荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的 探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)在结核分枝杆菌检测中的价值.方法 收集患者痰液、灌洗液、胸水和尿液等标本,分别作涂片检测(萋纳染色和荧光染色)和FQ-PCR检测,比较两者的阳性率.结果 169例标本中,萋纳染色阳性共7例(4.1%),38例疑似标本中荧光染色阳性共15例,FQ-PCR检测结核分枝杆菌 DNA阳性共17例(10.1%),FQ-PCR与荧光染色符合率为88.2%.结论 涂片检查结核分枝杆菌阳性率较低,FQ-PCR法检测结核分枝杆菌 DNA阳性率高于涂片法,可列入结核分枝杆菌实验诊断的常规项目.     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)在结核分枝杆菌检测中的价值。方法收集患者痰液、灌洗液、胸水和尿液等标本,分别作涂片检测(萋纳染色和荧光染色)和FQ-PCR检测,比较两者的阳性率。结果169例标本中,萋纳染色阳性共7例(4.1%),38例疑似标本中荧光染色阳性共15例,FQ-PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性共17例(10.1%),FQ-PCR与荧光染色符合率为88.2%。结论涂片检查结核分枝杆菌阳性率较低,FQ-PCR法检测结核分枝杆菌DNA阳性率高于涂片法,可列入结核分枝杆菌实验诊断的常规项目。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌快速诊断中的研究

目的 在痰液标本中,探讨荧光定量PCR技术快速检测结核分枝杆菌应用的诊断价值。方法 选取210例初诊的疑似结核病患者的痰液标本,分别进行痰涂片、MGIT960液体培养以及荧光定量PCR的检测,其中103例标本还进行了Xpert MTB/RIF检测,通过比较来分析荧光定量PCR在检测结核分枝杆菌方面的敏感度和特异性。结果 荧光定量PCR方法从痰液中检出结核分枝杆菌的阳性率高达28%,显著高于痰涂片15.2%的检出率,并且与结核培养的30.9%检出率相接近。以MGIT960液体培养为金标准,荧光定量PCR方法检测痰液标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为67.7%、 89.7%,阳性预测值和阴性预测值分别为74.6%和86.1%,两者之间差异没有统计学意义。将荧光定量PCR方法与Xpert MTB/RIF诊断方法相比较,分析发现荧光定量PCR方法的敏感度和特异度分别为85.9%、94.9%,阳性预测值和阴性预测值分别为96.5%和80.4%,两者之间差异没有统计学意义。结论 荧光定量PCR方法在检测结核分枝杆菌时具有较好的敏感度和特异度,效果优于传统的痰涂片方法,并且与Xpert MTB/RIF方法具有较好的一致性。荧光定量PCR检测成本较低,且结果准确,在快速检测结核菌方面具有比较好的应用前景。     

结核病实验室快速诊断方法的研究

目的:应用BACTEC TB 960快速培养法、ELISA、荧光定量PCR法检测痰标本中结核分枝杆菌,评价三种方法在结核病实验室快速诊断方法中的作用和地位。方法:对735例临床确诊的结核病患者和100例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用荧光定量PCR法和BACTEC TB 960快速培养法检测,并分离患者外周血血清检测结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果:BACTEC TB 960快速培养法检测结核杆菌阳性率为30%,特异性为100%;血清结核抗体检测阳性率为55%特异性为75%;荧光定量PCR检测阳性率为48.6%,特异性为100%。结论:荧光定量PCR是一种快速、防污染、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值

目的:评价荧光定量PCR技术在痰结核分枝杆菌DNA检测中的应用价值,为临床检测提供依据。方法:对2011年7月-2013年8月在我院住院治疗的78例结核病患者,采取荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养三种方法对患者的同一份痰标本进行检测,比较分析检测差异。结果:荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌的效果明显优于抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养检测,荧光定量PCR检测的阳性率最高,为73.1%。结论:应用荧光定量PCR技术检测痰结核分枝杆菌DNA操作简单、诊断快捷、灵敏度较高,可作为结核病的常规诊断方法,值得在临床推广应用。     

荧光定量PCR检测结核分枝杆菌

目的比较荧光定量PCR与抗酸染色、结核抗体检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,评价荧光定量PCR检测临床标本中结核杆菌的应用价值。方法对48例临床确诊的结核病患者和21例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测,并分离患者外周血血清检测结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为22.9%,特异性为100%;血清结核抗体检测阳性率为77.1%特异性为85.7%;荧光定量PCR检测阳性率为52.1%,特异性为100%。结论荧光定量PCR是一种快速、防污染、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测效果的比较分析

目的比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果.方法 80份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较.结果 RT-PCR法、菌培养法、染色法的检出率分别为93.75%、71.25%、56.25%.RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法,菌培养法检出率高于染色法.结论 荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便快速、敏感、特异的检测,值得推广应用.     

斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用

目的：探讨利用斑点金免疫渗滤试验（DIFGA）检测结核分枝杆菌抗体对肺结核临床诊断的应用价值。方法：应用斑点金免疫渗滤法检测了正常人和各类肺部疾病患者共313例血清中结核分枝杆菌抗体，并与痰液涂片法、结核菌培养法和PCR法进行方法学比较。结果：结核分枝杆菌抗体检测肺结核患者阳性率为80．77％．非结核性肺病患者阳性率为7．64％，正常人阳性率为3．08％。结论：斑点金免疫渗滤法检测结核分枝杆菌抗体对肺结核的诊断敏感性高，特异性好，对肺结核诊断有较高的应用价值，并且操作简便、快速，与涂片法、培养法和PCR相比，有明显优势。     

微阵列芯片技术在耐多药结核病临床诊断中的应用研究

目的 探讨微阵列芯片技术在耐多药结核病（multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB）临床诊断中的应用。方法 收集2020年6月至2021年5月经滨州市中心医院确诊的245例住院肺结核患者的标本（痰液标本125例和痰培养分离菌株120例）。痰液标本同时采用DNA微阵列芯片技术和传统培养法检测其结核杆菌阳性率。痰液标本和分离菌株均采用DNA微阵列芯片技术进行肺结核耐多药检测和分枝杆菌菌种鉴定。结果 125例痰液标本经DNA微阵列芯片技术和痰培养法检测,阳性率分别为58.4%（73/125）和24.8%（31/125）,两种方法比较差异有统计学意义（2=14.520,P<0.001）。采用DNA微阵列芯片技术检测125例痰液标本和120例分离菌株,共检出结核分枝杆菌复合群192例,非结核分枝杆菌7例。结核分枝杆菌复合群192例检出耐药者41例,其中耐异烟肼15例,耐利福平19例,同时耐两种药物7例。非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌4例,堪萨斯分枝杆菌2例,鸟分枝杆菌1例。结论 DNA微阵列芯片技术检测周期短,能同时进行结核分枝杆菌耐多药检测和菌种鉴定,对MDR-TB的早期诊断和治疗有较大的临床应用价值。     

外周血白细胞层结核DNA检测在肺结核诊断中的应用

目的 :评估外周血白细胞层结核DNA定性检测在肺结核诊断中的应用价值 ,寻找肺结核新的诊断手段。方法 :根据肺结核不同的临床表现 ,将 1 4 4例肺结核患者分为Ⅱ型肺结核痰结核分枝杆菌阳性组和阴性组及Ⅲ型肺结核痰结核分枝杆菌阳性组和阴性组。分别取静脉血 5ml进行白细胞层结核DNA定性检测 ,利用健康人静脉血作对照以对本方法进行质量控制。结果 :4 7例血行播散型肺结核组外周血白细胞层结核DNA总阳性率为 6 5 .9% ;其中 1 9例痰结核分枝杆菌阳性的患者结核DNA阳性 1 3例 ,阳性率为 6 8% ,2 8痰结核分枝杆菌阴性患者结核DNA阳性 1 8例 ,阳性率为 6 4%。 97例继发性肺结核组外周血白细胞层结核DNA阳性 6 4例 ,阳性率为 6 6 % ;其中 4 3例继发性肺结核痰结核分枝杆菌阳性组结核DNA阳性 2 8例 ,阳性率为 6 5 % ,5 4例继发性肺结核痰结核分枝杆菌阴性患者的结核DNA阳性 36例 ,阳性率为 6 7%。总之 ,肺结核组外周血白细胞层结核DNA总的阳性率为6 6 % ;痰结核分枝杆菌阳性组的阳性率为 6 6 % ;痰结核分枝杆菌阴性组的阳性率为 6 5 .8%。上述各组之间比较无统计学差异 ,P >0 .0 5。健康人组均为阴性。结论 :肺结核患者外周血白细胞层结核DNA定性检测阳性率为 6 6 % ,不受痰结核分枝杆菌检出率的影响。外周血     

