醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43（Connexin 43,Cx43）表达的影响。方法：将h9c2心肌细胞随机分为对照组和实验组,实验组用不同浓度（1×10^-8、1×10^-6、1×10^-4 mol/L）醛固酮处理24 h后,用RT-PCR和Western Blot观察不同浓度醛固酮下h9c2心肌细胞Cx43蛋白和mRNA的变化。结果：1×10^-8 mol/L醛固酮组Cx43mRNA和蛋白表达含量较对照组增加;1×10^-6 mol/L和1×10^-4 mol/L组的Cx43蛋白表达含量较对照组减少,而Cx43mRNA较对照组无明显改变。结论：醛固酮可能是通过对表达Cx43的双重影响来参与心肌细胞间隙连接重构的。     

血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞分泌纤连蛋白的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的肾小管上皮细胞分泌细胞外基质成分纤连蛋白的影响。方法:采用免疫印迹法(Westernblot)及细胞免疫荧光法检测10-6mol/LAngⅡ分别刺激肾小管上皮细胞6、12、24、48、72、96h,以及不同浓度(10-6、10-7、10-8mol/L) AngⅡ刺激96h时细胞纤连蛋白的表达。结果:10-6mol/LAngⅡ刺激体外培养的肾小管上皮细胞12h后纤连蛋白表达开始增加,72h达高峰。不同浓度的AngⅡ刺激96h后,纤连蛋白的表达均有增加,10-6mol/L增加最明显,10-7、10-8mol/L次之。结论:AngⅡ能使体外培养的肾小管上皮细胞分泌纤连蛋白增加,并具有时间和浓度依赖性。     

己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的促增殖、分化作用及其机制。方法:取孕16天SD胎鼠海马NSCs培养,分别设空白对照组,己烯雌酚1×10-7 mol/L组、1×10-8 mol/L组、1×10-9 mol/L组,以及脑源性神经营养因子(BDNF)5×10-2 mg/L组;免疫荧光化学方法检测Nestin、神经元特异烯醇化酶及神经胶质酸性蛋白的表达,RT-PCR检测BDNF mRNA的含量。结果:不同剂量己烯雌酚处理各组神经球面积、积分光密度值、平均突起长度与平均突起数均增加,其中10-8 mol/L组海马NSC增殖与分化最明显,BDNF mRNA表达量亦最高(P<0.01)。结论:己烯雌酚对海马NSCs的增殖分化具有促进作用,且可能与上调BDNF的表达有关。     

全反式维甲酸、1,25二羟维生素D3对白血病细胞株SHI-1中几种糖基转移酶mRNA表达的影响

目的探讨在全反式维甲酸（ATRA）、1,25二羟维生素D3[1,25-（OH）2D3]的作用下,白血病细胞株SHI-1中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶（ppGalNAcTs）和某些N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（GnTs）表达的变化。方法应用RT-PCR法研究在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3作用下,白血病细胞株SHI-1中ppGalNAcTs、GnTs表达的变化。结果在SHI-1细胞株中,随着1,25-（OH）2D3浓度（10^-8～10-^6mol/L）的增加,ppGalNAcT1和T2表达增加,T3表达没有变化,T4表达减少;加入ATRA（10^-8～10^-6mol/L）后,细胞株中ppGalNAcT2、β6GnTV、O-GnT表达量升高。结论白血病细胞株SHI-1ppGalNAcTs各型表达水平不同;在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3的作用下,白血病细胞株SHI-1中各型ppGalNAcTs表达变化也不同。在SHI-1细胞株加入ATRA后细胞中β2GnTI、β6GnTV发生显著变化。ppGal-NAcT1、ppGalNAcT2、GnTs与白血病细胞株的分化可能有一定关系。     

钠离子调节成骨细胞功能及其相关基因的差异性变化

目的探讨钠离子(Na+)对大鼠成骨细胞成骨功能的调节,及其相关基因mRNA的变化。方法应用CCK-8试剂盒和碱性磷酸酶(AKP)试剂盒检测5种不同浓度Na+对成骨细胞增殖和分化的影响。再从中选用低(1×10-4mol/L)、中(0.1 mol/L)、高(0.5 mol/L)3种浓度,于处理细胞15、30、120 min时,通过RT-PCR测定Na+对成骨细胞成骨功能相关基因OPN、Cbfa1 mRNA转录的影响。结果在1×10-4～1 mol/L范围内,与正常组相比,低浓度Na+明显促进成骨细胞分化,使AKP活性增加,高浓度则呈抑制作用,而Na+对成骨细胞的正常增殖无影响。RT-PCR结果显示与正常组相比,低浓度Na+显著地上调成骨细胞OPN、Cbfa1 mRNA的转录,高浓度则呈抑制作用。然而OPN、Cbfa1基因对Na+调节作出反应所需的时间存在差异,Cbfa1基因在经处理30 min时即可出现mRNA转录变化,而OPN基因则在处理120 min时才出现相应改变。结论 Na+可直接调节成骨细胞成骨功能,低浓度促进成骨细胞分化和相关功能基因OPN、Cbfa1的增加,而高浓度则显示抑制作用;且各基因转录变化具有时间差异。     

胰岛素、地塞米松、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对3T3-L1脂肪细胞脂肪水孔蛋白表达的调节作用

