肝祖细胞移植对四氯化碳诱导急性肝衰竭小鼠模型肝损伤的修复作用

目的:观察肝祖细胞(HPCs)移植后不同浓度四氯化碳(CCl₄)诱导的急性肝衰竭小鼠模型肝脏修复情况,评价HPCs对肝损伤的修复能力,为评估HPCs移植疗效建立理想的肝衰竭模型。方法:96只ICR小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组(0.1% CCl₄组、0.5% CCl₄组、2.0% CCl₄组、10.0% CCl₄组)和实验组(0.1% CCl₄+HPCs组、0.5% CCl₄+HPCs组、2.0% CCl₄+HPCs组和10.0% CCl₄+HPCs组)。空白对照组小鼠灌胃给予生理盐水,阴性对照组和实验组小鼠灌胃给予不同剂量CCl₄。CCl₄造模后1 d,将实验组和阴性对照组小鼠常规麻醉后切开腹腔,实验组小鼠经脾脏注射HPCs,阴性对照组小鼠注射等剂量无菌生理盐水。动态观察小鼠生命体征,监测其存活率;采血检测小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性;取肝脏计算肝脏指数;HE染色观察各组小鼠肝脏组织病理学变化;Hoechst33342标记外源性HPCs,激光共聚焦显微镜检测移植HPCs在肝脏中的分布情况及肝脏标志蛋白细胞角蛋白18(CK18)和白蛋白(ALB)的表达。结果:与空白对照组比较,0.1%和0.5% CCl₄组小鼠存活率、肝脏指数、AST和ALT活性无明显变化(P>0.05)。病理学检测,肝细胞有自我修复作用,HPCs移植治疗的效果不明显。与2.0 %CCl₄组比较,2.0%CCl₄+HPCs组小鼠AST和ALT活性及肝脏指数降低(P<0.01),存活率增加(P<0.01);病理学检测可见肝细胞再生和大量外源性肝细胞,CK18和ALB表达与内源性肝细胞相当,HPCs移植治疗有效。10.0%CCl₄组和10.0% CCl₄+HPCs组小鼠2 d内全部死亡,无法评估HPCs的治疗效果。结论:HPCs移植可提高急性肝衰竭模型小鼠存活率,改善AST和ALT活性,对肝损伤具有较强的修复能力;且2.0%CCl₄诱导的ICR小鼠急性肝衰竭模型能有效反映HPCs移植治疗的效果。     

血管内皮生长因子在四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中的表达

目的观察四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。方法采用1 g.L-1 CCl4在小鼠腹部皮下注射建立急性肝损伤模型;分别在诱导后3、6、12、24、30、36、42、48、54 h,对肝组织石蜡切片采用苏木素-伊红染色法观察肝脏病理变化情况,采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性变化,采用Western blot法检测VEGF蛋白表达。结果与阴性对照组相比,CCl4诱导后小鼠血清ALT、AST在不同时间点均显著升高(P<0.05),在36 h达到高峰,随后逐渐恢复到接近正常水平。小鼠肝脏组织结构在不同时间点均有不同程度受损,在36 h时组织受损最为严重。模型组小鼠VEGF蛋白表达量显著增加,24 h时达到高峰,随后逐渐降低。结论 CCl4诱导小鼠急性肝损伤过程中VEGF蛋白表达变化明显,VEGF在CCl4诱导的小鼠急性肝损伤过程中可能起重要作用。     

