PCR-RFLP鉴别临床常见的皮肤癣菌

目的 建立一种快速而简便的分子水平上鉴定常见皮肤癣菌的方法。方法 采用通用引物ITS1（5‘-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3‘)、ITS4(5‘-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3‘)对7种常见皮肤癣菌的核糖体的ITS（internal transcribed spacer)区（包含5.8SrDNA)进行PCR扩增，PCR产物分别应用限制性内切酶MvaI、TaqI、HinfI酶切。结果 7种皮肤癣菌的ITS区扩增产物条带大小不同；以MvaI、TaqI、HinfI三种酶分别酶切PCR-ITS区产物，7种皮肤癣菌均产生独特且易于区分的酶切图，尤其是MvaI酶产生的酶切图在种间差异最为明显。可将7种菌明确区分开。结论 核糖体ITS区PCR-RFLP分析是区分常见皮肤癣菌的有价值的方法。     

拓扑异构酶II基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌

目的:探讨拓扑异构酶II基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌的可行性。方法:用真菌拓扑异构酶II基因区通用引物dPsD1、dPsD2,先后对6种34株临床常见皮肤癣菌和2株白念珠菌以及4株曲霉的DNA进行巢式PCR(nested PCR)扩增,扩增后的阳性产物分别用限制性内切酶Hinc II和Hinf I酶切,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,根据结果来鉴定皮肤癣菌并在种的水平上区分这6种常见皮肤癣菌。结果:通用引物dPsD1对6种皮肤癣菌均能扩增出3 390 bp、dPsD2能扩增出2 380 bp的片段,而白念珠菌和曲霉则未见阳性扩增条带。扩增出的产物分别经Hinc II和Hinf I酶切后表现为58~1 670 bp长短不等的片段组合,根据这些特异性条带谱可以区分这6种临床常见皮肤癣菌。结论:拓扑异构酶II基因区的巢式PCR-RFLP方法,是鉴定和区分常见皮肤癣菌的有效方法。     

拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌

目的：探讨拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR～RFLP法鉴别常见皮肤癣菌的可行性。方法：用真菌拓扑异构酶Ⅱ基因区通用引物dPsD1、dPsD2，先后对6种34株临床常见皮肤癣菌和2株白念珠菌以及4株曲霉的DNA进行巢式PCR（nested PER）扩增，扩增后的阳性产物分别用限制性内切酶HincⅡ和HinfⅠ酶切，进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析，根据结果来鉴定皮肤癣菌并在种的水平上区分这6种常见皮肤癣菌。结果：通用引物dPsD1对6种皮肤癣菌均能扩增出3390bp、dPsD2能扩增出2380bp的片段，而白念珠菌和曲霉则未见阳性扩增条带。扩增出的产物分别经HincⅡ和HinfⅠ酶切后表现为58—1670bp长短不等的片段组合，根据这些特异性条带谱可以区分这6种临床常见皮肤癣菌。结论：拓扑异构酶Ⅱ基因区的巢式PCR—RFLP方法，是鉴定和区分常见皮肤癣菌的有效方法。     

临床常见皮肤癣菌的分子生物学鉴定

目的应用任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)鉴定临床常见皮肤癣菌。方法用引物AP3(5-′TCAC-GATGCA-3′)、任意引物ATG(5-′ATGGATCGGC-3′)、任意引物TCA(5-′TCACCACGGT-3′)和任意引物TCT(5-′TCTGTGCT-GG-3′)对常见皮肤癣菌进行任意引物聚合酶链反应。46株须癣毛癣菌采用引物ATG和引物AP3进行AP-PCR,并对扩增产物进行电泳分析。结果扩增产物电泳分析发现不同菌种间产生的DNA带型存在明显差异,尤其用引物AP3和引物ATG扩增产生的DNA带型的种间差异最明显。46株须癣毛癣菌的表型,全部为粉型,且均产生具有明显的电泳带型,可分为2型。结论AP-PCR可作为常见皮肤癣菌的种间及种内鉴定的简单、快速、可靠的方法。     

皮肤癣菌抗原制备的研究及其临床应用

皮肤癣菌病是一类临床多见且危害性严重的皮肤病，除结合其临床特征外，诊断主要依据真菌镜检和培养，真菌培养阳性是较有力的诊断依据［１］，但需两周才能出结果，往往因此而耽误治疗。为此，我们通过皮肤癣菌抗原制备的研究寻找一种快速准确诊断皮肤癣菌的方法。资料和...     

