四嗪二甲酰胺对K562和K562/Adr的作用及其与NF-κB信号分子的关系

目的探讨四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对慢性粒细胞白血病细胞株K562(K562-S)和耐药细胞株K562/Adr(K562-R)的抑制作用及其对p210 BCR/Ab l融合蛋白和转录核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法 MTT比色法观察其对K562-S细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪及细胞克隆形成初步分析其对白血病干细胞的影响,通过Western印迹分析PARP-1、p210 BCR/Abl、c-Abl、NF-κB的表达。结果不同浓度的ZGDHu-1对K562-S细胞均有增殖抑制作用,呈现剂量-时间依赖关系,ZGDHu-1作用48h时的IC50值为0.25μg/ml。在ZGDHu-1作用7天后,K562-S及K562-R细胞克隆形成被完全抑制。ZGDHu-1作用48h后,出现PARP-1裂解,诱发细胞凋亡,下调K562-R细胞p210 BCR/Abl及c-Abl的表达,抑制K562-S及K562-R细胞质内NF-κB/p65的表达。结论 ZGDHu-1能够抑制K562-S及耐药细胞株K562/Adr(K562-R)细胞的增殖,促进细胞凋亡。通过抑制p210 BCR/Abl的表达,降低NF-κB的活性,阻断NF-κB信号传导通路,尤其对于耐药型白血病细胞具有广泛的应用价值。     

四嗪二甲酰胺对K562和K562/Adr的作用及其与NF-KB信号分子的关系

目的 探讨四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对慢性粒细胞白血病细胞株K562(K562-S)和耐药细胞株K562/Adr(K562-R)的抑制作用及其对p210 BCR/Abl融合蛋白和转录核因子KB(NF-KB)表达的影响.方法 MTT比色法观察其对K562-S细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪及细胞克隆形成初步分析其对白血病干细胞的影响,通过Western印迹分析PARP-1、p210 BCR/Abl、C-Abl、NF-KB的表达.结果 不同浓度的ZGDHu-1对K562-S细胞均有增殖抑制作用,呈现剂量-时间依赖关系,ZGDHu-1作用48h时的,IC<,50>值为0.25μg/ml.在ZGDHu-1作用7天后,K562-S及K562-R细胞克隆形成被完全抑制.ZGDHu-1作用48h后,出现PARP-1裂解,诱发细胞凋亡,下调K562-R细胞p210 BCR/Abl及c-Abl的表达,抑制K562-S及K562-R细胞质内NF-KB/p65的表达.结论 ZGDHu-1能够抑制K562-S及耐药细胞株K562/Adr(K562-R)细胞的增殖,促进细胞凋亡.通过抑制p210 BCR/Abl的表达,降低NF-KB的活性,阻断NF-KB信号传导通路,尤其对于耐药型白血病细胞具有广泛的应用价值.     

地塞米松对柔红霉素诱导K562细胞核因子kappa B活化及凋亡的影响

目的探讨地塞米松（DXM）对柔红霉素（DNR）诱导K562细胞核因子kappaB（NF—κB）活化及凋亡的影响。方法采用免疫组化二步法检测K562细胞的NF—κB活化,用流式细胞检测术检测K562细胞的凋亡率。结果DNR同时具有诱导K562细胞凋亡和NF—κB活化的作用;DXM50μg／L能显著抑制DNR诱导的K562细胞的NF—κB活化和增强DNR诱导的K562细胞凋亡,NF—κB活化抑制率为20．17％（P〈0．01）,细胞凋亡增强率为25．44％（P〈0．01）。结论DNR诱导K562细胞凋亡的同时激活NF—κB p65活化;DXM通过抑制NF—κB活化,增强其诱导K562细胞凋亡的作用。     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞株凋亡的时程效应

