高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＰｈａｒｍａｃｉａＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ—３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０～５０ｍｌ腹水，回收率为８５％－９０％．整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测定，纯度＞９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００（７．８×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ）。该法操作简单、快速，只要有一台核酸／蛋白检测仪，便可进行制备级水平的纯化。     

凝胶色谱法半制备级纯化单克隆抗体

作者采用Ｓｅｐｈａｃｙ１Ｓ－２００凝胶色谱柱，在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰ－ＬＣ）建立了肝癌相关抗原单克隆抗体半制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经４０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用凝胶色谱纯化，一次上样量相当于５～１０ｍｌ腹水，可得纯化ＭｃＡｂ３０～６０ｍｇ，得率为６～５．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为６３％，一次色谱纯化周期２ｈ，整个分离纬化可在３ｈ内完成。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＤＥＡＥ离子交换色     

阴离子交换FPLC制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换柱。在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了ＩｇＧ类单克隆抗体制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经５０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用阴离子交换色谱纯化，一次上样量相当于８０～１００ｍｌ腹水。可得纯化ＭｃＡｂ５００～６００ｍｇ，得率为６～７ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为５７～６７％．一次纯化周期仅需４５ｍｉｎ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＭｃＡｂ纯度为９５％，ＡＢＣ染色法测定ＭｃＡｂ活性为１：２００００（３．１３×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ）．     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０￣５０ｍｌ腹水，回收率为８５％￣９０％。整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，纯度〉９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００     

抗肾综合征出血热病毒单克隆抗体纯化制剂的免疫学活性鉴定

采用多种方法对两株经辛酸－硫酸按沉淀法纯化的抗ＨＦＥＳ病毒ＭｃＡｂ进行了免疫学鉴定．结果表明，纯化后的ＭｃＡｂ的免疫学活性（抗体效价）无明显改变，特别是仍保留了很高的中和活性、血凝抑制活性及对感染乳鼠的保护活性．纯化ＭｃＡｂ制剂置４℃保存，至少一年内抗体效价未见降低     

液相色谱法分离纯化单克隆抗体的进展

本文介绍了近年来国内外液相色谱法(包括常压液相色谱法和高效液相色谱法)在单克隆抗体分离纯化中的应用。由于单克隆抗体分子的特殊性,其分离纯化的方法也多种多样,各种不同分离原理的液相色谱法:离子交换色谱,凝胶过滤色谱,疏水性相互作用色谱,亲和色谱,羟基磷灰石吸附色谱,以及新近发明的亲硫吸附色谱和混合态色谱都在单克隆抗体分离纯化中有着程度不同的应用。这些液相色谱方法可适用于分离纯化腹水或杂交瘤细胞培养上清液中的小鼠、大鼠和人源的不同类型及亚类的单克隆抗体。本文还就各种不同方法的应用范围,及纯化结果的纯度、活性回收率、纯化周期、每批可纯化样品量、纯化成本等方面作了比较和讨论。     

鼠源性IgM类单克隆抗体的纯化方法

本文综述了鼠源性IgM类单克隆抗体(McAb)的纯化方法,并对其进行了比较。(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法具有操作简便,适于大批量生产的特点。(2)免疫亲和层析法纯化的单克隆抗体具有良好的免疫活性,其纯度较高。(3)高效液相色谱法(HPLC)具有纯化条件温和,操作时间短,样品纯度高,且对单克隆抗体活性无不良影响的优点;但其设备昂贵,样品处理量相对较少。在实际应用中,可根据不同用途来选择纯化方法,获得理想的单克隆抗体。     

淋病球菌单克隆抗体的制备和特性的研究

应用杂交瘤技术筛选出２株淋球菌特异性单克隆抗体Ｎｇ４（ＩｇＧ２ａ）和Ｎｇ１８（ＩｇＧ３）有可能用于淋病的实验诊断．２株单抗的腹水效价可达１０７，抗原识别位点为淋球菌外膜蛋白约３５ｋＤ的糖蛋白成分．在免疫荧光实验中，２株单抗可与不同型淋球菌标准株反应，不与有关的细菌和真菌交叉。     

重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备

本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了４株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系ＢⅡ１Ｂ５、ＤⅡ６Ｂ９、ＭⅡ１Ｈ４和ＧＩ３Ｅ７。用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的类分别是ＩｇＭ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ。间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清的效价为１×１０－２～１．２５×１０－４，腹水效价为１×１０－２～１×１０－８。培养上清经ＥＬＩＳＡ鉴定，与ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α等细胞因子均无交叉反应，只与ｒＨｕＥＰＯ特异性结合。     

