补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响

目的:研究补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响,以探讨其对成骨肉瘤细胞的生物学效应.方法:以640μmol/L补骨脂素处理人成骨肉瘤MG-63细胞,通过生长曲线测定,流式细胞仪分析和光镜观察方法,研究补骨脂素对MG-63细胞的生长曲线和细胞周期的影响,井对其作用机理进行初步分析.结果:补骨脂素处理72h后,MC-63细胞生长抑制率达到77.74%,G0/G1期比例达到55.8%,细胞生长活性减退,体积变小、变圆,伪足消失,悬浮、空泡化现象明显.结论:640μmol/L补骨脂素可以有效抑制细胞的增殖活动,改变细胞形态特征,对细胞具有凋亡作用.     

夜香树多糖诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡作用的探讨

目的:探讨夜香树多糖对人骨肉瘤细胞MG-63凋亡诱导作用并研究其可能的作用机制。方法:从夜香树叶中提取夜香树多糖,分别用终质量浓度为2.5,5,10 mg·L^-1的夜香树多糖处理处于对数生长期的MG-63细胞,另设MG-63细胞为空白组;不同质量浓度夜香树多糖作用72 h后,采用MTT法检测MG-63细胞增殖抑制作用;不同质量浓度夜香树多糖作用46 h后,采用透射电镜观察经处理过的细胞超微结构的改变,采用流式细胞术检测夜香树多糖对MG-63细胞凋亡率的影响,Western blot法分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3),Caspase-8,Caspase-9和B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)的蛋白表达水平。结果:夜香树多糖显著抑制人骨肉瘤细胞MG-63增生,在5~10 mg·L^-1质量浓度显著抑制细胞增殖,并呈浓度和时间的依赖性;电镜下可发现夜香树多糖能诱导细胞凋亡,胞质内出现大量空泡,细胞核染色质固缩,细胞表面绒毛减少;流式细胞仪检测表明,5 mg·L^-1夜香树多糖可使MG-63细胞阻滞在G₀/G₁;夜香树多糖能剂量依赖诱导MG-63凋亡,浓度依赖性的降低MG-63细胞的Bcl-2蛋白表达和升高Caspase-8的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:夜香树多糖能抑制MG-63细胞增殖,诱导人骨肉瘤细胞MG-63凋亡,与作用剂量和作用时间呈正相关,这一过程可能与夜香树多糖下调Bcl-2和激活Caspase-8有关。     

仙茅总黄酮诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的机制研究

目的 观察仙茅总黄酮诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡并探讨其可能的机制。方法 采用加热回流提取和大孔吸附树脂纯化方法制备仙茅总黄酮。通过CCK-8法检测MG-63细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度（IC50）;Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞核形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法和RT-PCR法检测JNK、p38 MAPK、Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白和mRNA表达水平。结果 纯化后仙茅总黄酮纯度为40.72%;与空白对照组相比,仙茅总黄酮对MG-63细胞的增殖抑制作用明显,且呈时间和剂量依赖性;药物组凋亡率显著升高;Western blotting及RT-PCR结果显示,随药物浓度升高,JNK、p38 MAPK和Bcl-2的蛋白和mRNA表达水平均显著降低,Caspase-3、Bax的蛋白和mRNA表达水平均显著升高（P <0.05,P <0.01或P <0.001）。结论 仙茅总黄酮能显著抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖、促进其凋亡,其作用机制可能与下调MAPK信号通路JNK、p38 MAPK及抗凋亡因子Bcl...     

淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用的体外研究

目的探讨体外淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用及分子机制。方法设置对照组及不同浓度梯度的淫羊藿素组(10、20、40、80、160μmol/L)、阿霉素组(1、2、4、8、16μg/m L)、联合组(淫羊藿素+阿霉素:20μmol/L+1μg/m L、20μmol/L+2μg/m L、20μmol/L+4μg/m L、40 mol/L+1μg/m L、40μmol/L+2μg/m L、40μmol/L+4μg/m L、80μmol/L+1μg/m L、80μmol/L+2μg/m L、80μmol/L+4μg/m L),分别培养骨肉瘤MG-63细胞用倒置相差显微镜观察各组药物作用24、48 h后细胞形态;CCK-8法测定各组的细胞增殖抑制率并计算半数抑制浓度;AnnexinⅤ-FITC/PI双染料流式细胞分析技术测定各组的细胞凋亡率;RT-PCR检测bcl-2、caspase-3及p21表达。结果淫羊藿素及阿霉素可明显抑制MG-63细胞增殖,随着淫羊藿素的浓度从10μmol/L逐渐增加至160μmol/L,细胞增殖抑制率也随之从(9.67±3.62)%逐渐增加至(89.18±9.66)%,二者的半数抑制浓度分别为:46.93μmol/L、3.87μg/m L;淫羊藿素与阿霉素可致细胞早期及晚期凋亡,使bcl-2基因表达下调、caspase-3、p21基因表达上调(P0.05);以上改变联合组较淫羊藿素组及阿霉素组更明显(P0.05)。结论淫羊藿素联合阿霉素对抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖具有协同或相加效应,其作用机制可能与调控bcl-2、caspase-3及p21基因有关。     

槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用

目的 探讨槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及诱导自噬、抑制侵袭的作用。方法 取人骨肉瘤MG-63细胞,分为二甲基亚砜组和槲皮素组,分别给予0.1%二甲基亚砜、200μg/mL槲皮素处理。培养48 h后,使用流式细胞仪检测2组细胞凋亡情况,运用腺病毒双荧光载体mRFP-GFP-LC3转染技术检测2组人骨肉瘤MG-63细胞自噬情况。另取人骨肉瘤MG-63细胞,设空白对照组,采用Transwell侵袭小室试验检测不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)槲皮素处理后的细胞侵袭能力。结果 与二甲基亚砜组比较,槲皮素组MG-63细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率均明显增高(P均<0.05),MG-63活细胞率明显降低(P<0.05),MG-63细胞自噬水平明显上调(P<0.05)。25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L槲皮素处理后的穿膜细胞数分别为空白对照组的(86.48±5.02)%,(70.02±4.93)%和(42.87±4.62)%,呈浓度依赖性降低,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 槲皮素可诱导骨肉瘤MG-...     

大豆异黄酮对成骨肉瘤细胞株MG-63增殖活性的影响

本实验采用MTT法检测了不同浓度的大豆异黄酮对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖活性的影响。结果表明大豆异黄酮可以抑制MG-63细胞的增殖,具有剂量效应关系。     

野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用

目的探讨野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用及可能的机制。方法采用不同质量浓度野菊花总黄酮与顺铂单独及联合作用MG-63细胞;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞生长抑制率,并计算金氏公式Q值进行协同性分析;流式细胞仪和RT-PCR检测凋亡率及凋亡相关基因bcl-2、caspase-3和p21的表达情况。结果野菊花总黄酮与顺铂单独及联合作用均能够抑制MG-63细胞增殖,诱导其凋亡,并下调bcl-2及上调caspase-3、p21基因的表达;Q值提示两者低质量浓度联合作用具有协同效应,而较高质量浓度联合作用则表现为叠加效应,未显示出拮抗效应。结论野菊花总黄酮在诱导MG-63细胞凋亡起重要作用,但野菊花总黄酮中的单体发挥抗肿瘤作用和协同抗肿瘤的效果有待进一步深入研究。     

姜黄素对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响

目的探讨姜黄素诱导人骨肉瘤细胞株MG63凋亡的机制。方法不同浓度(0、25、50和75μM)姜黄素作用MG63细胞24 h后,CCK8法检测细胞体外增殖,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blotting检测AKT/Bax-Bcl-2/Caspase 3等内源性凋亡途径相关蛋白表达水平。结果 CCK8实验结果显示在0~75μM范围内,50μM以上浓度的姜黄素能显著抑制MG63增殖,诱导细胞凋亡、p-AKT蛋白水平明显降低,而Bax蛋白及剪切的Caspase 3蛋白水平则显著增高。结论姜黄素通过影响AKT/BaxBcl-2/Caspase 3途径诱导MG63细胞凋亡。     