任意引物聚合酶链反应鉴定皮肤癣菌研究

目的探讨任意引物聚合酶链反应(AP-PCR)和引物OPD18、OPAA11对常见皮肤癣菌进行分子水平鉴定的意义.方法用任意引物OPD18(5'-GAGAGCCAA-3')和OPAA11(5'-ACCCGACCTG-3')对常见皮肤癣菌进行AP-PCR,并对扩增产物的DNA带型进行分析.结果皮肤癣菌所试的7个菌种之间均产生具有明显差异的DNA带型.结论用AP-PCR和引物OPD18、OPAA11可对常见皮肤癣菌进行分子水平鉴定.     

派瑞松霜治疗皮肤癣菌病的临床对照观察

我们于 2 0 0 0年 2月～ 8月 ,应用派瑞松霜 (西安杨森制药有限公司生产 ) ,对皮肤癣菌病 (手足癣、体股癣 )患者进行了临床对照试验。结果如下。1　资料与方法　1.1　资料　临床符合 (以日本皮肤科学会标准为准[1] )、真菌镜检阳性的体股癣、手足癣患者共 80例 ,随机分为两组 ,Ａ组 40例 ,男 2 3例 ,女 17例 ;年龄 4月～ 5 8岁 ,平均 2 7.3岁 ;病程 3天～ 16年 ;手癣 8例、足癣 11例、体癣 12例、股癣 9例。Ｂ组 40例 ,男 19例 ,女 2 1例 ,年龄 4月～ 6 3岁 ,平均 2 6 .9岁 ,病程 2天～ 14年 ;手癣 7例、足癣 12例、体癣13例、股癣 8例。两…     

湖北仙桃地区皮肤癣菌病的临床与病原菌分离观察报告

仙桃市位于江汉平原腹地,常年气候温暖,适宜真菌生长繁殖,皮肤癣菌病的发病较高.从1988.4～1998.12我们对皮肤科门诊拟诊为头癣、体癣、手足癣、甲癣、念珠菌病、孢子丝菌病等病的患者进行了常规真菌镜检,并对部分病例进行了致病菌分离培养,结果从824例拟诊为皮肤癣菌病患者中分离出致病性真菌17种,589株.现将有关情况分析报告如下:     

建立巢式PCR和异源双链法检测石蜡标本麻风菌DDS耐药株

目的：为了能检出石蜡包埋组织中麻风菌氨苯砜（DDS）的耐药基因folPl，有必要建立敏感、特异的巢式PCR，为开展回顾性麻风菌DDS耐药流行病学研究服务。方法：从石蜡组织中提取麻风菌DNA，建立巢式PCR，优化PCR条件，扩增DDS耐药基因片段。用异源双链法筛选突变菌株，并经直接测序进一步证实。结果：巢式PCR将PCR检测folPl的敏感性，从6．5％（3／46）提高到76．7％（33／43）；优化后的巢式PCR，最终使敏感性更进一步提高至90．7％（39／43）。8株folPl突变菌、两种突变型被发现。结论：巢式PCR是一项快速、简便、可行的方法。通过优化多项PCR条件，提高了石蜡包埋组织中folPl检测的敏感性和特异性。异源双链法可用于筛选DDS耐药突变菌株。     

外用皮质类固醇激素引起皮肤癣菌病扩散及难辨认癣的临床观察研究

外用皮质类固醇激素引起皮肤癣菌病扩散及难辨认癣的临床观察研究苑贵毕（贵州省毕节地区医院皮肤科５５１７００）关键词皮肤癣菌病，类固醇激素，治疗自１９５２年氢化考地松应用于皮肤科临床取得极好的抗炎效果后，至今皮质类固醇激素的外用制剂产品己很多，并广泛用于...     

