早发型和晚发型子痫前期自噬与凋亡水平差异及相互关系研究

目的探讨早发型子痫前期(early-onset preeclampsia, EOPE)和晚发型子痫前期(late-onset preeclampsia, LOPE)胎盘组织中自噬和凋亡水平的差异,利用人绒毛膜滋养层细胞株HTR 8/SVneo缺氧模型探讨自噬与凋亡的关系,为解释子痫前期(preeclampsia, PE)的发病机制提供新的思路。方法选取2018年1～6月上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院产科剖宫产分娩孕妇26例的临床资料。按照PE发生程度分为EOPE组10例,LOPE组6例,正常孕妇组10例。通过透射电镜观察EOPE组、LOPE组和正常孕妇组胎盘组织滋养层细胞中的自噬溶酶体;采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应和免疫印迹方法检测EOPE组、LOPE组和正常孕妇组胎盘组织中自噬相关基因(LC 3和Beclin-1)、抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax mRNA和蛋白水平的表达;利用HTR 8/SVneo缺氧模型,检测LC 3、Beclin-1、Bcl-2和Bax mRNA水平的表达。结果与正常孕妇组胎盘组织相比,EOPE组自噬溶酶体含量降低,LC 3、Beclin-1和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。LOPE组自噬溶酶体含量增加并且出现凋亡细胞,LC 3、Beclin-1和Bax表达均升高,Bcl-2表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。缺氧模型中,与正常HTR 8/SVneo细胞相比,缺氧12 h组LC 3和Beclin-1 mRNA表达水平均升高,Bcl-2和Bax mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05),抑制自噬活性后,Bax mRNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05);24 h和48 h组LC 3、Beclin-1、Bcl-2和Bax的mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P0.05);72 h组LC 3、Beclin-1和Bax表达均升高,Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 EOPE组胎盘滋养层细胞中自噬活性受损,凋亡水平增加;而LOPE组中自噬和凋亡水平均增加;短期缺氧激活滋养层细胞自噬,凋亡降低,抑制自噬凋亡增加;长期缺氧引发过度自噬和凋亡。     

胰岛素样生长因子-1保护脑缺血后神经元凋亡的信号转导机制

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡的保护作用及信号转导机制。方法15只W istar雄性大鼠随机分为假手术组、缺血组及IGF-1治疗组。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型（MCAO）,应用TUNEL法检测神经元凋亡,应用免疫组化方法检测caspase-3、caspase-8及caspase-9的蛋白表达。结果IGF-1治疗组与缺血组相比,神经元凋亡数目显著减少（P〈0.01）,caspase-3、caspase-8及caspase-9蛋白表达显著减少（P〈0.01）。结论IGF-1能显著减少脑缺血再灌注后caspase-3、caspase-8及caspase-9蛋白表达,抑制神经元凋亡,提示IGF-1可能通过抑制线粒体通路和死亡受体通路对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

缺氧诱导因子1α调控人精子凋亡的作用研究

目的 探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha, HIF-1α)调控人精子凋亡的作用及机制,为弱精症等疾病的诊疗提供新的理论依据。方法 将成年人精液分为精子活力正常组和弱精症组,分别加入HIF-1α干扰剂氯化钴或鸟苷酸环化酶激活剂利非西呱(lificiguat, YC-1),并分别设置不加药物处理的对照组。用全自动计算机辅助精液质量分析系统检测各组精子活力(以前向运动率表示);用酶联免疫检测仪检测精子凋亡水平、顶体酶活性;蛋白质印迹法检测HIF-1α、Bcl-2及Bax水平。结果 与正常对照组相比,氯化钴处理组精子凋亡水平、HIF-1α和Bax蛋白的表达水平上升,精子活力、顶体酶活性、Bcl-2下降。与弱精症对照组相比,YC-1处理组精子凋亡水平、Bax表达下降,精子活力、顶体酶活性、HIF-1α、Bcl-2的表达上升。结论 HIF-1α水平可影响精子凋亡和活力。     