miR-124对人成骨肉瘤MG-63细胞生长增殖的影响

目的:探讨miR-124对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响。方法:运用miR-124的模拟物或抑制剂分别转染人成骨肉瘤MG-63细胞,分别为实验组和对照组(脂质体2000),采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况。结果:对照组吸光度值(A值)在24h、48h和72h分别为(0.261±0.017)、(0.379±0.021)、(0.414±0.031);miR-124模拟物可抑制MG-63细胞增殖,其A值分别降至(0.149±0.006)、(0.163±0.007)、(0.212±0.009),差异具有显著统计学意义(P<0.01);miR-124抑制剂可促进MG-63细胞增殖,其A值分别增至(0.313±0.016)、(0.542±0.033)、(0.713±0.041),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-124可抑制人成骨肉瘤细胞生长增殖活性,可作为一个抑瘤基因参与成骨肉瘤的发生与发展。     

莪术醇诱导人骨肉瘤MG63细胞自噬的实验研究

目的观察莪术醇对人骨肉瘤MG-63细胞自噬性凋亡的作用。方法体外人骨肉瘤MG-63细胞单独或和莪术醇共同培养,MTT法检测莪术醇对骨肉瘤细胞系MG-63的增殖抑制作用;FITC-annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡;PI和hochest33258活细胞染色观察凋亡细胞核形态学变化;EGFP-LC3b细胞转染,荧光显微镜观察细胞自噬;微管相关蛋白1轻链3-β(LC3)蛋白和自噬相关蛋白Beclin-1表达水平用Western blotting方法分析。结果 MTT检测显示莪术醇可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖,并具有浓度-时间依赖性;流式细胞术检测显示莪术醇可显著诱导MG-63细胞凋亡;活细胞荧光染色显示MG-63细胞核凝聚并碎裂成小体;细胞质内凝集荧光增强;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值,Beclin-1蛋白表达明显增强;自噬抑制剂3-MA可明显逆转上述现象。结论莪术醇能明显抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,其机制主要是通过诱导自噬性凋亡。     

白术和黄芪不同提取部位对小肠上皮细胞增殖的影响

目的观察白术和黄芪的不同提取部位对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖的影响。方法以系统溶剂分离法分别提取白术和黄芪的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、醇沉上清液和多糖部位;另将白术和黄芪以乙醇提取,D101大孔树脂吸附法得到40%和70%乙醇洗脱部位。MTT法检测白术和黄芪正丁醇部位、醇沉上清液、多糖部位、40%和70%醇洗脱液对IEC-6细胞增殖的作用。结果初步发现黄芪正丁醇部位、醇沉上清部位、糖复合物、40%和70%醇洗脱部位加药24h能促进细胞增殖;白术40%乙醇洗脱液部位加药24h能促进细胞增殖,白术正丁醇部位、糖复合物、40%和70%乙醇洗脱液部位加药48h能促进细胞增殖。结论白术和黄芪正丁醇部位、多糖部位、40%和70%醇洗脱液在加药后不同时间对IEC-6细胞有不同程度的促进增殖作用;采用系统溶剂分离法和大孔树脂吸附法提取白术和黄芪不同部位,可以用于细胞增殖实验,为进一步开展白术和黄芪在细胞水平上的药理研究提供参考。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的分子机制。方法以流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测CyclinD1、P21以及凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2和Bax表达的变化;TRAP-PCR-ELISA方法检测MG-63细胞端粒酶活性的变化;Z-IETD-fmk阻断试验检测Caspase-8阻断前后,冬凌草甲素对MG-63细胞凋亡影响的变化。结果冬凌草甲素增加G0/G1期MG-63细胞百分率,降低S期MG-63细胞百分率;浓度依赖性抑制MG-63细胞的CyclinD1、Survivin和Bcl-2蛋白表达,上调P21和Bax蛋白表达;浓度依赖性抑制MG-63细胞端粒酶的活性;Z-IETD-fmk阻断Caspase-8活性后,能部分逆转和减弱冬凌草甲素对MG-63细胞的凋亡诱导作用。结论冬凌草甲素通过影响细胞周期调节蛋白、阻断细胞周期G1/S期"稽查点";抑制Survivin、Bcl-2,上调Bax;抑制端粒酶活性以及活化Caspase-8等途径抑制MG-63细胞增殖及诱导MG-63细胞凋亡。     