目的研究不同时间蛋白酶体抑制剂MG-132对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562的干预作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测16μmol／LMG-132作用不同时间（0、24、48、72、96h5个时间点）对K562细胞株增殖的影响,免疫细胞组织化学法检测MG-132作用不同时间后核因子-κB（NF—κB）及糖皮质激素受体（GR）的表达,采用流式细胞术检测MG-132不同作用时间对凋亡的影响。结果MTT：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的抑制率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时抑制率最高,为（63．33±1．52）％。免疫细胞组织化学法：MG-132干预K562细胞不同时间后,K562细胞株中的NF—κB、GR的表达水平均表现为对时间的依赖性;对于NF—κB,实验组明显低于对照组（均P〈0．05）,以干预96h时表达最低,为51．15±1．64;对于GR,以干预72h时表达最高,为89．21±3．49。流式细胞术：MG-132干预K562细胞株不同时间后K562细胞株的凋亡率表现为对时间的依赖性,实验组明显高于对照组（P均〈0．05）,以干预72h时,凋亡率最高,为（17．57±1．45）％。结论MG-132可能是通过下调NF—κB、上凋GR的表达诱导了K562细胞的凋亡和抑制,并表现出对时间的依赖性。     

STI571 诱导K562细胞耐药机制的实验研究

目的体外建立对STI571耐药的K562细胞系(简写为K562-R),并对其耐药机制进行初步分析。方法用药物浓度逐步递增的方法培养野生型K562细胞(简写为K562-W)。绘制K562-R生长曲线,MTT法检测STI571、阿霉素(adriamycin,ADR)和三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对K562-R的细胞毒作用,Ho-echst33342染色检测STI571对K562-R诱导凋亡作用。流式细胞术检测K562-R的MDR-1表达情况;基因测序检测K562-R的Abl激酶ATP结合区点突变情况;间期荧光原位杂交(interphasal fluorescence in situ hybridization,I-FISH)检测Bcr/Abl融合基因扩增情况。结果生长曲线绘制结果表明K562-R在0.5μmol/L的STI571环境中可呈指数增长;MTT法检测STI571对K562-W和K562-R的半数抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC50)分别为(1.64±0.13)μmol/L和(3.32±0.05)μmol/L,K562-R的耐药倍数为(2.04±0.16)倍,而ADR和HT对两种细胞毒性作用均呈剂量依赖性反应,耐药前后差异无显著性(P值分别为0.472和0.108);Hoechst33342细胞凋亡试验表明STI571对K562-W诱导凋亡作用呈剂量依赖性,对K562-R作用减弱。流式细胞术检测K562-R和K562-W的MDR-1表达率分别为2.68%和1.39%(P<0.001),基因测序表明两种细胞Abl激酶ATP结合区序列完全一致;I-FISH检测初步观察K562-R的Bcr/Abl融合信号拷贝数增多(P<0.001)。结论体外成功建立STI571耐药的K562细胞系,其耐药机制可能与Bcr/Abl融合基因扩增有关。     

不同浓度硼替佐米对K562／DNR细胞株NF—κB，IκB及P-gp表达的影响

目的：观察不同浓度硼替佐米（商品名万珂,PS-341）对柔红霉素（DNR）诱导的K562耐药细胞株（K562／DNR）核因子-κB（NF—κB）、抑制蛋白κB（IκB）及P-糖蛋白（P—gp）表达的影响,探讨PS-341逆转耐药的分子机制．方法：四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）进行耐药细胞株和PS-341细胞毒性的判定．以100mg／LDNR单用或联合应用0．4,4,40μg／LPS-341作用于K562／DNR36h,检测各组NF-κB,IκB及P—gp表达情况,并测定NF—κB活性,检测各组细胞凋亡率．结果：与阴性对照组相比,DNR可诱导NF—κB表达上调、IκB表达下调、P-gp表达上调;加用PS-341可显著抑制NF—κB表达,同时使IκB表达增加、P—gp表达下降,上述作用随PS-341浓度增加而增强．NF—κB活性（％）检测示：DNR组为25．9±2．5,DNR＋0．4μg／LPS-341组为20．3±2．0,DNR＋4μg／LPS-341组为6．1±2．5,DNR＋40μg/LPS-341组为4．6±1．6,加入PS-341后,NF—κB活性受抑,该作用随PS．341浓度增加而增强．细胞凋亡率（％）检测结果示：DNR组为22．5±4．6,DNR＋0．4μg／LPS-341组为31．0±5．2,DNR＋4μg／LPS-341组为43．6±7．7,DNR＋40μg/LPS．341组为56．0±9．3,加入PS-341后可提高DNR引起的细胞凋亡率,该作用随PS-341浓度的增加而增强．结论：PS-341可逆转白血病细胞耐药,该作用呈浓度依赖性．     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562／A02核因子kB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine,Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB,NF-kB）表达的影响,探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌,细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后,对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）;K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）;Tet作用6h和12h后,可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