内质网应激介导的肝细胞凋亡在小鼠急性肝衰竭中的作用

目的 研究在D-氨基半乳糖(D-Galn)/脂多糖(LPS)联合腹腔注射诱导小鼠急性肝衰竭模型中内质网应激介导肝细胞凋亡的作用,从而为急性肝衰竭的治疗提供思路。方法 以雄性巴比塞(BALB/c)小鼠为研究对象,腹腔注射D-GalN 800 mg/kg联合LPS 10μg/kg建立小鼠急性肝衰竭模型。动物实验分组：对照组(仅给予相应量的磷酸盐缓冲液)、急性肝衰竭模型组和4-丁酸苯酯(4-PBA)干预组(建模前6 h尾静脉注射)。同时将急性肝衰竭模型组按照给药时间进一步分为1 h、5 h、7 h三个亚组,蛋白质印迹法(Western blot)方法检测各亚组与对照组间内质网应激蛋白标志物78 kDa糖调节蛋白(GRP78)、内质网应激诱导的凋亡蛋白转录因子C/ERP的同源蛋白(CHOP),促凋亡因子Caspase-12和Caspase-3蛋白表达情况。检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平评估肝脏功能,观察肝组织病理变化评价肝损伤程度。结果 Westernblot结果显示,与对照组比较,内质网应激蛋白标志物GRP78、内质网应激诱导的凋亡蛋白转录因子C/E...     

四氯化碳诱导犬急性肝功能衰竭模型的建立

目的 构建四氯化碳诱导犬急性肝功能衰竭模型,探讨为人工肝支持系统血液净化疗法提供实验动物的可行性.方法实验犬6只,随机分为A、B两组,分别按 1.0和0.5 mL/kg剂量腹腔注射四氯化碳,12 h后再次给药,二次给药剂量是首次给药的1/2.注射后24 h肝穿刺,取0.1 g肝组织,常规固定切片,HE 染色,观察肝的病理学改变.注射后0、6、12、24 h抽取外周静脉血,检测ALT、AST、Tbil、白蛋白水平.结果 A组与B组实验犬24 h内均存活.ALT、AST、Tbil水平随时间的延长逐渐增加,在第24小时出现高峰.B组ALT、AST和Tbil在第12 小时开始大幅增加,而A组在第24小时才大幅增加.白蛋白水平变化不明显.HE 染色示A组与B组均出现肝细胞大量死亡.结论 四氯化碳可以诱导急性犬肝功能衰竭,该诱导方法有望用于急性肝功能衰竭研究.     

急性肝衰竭最新研究进展

本次会议日本方大会主席藤原研司教授作了急性肝衰竭最新研究进展的专题报告。     

自然杀伤细胞在细菌性肺炎中的作用

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是机体固有免疫的主要承担者、适应性免疫的核心调节细胞,具有迅速免疫防御作用,又可分泌大量细胞因子调控获得性免疫,它无需预先致敏就具有杀伤作用,构成了抗击病原微生物的第一道防线,是固有免疫和获得性免疫之间的桥梁细胞,在机体抗感染、抗肿瘤和清除异己细胞过程中发挥重要作用,目前国内外研究肺部感染与NK细胞在机体免疫中的功能及发生机制之间的关系备受关注,并取得新的研究进展.本文就其在细菌性肺炎的作用做相关综述.     

急性肝衰竭动物模型的研究进展

急性肝衰竭是一种伴随多种临床症状的严重肝损伤疾病,死亡率高,治疗难度大,因此制备急性肝衰竭动物模型以进行治疗研究就显得非常必要。本文综述了适用于不同种类实验动物的急性肝衰竭模型的制备方法。     

巨噬细胞移动抑制因子在急性肝衰竭小鼠肝脏炎症中的作用研究

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)在急性肝衰竭(acute liver failure, ALF)小鼠肝脏炎症中的作用。方法 将18只雄性小鼠随机分为正常组、模型组、MIF拮抗剂ISO-1组。采用D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠ALF模型,检测3组小鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)和总胆红素(total bilirubin, TBIL)水平,HE染色观察肝脏病理形态学改变,Tunel染色观察肝细胞凋亡情况。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠肝脏组织中的MIF、CXC趋化因子受体2(CXC chemokine receptor 2, CXCR2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的水平,免疫荧光观察MIF的表达。结果 模型组小鼠较正常组小鼠肝组织结构破坏程度明显增加,肝细胞凋亡增多,肝功能受损;ISO-1能够减轻肝组织损害,减少肝细胞凋亡。模型组小鼠肝组织中MIF、CXCR2、TNF-α表达水平明显升高,而ISO-1能够显著降低MIF、CXCR2、TNF-α的表达水平,差异均有统计学意义(P < 0.05)。结论 MIF在ALF中的表达显著升高,抑制MIF可以改善肝组织损伤及炎性细胞因子表达,表明MIF在ALF中起重要作用。     

