高胆固醇血症小鼠肝脏的差异表达蛋白

运用以双向电泳为基础的蛋白质组学研究手段,比较分析高胆固醇血症小鼠与正常小鼠肝脏差异表达蛋白。用高脂饲料复制小鼠高胆固醇血症模型,饲喂14周后高脂组小鼠血浆中总胆固醇为9.5±3.9 mmol/L,肝脏中总胆固醇为35.3±3.7 mg/g,均明显高于对照组(P<0.001)。提取两组小鼠肝脏总蛋白,双向凝胶电泳分离蛋白质,所获得的凝胶图谱经软件分析后确定差异点及其等电点与分子质量,利用质谱技术对差异蛋白进行肽质量指纹谱分析鉴定,再与蛋白质数据库中的小鼠肝脏标准图谱匹配验证。双向凝胶电泳分离蛋白质样品的分辨率好、重复性较高,两组间至少有16个点有稳定的差异表达(2倍以上),鉴定其中4个点个为主要尿蛋白系列、2个点为碳酸酐酶Ⅲ、2个点为谷胱甘肽S-转移酶P2。实验结果提示:主要尿蛋白、碳酸酐酶Ⅲ及谷胱甘肽S-转移酶等受雄激素调控的蛋白质表达下调,可能与饮食引起的高胆固醇血症相关。     

脑瘫差异表达基因生物信息学分析及脑瘫核心驱动基因筛选

目的 对文献报道的脑瘫差异表达基因进行生物信息学分析,并筛选脑瘫核心驱动基因.方法 通过检索Pubmed、中国知网数据库相关文献,获取脑瘫差异表达基因,并进行GO功能富集分析、KEGG信号通路分析和通路串话分析,应用STRING和Cytoscape软件构建蛋白质互作网络(PPI),并筛选排名前10的差异表达基因,即为脑...     

胆固醇诱导血管内皮细胞基因的差异表达

为探讨高胆固醇致动脉粥样硬化的分子机理，利用抑制消减杂交技术克隆胆固醇诱导脐静脉内皮细胞产生的差异表达基因，并对其表达进行初步研究。经顺、反两向消减杂交和巢式聚合酶链反应扩增，获得了差异表达的cDNA片段，克隆化后挑选部分进行测序、同源性比较及应用半定量逆转录－聚合酶链反应分析部分差异基因的表达情况，得到23个差异表达的cDNA片段，其中6个新差异表达cDNA片段被GenBank接受。已知基因中的血小板反应蛋白1和蛋白酶体亚单位基因表达的改变可能与高胆固醇致动脉粥样硬化作用相关。     

慢性日本血吸虫病肝纤维化差异表达基因的生物信息学分析

目的 筛选慢性日本血吸虫病肝纤维化差异表达基因（differentially expressed genes, DEGs）,并对其功能进行分析。方法 从基因表达综合（Gene Expression Omnibus, GEO）数据库下载慢性日本血吸虫病肝纤维化患者测序表达谱数据集,利用R语言进行DEGs筛选,对其生物学功能进行基因本体论（Gene Ontology, GO）和京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）富集分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络,以筛选关键基因。结果 共鉴定出62个DEGs,其中12个下调表达基因、50个上调表达基因。GO富集分析显示,DEGs主要富集在脂肪酸、硫化合物、酰基辅酶A、硫酯代谢等116种生物学过程,线粒体基质、线粒体外膜、细胞器外膜等19种细胞组分及胰岛素样生长因子结合、氧化还原酶活性等7种分子功能。KEGG通路富集分析显示,DEGs与磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（phosphatidylinos...     

