血管抑素K1-5腺病毒载体的构建及对血管内皮细胞的抑制作用

目的构建携带血管抑素的腺病毒载体,并探讨其对血管内皮细胞增殖及迁移的抑制作用。方法采用基因重组技术,构建携带血管抑素K1-5的腺病毒载体,PCR鉴定,50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度及氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。直接感染台盼蓝染色排除法、MTT及体外趋化实验检测血管抑素K1-5对内皮细胞增殖及趋化的抑制作用。结果经50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度及氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,病毒滴度为1.5×109pfu/mL。扩增纯化后,病毒滴度达1.1×1010pfu/mL。实验表明,携带血管抑素K1-5的腺病毒能抑制血管内皮细胞增生,并对其具有杀伤力,且能使血管内皮细胞趋化能力减弱,抑制血管形成。结论成功构建了携带血管抑素K1-5的腺病毒载体,血管抑素K1-5能明显抑制血管内皮细胞增殖及迁移,为进一步体内实验,研究对血管形成的抑制作用奠定了基础。     

克拉霉素抑制肺癌细胞诱导血管内皮细胞迁移的实验研究

目的 观察克拉霉素（CAM）对人小细胞癌细胞表达VEGF其诱导血管内皮细胞迁移的影响，探讨CAM抗血管生成的机制。方法 采用免疫组化和图象分析技术，观察不同浓度的CAM作用下人小细胞肺癌细胞（NCI－H446）中VEGF蛋白表达的变化。采用共培养法（Marigel invasion chamber)，观察CAM为NCI－H446细胞诱导人血管内皮细胞（ECV－304）迁移的抑制作用。结果 CAM达到30mmol/L对其诱导的ECV－304细胞迁移表现出明显的抑制作用，达到40mmol/L可以抑制CI－H446细胞表达VEGH，CAM浓芳在30，40和50mmol/L时，抑制率分别为19．7％，24．3％和25．0％，呈现出明显剂量－反应关系（r=-0.764,P=0.001)。结论 CAM能够抑制肺癌细胞诱导的血管内皮细胞迁移，对其表达VEGF也具有抑制作用，以上作用可能是CAM抗血管生成的机制之一。     

miR-107对人脑微血管内皮细胞增殖、迁移和血管形成能力的影响

目的探讨miR-107对人脑微血管内皮细胞增殖、迁移和血管形成能力的影响。方法miR-107化学模拟物agomir转染人脑微血管内皮细胞,CCK-8细胞活性分析实验和Transwell法分别检测内皮细胞增殖和迁移能力变化,体外血管生成实验检测内皮细胞成管能力的改变。结果内皮细胞转染miR-107化学模拟物agomir显著上调miR-107的表达。与阴性对照组(agomiR-NC组)相比,miR-107过表达组(agomiR-107)内皮细胞增殖和迁移显著减少,体外成管能力显著降低(P0.05)。结论miR-107能够抑制脑微血管内皮细胞增殖、迁移并降低其体外成管能力。     

23-羟基桦木酸体外抑制血管生成的实验研究

目的：探讨23-羟基桦木酸（23-HBA）对体外血管生成的抑制作用。方法：采用磺酰罗丹明B（SRB）法测定23-HBA对人毛细血管内皮细胞（HMEC）增殖、迁移和小管形成的影响；用免疫组化染色法检测HMEC中CD31表达的变化。结果：23-HBA体外可明显抑制HMEC增值（IC50为40．44mg／L）、迁移和小管的形成，且呈明显的剂量依赖性。23-HBA的浓度为10mg／L时、HMEC中CD31的表达明显降低。结论：23-HBA体外具有明显抑制血管生成的作用．有可能成为有效的血管生成抑制剂。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞迁移和体外血管生成拟态的抑制作用