高活性小牛血去蛋白提取物对四氯化碳致急性肝损伤模型小鼠的保护作用

目的：观察小牛血去蛋白提取物（DECB）对四氯化碳（CCl₄）所致肝损伤小鼠的保护作用,初步探讨其作用机制。方法：健康ICR种小鼠40只,随机分组法分为对照组、模型组、DECB组和阳性药物组,每组10只。各组小鼠腹腔灌胃给药,对照组和模型组小鼠给予生理盐水20 mL·kg^-1,DECB组小鼠给予DECB 1 g·kg^-1,阳性药物组小鼠给予护肝片0.63 g·kg^-1,每天1次,连续30d;末次给药2 h后,对照组小鼠腹腔注射调和油溶液,其余各组小鼠腹腔注射10% CCl₄调和油溶液（10 mL·kg^-1）并禁食,建立CCl₄致急性肝损伤模型。测定各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性和肝组织总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）水平;HE染色法观察小鼠肝组织病理表现;TUNEL方法检测小鼠肝细胞凋亡。结果：与模型组比较,DECB组和阳性药物组小鼠血清中ALT和AST活性及肝组织中MDA和GSH水平明显降低（P<0.05）,T-SOD水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,DECB组和阳性药物组小鼠肝组织病理学损伤明显减轻,凋亡细胞数明显减少。结论：DECB对CCl₄诱导急性肝损伤小鼠具有保护作用,可以增强肝脏抗氧化能力,抑制肝细胞凋亡,其机制可能与减少氧自由基和抑制脂质过氧化有关。     

异绿原酸B对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究异绿原酸B(ICAB)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 建立CCl4诱导小鼠急性肝损伤实验模型并评价ICAB的保护作用,测定小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平和肝组织丙二醛(MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.采用HE染色对肝组织细胞形态进行观察;Western印迹法测定ICAB对肝损伤小鼠肝细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化物还原酶1(NQO1)表达的影响.结果 ICAB各给药组(5、10和20 mg/kg)均可不同程度抑制CCl4所致小鼠血清ALT、AST和MDA的升高(P<0.01),ICAB高剂量组(20 mg/kg)明显提高肝细胞中SOD(P<0.01)和GSH-Px活性水平(P<0.05),降低MDA含量.同时,ICAB能改善CCl4造成的肝组织病理学损伤.此外,ICAB可促进Nrf2的表达及Nrf2的核转位,进而促进Nrf2下游靶蛋白HO-1和NQO1的表达.结论 ICAB对CCl4引起的小鼠急性肝损伤具有明显的保肝降酶作用,其作用机制可能与参与调节Nrf2信号通路、缓解氧化应激相关.     

郁金对CCl4所致急性肝损伤小鼠肝脏的免疫调节作用

目的:观察单味郁金(Curcumae)水煎剂对四氯化碳（CCl4）所致急性肝损伤小鼠肝细胞免疫调节作用,为开发利用单味郁金水煎剂防治急慢性肝损伤提供实验依据。方法: ICR小鼠48只,雌雄各半,随机分为空白对照组,模型组,阳性药物组以及郁金高、中、低剂量组,每组8只。阳性药组以甘利欣22.5 mg/kg腹腔注射,每天1次;郁金高、中、低剂量组分别以12 、6、3 g/kg灌胃,每天1次;空白对照组及模型组等体积蒸馏水灌胃,每天1次;连续给药7 d,第7天给药后11 h;再以0.2%CCl4橄榄油溶液(10 mL/kg)腹腔注射（空白对照组除外）,复制急性肝损伤模型。造模后24　h处死,计算肝指数;肝组织HE染色观察病理变化; RT-PCR 法检测IL-1β及TNF-a mRNA表达水平;免疫组织化学法观察IL-18蛋白表达水平。结果：与模型组比较,各给药组肝指数明显下降（P<0.05）。HE染色显示：模型组小鼠肝小叶组织结构紊乱、肝窦充血明显、炎细胞浸润明显、肝组织呈局灶性细胞变性或死亡;而各给药组上述病理变化明显减轻。与模型组比较,郁金给药组小鼠肝组织IL-1β及TNF-α mRNA表达水平及IL-18蛋白表达水平均明显下调（P<0.05）。结论:单味郁金水煎剂可能通过抑制肝组织细胞因子IL-1β、IL-18和TNF-α的表达,调节小鼠肝脏免疫功能而减轻CCl4所致的急性肝损伤。     

