电针刺激对脊髓损伤大鼠NF200 GFAP表达的影响

目的：探讨脊髓损伤后电针刺激对NF200、GFAP表达的影响。方法：将大鼠分为正常对照组、空白对照组、模型对照组和电针刺激组。神经元的鉴定采用甲苯胺蓝染色法，脊髓NF200、GFAP抗体采用免疫组化染色。结果：正常对照组和空白对照组的大鼠脊髓灰质中的神经元数量无显著性差异（P＞0.05）；模型对照组脊髓灰质中神经元数量同正常对照组、空白对照组、电针刺激组相比均少，有显著性差异（P<0.05）。模型对照组的NF200阳性神经元数量、GFAP阳性面积显著低于电针刺激组（P<0.05）。电针刺激脊髓损伤4周后大鼠脊髓灰质中神经元数量显著较模型对照组增多；NF200阳性神经元数量、GFAP阳性面积较正常大鼠明显增多。结论：电针刺激可促进脊髓损伤大鼠NF200与GFAP的表达，可能有助于脊髓功能的恢复。     

恐惧应激大鼠血ACTH、CORT、IL-2、IL-8的含量变化

目的 探索“恐惧”情绪应激对大鼠内分泌及免疫系统的影响. 方法 根据Takashi方法建立恐惧应激模型,通过放射免疫方法检测ACTH、CORT、IL-2和IL-8,并与正常组、孤独饲养组进行对照.结果 各组大鼠ACTH、CORT均有显著差异（F 值分别10.466、13.804;均为P〈0.01）.恐惧模型组ACTH、CORT水平高于正常对照组及孤独饲养组.各组大鼠IL-8比较,存在显著差异（F=3.489,P=0.049）,恐惧模型组血清IL-8水平高于正常对照组,各组大鼠IL-2未见显著差异（F=1.355, P=0.280）. 结论 恐惧可通过激活HPA轴,升高ACTH、CORT水平这一途径调控应激反应.恐惧应激可提高IL-8水平,对机体免疫功能有抑制作用.     

大鼠脑梗死后急性期肾上腺皮质功能改变及地塞米松的干预作用

目的：探讨大鼠脑梗死后急性期肾上腺皮质功能的改变以及地塞米松的干预作用。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组（对照组）、模型加生理盐水组（安慰剂组）和模型加地塞米松组（治疗组）,每组20只。采用改进的线栓法建立大鼠脑缺血模型。治疗组应用小剂量地塞米松（0.8 mg/kg）替代治疗。各组分别于脑损伤后第3、12、24、72 h 4个时间点进行观察。给予小剂量促肾上腺皮质激素（ACTH）行刺激试验,应用ELISA法测定血清皮质酮（CORT）和ACTH含量。结果安慰剂组大鼠脑损伤后3 h外周血CORT和ACTH均明显高于对照组（P＜0.01）,随后逐渐降低,72 h又有升高趋势;各时间点ACTH刺激后CORT上升值均低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。治疗组伤后所有时间点CORT均高于安慰剂组（P＜0.01或P＜0.05）,ACTH仅24 h高于安慰剂组（P＜0.05）;各时间点ACTH刺激后CORT上升值均高于安慰剂组（P＜0.05或P＜0.01）。结论大鼠脑梗死急性期即存在肾上腺皮质功能不全,随着时间推移,肾上腺储备功能下降,对ACTH反应程度降低。小剂量短疗程肾上腺糖皮质激素可增强肾上腺皮质对ACTH刺激的敏感性。     

烧伤后慢性应激大鼠血液ACTH、CRF及皮质醇的变化

目的：探讨烧伤后并发抑郁,其下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）的调节机制。方法：Wistar大鼠46只,分为烧伤组（30%深Ⅱ度烧伤）10只,抑郁组（给予慢性不可预见性中度刺激）、并发组（烧伤＋抑郁）及正常组各12只,观察大鼠的行为变化及放射免疫方法测定大鼠血浆ACTH、CRF及皮质醇水平。结果：实验22天,与正常组比较,烧伤组、抑郁组及并发组大鼠旷场行为明显减少;抑郁组CRF及皮质醇、并发组ACTH、CRF及皮质醇水平较正常组及烧伤组均显著升高（P〈0.05）。结论：烧伤后并发抑郁与HPA轴功能亢进有重要的联系。     