miR-423-5p参与AMI大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR-423-5p对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,将其随机分为模型组、阴性组和干扰组,另设只开胸穿针不做冠状动脉结扎的假手术组,每组7只;采用Real-time PCR检测各组心肌组织中miR-423-5p的表达水平,心脏彩超检测各组大鼠的心脏功能,TCC法检测各组大鼠的心肌梗死面积,TUNEL法检测各组心肌细胞的凋亡指数,Western blot检测Cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,模型组和阴性组中miR-423-5p表达水平、左室收缩末期内径(LVDS)、左室舒张末期内径(LVDD)和Bcl-2蛋白表达水平均降低,而左室长轴缩短分数(FS)、左室射血分数(LVEF)、心肌细胞凋亡指数、心肌梗死面积和Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均明显升高(P0.05);与模型组和阴性组相比,干扰组中上述指标变化明显逆转(P0.05)。结论 miR-423-5p可通过下调Cleaved caspase-3、Bax和上调Bcl-2表达抑制AMI大鼠心肌细胞凋亡,改善心脏功能,从而减轻AMI。     

丹参酮对脓毒症大鼠心功能的保护作用机制

目的初步探究丹参酮对脓毒症大鼠心脏损伤的保护作用机制。方法选取40只SD大鼠,随机分为四组分别为假手术+生理盐水组、假手术+丹参酮组、模型+生理盐水组以及模型+丹参酮组。其中模型+生理盐水组和模型+丹参酮组大鼠采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型,造模成功的基础上丹参酮处理12 h。检测大鼠心脏功能、炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌形态学变化;蛋白质免疫印迹检测心肌组织凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、Bcl-2)和焦亡执行者消皮素E(GSDME)表达。结果与假手术+生理盐水组相比,模型+生理盐水组大鼠心功能减退,心肌炎症细胞因子IL-1β、IL-18、TNF-α增加,Caspase-3、Bax、GSDME-N蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。与模型+生理盐水组相比,模型+丹参酮组心功能恢复,心肌炎症细胞因子IL-1β、IL-18、TNF-α降低,Caspase-3、Bax、GSDME-N蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调。结论丹参酮对脓毒症大鼠心脏损伤具有良好保护作用,其机制可能是通过降低心肌炎症反应,抑制细胞凋亡以及焦亡过程。     

自噬及凋亡因子在慢性氟中毒大鼠肝脏中表达

目的 探讨自噬相关因子LC3A、Beclin-1及凋亡因子Bcl-2、Bax在慢性氟中毒大鼠肝脏中的表达意义。方法 将36只健康SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组、高氟组,分别用含氟量<1 mg/L的自来水和含氟5、50 mg/L的含氟水饲养6个月,观察氟斑牙形成情况;测定尿氟、骨氟含量以及大鼠肝功能;苏木素-伊红染色观察肝脏病理形态学改变;免疫组织化学法检测大鼠肝组织中微管相关蛋白轻链3A （LC3A）、哺乳动物ATG6同源蛋白（Beclin-1）及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白细胞基因伴随蛋白x （Bax）的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟含量分别为[（2.18±0.14）、（2.40±0.19） mg/L]、骨氟含量分别为[（237.42±18.48）、（248.00±14.72） mg/kg]均明显升高（P<0.05）;染氟组大鼠肝脏肝细胞索排列紊乱,肝细胞肿大,部分肝细胞胞质透亮,呈空泡样改变;与对照组比较,染氟组大鼠血清中谷丙转氨酶活性及谷草转氨酶活性明显升高（P<0.05）;低、高氟组大鼠肝脏LC3A[（35.35±2.71）、（44.10±6.72）]、Beclin-1[（57.56±12.1）、（74.76±18.67）]及Bax[（51.1±9.23）、（62.32±10.3）]蛋白表达明显高于对照组,Bcl-2蛋白表达分别为[（55.18±8.36）、（39.05±6.91）]明显低于对照组（P<0.05）。结论 过量氟可激活大鼠肝组织中自噬和凋亡因子,自噬和凋亡可能共同参与慢性氟中毒所致肝脏损伤的发病过程。     