聚合酶链反应快速诊断浅部真菌病

目的评价聚合酶链反应（PCR）技术直接从临床标本中检测浅部真菌病病原真菌的方法.方法采用蛋白酶K消化法和煮沸法处理临床标本,从中提取致病菌DNA,然后用真菌通用引物ITS1进行PCR扩增检测,并与直接镜检和培养法作对比.结果共收集112例临床标本,PCR检测、直接镜检和培养的敏感性分别为80.7%、96.5%和70.2%,特异性分别为100%、89.1%和100%,阳性预测值分别为100%、90.2%和100%,阴性预测值分别为83.3%、96.1%和76.4%.PCR方法在24 h内即可完成从标本处理至结果判读的全过程.结论PCR检测具有较好的特异性和准确性,且比培养缩短了近2周的时间,为临床快速诊断和及时、合理地治疗浅部真菌病提供参考.     

用任意引物聚合酶链反应进行皮肤癣菌的分子生物学研究

目的 探讨任意引物聚合酶链反应（AP-PCR）方法对皮肤癣菌的分子生物学鉴定和分型的意义。方法 用随机引物OPAA115′-ACCCCACCTG-3′,OPD185′-GAGAGCCAAC-3′对皮肤癣菌的3个属9个种和孢子丝菌及白念珠菌共64个菌株进行AP-PCR,并对扩增产物进行电泳分析。结果 皮肤癣菌所试验的9个菌种之间均产生具有明显差异的电泳带型,来自不同地区的红色毛癣菌丝多次实验均出现主带相同的电泳带型,同时存在株间差异。结论 以OPAA11和OPD18为引物,用AP-PCR可对皮肤癣菌从基因分子水平上进行鉴别。并为分型提供依据。     

某社区医院甲真菌病临床类型和致病真菌的研究

目的分离和调查某社区医院甲真菌病的致病真菌和临床类型。方法自2005年1月～2007年8月,对306例甲真菌病患者的病甲进行致病真菌分离,将取材物进行KOH显微镜检查和真菌培养。记录每位患者的病史资料,分析致病真菌分布与各因素之间的关系,临床类型与致病真菌之间的关系。结果306例中足趾甲感染占62.1%,手指甲感染占9.5%,手足指趾甲混合感染占28.4%。远端侧缘甲下型(DLSO)是最常见的一种临床类型,有195例患者(63.7%),其次是全甲破坏型(TDO)(82例;26.8%),无甲沟炎的近端甲下型(PSO)(18例;5.9%),合并甲沟炎的近端甲下型(PSO)(8例;2.6%),浅表白甲型(SWO)(3例;0.98%)。DLSO与其他临床类型相比显著增多(P<0.001)。306株致病真菌中主要为皮肤癣菌(68.0%),其中80.3%为红色毛癣菌;酵母菌22.5%,其中73.9%为白念珠菌;第三位是霉菌(9.5%),主要为曲霉。结论发现该社区医院甲真菌病常见的临床类型为DLSO和TDO,而PSO和SWO不常见。致病病原菌以红色毛癣菌和白念珠菌为主。临床类型和病原学关系显示单一致病真菌可以引发一种以上类型的甲真菌病。     

聚合酶链反应检测深部致病真菌的实验研究

目的 建立能用于临床实践的检测常见致病真菌的聚合酶链反应(PCR)方法.方法 设计了以热启动PCR为基础的实验方法,首先用真菌通用引物对标本进行单重PCR,若阳性,再用白念珠菌、烟曲霉和新生隐球菌的种特异性引物进行三重PCR来检测这3种常见致病真菌.结果 对9属55种78株常见深部真菌均扩增出260bp的DNA片段,而对细菌和人DNA均未扩增出目的 片段,具有高度特异性和敏感性,该方法操作简便且成本低.结论 以热启动PCR为基础的单重PCR和三重PCR方法可能成为临床上深部真菌感染理想的快速诊断工具.     