大鼠重型颅脑创伤后急性期下丘脑-垂体-肾上腺轴损害和功能改变的意义

目的 探讨大鼠重型颅脑创伤(traumatic brain injury,TBI)后急性期下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)轴损害和功能改变的意义.方法 成年健康封闭群雄性SD大鼠60只,随机(随机数字法)分为假手术组、模型组和治疗组,每组20只.采用Feeney法建立大鼠重型TBI模型.治疗组于伤后10 min、24 h和48 h腹腔注射地塞米松0.6mg/kg,假手术组和模型组给予等容量生理盐水替代.各组大鼠腹腔注射1μg促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)作刺激试验,分别于伤后第3、12、24、72小时4个时间点进行观察.应用化学发光法测定血清皮质酮(corticosterone,CORT)和ACTH含量.第72小时取大鼠下丘脑、垂体和肾上腺,采用免疫组织化学方法观察白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达情况.所得数据采用SPSS 17.0统计软件包进行单因素方差分析和SNK-q检验.结果 ①模型组大鼠伤后第3小时外周血CORT和ACTH达高峰,明显高于假手术组,随后逐渐降低;各时间点ACTH刺激试验后CORT上升的幅度(△max)均低于假手术组(P＜0.05或P＜0.01).治疗组大鼠伤后所有时间点CORT均高于模型组,ACTH仅伤后第24小时高于模型组;ACTH刺激后CORT的△max值均较模型明显升高(P＜0.05或P＜0.01).②模型组大鼠伤后第72小时下丘脑与垂体IL-6、TNF-α阳性细胞数较假手术组明显升高(P＜0.01);治疗组则较模型组明显降低(P＜0.01);肾上腺皮质仅IL-6阳性细胞数差异显著(P＜0.01).结论 重型TBI大鼠早期即可存在肾上腺皮质功能改变,随着时间推移,对ACTH反应程度降低.小剂量短疗程地塞米松可减轻HPA轴炎症反应程度,增强肾上腺皮质对ACTH的敏感性.     

电针对慢性期脊髓损伤大鼠功能恢复及神经营养因子表达的影响

摘要 目的:研究督脉电针对慢性期脊髓损伤大鼠功能康复及神经营养因子的表达的影响,探讨督脉经上不同穴位电针的作用是否存在差异。 方法:将32只雄性SD大鼠随机分为4组：假模组、模型对照组、头部督脉电针组（“百会、风府”）、背部督脉电针组(“大椎、命门”),每组8只。建立大鼠脊髓损伤模型,各治疗组于术后1周开始6周的电针治疗。采用BBB运动功能评分法评定大鼠后肢运动功能的恢复情况。术后7周处死大鼠,采用实时荧光定量PCR及Western-blot方法检测受损脊髓脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养素-3（NT-3）mRNA和蛋白的表达。 结果:电针干预组BBB评分高于模型组（P<0.05),且背部督脉电针组评分明显高于头部督脉电针组(P<0.05)。电针治疗后大鼠脊髓BDNF及NT-3 mRNA和蛋白的表达与模型对照组比较均明显上调（均P<0.05）,且背部督脉电针组高于头部督脉电针组（P<0.05）。 结论:电针治疗能增强受损伤脊髓神经营养因子的表达和促进大鼠后肢运动功能的恢复,背部督脉电针组作用强于头部督脉电针组。     

重复经颅磁刺激对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及HPA轴的影响

目的观察重复经颅磁刺激（rTMS）对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响，并探讨其可能的神经内分泌机制。 方法筛选40只同质均一的健康成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组（8只）和造模组（32只）。对照组正常饲养条件下群养，每笼4只，不给予任何干预处理；造模组大鼠采用联合慢性温和不可预知应激（CUMS）方法孤养制备大鼠抑郁模型。运用体重测量、蔗糖水消耗实验及旷场实验行为学评估指标筛选出造模成功的大鼠，将造模成功的大鼠再按随机数字表法分为模型组、rTMS组和伪刺激组，每组8只大鼠。rTMS组和伪刺激组分别接受rTMS和假rTMS刺激干预，为期3周。分别于造模后和干预结束后，运用上述行为学评估指标对各组大鼠行为学改变进行评估，应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质酮（CORT）的含量，采用半定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）mRNA表达量。 结果①CUMS处理后（造模后）大鼠体重增长率［（24.784±13.879）%］、蔗糖水消耗量［（2.102±0.998）ml/100g］、旷场实验垂直运动次数［（3.500±2.207）次］及修饰次数［（8.792±2.889）次］均较对照组［（39.810±11.739）%、（3.510±0.878）ml/100g、（10.875±4.357）次、（18.125±4.853）次］显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)；rTMS干预后，与模型组相比，rTMS组大鼠体重增长率［（36.520±6.469）%］、蔗糖水消耗量［（4.130±0.917）ml/100g］、旷场实验的垂直运动次数［（7.000±3.742）次］及修饰次数［（16.250±3.012）次］均显著增高(P<0.05)；②干预后，模型组大鼠血浆ACTH和CORT含量［（204.014±13.915）和（203.053±18.502）μg/L］显著高于对照组［（108.705±12.808）和（104.611±5.099）μg/L］，而rTMS组的ACTH和CORT水平［（131.964±12.172）和（129.378±8.806）μg/L］均明显较模型组降低，且差异有统计学意义(P<0.01)；③与对照组相比，模型组大鼠下丘脑CRH mRNA的表达显著增高［（1.92±0.18）%］,差异有统计学意义(P<0.01)；而rTMS组下丘脑CRH mRNA表达较模型组有明显降低［（1.12±0.12）%］,差异有统计学意义(P<0.01)。 结论rTMS刺激能够改善慢性应激抑郁模型大鼠的抑郁样行为，其机制可能与下调亢进的下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴有关。     