基于生物信息学分析鉴定阿尔茨海默病中关键差异表达基因及其潜在治疗靶点

目的 利用生物信息学方法挖掘阿尔茨海默病(AD)的基因表达谱,筛选出与该病发生发展相关的关键基因。方法 从基因表达综合数据库(GEO)下载数据集GSE132903,利用R语言进行分析,鉴定出差异表达基因(DEGs),利用DAVID数据库对差异基因进行GO与KEGG功能富集分析,利用string数据库对差异表达基因进行蛋白互作网络分析,随后利用Cytoscape软件中的插件cytohubba进行关键基因筛选。结果 在AD的基因表达谱中鉴定了319个差异表达基因。其中上调基因118个,下调基因201个,与正常对照组样本相比,AD患者样本中神经活动配体-受体相互作用、GABA能突触、突触囊泡循环、长程增强效应等通路显著改变。基于多种算法得到关键基因分别是：SNAP25、SYP、SYT1、SYT4,其中SYT4在AD中的作用机制尚未有报道。结论 利用生物信息学方法成功构建了在AD中起关键作用的蛋白互作网络,发现了4个与疾病相关的关键基因,进一步证明了突触功能在AD中的重要作用,其中SYT4可能是AD治疗的新靶点。     

乙型肝炎病毒相关肝细胞癌核心差异表达基因生物信息学分析

目的 探索与乙型肝炎病毒（HBV）相关肝细胞癌（HCC）发生发展相关的核心基因,为进一步揭示HBV相关HCC发病机制提供参考。方法 从高通量基因表达数据库（GEO）中下载GSE55092、GSE121248两个数据集,采用R语言筛选HCC组织和癌旁组织间差异表达基因（DEGs）,并绘制可视化火山图。对DEGs基因进行基因本体论（GO）和京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析,构建蛋白质相互作用（PPI）网络,并用Cytoscape 3.9.0开源平台中分子复合物检测（MCODE）和cytoHubba插件筛选核心DEGs。利用UALCAN和Kaplan Meier-plotter数据库中临床样本数据对筛选出的核心DEGs进行差异表达和生存分析验证。结果 从GSE55092数据集和GSE121248数据集中分别筛选出1 148个和686个DEGs,其中下调表达基因分别为703个和477个、上调表达基因分别为445个和209个;两个数据集共筛选出557个共同表达的DEGs,其中下调表达基因384个、上调表达基因173个。GO富集分析显示,DEGs主要参与细胞分裂、细胞增殖、氧化还原、免...     

血管内皮细胞的剪切应力信号转导机制与动脉粥样硬化

剪切应力作用于血管内皮细胞可通过激活膜感受器和细胞内信号转导而调控基因表达,从而影响血管内皮细胞的功能。剪切应力的改变与动脉粥样硬化的发生发展有密切关系。本文就血管内皮细胞的剪切应力信号转导机制及与动脉粥样硬化的关系进行综述。     

高血压大鼠重塑血管差异表达基因的克隆及表达

为从基因水平研究高血压病大鼠血管重塑机制，采用抑制消减杂交性筛选两肾一夹肾血管性高血压大鼠重塑大血管（胸主动脉）差异表达基因。经过两轮消减杂交和巢式聚合酶链反应扩增，获得了富集的差异表达cDNA片段，经Genbank等数据库进行同源比较，获得10余个差异表达的表达序列标签；采用Western blot方法对其中2个已知基因编码蛋白细胞色素C和Bcl-2的表达进行检测。结果发现细胞色素C在高血压大鼠重塑大血管组织中表达增高，而Bcl-2在高血压大鼠重塑大血管组织中表达减少。研究结果提示氧化应激导致细胞凋亡机制尤其是Bcl-2／细胞色素C－半胱天冬酶途径在大血管重塑过程中具有重要作用。     

bcl-2在神经酰胺致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究bcl-2在神经酰胺诱导人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度神经酰胺进行诱导并观察bcl-2的表达及细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法测定bcl-2mRNA和蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果神经酰胺以剂量依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,对照组和5、12.5、25及50μmol/L神经酰胺处理24h后各组细胞凋亡率分别为2.13%±0.12%、13.24%±1.32%、29.67%±2.32%、34.43%±3.36%及38.56%±2.21%,神经酰胺处理组bcl-2mRNA及蛋白的表达较对照组显著降低(P<0.05)。结论神经酰胺在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,bcl-2表达减低,从而引起细胞凋亡。     