 目的：研究口虾蛄提取物（extract of Oratosquilla,EOS）对人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2的迁移及体外血管生成拟态的影响。方法：用不同浓度（0 mg/L 、125 mg/L、250 mg/L、500 mg/L）EOS处理CNE-2细胞24 h后,创伤修复实验检测细胞迁移能力;通过Matrigel三维细胞培养观察CNE-2细胞形成类血管网状结构的能力及其特点;体外管道形成抑制实验检测不同浓度EOS对CNE-2细胞管道形成能力的影响;Western blotting法检测不同浓度EOS对CNE-2细胞fascin 1和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。结果：EOS可以显著降低CNE-2细胞的迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;CNE-2细胞在Matrigel上培养能形成类似血管的网状样结构;EOS能以剂量依赖方式抑制CNE-2细胞体外管道形成的数量（P＜0.01）;EOS能抑制CNE-2细胞中fascin 1和VEGF蛋白的表达（P＜0.01）,且其管状结构数量与2种蛋白变化趋势呈正相关（P＜0.05）。结论：CNE-2细胞具有血管生成拟态的能力;EOS能够抑制CNE-2细胞的迁移和体外血管生成拟态的能力,其机制可能与下调fascin 1和VEGF蛋白的表达有关。     

Akt、ERK1/2活化在脑源性神经营养因子促血管新生中的作用

目的： 探讨脑源性神经营养因子(BDNF) 促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。 方法: 以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western 印迹方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达； 采用Transwell小室迁移实验、管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力，MTT法检测内皮细胞增殖 活性，FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡。 结果: BDNF以时间依赖性方式激活PI3K/Akt 和MEK1/ERK信号通路。分别应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、 MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100 μg/L 的BDNF体 外促内皮细胞血管新生能力与 25 μg/L 血管内皮生长因子（VEGF）相当， 其中BDNF诱导的细胞迁移分 别被Ly294002和PD98059阻断，其抑制率分别约为74%和36%；同样，Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱 导的小管形成效应，其阻断率分别约57%和37%；而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗，抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。 结论: BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt 和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

MCP-1/CCR2信号途径介导酒精诱导的乳腺癌血管新生

目的:研究单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CCR2)在酒精刺激乳腺癌血管生成中的作用及其机制。方法:建立小鼠饮酒乳腺癌移植瘤模型,免疫组化检测肿瘤组织中MCP-1和CCR2表达与血管标志物血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性。体外建立3D肿瘤-内皮细胞共培养系统观察肿瘤血管新生,检测MCP-1/CCR2信号在酒精介导血管生成中的作用。通过细胞迁移实验检测MCP-1/CCR2是否增加细胞移动而促进脉管形成。结果:饮酒的荷瘤小鼠肿瘤组织中MCP-1和CCR2均高表达,且表达水平和血管新生标志物PECAM-1和VEGF相一致。通过3D肿瘤-内皮细胞共培养系统观察到小鼠乳腺癌E0771细胞和内皮细胞相互作用可促进血管的形成,酒精可以增强此种肿瘤血管新生效应。外源性MCP-1可以促进此种肿瘤血管生成,其受体CCR2抑制剂处理则可以有效抑制酒精刺激的肿瘤血管生成。进一步研究发现MCP-1/CCR2可以增强内皮细胞的迁移能力。结论:MCP-1/CCR2信号途径在酒精刺激乳腺癌血管生成中发挥重要作用,其机制可能是促进了内皮细胞...     

G-CSF、AMD3100对大鼠间充质干细胞增殖、迁移和黏附能力影响的研究

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、AMD3100对大鼠间充质干细胞(MSCs)增殖、迁移和黏附的影响.方法 采用MTT比色法、Transwell迁移法和黏附试验分别检测体外G-CSF、AMD3100对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力的影响.结果 在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0.5 mg/L时MSCs增殖能力最强;在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0 mg/L时MSCs迁移能力最强;在G-CSF质量浓度为200 μg/L、AMD3100质量浓度为0.5 mg/L时MSCs黏附能力最强.结论 体外G-CSF对间充质干细胞的增殖、迁移和黏附能力呈促进作用,而AMD3100呈抑制作用.     

