黄芩苷联合黄芩素诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的：探讨黄芩苷和黄芩素联合应用对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。方法将不同浓度的黄芩苷、黄芩素以及两者联合作用于人乳腺癌（Michigan Cancer Foundation 7,MCF-7）细胞。检测上述化合物对乳腺癌细胞的活力、凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果黄芩苷或黄芩素作用于乳腺癌细胞后,与作用前相比细胞生长抑制率显著升高（P〈0.05）;两者联合应用,与两者单独作用相比抗增殖作用明显增强（P〈0.05）。流式细胞术检测发现两者作用后尤其是两者联用后细胞凋亡显著增加。蛋白印迹分析显示黄芩苷和黄芩素联合作用后Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53的表达增加而Bcl-2表达下降,同时p-38活化亦增加。结论黄芩苷和黄芩素均能诱导乳腺癌细胞的凋亡,两者联合应用后作用明显增强,其机制可能与其促进促凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53等的表达,并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应.方法 通过MTT法检测DADS对CNE1细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用.免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 DADS能抑制CNE1细胞的生长.DADS处理CNE1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变.流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNE1细胞凋亡.免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降.随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强.结论 DADS具有诱导CNE1细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2/Bax下降,促进Caspase-3活化有关.     

IP6诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2和Bax蛋白表达影响

目的研究肌醇六磷酸(IP6)对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用及其对相关蛋白表达的影响。方法将不同浓度IP6作用于体外培养的HepG2细胞,应用Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;IP6作用后的HepG2细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系(F=342.15,q=2.98～28.53,P<0.05);与0 mmol/L IP6组相比,1.0、2.0、3.0 mmol/L IP6组均有效抑制Bcl-2的表达(F=110.21,q=5.88～16.92,P<0.05),上调Bax的表达(F=26.00,q=2.97～8.19,P<0.05)。结论 IP6可能通过调控Bcl-2及Bax蛋白的表达而诱导HepG2细胞的凋亡。     

IP_6诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2和Bax蛋白表达影响

目的研究肌醇六磷酸（IP6）对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用及其对相关蛋白表达的影响。方法将不同浓度IP6作用于体外培养的HepG2细胞,应用Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;IP6作用后的HepG2细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系（F=342.15,q=2.98～28.53,P〈0.05）;与0 mmol/L IP6组相比,1.0、2.0、3.0 mmol/L IP6组均有效抑制Bcl-2的表达（F=110.21,q=5.88～16.92,P〈0.05）,上调Bax的表达（F=26.00,q=2.97～8.19,P〈0.05）。结论 IP6可能通过调控Bcl-2及Bax蛋白的表达而诱导HepG2细胞的凋亡。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应。方法通过MTF法检测DADS对CNEl细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用。免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Westem blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果DADS能抑制CNEl细胞的生长。DADS处理CNEl细胞后,细胞呈凋亡特征性改变。流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNEl细胞凋亡。免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降。随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强。结论DADS具有诱导CNEl细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2／Bax下降,促进Casoase-3活化有关。     

黄连素联合顺铂诱导人肺癌耐药A549/DDP细胞凋亡的实验研究

目的观察黄连素联合顺铂对A549/DDP细胞凋亡的影响并探讨其相关机制。方法以A549/DDP细胞为研究对象,分别加入12μg/m L的顺铂、浓度为20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L的黄连素+12μg/m L的顺铂,设置空白对照孔(PBS孔),分别用药物干预24 h、48 h、72 h,采用MTT法检测细胞增殖活性;各组用药干预48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白表达情况,Real-time PCR法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的m RNA表达水平。结果黄连素联合顺铂能够抑制A549/DDP细胞增殖(P0.01),并具有一定的时间-浓度依赖性。黄连素联合顺铂能够诱导耐药细胞A549/DDP凋亡(P0.01),且呈一定的浓度依赖性。不同浓度的黄连素联合顺铂使促凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax在蛋白和m RNA水平表达上调(P0.05),而抗凋亡基因Bcl-2在蛋白和m RNA水平表达下调(P0.05)。结论黄连素联合顺铂抑制A549/DDP细胞增殖和促凋亡的分子机制可能是上调促凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、Bax的表达,下调抗凋亡基因Bcl-2的表达。     