FPLC纯化单克隆抗体（Fab＇）_2片段

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱，在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了抗肝癌单克隆抗体（ＨＡｂ１８）Ｆ（ａｂ＇）２片段的快速纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ用胃蛋白酶消化１８ｈ后，上阴离子交换色谱柱纯化，用ｐＨ７．５１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ洗脱，即得到纯化的Ｆ（ａｂ＇）２．一次纯化周期仅需２５ｍｉｎ，一次上样量１２０～１６０ｎｇ蛋白，Ｆ（ａｂ＇）２得率为３４％，回收率为５１％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定纯度大于９５％，免疫荧光法测定活性为１：４０００．该法操作简单、快速、实用性强，不需要高档次的色谱仪，只要有一台核酸／蛋白检测仪便可进行纯化，是实验室纯化Ｆ（ａｂ＇）２的理想方法．     

亲和层析法提纯双特异单克隆抗体

本文介绍了用亲和层析法从抗HRP-抗HBsAg双特异单克隆抗体的8B_6腹水中纯化,获得的四个组份蛋白,经过EL1SAg测定证实为抗HRP-抗HBsAs双特异单克隆抗体、抗HRP单抗、抗HBsAg单抗和无反应活性免疫球蛋白.因此,建议可以用亲和层析法简便地提纯出高纯度的双特异单克隆抗体.     

抗层粘蛋白（Laminin）杂交瘤细胞株的建立及临床应用

本文用纯化的层粘蛋白作为免疫原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合，获得５株能稳定分泌高效价抗层粘蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株。并建立了检测血清中层粘蛋白的简便、快速和稳定的酶联免疫吸附试验．用其建立的检测技术，检查了急性肝炎、慢迁肝、慢活肝、肝硬化病人和正常人血清中的层粘蛋白含量。表明除慢迁肝外，各型肝炎及肝硬化病人血清层粘蛋白的浓度明显高于正常人，病人血清中层粘蛋白升高与肝脏纤维化程度呈正相关．本研究为诊断肝纤维化、肝硬化及门脉高压症等疾病提供了一种血清学指标。     

Purification of murine IgM monoclonal antibodies by hydroxylapatite chromatography

Summary A simple method is described for the isolation of murine monoclonal immunoglobulin M using hydroxylapatite chromatography.     

抗人乳腺癌单克隆抗体HD1的特性

HD1是由1株抗人乳腺癌杂交瘤腹水扩增,亲和层析纯化得到的单克隆抗体,分泌抗体(IgG)的蛋白含量:上清为10μg/ml,腹水为1.5mg/ml。用ABC法检测,HD1与3株人乳腺癌细胞系呈阳性反应,而与胃癌、结肠癌等细胞和正常成纤维细胞、淋巴细胞呈阴性反应。组织化学染色显示对部分乳腺癌石蜡切片为阳性,而对多种正常组织为阴性。HD1对3株乳腺癌细胞系的亲和力在1.3×10~(-8)～2.7×10~(-8)mol/L之间。免疫印迹实验表明,HD1可使乳腺癌细胞MCF-7和475-A细胞膜Mr为60000的抗原组分染色,使另一株乳腺癌细胞BCaP-37 Mr为56000和94000的组分着色。对3株乳腺癌细胞有抗体介导的细胞毒效应(18％～27％)。以上的研究有助于对HD1性质及其相对应抗原的了解,为抗乳腺癌单抗的应用提供了可靠的依据     

人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法：人工合成人促甲状腺激素（hTSH）上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白（BSA）构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB／c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果：建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于K型,McAb腹水ELISA效价达1：1．6×10^5,与促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论：本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。     

Purification of murine monoclonal antibodies by affinity chromatography using protein A-Sepharose

Summary A simple method is described for the isolation of murine monoclonal immunoglobulin G subclasses using protein A-Sepharose affinity chromatography.     

全军单克隆抗体的研究进展

作者概述了近10年军队系统单克隆抗体(McAb)技术研究的进展。军队开展McAb的研究是同国内同步进行的。他们曾采用了各种先进方法,制备出包括抗微生物、肿瘤相关抗原及标志物、白细胞分化抗原、血小板、淋巴因子、各种蛋白、激素及酸等80余种McAb,其中多种抗病毒McAb己制成系多列产品。一些研究已从实验阶段进入军事医学和临床医学的实际应用和基础医学研究的探索,抗病毒和抗肿瘤McAb正在进行广泛的临床诊断和治疗研究,並已取得了效果。文中评述了军队开展杂交瘤枝术的组织领导、技术培训、学术交流的特点及其在全国所起的作用,也讨论了McAb技术发展中的有关问题。