汉防己甲素对白血病耐药细胞株K562/A02核因子κB表达的影响

目的：通过研究汉防己甲素（tetrandrine，Tet）对白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562／A02核因子kB（nuclear factor-kaPPaB，NF-kB）表达的影响，探讨Tet逆转多药耐药的作用机制。方法：采用免疫细胞化学及蛋白印迹法分别检测1umol／L Tet作用K562和K562／A02细胞6h和12h舌，细胞NF-kB核转位水平和胞核NF—kB蛋白表达的变化。结果：Tet作用6h和12h后，对K562细胞的NF-kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）；K562／A02细胞NF—kB核转位水平及胞核NF—kB蛋白表达明显高于K562细胞对照组（P〈0．01）；Tet作用6h和12h后，可明显降低K562／A02细胞NF-kB蛋白核转位（P〈0．05）和胞核NF—kB蛋白表达水平（P〈0．01）。作用12h较作用6h效果更显著（P〈0．05）。结论：1umol／L Tet可能通过抑制NF—kB活化逆转K562／A02细胞多药耐药性。     

辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF κB通路的分子变化

目的：探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NFκB信号通路的分子变化，以说明辛伐他汀是否依赖NFκB信号通路参与K562细胞凋亡发生。方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞，接种于18只BALB/cnu/nu裸小鼠皮下，构建移植瘤模型。随机分为3组，每组6只。对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml，两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml（0.05 mg）和0.4 ml（0.08 mg）。均隔日注射，连续6次。采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化，RTPCR检测K562细胞中NFκB信号通路IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的差异表达。结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡，且高剂量组凋亡率高于低剂量组（P<0.01）;不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的表达下调（P<0.01）。结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡，可能与NFκB通路基因的表达下调有关。     

铁剥夺对柔红霉素诱导K562细胞多药耐药基因1表达及NFκB活化的影响

目的:探讨铁剥夺对柔红霉素(DNR)诱导K562细胞多药耐药基因1(MDR1)表达及核因子κB(NFκB)活化的影响.方法:以1.0μmol/L DNR单用或联合应用25μmol/L去铁胺(DFO)作用于人红白血病细胞株K56224h后,应用RT-PCR法、流式细胞仪分别检测对照组、DNR组和DNR+DFO组K562细胞MDR1 mRNA和P糖蛋白(Pgp)的表达情况,同时采用凝胶滞留试验检测NFκB的转录活性水平.结果:与对照组相比,DNR可同时诱导MDR1mRNA、Pgp表达上调和NFκB活化增强(P＜0.05);DFO联合DNR可显著抑制DNR诱导的MDR1 mRNA、Pgp表达及NFκB活化(P＜0.05).结论:铁剥夺可减少DNR诱导的MDR1、Pgp表达,其机制可能与抑制NFκB活化有关.     

三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)对K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响，通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况，RT—PCR技术分析p2l^WAFl表达的改变。结果(1)TB抑制：K562细胞的增殖。(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡，影响细胞周期的进程，使细胞周期阻滞于G2／M期。(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中，p2l^WAFl表达增加。结论TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G2／M期，p2l^WAFl在此过程中发挥作用。     