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

目的：评估荧光PCR熔解曲线法（熔解曲线法）检测肺结核患者涂阳痰样本结核分枝杆菌（MTB）对一线抗结核药物耐药性价值及耐药特征分析。方法：收集涂阳且培养阳性肺结核患者痰样本和相应MTB菌株各142例,采用熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物链霉素（SM）、异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）耐药情况,同时采用液体药敏法对相应MTB菌株耐药性检测,对两种检测结果行方法学比较。结果：以液体药敏法为标准,熔解曲线法检测痰样本MTB对4种抗结核药物耐药性结果差异无统计学意义（P>0.05）,熔解曲线法检测SM、INH、RFP、EMB耐药性的敏感度分别为：78.57% (11/14),70.00% (14/20),100.00% (12/12),71.43% (5/7);特异度分别为：92.97%(119/128),96.72%(118/122),97.69%(127/130),100%(135/135);两者符合率分别为：91.55%(130/142),92.96%(132/142),97.89%(139/142),98.59%(140/142);Kappa值分别为：0.601,0.696,0.877,0.826。结论：与传统液体药敏检测相比,熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物SM、INH、RFP、EMB的耐药性效能一致,特异度和符合率均较高。该法对结核患者涂阳痰样本MTB耐药性检测有较好临床参考价值。     

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法，探讨荧光PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针，并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本，应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。结果荧光定量PCR、抗酸染色法检测结核分枝杆菌的特异性分别为100％、30％。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法，具有重要的应用价值。     

结核杆菌的细菌学、分子生物学和免疫学检测方法评价

目的比较涂片法、荧光定量PCR方法和结核抗体检测法对结核病的诊断价值。方法选取2006年7月~2010年8月期间临床确诊或怀疑结核的检样326例,进行涂片抗酸染色、荧光定量PCR检测和采集血样进行结核抗体检查。结果 326例检样中,检出TB-DNA阳性107例,阳性率32.82%。其中脓液、支气管灌洗液和痰液最高,分别为48.84%（86例）、31.71%（82例）、30.39%（102例）。抗酸染色标本痰液阳性率为9.80%,脓液25.58%,支气管灌洗液15.85%。结核抗体阳性率52.45%。抗酸染色法与荧光PCR法的符合率81.60%,而结核抗体检测法与抗酸染色法的符合率61.97%,与荧光PCR检测法的符合率为80.37%。结论三种方法中,以结核抗体法阳性率最高,荧光PCR法次之,抗酸染色法阳性率最低。三种方法联合运用,可弥补单独采用1种方法阳性率低的缺点,几种方法之间可相互佐证,从而使准确性得以提高。     

萋-尼氏抗酸染色法和金胺O荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中的对比

目的:比较萋-尼氏抗酸染色法（简称Z-N）和金胺O荧光染色法（简称荧光染色）在痰涂片镜检中对结核分枝杆菌的检测效果差异。方法:纳入580份痰标本,挑取相同部位制成两份涂片,分别使用Z-N和荧光染色进行染色镜检,比较两种方法的阳性检出率、阳性分级标准及读片时间上的差异。将涂片后余下的痰标本采用全自动分枝杆菌检测/药敏系统做液体培养。结果:Z-N法阳性检出率为10.8%,荧光染色法为15.3%,两种方法比较差异有统计学意义（P＜0.05）。对两种方法每一级别的结果进行?字2检验,结果表明两种染色方法在各个分级没有统计学差异（P＞0.05）。荧光染色法的读片时间要明显短于Z-N。结论:荧光染色阳性检出率略高于Z-N,证明荧光染色法是一种快速、灵敏的检测方法,对肺结核的临床诊断具有重要意义。     