那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌 Tca8113 细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞增殖及凋亡的影响。方法 将 体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞随机分为空白对照组、奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组。 CCK-8 法检测各组药物对Tca8113 细胞的存活率;Hoechst33342 染色荧光显微镜下观察凋亡形态变化;流 式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting 法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PARP、Cleaved Caspase-9 及 Cleaved Caspase-3 蛋白的表达水平。结果 奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Tca8113 细胞存活率较空白 对照组低（P <0.05）,联合用药组较奥沙利铂组、那可丁组低（P <0.05）。Hoechst33342 染色法结果显示：奥 沙利铂组、那可丁组和联合用药组处理后均使人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞发生凋亡特征性改变。奥沙利铂组、 那可丁组和联合用药组Tca8113 细胞凋亡率较空白对照组高（P <0.05）,联合用药组较奥沙利铂组、那可丁 组高（P <0.05）。奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Bax、PARP、Cleaved Caspase-9 及Cleaved Caspase-3 的蛋白表达较空白对照组高（P <0.05）,而Bcl-2 的蛋白表达较空白对照组低（P <0.05）,联合用药组Bax、 PARP、Cleaved Caspase-9 及Cleaved Caspase-3 的蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组高（P <0.05）,Bcl-2 的 蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组低（P <0.05）。结论 那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113 细 胞的生长具有协同抑制作用,并促其凋亡,其作用机制可能与调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

大蒜素对子宫内膜癌细胞顺铂增敏作用及机制的实验研究

目的研究大蒜素(Allitridi)对体外人子宫内膜癌Ishikawa细胞顺铂化疗敏感性的影响并其机制。方法体外培养并取对数生长期Ishikawa细胞,设空白对照组、大蒜素(25μg/ml)组、顺铂(40μg/ml)组和联合干预[大蒜素(25μg/ml)+顺铂(20μg/ml)]组。MTT比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期并观察细胞凋亡状况,RT-PCR法测定Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达,Western blotting法检测激活型Caspase-3蛋白表达。结果较顺铂组,联合干预组细胞增殖抑制率显著升高,处于细胞周期G0/G1期比例显著升高而S期、G2/M期比例显著降低,细胞凋亡率(AI)显著升高,Bax mRNA表达上调、Bcl-2 mRNA表达下调且Bax/Bcl-2比值显著升高,激活型Caspase-3蛋白表达上调;较空白对照组,大蒜素组处于细胞G0/G1期比例显著提高、G2/M期比例显著降低,Bcl-2 mRNA表达下调、Bax/Bcl-2比值升高,激活型Caspase-3蛋白表达显著上调;上述差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论大蒜素具有提高人子宫内膜癌细胞顺铂化疗敏感性的作用,机制可能与阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

丹参酮ⅡA联合顺铂对Hela细胞的凋亡作用

目的研究丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)联合顺铂(DDP)在体外对宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及凋亡蛋白Bax与Bcl-2表达水平的变化。方法采用苏木素-伊红染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测药物作用后的细胞凋亡情况;Western Blot测定Bax与Bcl-2蛋白在Hela细胞中的表达水平。结果对照组细胞未见凋亡,而两药单用组及联合组均可见凋亡细胞;除对照组外其他各组均可检测到细胞亚二倍体凋亡峰,Tan ⅡA+DDP组凋亡率高于两药单用组凋亡率,差别均有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在各组中均有表达,但表达水平变化不明显(P>0.05);Bax蛋白在对照组中几乎不表达,而在各药物处理组中均有表达,且两药联合组中表达水平高于两药单用组,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论Tan ⅡA与DDP二者联合可以增加Hela细胞凋亡率,其中通过增加Bax蛋白的表达,使Bax/Bcl-2比值升高,可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

放疗联合热疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其与Bcl-2和Bax蛋白表达关系的研究

目的探讨放疗联合热疗诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其与Bcl-2和Bax蛋白表达的关系。方法将体外培养的肝癌HepG2细胞随机分为未治疗对照组、单纯放疗组、单纯热疗组、放疗联合热疗组,采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,免疫组化法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果 4组肝癌HepG2细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中单纯热疗组、单纯放疗组及放疗联合热疗组较未治疗对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);放疗联合热疗组较单纯热疗组和单纯放疗组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。4组肝癌HepG2细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达和Bax/Bcl-2比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中单纯热疗组、单纯放疗组及放疗联合热疗组较未治疗对照组Bcl-2蛋白阳性表达率明显降低,Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bax/Bcl-2明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);放疗联合热疗组较单纯热疗组和单纯放疗组Bcl-2蛋白阳性表达率明显降低,Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bax/Bcl-2明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论放疗联合...     