铁剥夺对柔红霉素诱导K562细胞多药耐药基因1表达及NFKB活化的影响

目的:探讨铁剥夺对柔红霉素(DNR)诱导K562细胞多药耐药基因1(MDR1)表达及核因子κB(NFκB)活 化的影响。方法:以1.0μmol/LDNR单用或联合应用25μmol/L去铁胺(DFO)作用于人红白血病细胞株K56224h 后,应用RT -PCR法、流式细胞仪分别检测对照组、DNR组和DNR+DFO组K562细胞MDR1mRNA和P糖蛋白 (Pgp)的表达情况,同时采用凝胶滞留试验检测NFκB的转录活性水平。结果:与对照组相比,DNR可同时诱导MDR1 mRNA、Pgp表达上调和NFκB活化增强(P<0.05);DFO联合DNR可显著抑制DNR诱导的MDR1mRNA、Pgp表达及 NFκB活化(P<0.05)。结论:铁剥夺可减少DNR诱导的MDR1、Pgp表达,其机制可能与抑制NFκB活化有关。     

siRNA诱发K562/Adr细胞凋亡的机制研究

目的研究siRNA引起K562/Adr细胞凋亡的机制。方法siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染K562/Adr细胞,透射电镜观察K562/Adr细胞超微结构变化;W estern b lot检测凋亡相关蛋白Bc l-2的改变。结果透射电镜下,pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组细胞胞浆浓缩、线粒体出现肿胀空泡样变、胞核内染色质浓集、染色质形成新月体样改变并有凋亡小体形成等典型的凋亡改变;W estern b lot结果表明pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组发生凋亡的K562/Adr细胞中,Bc l-2含量明显减少,与mock相比差异具有显著性意义(P<;0.05)。结论siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ通过抑制Bc l-2表达诱导K562/Adr细胞发生凋亡,逆转其多药耐药的发生,从而为siRNA逆转白血病多药耐药提供坚实的理论依据。     

Thapsigargin逆转K562/A02细胞多药耐药性的实验研究

目的 探讨内质网Ca^2 -ATP酶抑制剂thapsigargin对白血病多药耐药细胞株K562／A02化疗敏感性的影响。方法 用MTT比色法检测K562／A02细胞耐药性、thapsigargin的增殖抑制活性及其对K562／A02细胞化疗敏感性的影响；丫啶橙(AO)／溴化乙锭(EB)染色荧光显微镜观察thapsigargin处理后K562／A02细胞形态改变；流式细胞仪(FCM)检测P-糖蛋白(P-gp)表达；荧光显微镜检测Pgp功能。结果 ①thapsigargin对K562和K562／A02细胞的增殖抑制活性呈剂量和时间依赖性，K562／A02细胞较K562细胞对thapsigargin更敏感，thapsigargin诱导K562／A02细胞呈现典型的凋亡细胞形态学改变。②K562／A02细胞对阿霉素(ADM)、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MXT)均出现不同程度的耐药性；thapsigargin抑制K562／A02细胞P-gP功能而对其表达无影响，thapsigargin能增加K562／A02细胞对ADM、DNR、VCR、VP-16、HHT和MXT的化疗敏感性。结论 Thapsigargin能诱导白血病多药耐药细胞株K562／A02细胞凋亡并能部分逆转K562／A02的多药耐药性；thapsigargin的多药耐药逆转功能可能与其凋亡诱导作用和抑制PgP功能有关。     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562的凋亡作用及机制

目的 探讨硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562(K562R)的诱导凋亡作用及机制.方法 采用浓度梯增法建立耐伊马替尼K562细胞系.应用CCK-8法检测不同浓度硼替佐米分别作用K562和K562R细胞24 h、48 h后,对细胞的增殖抑制的效果.使用流式细胞术方法分别检测硼替佐米单独或联合伊马替尼作用于K562R细胞48 h后的细胞凋亡.应用Western blotting检测不同浓度硼替佐米作用K562R细胞48 h后,Mcl-1、Bcl-2、Bcr/Abl蛋白表达的异同.结果 成功将对伊马替尼敏感的K562细胞诱导为K562R,耐药倍数为31.8;硼替佐米对K562及K562R细胞的增殖抑制呈浓度、时间依赖(P均<0.05);随着硼替佐米浓度增加,对K562R细胞的诱导凋亡作用增强,且硼替佐米与伊马替尼联合具有协同作用(P<0.05);硼替佐米可抑制K562R细胞Mcl-1,Bcr/Abl蛋白的表达,Bcl-2无变化.结论 硼替佐米具有对K562R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与下调K562R细胞Bcr/Abl和MCL-1的表达以及促进MCL-1发生切割有关.     