丙泊酚对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力的影响

目的:观察丙泊酚对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力的影响。方法:用不同浓度(1、3、5和7 mg/L)的丙泊酚培养SGC-7901细胞24 h。MTT实验检测细胞活力,细胞侵袭实验和划痕愈合实验分别检测细胞侵袭和迁移能力;免疫细胞化学法和Western blot实验检测富半胱氨酸血管生成诱导因子61(CYR61)、CD44v6和基质金属蛋白酶7(MMP-7)3种蛋白的表达。结果:与对照组相比,5 mg/L丙泊酚对SGC-7901细胞的活力无明显影响,但显著抑制细胞的侵袭和迁移能力(P0.05),并抑制CD44v6和MMP-7的表达(P0.05)。结论:丙泊酚可抑制人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力,抑制作用与CD44v6和MMP-7的表达降低相关。     

两种源于胶原Ⅳ非胶原区具有抑制血管形成和肿瘤生长的功能肽

Tum statin和 Canstatin是继 Restin、angiostatin和 endostatin之后最新发现的基底膜来源人胶原 肿瘤血管生成抑制因子。 Tumstatin来源于胶原 α3链 ,其 N-端 5 4～ 132氨基酸功能肽能够抑制内皮细胞增殖和诱导内皮细胞凋亡 ,N -端 197～ 2 15氨基酸 [α3( ) NC1185～ 2 0 3氨基酸 ]功能肽能够抑制多种恶性肿瘤细胞的增殖。 Canstatin是来源于 型胶原α2链的 2 4 k D的血管生成和肿瘤生长抑制因子 ,它能剂量依赖性抑制内皮细胞管状结构的形成 ,有效抑制内皮细胞的增殖和迁移 ,并能诱导内皮细胞凋亡。在小鼠移植瘤模型体内实验中 ,Tum-statin和 Canstatin都显示出对实体瘤生长的显著抑制作用     

PI3K对IL-8／Rac1信号通路介导的内皮细胞迁移的影响

目的研究磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）对IL-8／Rac1信号通路所介导的内皮细胞迁移的影响。方法选择P13K抑制剂wortmannin及划痕创伤愈合修复分析,研究不同wortmannin的作用浓度和不同时间对IL-8／Rac1信号通路诱导的内皮细胞迁移的影响。结果不同wortmannin的作用浓度和不同时间预处理均可抑制IL-8／Rac1信号通路介导的内皮细胞迁移,其中wortmannin预处理浓度为100nmol／L,预处理时间为20min时IL-8诱导的内皮细胞迁移水平最低。结论P13K能够影响IL-8／Rac1信号通路介导的内皮细胞迁移;P13K抑制剂wortmannin的最佳作用浓度为100nmol／L,最佳作用时间为20min。     

木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响

目的:探讨木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度木犀草素处理体外培养的人肝癌HepG2细胞株,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,黏附实验评价细胞的黏附能力,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snai1蛋白的表达。结果:木犀草素可明显降低肝癌HepG2细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.01),且在一定浓度范围内呈明显量效关系。木犀草素处理肝癌细胞后,上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达明显上调,间质细胞标志蛋白N-cadherin和vimentin以及转录因子Snai1表达均明显下调,木犀草素对以上蛋白的调节呈明显浓度依赖性。结论:木犀草素体外具有抑制肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附的作用,其作用机制可能与调控上皮-间质转化有关。     

EGCG改善高浓度TNF-α对人皮肤创伤愈合中成纤维细胞的抑制作用

目的: 探讨高浓度肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人皮肤创伤愈合中成纤维细胞的抑制作用以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的干预效应。方法: 体外培养原代人皮肤成纤维细胞,以10 μg/L TNF-α作用24 h或联合EGCG预处理干预,用细胞计数试剂盒观察细胞增殖,细胞划痕愈合实验观察成纤维细胞的迁移,Western blotting法研究I型胶原蛋白的表达。结果: TNF-α显著抑制皮肤成纤维细胞的增殖和迁移,EGCG呈浓度依赖性地改善TNF-α的增殖抑制作用,以EGCG(40 μmol/L)预处理后,TNF-α对细胞迁移的抑制作用也得到恢复。Western blotting发现TNF-α还能抑制I型胶原蛋白的表达,而加入EGCG(40 μmol/L)后其表达有显著恢复。结论: EGCG能显著改善高浓度TNF-α对人皮肤成纤维细胞增殖和迁移的抑制作用,并恢复I型胶原的表达,从而促进皮肤创口的愈合。     