胚胎脊髓干细胞移植联合神经生长因子对成鼠损伤脊髓结构和功能恢复的影响

目的：将胚胎脊髓干细胞移植及神经生长因子联合应用于实验性脊髓损伤大鼠，观察二者联用对损伤脊髓结构和功能恢复的干预。 方法：实验于2003-05／2004-02在大庆市第四医院骨科完成。选取健康8月龄SD雄鼠2只，雌鼠4只，同笼过夜，次晨观察雌鼠，发现鼠精子者确定为孕鼠并记为妊娠0d，取胚鼠6只作为供体。另选取清洁级健康雄性SD大鼠50只，随机分为5组：神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组、神经生长因子组、胚胎脊髓干细胞组、模型对照组、空白对照组，10只／组。其中神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组、胚胎脊髓干细胞组大鼠作为受体。①除空白对照组外，其余各组均建立T12脊髓右半切损伤动物模型。②孕鼠于妊娠14d麻醉后暴露子宫，手术显微镜下取出胚鼠，剪去头尾，移取长约3mm的胚胎脊髓，浸泡于2000Bu／mL神经生长因子液后，立即分别移植入神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组及胚胎脊髓干细胞组刚完成的急性脊髓右半切损伤部位。神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组、神经生长因子组均在蛛网膜下腔插入内径0．6mm、外径1mm的导管，固定后于术后每天经导管给予神经生长因子500Bu。连续2周。模型对照组与空白对照组不给予任何治疗。③术后观察各组动物的一般状态及运动功能变化。Bieschowsky还原银染色法对神经纤维进行病理观察，并对各组损伤区脊髓横断面神经纤维数进行统计。 结果：实验选取SD大鼠50只，术后1周内死亡11只，除空白对照组未死亡外，模型对照组死亡2只，其余3组各死亡3只。①术后不同时间各组大鼠的一般状态：空白对照组在手术前后均未出现尿便异常情况。神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组、神经生长因子组、胚胎脊髓干细胞组、模型对照组大鼠术后1周内均出现尿便失禁，模型对照组死亡2只，其余3组各死亡3只；术后2周有18只大鼠排尿排便功能逐渐恢复，神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组7只，神经生长因子组4只，胚胎脊髓干细胞组5只，模型对照组2只；术后8周有20只大鼠排尿排便功能已完全恢复，神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组7只，神经生长因子组5只，胚胎脊髓干细胞组6只，模型对照组2只。②术后不同时间各组大鼠的运动功能改变：空白对照组在手术前后感觉运动功能无异常改变。神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组、神经生长因子组、胚胎脊髓干细胞组、模型对照组建立T12脊髓右半切损伤模型后，大鼠右后肢运动功能全部消失，左后肢出现感觉障碍；术后8周时神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组有6只大鼠出现刺激左后肢的逃避反应，但右后肢运动功能未见改善；胚胎脊髓干细胞组有4只大鼠对左后肢痛觉刺激出现逃避反应。神经生长因子组、模型对照组大鼠右后肢常处于拖行状态，感觉与运动功能均无改善。③术后8周各组组织病理染色观察结果：神经生长因子＋胚胎脊髓干细胞组与神经生长因子组、胚胎脊髓干细胞组、模型对照组之间差异有显著性意义（27．6&;#177;4．3），（4．31&;#177;0．5），（14．2&;#177;1．6），0，P〈0．05）。 结论：胚胎脊髓干细胞为宿主脊髓损伤区提供了优良的微环境及支持引导作用，并通过自身的分化再生与宿主神经元形成广泛联系，同时产生更多的神经营养因子，与胚胎脊髓干细胞移植联合应用可协同促进宿主脊髓功能的恢复。     