姜黄素对人骨肉瘤细胞的生长抑制及对MAPK基因的调控作用研究

目的:研究姜黄素人成骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用,并检测对骨肉瘤细胞中MAPK基因表达的调控作用,初步明确姜黄素对骨肉瘤细胞的作用机制。方法:以人骨肉瘤细胞株MG-63为研究对象,采用不同剂量姜黄素处理。MTT法检测5,10,15,20,25,30,35,40,50μmol/L姜黄素作用24,48,72 h对细胞的毒性作用;Transwell小室侵袭实验法检测5,10,15μmol/L姜黄素对细胞的侵袭能力,黏附实验法检测对细胞的黏附能力;Western blot法检测5,10,15μmol/L姜黄素作用后MAPK蛋白表达水平的影响,RT-PCR法检测对细胞中MAPK基因m RNA转录水平的影响。结果:姜黄素浓度>15μmol/L,作用时间>24 h时,对细胞的生长抑制呈时间和剂量依懒性(P<0.001),当姜黄素浓度≤15μmol/L,作用时间为24 h时,对细胞无明显毒性作用,细胞存活率>85%;细胞侵袭能力和黏附能力随着姜黄素浓度的增加而逐渐降低,以15μmol/L姜黄素浓度处理效果最明显(P<0.05);姜黄素可明显抑制MAPK基因m RNA转录水平,其抑制作用与剂量呈高度依懒性(P<0.05)。结论:姜黄素可通过抑制MAPK信号通路的活化及此信号通路靶基因MAPK的表达降低人骨肉瘤细胞株MG-63的侵袭性。     

蒲公英水提取物对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用研究

目的观察蒲公英水提取物对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响,并探讨其改善胰岛素抵抗的作用机制。方法用高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗模型。将成模大鼠随机分为模型组,蒲公英水提取物高、中、低剂量组及吡格列酮组,并设正常组作对照。蒲公英水提取物高、中、低剂量组分别灌胃500、250、125 mg·kg^-1蒲公英水提取物稀释液,吡格列酮组灌胃3.15 mg·kg^-1吡格列酮溶液,正常组及模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,连续4周。观察大鼠一般状态及测定体质量;测定大鼠空腹血糖(FBG),行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)并计算血糖曲线下面积(AUC);测定大鼠血清胰岛素(FINS)并计算胰岛素敏感指数(ISI)及胰岛素抵抗指数(IRI);测定大鼠血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及肝脏组织IkB激酶β(IKK-β)、核因子κB(NF-κB)mRNA表达;HE染色观察大鼠胰岛形态;免疫组化染色观察大鼠胰岛β细胞数目及胰岛素表达。结果与正常组比较,模型组大鼠多饮、多食、多尿现象明显,精神不振、活动减少,体质量下降明显(P<0.01);FBG、OGTT各时间点血糖、AUC均明显升高(P<0.01);FINS、IRI明显升高(P<0.01),ISI明显降低(P<0.01);IL-6、TNF-α、IKK-β、NF-κB均明显增加(P<0.01);HE染色胰岛形态不规则,边界模糊,胰岛细胞数目明显减少;免疫组化染色胰岛β细胞数目及胰岛素表达均明显减少。与模型组比较,蒲公英水提取物高、中剂量组大鼠的多饮、多食、多尿现象及精神状态明显改善,体质量增加明显(P<0.01,P<0.05);FBG、OGTT各时间点血糖及AUC均明显降低(P<0.01,P<0.05);FINS、IRI明显降低(P<0.01,P<0.05),ISI明显升高(P<0.01);IL-6、TNF-α、IKK-β、NF-κB均明显减少(P<0.01,P<0.05);HE染色胰岛形态及胰岛细胞数目改善明显,以高剂量组为佳;免疫组化染色胰岛β细胞数目及胰岛素表达明显增加,以高剂量组为佳。结论蒲公英水提取物可以有效改善2型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗,以高剂量为佳,其机制可能与下调IKK-β/NF-κB信号通路中IKK-β、NF-κB的表达,减少炎症因子IL-6、TNF-α的生成有关。     