冬凌草甲素对人肝癌MHCC-97H细胞系侵袭和迁移的作用

目的:探讨冬凌草甲素(oridonin)对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法:采用细胞培养技术培养人肝细胞癌MHCC-97H细胞,用不同浓度的冬凌草甲素处理肝癌细胞,采用划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell实验测定细胞的侵袭能力;黏附实验评价细胞的黏附能力;Western blot法检测LIM激酶1(LIMK-1)、丝切蛋白(cofilin)和磷酸化cofilin(p-cofilin)蛋白水平的改变。结果:冬凌草甲素可明显降低肝癌细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.05),且在一定浓度范围内具有明显的量效关系。冬凌草甲素干预处理细胞后,cofilin的蛋白水平无明显变化,LIMK-1和p-cofilin的蛋白水平明显下调。结论:冬凌草甲素体外具有抑制肝癌MHCC-97H细胞侵袭和迁移的作用,其机制可能与调控LIMK-1/cofilin信号通路有关。     

Soluble N-cadherin fragment promotes angiogenesis

Endothelial cells express two dependent intercellular adhesion molecules: vascular endothelial (VE)-cadherin, specific for endothelial cells, and N-cadherin, also present in neuronal, lens, skeletal and heart muscle cells, osteoblasts, pericytes and fibroblasts. While there exists a vast amount of evidence that VE-cadherin promotes angiogenesis, the role of N-cadherin still remains to be elucidated. We found that a soluble 90-kDa fragment N-cadherin promotes angiogenesis in the rabbit cornea assay and in the chorioallantoic assay when cleaved enzymatically from the extracellular domain of N-cadherin. Soluble N-cadherin stimulates migration of endothelial cells in the wound healing assay and stimulates phosphorylation of extracellular regulated kinase. In vitro experiments with PD173074 and knock-down of N-cadherin and fibroblast growth factor (FGF)-receptor, showed that the pro-angiogenic effect of soluble N-cadherin is N-cadherin- and FGF-receptor-dependent. Our results suggest that soluble N-cadherin stimulates migration of endothelial cells through the FGF-receptor.     

Involvement of endothelial CD44 during in vivo angiogenesis

CD44, a cell-surface receptor for hyaluronan, has been implicated in endothelial cell functions, but its role in the formation of blood vessels in vivo has not been established. In CD44-null mice, vascularization of Matrigel implants and tumor and wound angiogenesis were inhibited. Leukocyte accumulation during tumor growth and wound healing in wild-type and CD44-null mice were comparable, and reconstitution of CD44-null mice with wild-type bone marrow did not restore the wild-type phenotype, suggesting that impairments in angiogenesis in CD44-deficient mice are due to the loss of endothelial CD44. Although the cell proliferation, survival, and wound-induced migration of CD44-null endothelial cells were intact, these cells were impaired in their in vitro ability to form tubes. Nascent vessels in Matrigel implants from CD44-null mice demonstrated irregular luminal surfaces characterized by retracted cells and thinned endothelia. Further, an anti-CD44 antibody that disrupted in vitro tube formation induced hemorrhage around Matrigel implants, suggesting that antagonism of endothelial CD44 undermined the integrity of the endothelium of nascent vessels. These data establish a role for CD44 during in vivo angiogenesis and suggest that CD44 may contribute to the organization and/or stability of developing endothelial tubular networks.     

Antiangiogenic properties of silver nanoparticles

Angiogenesis is an important phenomenon involved in normal growth and wound healing processes. An imbalance of the growth factors involved in this process, however, causes the acceleration of several diseases including malignant, ocular, and inflammatory diseases. Inhibiting angiogenesis through interfering in its pathway is a promising methodology to hinder the progression of these diseases. The function and mechanism of silver nanoparticles (Ag-NPs) in angiogenesis have not been elucidated to date. PEDF is suggested to be a potent anti-angiogenic agent. In this study, we postulated that Ag-NPs might have the ability to inhibit angiogenesis, the pivotal step in tumor growth, invasiveness, and metastasis. We have demonstrated that Ag-NPs could also inhibit vascular endothelial growth factor (VEGF) induced cell proliferation, migration, and capillary-like tube formation of bovine retinal endothelial cells like PEDF. In addition, Ag-NPs effectively inhibited the formation of new blood microvessels induced by VEGF in the mouse Matrigel plug assay. To understand the underlying mechanism of Ag-NPs on the inhibitory effect of angiogenesis, we showed that Ag-NPs could inhibit the activation of PI3K/Akt. Together, our results indicate that Ag-NPs can act as an anti-angiogenic molecule by targeting the activation of PI3K/Akt signaling pathways.