PPARγ激动剂对肝癌细胞HepG2增殖的影响及其机制探讨

目的 观察过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮体外抑制人肝癌细胞HepG2生长并探讨其作用机制.方法 MTT检测不同浓度罗格列酮(10、30、50、100 μmol/L)对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,免疫细胞化学半定量检测PPARγ、PTEN、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,TUNEL和透射电镜观察HepG2细胞凋亡的形态学改变.结果 PPARγ经其配体罗格列酮激活后,可明显抑制HepG2细胞的生长并呈剂量和时间依赖关系;HepG2细胞周期出现G0/G1期停滞;PTEN、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达水平下降,Caspase-3被激活.TUNEL和透射电镜均可在罗格列酮组观察到凋亡细胞.结论 PPARγ激动剂罗格列酮可抑制肝癌细胞HepG2的生长,其主要作用机制之一是促进细胞凋亡,这可能与调节Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达有关.     

大黄素对化疗药诱导肝癌细胞凋亡的增强作用

目的 观察大黄素对化疗药5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法 不同浓度大黄素单用或与5-Fu联合作用HepG2细胞，以流式细胞仪（FCM）及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡；免疫组织化学（sP）法检测Bax、Bcl-2、凋亡诱导因子（AIF）蛋白表达的改变。结果 2、4μg／m1大黄素分别与5-Fu联用，作用细胞16、24、48h后，时间依赖性地诱导HepG2细胞凋亡，且随大黄素浓度的增加细胞凋亡率有增加的趋势。联用组细胞凋亡率及Bax、Bcl-2、AIF蛋白表达与5-Fu单用组相比差异均有极显著性意义（均P〈0．01）。各组细胞凋亡率与Bax蛋白表达呈正相关（r=0．881，P〈0．05），与Bcl-2蛋白表达呈负相关（r=-0．942，P〈0．01），与AIF蛋白表达呈正相关（r=0．900，P〈0．05）。结论 大黄素可显著增强5-Fu诱导HepG2细胞凋亡的作用，可能与调控Bax、Bcl-2、AIF蛋白表达有关。     

黄芩苷抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的机制研究

目的 用黄芩苷干预人乳腺癌细胞株MCF-7,观察黄芩苷对乳腺癌细胞侵袭、迁移与凋亡的影响及其作用机制.方法 实验分为正常组、模型组、黄芩苷组、miR-126组、LNA组、LNA-126组和LNA-126+黄芩苷组.采用RT-PCR检测miR-126、miR-145、miR-100和let-7c的表达水平,MTT法检测细...     

黄芩苷对抗牛磺酸脱氧胆酸诱导肝细胞损伤的实验研究

[目的]探讨黄芩苷抑制牛磺酸脱氧胆酸诱导肝细胞损伤的作用及其作用机制。[方法]黄芩苷用于培养肝细胞,用牛磺酸脱氧胆酸(TDCA)诱导肝细胞损伤、凋亡。应用MTT法检测细胞活力及流式细胞仪对凋亡细胞进行测量,并进行Caspase-3/7活性分析及免疫印迹试验测定凋亡蛋白Bax。[结果]TDCA孵育可诱导显著肝细胞损伤,细胞存活率下降25.48%,细胞经黄芩苷与TDCA共孵育后,细胞存活率提高到79.6%;黄芩苷抑制TDCA诱导细胞损伤随剂量增加而抑制作用加强。流式细胞仪测定结果:TDCA引起显著肝细胞损伤,凋亡细胞达6.5%,坏死达24.0%,加入黄芩苷的细胞坏死下降至13.58%。凋亡蛋白Bax表达减少,Caspase-3/7活性下降。[结论]黄芩苷能抑制TDCA诱导肝细胞损伤,其机制与减少凋亡蛋白Bax表达、降低Caspase-3/7活性有关。     