血管生成因子A抑制剂对子宫内膜异位症模型大鼠干预效果及作用机制研究

目的:探究血管生成因子A(VEGF-A)抑制剂对子宫内膜异位症模型大鼠的干预效果及作用机制。方法:选取35只SD健康雌性大鼠,正常大鼠组5只,余30只建立子宫内膜异位症模型并分别干预(模型组、丹那唑组、VEGF-A抑制剂组各10只)。检测各组雌二醇(E_2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-6水平,Western blot法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-2、Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白表达。结果:VEGF-A抑制剂组E_2、P、FSH、LH水平,CRP、IL-8、IL-6水平,VEGF、HIF-1α及Bcl-2、caspase3相对表达量均低于丹那唑组、模型组,Bax相对表达量高于丹那唑组、模型组(均P0.05)。结论:使用VEGF-A抑制剂干预子宫内膜异位症模型大鼠,能够调控其性激素水平,抑制炎症反应和异位内膜组织生长,促进异位内膜组织凋亡。     

神经生长因子对高胆红素血症新生大鼠脑组织Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨神经生长因子干预对高胆红素血症新生大鼠脑组织Bcl-2和Bax表达的影响。方法选择7日龄SD新生大鼠90只,随机分为3组:对照组30例,高胆红素血症模型组30例,神经生长因子干预组30例,各组根据处死时间不同又分为6 h、12 h、24 h、48 h和72 h 5个亚组,每个亚组6只。各组在各时间点取脑组织,用苏木素-伊红染色法观察各组脑组织病理改变,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法测定脑组织细胞凋亡率,免疫组织化学法测定Bcl-2和Bax表达。结果 1与对照组相比,模型组海马区神经细胞凋亡增加,Bcl-2表达轻度升高,Bax表达明显升高,差异有统计学意义(P0.05);2与模型组比较,NGF干预后,Bcl-2表达明显升高(P0.05),Bax蛋白表达明显降低(P0.05),海马区神经细胞凋亡减少(P0.05),但Bax表达和凋亡率仍高于对照组(P0.05)。结论 1Bcl-2和Bax可能参与了新生大鼠高胆红素血症神经细胞凋亡的发生;2NGF可能通过上调Bcl-2表达,下调Bax表达,抑制神经细胞凋亡,从而发挥其脑保护作用。     

吗啡依赖大鼠脑超微结构及其Bcl-2表达研究

[目的]明确吗啡依赖对大鼠不同脑区神经元超微结构及Bcl-2表达的影响.[方法]将Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为吗啡依赖组、吗啡戒断组和空白对照组.采用递增法皮下注射吗啡建立大鼠吗啡依赖模型,等量注射生理盐水建立空白对照组.用H600透射电镜分别观察吗啡依赖组和空白对照组大鼠中脑腹侧背盖区(VTA)和蓝斑区(LC)神经元超微结构;用免疫组化和地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术分别检测两组大鼠VTA、LC区Bcl-2蛋白及其mRNA的表达情况.[结果]与对照组比较,吗啡依赖组大鼠VTA、LC区神经元均出现髓样变性;吗啡依赖组大鼠VTA和LC的Bcl-2蛋白及其mRNA表达水平均较空白对照组低,其差异具有统计学意义(P＜0.05).[结论]吗啡依赖可导致大鼠VTA和LC神经元超微结构受损;吗啡依赖可能通过下调抑凋亡因子Bcl-2的表达,促进上述脑区神经元凋亡形成;Bcl-2蛋白表达及其mRNA水平降低可能是吗啡依赖致神经元超微结构损伤的重要环节之一.     