姜黄素对脂质运载蛋白2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的研究姜黄素对脂质运载蛋白2(LCN-2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及与p38 MAPK通路的关系。方法以LCN-2不同质量浓度(0,5,10,20μmol/L)及不同时间(0,24,48,72 h)作用HUVEC,CCK-8法测细胞增殖,流式细胞仪测细胞凋亡,ELISA测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及白细胞介素6(IL-6)含量,比色法测乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blot测HUVEC中p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达;分别加入10μmol/L姜黄素和25μmol/L SB203580观察姜黄素的干预作用。结果与对照组比较,LCN-2可显著抑制HUVEC增殖,上调HUVEC内Bax/Bcl-2蛋白比率而促进细胞凋亡,诱导HUVEC分泌MCP-1及IL-6,增加LDH活性(P0.05);与LCN-2组比较,姜黄素及SB203580均可显著减轻LCN-2诱导的HUVEC增殖抑制,下调Bax/Bcl-2蛋白比率而抑制HUVEC凋亡,减少LCN-2诱导的HUVEC分泌MCP-1及IL-6,降低LDH活性(P0.05)。结论姜黄素可通过抑制p38 MAPK通路,减轻LCN-2诱导的HUVEC损伤。     

L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用

目的通过研究L-精氨酸和N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮和超氧阴离子的影响以探讨L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用。方法不同浓度L-精氨酸、N^G-硝基-L精氨酸-甲基酯、葡萄糖和胰岛素加入体外培养的人脐静脉内皮细胞，24h后分别测定细胞培养液中一氧化氮舍酶和超氧化物歧化酶活性及一氧化氮和超氧阴离子浓度。结果25mmol／L葡萄糖使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高，一氧化氮产生增加，超氧化物歧化酶活性下降，超氧阴离子产生增加；L-精氨酸对一氧化氮舍酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶的影响与对照组相比无显著性差异（P〉0．05）。但可以使超氧阴离子产生减少；25mmol／L葡萄糖＋L-广精氨酸使内皮细胞一氧化氮舍酶活性增强，一氧化氮产生增加，L-精氨酸可以改善高糖引起的超氧阴离子升高。不同浓度的胰岛素使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高，一氧化氮产生增加，对超氧化物歧化酶活性和超氧阴离子产生无明显影响；不同浓度胰岛素＋L-精氨酸使内皮细胞一氧化氮合酶活性增强，一氧化氮产生增加，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但可以使超氧阴离子水平降低。100μmol／LN^G-硝基-L-广精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降，一氧化氮产生减少，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但使超氧阴离子产生增加；25mmol／L葡萄糖＋N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降，一氧化氮产生减少，但对高糖引起的超氧化物歧化酶活性下降和超氧阴离子升高无明显影响。10mu胰岛素＋10μmol／L N^G-硝基-L-精氨酸．甲基酯和100mu胰岛素＋100μmol／L N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降，一氧化氮产生减少，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但使超氧阴离子升高。结论L-精氨酸对一氧化氮合酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶无明显影响，但可以使超氧阴离子产生减少；N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降。一氧化氮产生减少，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但使超氧阴离子产生增加。     