卡托普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利对糖尿病(DM)大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照组(NC组)、DM组、卡托普利治疗组(Cap组),每组10只。应用链脲佐菌素(STZ)诱导构建DM大鼠模型,Cap组每日灌胃给予卡托普利50 mg/kg,其余两组给予等容积的0.9%氯化钠溶液。用药12周后,原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测计算心肌细胞凋亡指数(AI),Western blot法检测心肌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,透射电镜观察心肌超微结构变化。给药期间动态观察测定大鼠行为、体质量及血糖水平的改变。结果:与NC组相比,DM组大鼠心肌细胞AI明显升高,Bcl-2蛋白表达减少,Bax、Caspase-3蛋白表达增加;电镜示心肌细胞超微结构呈明显损伤性变化。与DM组相比,Cap组心肌细胞AI明显降低,Bcl-2蛋白表达增加,Bax、Caspase-3蛋白表达减少;超微结构损伤不同程度减轻。结论:卡托普利可能通过上调Bcl-2表达,下调Bax表达,减少Caspase-3依赖性的心肌细胞凋亡,从而起到保护DM大鼠心肌细胞的作用。     

参附注射液对大鼠缺血再灌注小肠细胞Bax、Bcl-2及c-myc蛋白表达的影响

目的　探讨参附注射液对大鼠缺血再灌注小肠细胞Bax、Bcl 2及c myc蛋白表达的影响及它们与肠细胞凋亡的内在联系。方法　健康SD大鼠 36只随机分为 3组 ,空白对照组 (S组 )、缺血再灌注 +生理盐水组 (IR +NS组 )、缺血再灌注 +参附注射液组 (IR +SF组 ) ,每组 12只。采用钳闭肠系膜前动脉制备小肠缺血再灌注模型。免疫组化检测Bax、Bcl 2及c myc蛋白的表达 ,每组选 2 4个视野分别测量光密度值 (OD值 )。TUNEL法检测凋亡的小肠细胞并计算凋亡指数。结果　IR +NS组BaxOD值明显高于S组 (P <0 .0 1) ,IR +SF组BaxOD值明显低于IR +NS组 (P <0 .0 1) ,且低于S组 (P <0 .0 5 )。IR +NS组Bcl 2OD值高于S组 (P <0 .0 5 ) ,且IR +SF组Bcl 2OD值高于S组 (P <0 .0 1) ,但IR +NS组与IR +SF组比较无显著差异。IR +NS组c mycOD值明显高于S组 (P<0 .0 1) ,且明显高于IR +SF组 (P <0 .0 1)。IR +NS组细胞凋亡指数明显高于S组和IR +SF组 (P <0 .0 1) ,而IR +SF组高于S组 (P <0 .0 5 )。结论　参附注射液增加小肠组织Bcl 2蛋白的表达 ,降低Bax及c myc蛋白的表达 ,抑制小肠细胞凋亡 ,保护缺血再灌注小肠。     

丙戊酸钠通过线粒体凋亡通路诱导肝癌细胞凋亡

背景：已经有人发现丙戊酸钠可以抑制成神经细胞瘤以及其他一些肿瘤细胞的细胞增殖。丙戊酸钠对肝癌细胞的的增殖抑制作用在近期也被人发现,但是具体机制还不清楚。本研究是为了证实丙戊酸钠对肝癌细胞的增殖抑制作用以及其具体机制。 方法：用WST法和克隆形成抑制来检测丙戊酸钠对肝癌细胞的增殖抑制作用,hoechest 33258染色来检测细胞核形态的改变,流式细胞仪检测丙戊酸钠诱导的肝癌细胞凋亡率,JNK, p-JNK, Bcl-2, Bax,Caspase-9,Caspase-3等蛋白的表达用Western blot检测,线粒体膜电位用JC-1染色法检测。 结果：丙戊酸钠可以显著抑制肝癌细胞的增殖并且呈现剂量-效应关系,流式细胞仪检测出现了明显的亚二倍体峰和凋亡细胞群,hoechest 33258染色来检测出现了明显的核固缩、边聚和裂解。JC-1染色法显示线粒体膜电位发生了明显的改变,JNK, p-JNK, Bcl-2, Bax,Caspase-9,Caspase-3等蛋白的表达也发生了改变。 结论：丙戊酸钠通过线粒体凋亡通路诱导肝癌细胞凋亡。