Contribution of IL-17 to mouse hepatitis virus strain 3-induced acute liver failure

Recently,the Th17 cells and IL-17 have been shown to play a critical role in the immune-mediated liver injury in hepatitis B,while their functions in acute liver failure have not been well elucidated yet.In this study,we primarily investigated the role of IL-17 in the development of mouse hepatitis virus strain 3(MHV-3)-induced acute liver failure.IL-17 mRNA levels in liver tissue were quantified by using quantitative real-time polymerase chain reaction,and cytokine IL-17 levels in liver tissue and serum were determined by using ELISA in MHV-3-induced murine fulminant hepatitis model.The IL-17 expression levels on CD4 + T and CD8 + T cells were determined by using flow cytometry.The correlation between IL-17 level and liver injury was studied.Th17 associated cytokines were also investigated by intracellular staining.Our results showed that the IL-17 expression was significantly elevated in the liver and serum of BALB/cJ mice infected with MHV-3.Moreover,a time course study showed that the percentage of both IL-17-producing CD4 + T cells and IL-17-producing CD8 + T cells was increased remarkably in the liver starting from 48 h and peaked at 72 h post-infection.There was a close correlation between hepatic or serum IL-17 concentration and the severity of liver injury defined by ALT level,respectively.Th17 associated cytokines,IL-6,IL-21 and IL-22,were also increased significantly at 72 h post-infection.It was concluded that IL-17 may contribute to the pathogenesis of MHV-3-induced acute liver failure.     

急性肝衰竭动物模型的建立

建立一个合适的急性肝衰竭动物模型对进一步的研究非常重要。现在的模型建立方法包括外科手术如肝切除、阻断供肝血流，或由多种药物诱发，也可以将上述两种方式联合使用，尚无一种合适的疾病模型可供所有急性肝衰竭研究之用。因此，不同的研究目的应选择不同的类型，为基础和临床研究而寻找更理想急性肝衰竭模型的工作仍在继续。     

恶性淋巴细胞增殖性疾病外周血自然杀伤细胞计数及活性变化的研究

本文对２０例正常人及３０例恶性淋巴细胞增殖性疾病（ＭＬＰＤ）病人进行ＮＫＣ计数及活性的研究，结果表明：后者的自然杀伤细胞（ＮＫＣ）活性显著低于前者而计数结果却显著高于前者，并发现完全缓解期病人的ＮＫ活性显著高于未缓解及部分缓解者，处于化疗及放疗中的病人的ＮＫ活性显著低于其它病期，对ＭＬＰＤ患者的ＮＫＣ数量及活性进行相关性分析的结果表明二者无相关性（Ｐ＞０．０５），本文就ＮＫＣ计数及活性的变化及意义进行了探讨。     