孕哺期及成年期饮水高氟暴露致子代大鼠学习记忆损伤及大脑海马组织凋亡与自噬

目的研究饮水途径高氟暴露对大鼠学习记忆能力的影响,并探索凋亡和自噬在高氟致海马组织损伤的作用。方法妊娠的清洁级SD大鼠饮用含氟量不同(10、50、100 mg/L NaF)的自来水,子代鼠从出生至断乳前通过母乳接触NaF;断乳后,各组子代鼠接受与亲代相同的氟暴露处理至出生后第60天,以Morris水迷宫试验检测大鼠的空间学习记忆能力,通过Western blot方法检测海马组织中与凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)以及与自噬相关蛋白(Beclin-1、mTOR、LC3-Ⅱ和p62)的表达水平。结果与对照组相比,雄性子代大鼠100 mg/L NaF染毒组到达平台的潜伏期和路径距离明显增加(P0.05),雌性子代大鼠100 mg/L和50 mg/L NaF染毒组到达平台的潜伏期和路径距离也明显增加(P0.05);雌、雄子代大鼠100 mg/L和50 mg/L NaF染毒组子代大鼠海马组织中Bax、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平均明显上调(P0.05),Bcl-2、mTOR和p62蛋白表达水平均明显下调(P0.05)。结论孕哺期及成年期饮水高氟暴露致子代大鼠空间学习记忆能力的损伤可能与海马组织自噬作用增强有关,同时可能伴随海马组织凋亡发生。     

高功率微波辐射对大鼠脑HIF-1α表达影响

目的探讨高功率微波（high power microwave,HPM）辐射后大鼠不同脑区低氧诱导因子1α（hypoxia in-ducible factor-1 alpha,HIF-1α）的改变及其意义。方法60只Wistar雄性大鼠于0,30和100mW/cm2HPM辐射后6h,1,3和7d时活杀取大脑皮层和海马,采用苏木素-伊红染色观察形态改变,采用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等技术检测大鼠不同脑区HIF-1α蛋白和mRNA表达改变。结果对照组大鼠皮层和海马毛细血管形态规则,未见毛细血管间隙增宽;30和100m Wcm2组大鼠皮层和海马脑辐射后6h～1d毛细血管周隙增宽,3d达高峰,7d后恢复;对照组HIF-1α蛋白于皮层和海马神经细胞呈弱阳性,30和100m Wcm^2组皮层和海马神经元和胶质细胞核HIF-1α于辐射后6h～1d呈阳性,其后呈弱阳性;HIF-1α mRNA改变规律与其蛋白变化相同。结论脑内神经元的损伤和修复过程中HIF-1α表达增加,参与了毛细血管通透性升高的过程。     

AMP-活化蛋白激酶信号通路调控新生大鼠缺氧缺血性神经元凋亡机制

目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型的AMP-活化蛋白激酶(AMPK)、核转录因子FOXO3a及凋亡蛋白活化型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(CC3)表达水平变化,探讨抑制AMPK/FOXO3a信号通路对新生大鼠缺氧缺血神经元凋亡的保护作用机制。方法将64只7d龄SD大鼠按照随机数字表法分为4组:缺氧缺血组(HI组)、假手术组(sham组)、AMPK特异性抑制剂Compound C干预组(干预组)、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组(对照组),每组SD大鼠各为16只。建模方法:对HI组SD大鼠在乙醚麻醉下进行右侧颈总动脉结扎,采用氧、氮混合气体(8%O2、92%N2)缺氧处理2.5h;对sham组SD大鼠仅分离右侧颈总动脉,不结扎,不进行缺氧处理;对干预组和对照组SD大鼠分别于右侧脑室内注射等量Compound C和DMSO,30min后,采用氧、氮混合气体(8%O2、92%N2)进行缺氧处理。分别于建模24h后处死4组SD大鼠,取大脑皮质,采用Western印迹法定量检测各组SD大鼠模型大脑皮质的AMPK蛋白、p-AMPKα蛋白、总FOXO3a蛋白、细胞核FOXO3a蛋白、细胞质FOXO3a蛋白及CC3表达水平;应用原位缺口末端标记(TUNEL)染色法,检测凋亡神经元细胞。结果 (1)与sham组相比,HI组及对照组SD大鼠模型大脑皮质的AMPK蛋白水平与总FOXO3a蛋白水平均无显著变化,并且差异均无统计学意义(P0.05);p-AMPKα蛋白水平及细胞核FOXO3a蛋白水平均显著增高,细胞质FOXO3a蛋白水平均显著降低,CC3表达水平均显著增高,并且差异均有统计学意义(P0.01)。(2)与HI组及对照组相比较,干预组SD大鼠模型大脑皮质p-AMPKα蛋白水平及细胞核FOXO3a蛋白水平显著降低,细胞质FOXO3a蛋白水平显著增高,凋亡蛋白CC3表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P0.01)。(3)与sham组相比,HI组及对照组SD大鼠模型大脑皮质神经元细胞凋亡水平(TUNEL呈阳性细胞表达水平)均显著增高,并且差异均有统计学意义(P0.01);干预组SD大鼠模型大脑皮质神经元细胞凋亡水平,较HI组及对照组显著降低,差异亦有统计学意义(P0.01)。结论新生大鼠发生HIBD损伤时,AMPK发生磷酸化,活性增高;而抑制AMPK活性,可抑制FOXO3a核转位,下调凋亡蛋白CC3表达水平,减少神经元细胞凋亡。     