结核杆菌痰检方法的临床应用比较

目的：比较结核杆菌抗酸染色、金胺O荧光染色（以下简称荧光染色）及结核杆菌分离培养（以下简称结核培养）3种检测方法的阳性检出率,探讨最适合基层医疗机构结核杆菌筛查的检测模式。方法选取确诊为肺结核的患者536例,期间共计痰检人次为1531次,按医学影像学和临床症状分为3个组,每位肺结核患者每痰检1次则记为1例,其中处于进展期895例,好转期357例,稳定期279例。对处于进展期、好转期和稳定期的患者的痰检标本分别采用抗酸染色、金胺O荧光染色及结核杆菌分离培养3种方法同时检测即时、夜间和晨痰3份标本。对检测结果进行统计学分析。结果（1）肺结核进展期895例,其中抗酸染色阳性病例为266例（29.72%）,金胺O荧光染色阳性病例377例（42.12%）,结核杆菌分离培养阳性病例401例（44.80%）。结核杆菌分离培养阳性检出率最高,荧光染色次之,抗酸染色最低;抗酸染色与另2种检测方法之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）;另2种检测方法之间比较差异无统计学意义。（2）肺结核好转期357例,其中抗酸染色阳性病例为7例（1.96%）,金胺O荧光染色阳性病例23例（6.44%）,结核杆菌分离培养阳性病例19例（5.32%）。后2种检测方法之间比较差异无统计学意义;抗酸染色与后2种检测方法之间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）稳定期279例,其中抗酸染色阳性病例为5例（1.79%）,金胺O荧光染色阳性病例8例（2.86%）,结核杆菌分离培养阳性病例7例（2.51%）。3种方法之间比较差异均无统计学意义。结论抗酸染色检测迅速,实验操作及设备要求简单,适合基层医疗机构大规模结核病初次筛查及稳定期患者的痰检;金胺O荧光染色检测迅速,操作简单,实验设备要求相对较高,配合抗酸染色有助于提高结核杆菌检出率,适用于肺结核治疗过程中痰菌检测;结核杆菌分离培养在3种方法中阳性检出率最高,但是检测时间相对较长,不利于结核杆菌的快速检出,可用于检测抗酸染色和金胺O荧光染色不能确定的可疑标本。     

比较分析痰涂片及荧光定量PCR在诊断肺结核中的作用

目的探讨建立更快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法。方法采用痰涂片抗酸染色法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检。结果荧光定量PCR技术的阳性检出率是63.7%（571/897）,明显高于抗酸染色法的43.4%（389/897）。2种方法检测对照组的结果均为阴性,特异度为100%（103/103）。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,具有重要的应用价值。     

套式PCR在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值

目的采用套式PCR（二次扩增）替代传统PCR（一次扩增）扩增痰中结核分枝杆菌embB基因。探讨其在检测结核分枝杆菌embB基因突变中的应用价值。方法选取本院已确诊的活动性肺结核住院病人68例和非结核肺部感染病人16例，嘱其留取晨痰，分别进行套式PCR扩增和传统PCR扩增，再行产物分析。结果68例活动性肺结核病人传统PCR扩增embB基因阳性结果为29例，阳性率为42．6％。套式PCR扩增embB基因阳性结果为47例。阳性率为69．1％，两者比较差异有显著性（X^2=9．66，P〈0．05）；16例非结核病人传统PCR和套式PCR和检测结果均为阴性，两者特异度均为100％。结论检测结核分枝杆菌embB基因突变，套式PCR灵敏度高于传统PCR．两者特异度相同，套式PCR能快速、敏感、特异地扩增结核分枝杆菌embB基因片段。     

荧光定量PCR检测石蜡组织中结核杆菌的临床应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测石蜡包埋组织结核分枝杆菌DNA（TB—DNA）在结核病诊断中的应用价值。方法33例石蜡包埋组织标本采用FQ—PCR技术检测TB—DNA,同时进行组织病理学检查,分别计算FQ—PCR和病理学检查的灵敏度和准确度。结果29例临床诊断为结核病的组织标本中,FQ—PCR检测阳性26例,病理学拟诊为结核阳性20例,4例临床诊断非结核病的标本中,FQ—PCR检测和病理学检查都为阴性,两者的灵敏度和准确度分别为89．66％、90．91％和68．97％、72．73％。结论FQ—PCR技术检测石蜡包埋组织的TB—DNA用于结核病的诊断具有较高的灵敏度和准确度,与病理学检查相结合可以大大提高结核病的检出率。     

PCR检测肺结核病人外周血中结核分枝杆菌

为了解ＰＣＲ检测外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ对肺结核诊断的价值，采用ＰＣＲ检测了１９０例可疑肺结核病人外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并用涂片镜检和培养法检测了这些病人痰中结核分枝杆菌。结果肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率（４４％）明显低于培养法（８０．０％），与涂片法相当（４６．８％）；非肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率为１６．２％（５／３）。ＰＣＲ检测外周血结核分枝杆菌ＤＮＡ诊断肺结核的应用价值有限，对急性