不同纯化工艺对金钱草水提液的影响

目的:探索壳聚糖絮凝澄清工艺与醇沉工艺对中药水提浸膏吸湿性影响的差异.方法:考察2种纯化工艺对浸膏得率、糖类和氨基酸保留率、蛋白质和鞣质去除率、浸膏吸湿性的影响.结果:壳聚糖絮凝澄清工艺的浸膏得率、糖类和氨基酸保留率、蛋白质和鞣质去除率均高于醇沉工艺,但浸膏吸湿性低于醇沉工艺.结论:金钱草水提浸膏的吸湿性与多糖保留率、蛋白和鞣质去除率有关,为2种纯化工艺的选用提供依据.     

鱼腥草不同提取部位药理活性的比较研究

目的 比较鱼腥草不同提取部位的药理活性.方法 通过二甲苯致小鼠耳炎症实验,观察鱼腥草不同提取部位的抗炎作用;采用浓氨水诱导法引起的咳嗽实验,观察鱼腥草不同提取部位的止咳作用;采取醋酸引起的化学刺激致痛实验,考察鱼腥草不同提取部位的镇痛作用.结果 鱼腥草氯仿提取物、水提取物对二甲苯致小鼠耳炎症,浓氨水诱导法引起的咳嗽,醋酸引起的化学刺激致痛具有显著的抗炎、止咳和镇痛作用,正丁醇提取部位具有显著的抗炎和止咳作用.结论 抗炎和止咳的有效部位为鱼腥草氯仿部位、水部位和正丁醇提取部位,镇痛的活性部位为鱼腥草氯仿部位和水部位.     

硝唑尼特对骨肉瘤的影响及机制研究

目的 以网络药理学为基础,探讨硝唑尼特(nitazoxanide,NTZ)对骨肉瘤的影响及作用机制。方法 利用化合物靶点预测数据库,筛选NTZ在骨肉瘤治疗中的潜在靶点,构建蛋白互作网络,并在Cytoscape软件中对蛋白互作网络进行可视化分析,通过计算度值,将排名前20的基因视为关键靶基因。借助David数据库对潜在靶点进行富集分析,预测药物潜在作用途径。通过体外实验验证NTZ的抗骨肉瘤的作用,设置NTZ处理组0,10,20,30,40 μmol·L^-1和0.05%DMSO对照组分别作用于骨肉瘤细胞143B细胞,结晶紫、MTT实验检测NTZ对骨肉瘤143B细胞增殖的影响;划痕和Transwell侵袭实验观察迁移侵袭能力;流式细胞术和Hoechst 33258检测细胞凋亡;蛋白印迹法(Western blot)检测细胞蛋白水平的变化。结果 NTZ作用于骨肉瘤的潜在靶点共有78个;Gene Ontology(GO)富集分析涉及306个条目,京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)分析得到80个条目,涉及肿瘤通路、细胞周期信号通路、受体酪氨酸蛋白激酶(ErbB)信号通路等。实验结果表明,NTZ抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移侵袭,诱导凋亡,细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路关键分子ERK1/2的磷酸化显著抑制。结论 NTZ对骨肉瘤的作用涉及多靶点、多过程,能调节ERK1/2信号通路,有效抑制骨肉瘤。     

地锦草不同萃取部位体外抗真菌作用研究

目的对地锦草不同萃取部位进行体外抗真菌实验,测定其最小抑菌浓度值（MIC）。方法采用溶剂萃取法分离地锦草乙醇提取液,得到水、石油醚、氯仿、正丁醇等4个萃取部位;根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》（M38-A）,测定地锦草各萃取部位对23株临床常见皮肤癣菌的MIC。结果由于地锦草萃取分离后的石油醚和氯仿部位在药敏试验中的溶解度甚小,影响结果的科学观察,本研究主要针对正丁醇和水部位的体外药敏进行了检测,正丁醇和水部位对真菌有明显的抑制作用,并且正丁醇部位的作用优于水部位。结论地锦草萃取部位具有体外抗真菌作用。