T细胞受体免疫组库研究技术概述

T淋巴细胞能够同时对外环境中的病原体及其毒素和内环境中因基因突变产生的肿瘤抗原产生免疫应答.然而环境中的抗原千变万化,它们何以识别自然界中天文数量的抗原?经典的克隆选择理论(clonal selection theory)认为,机体内存在众多的淋巴细胞克隆(1012个以上),每一个克隆携带一种抗原受体,特异性识别一种抗原,从而组成一个多样性极其丰富的抗原受体库(repertoire)[1].抗原受体的多样性由T细胞发育过程中,决定其表面受体(T cell receptor,TCR)结构的基因发生重排(rearrangement)而产生[2].TCR由异源二聚体α/β或γ/δ组成.其中参与特异性免疫应答的T细胞主要是α/β T细胞,占外周T细胞库的90％ ～95％[3].     

T细胞TCR CDR3受体库的高通量测序分析概况

T细胞是机体免疫功能的执行者,T细胞受体(TCR)是T细胞表面识别抗原的分子,也是T细胞产生免疫应答的第一个关键分子。TCR由胚系基因于胸腺中进行V(D)JC基因重排而形成,发育成熟的T细胞迁移至外周组成多样性的T细胞库,其中最能代表T细胞应答特征的分子为TCR高变区CDR3,在外周形成一个多样性的T细胞CDR3受体库(rep-ertoire),对TCR CDR3受体库研究,将为T细胞生理和病理特征的全面解析提供基础。     

TCRγδ—是多余的T细胞亚群,还是免疫系统的特殊成分?

免疫学家在研究TCRαβ介导免疫识别的发育及结构的同时发现了一类新的T细胞亚群,它既不同于CD_8~+溶细胞性TCRαβ细胞,又不同于CD_4~+辅助性TCRαβ细胞,它由二硫键联结γ-和δ-基因产物(γ、δ键)组成。笔者近几年来着重研究TCRαβ细胞的胚系发生、多样性及其分子结构。众所周知,TCRγ基因是Tonegawa 等在寻求TCRαβ二聚体中α基因重排时发现的,γ基因虽可从TCRαβ细胞中分离到,但其编码的蛋白质并不参与TCRαβ细胞的功     

外周T细胞TCR基因的重排(编辑/修正)与选择

T细胞在胸腺发育过程中,TCR通过VDJC基因重排(rearrangement)和选择(细胞水平选择或克隆选择,cellorclonalselection),而组成了外周多样性的T细胞库。现证实外周的T细胞存在着TCR的第二次重排(编辑/修正,editing/revision)与选择(受体水平或分子水平的选择,receptorormolecularselection),即外周的T细胞能重新开放RAG酶等进行VDJC基因的重新编排,修正原来的TCR或产生全新的TCR,再一次选择成为产生耐受或特异应答的新的T细胞,这种机制在外周T细胞库的扩展、自身免疫病、T细胞的外周耐受、肿瘤和感染、免疫缺陷和移植等免疫应答机制中发挥重要作用。     

γδT细胞的生物学意义

<正>T淋巴细胞表面可分别表达两种与CD3分子相关联的T细胞抗原受体(T cell re-ceptor,TCR):由α链和β链(TCRαβ)或γ链和δ链构成的异质二聚体.人们一直对αβT细胞的结构和功能研究予以很大程度上的关注,而对于γδT细胞研究投入要少些.主要原因可能是人们认为TCRγδ细胞是一个外周淋巴细胞库中的数量较小的亚群,不大可能在免疫应答中起主要作用.γδT细胞约占正常人外周血淋巴细胞总数的3%～10%,在其表面表达CD3分子,但绝大多数不表达CD4及CD8分子.然而在长期进     

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。     

CML急变的Ig和TCR基因双重排

免疫球蛋自(Ig)和T细胞受体(TCR)基因重排可分别作为B细胞系和T细胞系的遗传学标记。约25%ALL,甚至AML,尤其是末端转脱氧核苷酸酶(TdT)阳性AML可有Ig和TCR基因双重排。CML急淋变多数源于有Ig基因重排的B细胞克隆,部分起源于有TCR基因重排的T细胞克隆。本文首次报告一例有IgH和TCR(β、δ)基因双重排,慢性期长达7年多的急淋变Ph~+CML。     

T细胞等位基因排斥研究进展

T淋巴细胞通过其表面受体(T cell receptor,TCR)与抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)表面的MHC-肽复合物结合识别外来抗原.TCR由异源二聚体α、β或γ、δ组成.其中参与特异性免疫应答的T细胞是α/βT细胞,占外周T细胞库的90%～95%[1].     