目的通过细胞培养研究胰岛素样生长因子-1(IGF鄄1)、地塞米松对成熟脂肪细胞水孔蛋白(Aquaporinadipose,AQPap)基因表达的影响,并与胰岛素的作用相比较,以此了解AQPap基因表达的影响因素,探讨其在肥胖及糖尿病发病中所起作用。方法用不同浓度(10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)的胰岛素、IGF鄄1(10-7、10-8、10-9、10-10mol/L)及地塞米松刺激液(10-6、10-7、10-8mol/L)刺激诱导分化第9天的3T3鄄L1细胞6h;提取细胞RNA,运用半定量RT鄄PCR技术,检测AQPapmRNA表达量的变化。结果与对照组相比,10-9mol/L胰岛素刺激细胞6h可使AQPap基因表达下降16%,10-6mol/L胰岛素使之下降超过50%。IGF鄄1也降低AQPap的基因表达,但相同浓度(10-7mol/L)刺激下,IGF鄄1的作用要弱于胰岛素(P<0.05)。地塞米松对AQPapmRNA的表达量无明显影响,不过,同时给予10-6mol/L的地塞米松和胰岛素与单用10-6mol/L胰岛素相比,AQPapmRNA的表达量有所上升(P<0.05)。结论胰岛素对3T3鄄L1脂肪细胞AQPap的表达起抑制作用,并呈剂量及时间依赖性。IGF鄄1也有抑制作用,但较胰岛素弱。地塞米松能够拮抗胰岛素对3T3鄄L1脂肪细胞AQPap基因表达的下调作用。     

A new 2-aminosteroid induces cellular differentiation and upregulates the expression of MafB and Egr-1 genes respectively in HL-60 and K562 leukemia cells

Background In previous work, we suggested that some 2-aminosteroids inhibited proliferation and induced differentiation of both human and murine leukemia cells. Here, we reported the actions of another new 2-aminosteroid designated as H89712 on human leukemia cells. Methods Cell colony counting and MTT assay were used to determine proliferation. Cell morphology, histochemical staining, UV detection and cytometry were used to determine differentiation. RT-PCR was used to detect gene expression. Standard statistical method was used to analyze data. Results H89712 inhibited proliferation of HL-60 leukemia ceils and the inhibition percentage in MTT assay was 18% at the dose of 10^-8 mol/L and 65% at the dose of 10^-5 mol/L, respectively. The inhibition for HL-60 in colony assay was 23% at the dose of 10^-8 mol/L and 96% at the dose of 10^-5 tool/L, respectively. H89712 also induced HL-60 cells toward macrophage-like differentiation. It was verified by flow cytometry that the percentage of positive CD14 expression in differentiated HL-60 cells was about 9 times higher than that of the control at thedose of 10^-8 mol/L and 20 times higher than that of the control at the dose of 10^-5 mol/L respectively, and this action involved upregulation of MafB gene in HL-60 leukemia cells. On the other hand, H89712 inhibited proliferation of K562 leukemia cells and the inhibition of K562 leukemia cells in MTT assay was shown by 34% at the dose of 10^-8 mol/L and 88% at the dose of 10^-5 mol/L respectively. The inhibition of K562 leukemia cells in colony assay was 53% at the dose of 10^-8 mol/L and 100% at the dose of 10^-5 mol/L respectively. H89712 also induced K562 cells toward erythroid-like differentiation and it was verified by flow cytometry that the percentage of positive CD71 expression in differentiated K562 cells was about 9 times higher than that of thecontrol at the dose of 10^-8 mol/L and 16 times higher than that of the control at the dose of 10^-5 mol/L respectively. This action was related to upregulation of Egr-1 gene in K562 leukemia cells. Conclusions Our results showed the important roles played by MafB in macrophage differentiation and Egr-1 in erythroid differentiation of human myeloid leukemia cells.     

BM210955抗骨吸收细胞药效与作用机制

目的　研究BM2 10 955延缓骨量丢失、抑制骨吸收的细胞药效和作用机制。方法　由 10日龄新西兰兔四肢长骨分离破骨细胞接种于象牙片和盖玻片上培养 ,应用TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶 )、TB(甲苯胺蓝 )和吖啶橙荧光染色等技术 ,观察不同浓度BM2 10 955药物对破骨细胞生存率、骨吸收功能和凋亡率等细胞药效评价指标的影响。结果　BM2 10 955降低TRAP( )多核细胞数目 ,10 -8mol/L组较对照组减少 73% ;BM2 10 955抑制骨片吸收陷窝的形成 ,作用强度与药物浓度有关 ,10 -12 、10 -10 和 10 -8mol/L组抑制率分别为 31.5 8%、76 .32 %和87.99% ;10 -8mol/L以上药物浓度对破骨细胞凋亡有诱导作用 ,10 -4 mol/L组凋亡指数为 6 2 %。结论　诱导破骨细胞凋亡、降低破骨细胞生存数目并抑制细胞的骨吸收功能是BM2 10 955延缓骨丢失、抑制骨吸收的主要机制之一。     

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的：研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3－E1甾体激素受体辅激活因子1（steroid receptor coactivator-1,SRC-1）和核受体辅抑制因子（nuclear receptor corepressor,NcoR）表达的调节作用及其机制。方法：体外培养MC3T3-E1细胞于含29／6胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的α最低必须培养基（α—minimal essential medium,α—MEM）中,给予不同浓度大豆苷原或10^-6 mol／L的雌二醇作用3d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体（estrogen receptor,ER）拮抗剂ICI182780（Faslodex,ICI,10^-7 mol／L）和雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）特异性拮抗剂（methyl—piperidino—pyrazole,MPP,10^-6 mol／L）干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果：大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^-7mol／L和10smol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2．5倍（P〈0．05）和2倍（P〈0．05）。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35％（P〈0．05）。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^-7mol／L和10^-5 mol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1．8倍（P〈0．05）和2．4倍（P〈0．05）。结论：大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1／NcoR比值。ER8参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1／NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。