三氧化二砷及干扰素联用对K562及K562/ADM耐药细胞系的作用

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对K562及其耐药细胞K562／ADM细胞株几种耐药机制的作用，以及干扰素(IFNα-2b)与之联用的效应。方法 采用免疫细胞化学染色及TUNEL原位末端标记检测不同浓度As2O3作用不同时间或与IFNα-2b联用，对K562及K562／ADM细胞相关耐药基因蛋白(P-gp、GST-x、Bcl-2)表达的影响及凋亡诱导作用。结果 K562、K562／ADM细胞表面P-gp蛋白表达无明显改变；As2O3(5，10，20μmol／mL)作用72h可降低K562、K562／ADM细胞GST-π的表达，与对照组比较P＜0．05；As2O3抑制K562、K562／ADM细胞Bcl-2蛋白的表达，诱导细胞凋亡，并有计量时间效应；IFNα-2b与As2O3联用可增强对K562细胞的作用，对K562／ADM细胞未见明显增强效应。结论 As2O3具有抑制K562、K562／ADM细胞GST-π、Bcl-2蛋白的表达及诱导细胞凋亡作用；对P-gp蛋白表达无明显影响；IFNα-2b可增强其对K562细胞的这种作用。     

微波对白血病耐药细胞株K562/MDR的影响

目的 研究微波对白血病耐药细胞株K562／MDR耐药性的影响。方法 使用流式细胞仪测量K562／MDR细胞内罗丹明（Rh123)含量及多药耐药基因产物P－糖蛋白（P－gp)的表达，使用DPH标记的荧光分光光度计法测量K562／MDR细胞膜流动性。结果 微波处理后，K562／MDR细胞内罗丹明含量增加，P－gp糖蛋白表达下降，细胞膜流动性增加。结论 微波能对白血病耐药细胞株K562／MDR的耐药性起一定的逆转作用。     

辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF-κB通路的分子变化

目的:探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NF-κB信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀是否依赖NF-κB信号通路参与K562细胞凋亡发生.方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞,接种于18只BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,构建移植瘤模型.随机分为3组,每组6只.对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml,两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml(0.05 mg)和0.4 ml(0.08 mg).均隔日注射,连续6次.采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化,RT-PCR检测K562细胞中NF-κB信号通路IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡,且高剂量组凋亡率高于低剂量组(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的表达下调(P＜0.01).结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡,可能与NF-κB通路基因的表达下调有关.     

核糖体蛋白L6在K562/A02和K562细胞株中的表达差异

目的探讨核糖体蛋白L6（ribosomal proteinL6，RPL6）在急性髓细胞性白血病耐药细胞系K562／A02和敏感细胞系K562中的差异表达。方法分别从K562／A02和K562细胞中提取总RNA，以内参对照RT—PCR检测fuPL6基因表达。结果RPL6在飚62／A02细胞中的表达较K562高（P〈0．001）。结论在耐药细胞系K562／A02高表达RPL6可能与白血病耐药有关。     

小檗胺对慢性粒细胞白血病细胞抑制作用的机制研究

目的：探讨小檗胺诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制。方法：体外培养K562细胞株细胞,经8μg／ml小檗胺处理不同时间后用Westernblot检测细胞内总NF—KB、核内NF—xB和IxBa、plxBa、IKKa、A20蛋白表达。结果：随着小檗胺处理时间的延长,细胞内总NF—xB无变化,但核内的NF—KB表达下降,半定量比值从处理前的59．2％,随着作用时间的延长,逐步下降为31．4％,19．7％,4．1％,0％。同时出现pIkBa、IKKa表达下调,A20表达增高。结论：小檗胺通过NF—KB途径诱导慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞凋亡的机制,可能涉及抑制NF—KB的核转位和转激活,推测其作用与小檗胺降低K562细胞bcr—abl基因的表达有关。