肝细胞系Chang liver细胞移植对改善急性肝衰竭存活率的作用的研究

目的 通过体外实验及体内急性肝衰竭模型验证其肝细胞功能,为生物人工肝支持系统寻找一种可用的细胞源。方法 通过Western-Blotting和激光共聚焦检测Chang Liver细胞的肝细胞特异性蛋白表达,在体外评估其肝细胞功能。采用RT-PCR从基因水平检测肝细胞功能相关基因的表达情况。采用大鼠90%肝切除术诱导急性肝衰竭模型(ALF)。取生长良好的Chang Liver细胞移植入脾脏内,并于移植后24 h行90%肝切除术诱导急性肝衰竭,每隔24 h采血1次,测定肝功能指标变化情况。结果 在体外,Chang Liver细胞表达肝细胞特异性标志蛋白,如白蛋白(ALB)、葡糖醛酸基转移酶(UGT)及细胞色素酶P450(CYP3A4)。RT-PCR 同样可检测到相关基因在mRNA水平的表达。在体内,实验组接受Chang Liver细胞移植,其长期生存率达到40%,而对照组的生存率为0。移植Chang Liver细胞的大鼠的肝功能在急性肝衰竭后24 h较对照组获得明显的改善,表现为血样标本中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),胆红素和碱性磷酸酶(ALP)等肝功能指标的下降。结论 Chang Liver细胞可像正常肝细胞一样表达功能蛋白,明显改善急性肝衰竭大鼠的肝功能,改善存活率,可以作为生物人工肝支持系统较好的细胞源。     

急性肝功能衰竭小鼠肠屏障功能障碍的实验研究

目的 探讨急性肝功能衰竭时肠屏障功能的变化.方法 腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN,700 mg/kg)/内毒素(LPS,10 μg/kg)建立小鼠急性肝功能衰竭模型,造模6h后测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,取肠内容物及肝组织进行细菌培养,同时检测肠组织二胺氧化酶(DA...     

骨髓间充质干细胞移植对小鼠急性肝功能衰竭的治疗作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对小鼠急性肝功能衰竭(ALF)的治疗作用,为MSCs的临床应用提供理论依据。方法:分离、纯化、扩增、鉴定小鼠MSCs,用CCl4灌胃制备稳定的小鼠ALF模型,将小鼠随机分为实验组和对照组,MSCs经尾静脉移植入实验组小鼠体内,对照组小鼠注入等量生理盐水,观察2组小鼠的活动、对外界反应及存活情况,检测2组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及总胆红素(TBIL),并进行病理学检测,免疫组织化学染色法检测肝脏白蛋白（ALB）表达。结果：流式细胞术检测,分离培养的MSCs 75.27%处于G0-G1期,而且MSCs强表达CD44,表达率为88.71%,基
本不表达造血细胞表面标志物CD34。将MSCs移植入ALF小鼠体内后,实验组小鼠术后7 d生存率为65%,明显高于对照组（25%）（P<0.01）。实验组与对照组小鼠血清ALT、AST及TBIL水平均明显升高,但实验组明显低于对照组,各时间点2组间比较差异有统计学意义（P<0.01）。实验组小鼠肝细胞坏死程度及炎细胞浸润等明显轻于对照组;7 d后实验组小鼠病理组织学改善情况较对照组明显。免疫组织化学检测,7 d后实验组小鼠肝组织中ALB表明显高于对照组。结论:骨髓MSCs移植能明显改善ALF小鼠的肝功能,提高其生存率,提示骨髓MSCs移植对小鼠ALF具有明显的治疗作用。     

急性肝衰竭小鼠Occludin表达与血脑屏障通透性的关系

目的探讨乙酰氨基酚/扑热息痛(acetam inophen/paracetam ol,APAP)导致的急性肝衰竭(acute liverfailure,ALF)小鼠模型中血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性与脑组织紧密连接(tight junction,TJ)蛋白O ccludin表达的关系。方法应用APAP复制ALF小鼠模型,检测脑中伊文思蓝(evans blue,EB)的含量反映BBB通透性,电镜下观察TJ的结构变化。应用W estern blotting方法检测脑组织中O ccludin蛋白的表达。结果小鼠脑组织EB含量于2 h开始升高(2.29±0.42)μg/g,6 h达到峰值(3.61±0.33)μg/g,脑组织中O ccludin蛋白表达2 h开始下降,6 h表达最低,同时电镜下观察到TJ结构出现破坏。结论在APAP所致的ALF动物模型中,BBB通透性增加,表明血管源性脑水肿机制参与脑水肿形成,与其相反,O ccludin表达呈下降趋势,提示脑水肿的发生与O ccludin表达下降引起TJ结构破坏有关。