口服伤寒杆菌后小鼠肠道黏膜上皮内淋巴细胞的变化

目的研究经口服伤寒杆菌后,小鼠肠道黏膜上皮内淋巴细胞中T细胞亚群的变化,探讨肠道黏膜免疫应答机制。方法将8～10周龄的BALB/C小鼠100只随机分为对照组和实验组。实验组灌胃伤寒杆菌悬液分两次进行免疫,在第二次灌胃后第3、5、7、9、11d分别处死小鼠。通过免疫组化染色对小鼠肠道上皮内淋巴细胞进行表型分析,并按表型进行计数。对照组给予同体积PBS。结果实验组小鼠上皮内淋巴细胞中CD4+、CD8+、TCRαβ+、TCRγδ+亚群在3、5、7、9、11天呈增高趋势,其中从第5天开始CD8+、TCRγδ+T细胞亚群数量(个/100肠上皮细胞)与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),CD4+、TCRαβ+T细胞数量与对照组相比。差异无统计学意义(P>0.05)。结论肠道黏膜上皮内淋巴细胞中CD8+、TCRγδ+T细胞增殖明显,提示其在抗感染免疫应答中起主导作用。     

Jurkat(E6-1)细胞TCR alpha和beta链重排基因家族取用分析

目的 探讨人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat(E6-1)TCR alpha和beta链的重排基因家族的取用及基因、氨基酸序列与结构,为Jurkat细胞做为单克隆T细胞研究的模型提供基础.方法 采用T细胞TCR的免疫扫描谱型分析技术(im-munoscope spectratyping),监测Jurkat细胞的alpha和beta链各基因家族的取用,ABI测序仪测序出各取用家族基因的序列,并分析其氨基酸组成(DNA tools软件),模拟H{TCR的结构(CPH modle 2.0 Server和Informax 9.0).结果 Jurkat细胞TCR alpha链的基因家族取用为:可变区为TRAV1,连接区为TRAJ3;beta链的基因家族取用为:可变区为TRBV8S1,连接区为TRBJIS2.结论 Jurkat(F6-1)细胞的TCR alpha和beta链基因、氨基酸序列和结构的确定,将为Jurkat做为效应T细胞、TCR重排模型等方面的研究提供基础.     

Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤诊断中的应用

目的 探讨Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤(gastrointestinal lymphomas,GIL)中的诊断价值.方法 选取常规石蜡包埋的GIL病理标本35例(包括成熟B淋巴细胞肿瘤29例,成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤6例),淋巴结反应性增生病变10例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析,并采用原位杂交方法检测EB病毒编码的小RNA(EBER).结果 35例GIL中,共检测出34例克隆性重排.其中29例成熟B细胞淋巴瘤均扩增出Ig克隆性重排,敏感性为100%,且联合应用IgH与IgK引物Ig单克隆性重排的检出率最高;6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中5例扩增出TCR克隆性重排,敏感性为83.3%;10例淋巴结反应性增生病例均未检测到Ig及TCR克隆性重排条带,其检测特异性为100%.29例成熟B细胞淋巴瘤及10例淋巴结反应性增生组织经EBER原位杂交检测均为阴性,6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中2例EBER原位杂交检测阳性,且均为鼻型NK/T细胞淋巴瘤.结论 BIOMED-2标准化的基因重排分析系统检测石蜡包埋组织中Ig基因和TCR基因克隆性重排的敏感性和特异性均很高,对GIL的诊断和鉴别诊断具有重要的临床应用价值,EBER原位杂交检测对基因克隆性重排阴性的淋巴瘤也具有一定的辅助诊断作用.     

裸鼠αβT细胞前体的胸腺外阳性选择

裸鼠有很多T 细胞,但因为无胸腺,故不能产生病原体特异性T 细胞应答;重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠由于不能重排和表达TCR 及Ig 基因而缺乏功能性淋巴细胞;给SCID H-2~d 小鼠静脉注射裸鼠(H-2~b)骨髓细胞,以弥补此二类小鼠上述不同     

克隆性基因重排在淋巴瘤诊断中的应用

大多数淋巴组织增生性病变通过组织形态学和免疫表型可得出肯定诊断,大约有5%～10%的病例表现复杂,即使做大量的免疫标志可能也难以鉴别其良恶性,免疫球蛋白和T细胞受体(TCR)基因克隆性重排可作为重要的辅助指标协助诊断,其基本原理是淋巴瘤(或其他淋巴细胞性恶性肿瘤)起源于单个恶性转化的淋巴细胞,相同的克隆具有相同的基因重排方式.     

正常人T细胞和胸腺细胞中多种新的TCRδRec基因重排

利用巢式或半巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMC)、4例分选CD3~+细胞和7例正常胸腺细胞DNA中TCR δRec区与Jδ1、Dδ3和Ja重排的基因片段,分析正常人外周血T细胞和胸腺细胞中TCR δRec基因重排情况。克隆性PCR产物进一步进行核苷酸序列分析确定其重排位置。结果发现了4种新的TCR δRec重排,包括TCR δRec_(149321)-Jδ1、TCRδRec_(149820)-Jδ1、TCR δRec_(151657)(Nx)-Ja和TCR δRec_(153199)-Jδ1等,其中以TCR δNx的重排最多见,通过利用不同模板DNA的PCR分析发现δRec重排在外周血和胸腺细胞中有所不同。结果显示TCR δNx-Jδ1重排在成熟和不成熟T细胞发生频率均较高,而TCR δNx-Dδ3重排在不成熟T细胞中发生率较高。但所有重排均不表达于mRNA中。本研究结果为TCR δ基因重排的研究补充了一些新的数据。     