电针对断尾大鼠椎管内麻醉下应激反应调控效果的影响

目的：探讨电针不同部位联合鞘内注射芬太尼对大鼠急性应激反应调控作用的影响及与脊髓表达c-fos蛋白相关的机制。方法：将鞘内置管成功的50只雄性SD大鼠随机分为5组（n＝10）：对照组（Ⅰ组,仅鞘内置管注射生理盐水50μL）、模型组（Ⅱ组,低位尾干切断＋鞘内置管注射生理盐水50μL）、鞘内麻醉组（Ⅲ组,模型成功后,鞘内注射芬太尼50μL,2．5μg）、鞘内麻醉＋体针组（Ⅳ组,模型成功后,鞘内注射50μL芬太尼,采用电针仪刺激大鼠双侧“足三里”穴,强度＜2 mA,频率2／100 Hz,时间30 min）、鞘内麻醉＋耳针组（Ⅴ组,模型成功后,鞘内注射芬太尼50μL,取双侧耳尖穴进行穴位电刺激,刺激参数及时间同Ⅳ组）,用酶联免疫法（ELISA法）测血清促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质醇激素（CORT）水平,取脊髓L4-6段,采用Western Blot免疫印记法测脊髓c-fos蛋白表达,用IPP6．0凝胶成像系统进行分析。结果：Ⅱ组血清ACTH、CORT水平和脊髓c-fos表达均较Ⅰ组明显升高（P＜0．01）,与Ⅱ组相比,Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组血清ACTH、CORT水平均有不同程度下降,差异有统计学意义（P＜0．05）,但脊髓c-fos表达在Ⅱ组与Ⅲ组间无差异（P＞0．05）。Ⅲ、Ⅳ组间,血清激素水平无差异（P＞0．05）,Ⅴ组c-fos表达较Ⅳ组低（P＜0．01）。结论：体针和耳针电刺激复合鞘内麻醉均对降低急性疼痛大鼠的应激反应有效;鞘内麻醉下,非神经阻滞区域的耳针作用明显,其机制可能与神经传导诱发脊髓释放c-fos蛋白有关。     

脓毒症早期大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴超微结构变化与功能的关系

目的 观察脓毒症早期下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴结构及功能的变化,并探讨其相互关系.方法 雄性SD大鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、假手术组和脓毒症组.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作脓毒症大鼠模型,术后6 h取血并处死动物,检测血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CoRT)以及下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平;透射电镜下观察HPA轴的超微结构改变.结果 脓毒症组血浆ACTH、CORT和下丘脑CRH水平均明显高于正常对照组和假手术组[ACTH(pmol/L):5.78±0.36比1.94±0.31、2.51±0.10;CORT(nmol/L):88.48±4.47比22.02±1.62、34.20±2.51,CRH(μg/L):101.92±6.61比61.65±6.05、66.65±4.03,P＜0.05或P＜0.01].透射电镜下观察:脓毒症组大鼠下丘脑粗面内质网囊状扩张、脱颗粒,高尔基体肿胀,垂体ACTH细胞分泌颗粒增多,肾上腺组织脂滴减少.结论 脓毒症早期大鼠HPA轴处于过度激活状态,血浆ACTH、CORT和下丘脑CRH水平明显升高;HPA轴的超微结构明显改变,且与功能变化有密切联系.

Abstract：

Objective To observe the changes in ultrastructure and function of hypothalamicpituitary-adrenal axis (HPAA), and to approach the relationship between them in early stage of sepsis in rats. Methods Thirty male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into normal control group,sham group, sepsis group. The sepsis model was reproduced by cecal ligation and puncture (CLP). The rats were sacrificed after collection of blood at 6 hours after CLP, and the levels of adrenocorticotropic hormone (ACTH) and corticosterone (CORT) in the plasma, and the corticotropin release hormone (CRH) in the tissue of hypothalamus were detected. The histopathological changes in HPAA were observed with transmission electron microscopy. Results The levels of ACTH and CORT in plasma, and the CRH in hypothalamus tissue of sepsis group were increased in the early stage of sepsis compared with the normal control group or sham group [ACTH (pmol/L): 5. 78 ± 0. 36 vs. 1.94 ±0.31, 2. 51 ± 0.10; CORT (nmol/L), 88.48±4.47 vs. 22.02±1.62, 34.20±2.51; CRH (μg/L): 101. 92±6. 61 vs. 61.65±6.05,66. 65±4. 03, P＜0. 05 or P＜0. 01]. The changes in ultrastructure of the hypothalamus, pituitary and adrenal were also found. In sepsis group, the ultrastructure of hypothalamus was as follows. Rough endoplasmic reticulum expansion and degranulation of rough endoplasmic reticulum, and swelling of Golgi complex were found. A large number of endocrine granules could be seen in ATCH cells in the pituitary with depletion of adrenal lipid droplets. Conclusion In septic rats, the HPAA was excessively activated, and ACTH and CORT in plasma, and CRH in hypothalamus were significantly increased in early stage of sepsis.The changes in ultrastructure of HPAA were obvious, and the change in function was closely related to the ultrastructural changes.