广州地区甲真菌病病原菌流行病学的多中心研究

目的：了解近年来广州地区甲真菌病病原菌的种类和构成情况,获取流行病学的资料。方法：我们于1997年11月-1998年11月采取多中心研究的方式组织了广州地区不同区域的6家主要医院对有典型临床表现且真菌镜检阳性的1045例甲真菌病患者进行了真菌分离培养。结果：共培养出致病真菌915株,构成比为皮肤癣菌占64.81%（593/915）,其中红色毛癣菌占51.48%（471/915）,须癣毛癣菌占10.49%(96/915);酵母菌占28.09%(257/915),其中以白念珠菌最常见为13.01%(119/915）;霉菌占7.1%(96/915）,主要是曲霉和青霉。混合感染指趾甲占6.73%(57/847）。结论：近年来广州地区的甲真菌病的病原菌为皮肤癣菌、酵母菌和霉菌,其中以红色毛癣菌和白念珠菌最常见。     

深圳地区甲真菌病病原菌流行病学的多中心研究

目的 了解深圳地区最近4年甲真菌病病原菌的种类和构成,发现流行病学特点。方法 以多中心研究方式选取深圳地区6家不同区域的主要医院,选取临床表现典型、真菌镜检阳性的1162例甲真菌病患者进行真菌分离培养。结果共培养出致病真菌553株。皮肤癣菌占68.53％,以红色毛癣菌为主占52.26％,其次是须癣毛癣菌占11.21％;酵母菌占25.68％,其中以白念珠菌最多占9.22％;霉菌占5.79％,主要是曲霉属和青霉属;混合感染占4.30％。结论深圳地区最近4年甲真菌病病原菌为皮肤癣菌、酵母菌和霉菌。红色毛癣菌和白念珠菌所占比例最高。     

儿童甲真菌病82例临床及病原菌分析

目的了解儿童甲真菌病的主要临床特征,危险因素及病原菌的种类和构成情况。方法对2003年3月～2006年12月本科门诊就诊的真菌直接镜检阳性的82例儿童甲真菌病患者(年龄≤18岁)进行流行病学调查及真菌的分离培养。结果儿童甲真菌病最常见的感染类型是远端侧缘甲下型,指甲感染者较趾甲感染者常见。手癣、足癣、甲外伤、长期穿不透气的鞋袜是儿童甲真菌病的危险因素。共分离出致病真菌64株,皮肤癣菌59株(92.19%),其中红色毛癣菌57株(89.06%);酵母菌5株(7.81%),白念珠菌最常见。结论儿童甲真菌病最常见的致病菌是红色毛癣菌,其次为白念珠菌。临床特征和危险因素的分析对于儿童甲真菌病的防治具有重要意义。     

兰州地区浅部真菌病及病原菌种类分析

目的　了解兰州地区浅部真菌病发病情况及病原菌菌种分布特点。方法　对临床拟诊为浅部真菌病的患者 14 43例 ,取标本行 10 %KOH涂片镜检、分离培养及菌种鉴定。登记镜检阳性患者的相关临床资料 ,分析浅部真菌病的发病特点。结果　真菌镜检阳性 5 94例 (4 1.2 % ) ,主要为足癣 2 3 0例 (3 8.7% )、甲真菌病 165例 (2 7.8% )、手癣 80例(13 .5 % ) ;分离菌株 2 2 1株 ,其中红色毛癣菌 97株 (4 3 .9% )、须癣毛癣菌 65株 (2 9.4% )、念珠菌 3 1株 (14 .0 % ) ,其他菌种2 8株 (12 .7% )。结论　兰州地区浅部真菌病中足癣最常见 ;致病菌以红色毛癣菌占首位 ,须癣毛癣菌位于第二 ,念珠菌居第三。