差异显示法研究氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞基因差异表达

目的：研究血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因子作用下,差异表达基因的结构与功能。 方法：氧化低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）诱导培养的人脐静脉内皮细胞,用差异显示－多聚酶链式反应（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术,克隆表达水平有明显差异的基因片段,并用Ｎｏｒｔｈｅｎ印迹法证实阳性结果。 结果：发现ＯＸ－ＬＤＬ诱导培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）出现一些上、下调节的基因片段。已知的上调基因包括人的胸腺素（Ｔｈｙｍｏｓｉｎ）β４、细胞间粘附因子（ＩＣＡＭ）－１、ＦＫ５０６结合蛋白、ＥＲｐ７２;下调的基因有细胞色素Ｂ５６１、Ｒｅｓｔｉｎ。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹证实了ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的结果,不同的上、下调节基因表达水平变化在３０％～２００％之间不等。 结论：本研究首次用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的方法证实在体外ＯＸ－ＬＤＬ可诱导ＨＵＶＥＣ许多基因表达水平的变化。细胞中细胞间粘附因子的高表达,进一步说明细胞间粘附因子是参与动脉粥样硬化过程重要的粘附分子。胸腺素β４基因的上调表达与ＯＸ－ＬＤＬ诱导细胞肌动蛋白张力纤维的生成增加有关,可能影响内皮细胞的增殖。     

脂质体介导血管内皮生长因子基因在内皮细胞的稳定表达

建立稳定表达血管内皮生长因子的人脐静脉内皮细胞系 ,为其在组织化工程血管的应用奠定基础。将真核表达载体PCD2 VEGF1 2 1 用阳离子脂质体介导 ,转染人脐静脉内皮细胞系细胞 ,G4 18筛选 ,获得G4 18抗性单克隆细胞 ,扩增后分别用逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学及血管通透性实验检测血管内皮生长因子的转录、蛋白质的表达及其生物学活性。结果发现 ,逆转录聚合酶链反应检测出了转录血管内皮生长因子的稳定转染细胞克隆 ,该单克隆细胞的免疫组织化学检测血管内皮生长因子蛋白质表达呈阳性 ,血管通透性实验和细胞生长实验发现其表达产物具有生物学活性 ,而作为对照的转空白质粒细胞和未转染细胞上述实验结果皆为阴性。结果表明 ,该方法成功建立了稳定表达血管内皮生长因子的人脐静脉内皮细胞系单克隆细胞     

血管内皮细胞的氧化性损伤机理

近年来研究发现 ,内皮细胞 (EC)不仅仅是血液与间质组织间的一层半透性的屏障 ,而且还具有多种重要的生理功能如内分泌功能、抗血栓作用、调节血管张力等 ,在不同的器官还具有特殊的作用。内皮细胞损伤会引起内皮功能障碍 ,与高血压、动脉粥样硬化、心力衰竭等心血管疾病的发生、发展有密切关系。引起 EC损伤的因素很多 ,如细胞因子、活性氧、脂肪酶 (L PS)等 ,其中氧应激引起的内皮细胞氧化损伤是引起血管内皮功能障碍的一个重要原因 ,在心脑血管疾病的发生中起着重要作用 ,因此本文就血管内皮细胞的氧化性损伤机理进行探讨。1　内皮细…     

血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡的影响及其机制

目的研究血管内皮生长因子对过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡的影响,同时检测凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分成对照组、过氧化氢组和过氧化氢 血管内皮生长因子组,12 h后,采用原位末端标记法和流式细胞仪分别观察各组细胞的凋亡数和凋亡率,通过逆转录聚合酶链反应观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA与Fas mRNA表达的变化。结果过氧化氢组凋亡细胞数(27.83±2.14)明显高于对照组(2.50±1.05)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(13.00±2.10)(P<0.01)。过氧化氢组细胞凋亡率(14.17%±0.45%)明显高于对照组(1.55%±0.87%)(P<0.01)和过氧化氢 血管内皮生长因子组(5.69%±0.38%)(P<0.01)。与过氧化氢组比较,过氧化氢 血管内皮生长因子组Fas mRNA表达明显减少(40.67%±2.16%比94.50%±3.45%,P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(60.33%±1.75%比23.17%±1.17%,P<0.01)。结论血管内皮生长因子能拮抗过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2 mRNA表达与下调Fas mRNA表达有关。