适应性免疫在阿尔茨海默病中的作用北大核心CSCD

阿尔茨海默病(AD)是一种不可治愈的神经退行性疾病,是21世纪以来面临的一个巨大挑战。了解免疫系统参与对抗疾病至关重要。现综述对适应性免疫特别是T淋巴细胞在AD发病机制中的研究,初步证实以T淋巴细胞及其亚群、固有免疫细胞为主,通过与Aβ、Tau及HSV、EBV等自身/外源抗原发生免疫反应,未来亟需通过单细胞测序、BCR/TCR组库等高通量分析技术,及更多志愿者的CSF,整体研究AD炎症微环境的免疫应答、鉴定AD特异性抗原。这有助于确定新的靶标和治疗方案。     

皮下脂膜炎性T细胞性淋巴瘤的临床特征及分子生物学特点

目的：对皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤(SPTCL)的临床特征、病理、免疫表型及分子生物学特点进行研究。方法：临床观察及实验室、病理检查研究SPTCL的临床、病理特点，免疫表型通过LCA、CD3、UCIL、L26单抗进行石蜡免疫过氧化物酶染色、用αβTCR、γδTCR抗体进行冷冻切片免疫过氧化物酶的染色，用识别Vδ^1、Vδ^2的抗体进行γδTCR亚型分析，PCR检测SPTCL患者TCR基因重排。结果：7例SPTCL患者均有皮下结节、高热、体重下降，5例出现嗜血细胞综合征，7例SPTCL患者均有电介质、酸碱平衡失调及酶学检查的异常。7例SPTCL患者的病理均在脂肪组织内见大量异型淋巴细胞浸润，均表达LCA、CD3、UCHL，不表达L26。4例SPTCL患者中有3例表达γTCR，1例表达αβTCR，3例γδTCR患者均表达Vδ^2 ，4例有3例出现TCRγ基因重排。结论：SPTCL大多病情严重，肿瘤细胞来源于T细胞系的皮肤淋巴细胞组织相关的Vδ^2 细胞，可以出现TCRγ基因重排。     

用单克隆抗体和基因扩增技术研究淋巴细胞白血病细胞起源

本研究采用系列单克隆抗体免疫酶方法(APAAP法)和体外基因扩增聚合酶链反应(PCR)技术,通过检测白血病细胞表面分化抗原及免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ、δ 基因重排,研究35例淋巴细胞白血病细胞起源。结果表明,20例表达B细胞表面标记,其中B-ALL15例,     

T淋巴细胞免疫功能的研究进展

经典免疫细胞中T淋巴细胞是参与机体细胞免疫反应,并在免疫应答中起重要调节作用的免疫细胞。正常情况下T细胞及其亚群的数目在周围组织中相对稳定,机体正常免疫应答过程依赖于各种免疫细胞之间的恒定,从而形成适度的免疫应答,使之既能清除抗原性异物,又不损伤机体自身组织。近年来,随着对机体免疫功能研究的不断深入,对T细胞的研究越来越全面。本文从T淋巴细胞的发育、抗原识别、T淋巴细胞亚群进行综述。     

BIOMED-2系统引物用于检测T细胞淋巴瘤石蜡样本T细胞受体γ基因重排的研究

目的 了解BIOMED-2系统T细胞受体(TCR)γ引物组合对T细胞淋巴瘤的常规石蜡包埋组织样本中TCR基因重排的检出情况及其实用性.方法 用酚/氯仿法提取55例各种组织类型的T细胞淋巴瘤石蜡包埋组织样本的DNA并通过扩增看家基因β-globin检测其质量,利用BIOMED-2系统TCR-γ引物组合和TCR-γ基因通用型引物(TVG/TJX)对55例进行TCR基因重排检测,比较二者的检出率并进行统计学分析.结果 BIOMED-2系统TCR-γ引物组合和TCRγ基因通用型引物(TVG/TJX)的TCR基因重排检出率分别为76.4%和60.0%,前者高于后者,二者的差异无统计学意义(P>0.05).结论 BIOMED-2系统TCRγ引物组合适用于本组T细胞淋巴瘤石蜡包埋组织样本的TCR基因重排检测.     

CDR3谱型分析在肿瘤研究中的应用进展

肿瘤特异性T细胞通过其表面T细胞受体(Tcell receptor,TCR)识别肿瘤,进而杀伤肿瘤细胞,其所介导的细胞免疫在机体抗肿瘤免疫应答中发挥极其重要的作用.寻找肿瘤特异性T细胞克隆是当前肿瘤研究领域的热点,而应用最广泛、最灵敏地寻找肿瘤特异性T细胞的方法是通过基因扫描(Ge-neScan)对TCR互补决定区3(complementary deter-mining region 3,CDR3)谱型进行分析.