益生菌对力竭运动大鼠肠上皮细胞自噬的影响

目的研究补充益生菌对力竭运动大鼠肠上皮细胞自噬水平的影响。方法将SD大鼠随机分为安静对照组、力竭运动组,力竭运动+益生菌低、中、高剂量组。各组灌胃不同剂量的益生菌溶液,6周力竭运动训练后,经腹腔注射麻醉后迅速剖腹大鼠,取远端回肠30cm。通过透射电镜观察大鼠肠上皮细胞自噬变化和测定大鼠肠上皮细胞Atg16L1、Beclin-1和LC3 mRNA及蛋白表达。结果力竭运动组大鼠肠黏膜上皮细胞可见大量的自噬体,力竭运动+益生菌低剂量组大鼠自噬体数目明显较少,而力竭运动+益生菌中剂量和力竭运动+益生菌高剂量组大鼠没有自噬体的产生。ME组大鼠肠上皮细胞Atg16L1、Beclin-1、LC3 mRNA和蛋白表达均高于安静对照组(P0.01或P0.05);MEYZ组和MEYG大鼠肠上皮细胞Atg16L1、Beclin-1、LC3 mRNA表达均低于ME组(P0.01)。MEYZ组大鼠肠上皮细胞Beclin-1蛋白表达低于ME组(P0.05)。MEYD、MEYZ和MEYG组大鼠LC3蛋白表达均低于ME组(P0.01)。结论长时间的力竭运动诱发大鼠肠上皮细胞自噬体的产生,起到防御氧化应激致使肠上皮细胞受到损伤。通过补充益生菌后降低了Atg16L1、Beclin-1和LC3的表达。表明益生菌起到保护肠上皮细胞受到损伤和有效抑制反复力竭运动大鼠肠上皮细胞自噬的产生。     

生长抑素对内毒素诱导感染性休克大鼠肺损伤的保护作用

目的基于Toll-样受体4/核因子кB(TLR4/NF-κB p65)信号通路探讨生长抑素(SST)对内毒素诱导感染性休克大鼠肺损伤的保护作用。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组[10 mg/kg脂多糖(LPS)]、BAY11-7082组(LPS+10 mg/kg BAY11-7082)、SST组(LPS+22μg/kg SST)和SST+BAY11-7082(LPS+SST)组各12只。注射LPS后12 h,检测各组大鼠肺组织病理变化和细胞凋亡、肺组织湿/干质量(W/D)比值、LPS、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TLR4、髓样分化蛋白抗原(MyD88)、p65、磷酸化的NF-кB抑制蛋白(p-IκB)和裂解天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase)-3表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织W/D比值和细胞凋亡率升高,LPS、IL-6、IL-10和TNF-α水平升高,TLR4、MyD88、p65、p-IκB和cleaved Caspase-3表达升高(P0.05);与模型组比较,BAY11-7082组和SST组肺组织病理学评分、W/D比值和细胞凋亡率降低,LPS、IL-6和TNF-α水平下降,IL-10水平升高(P0.05),TLR4、MyD88、p65、p-IκB和cleaved Caspase-3蛋白表达下降(P0.05);与SST组比较,SST+BAY11-7082组肺组织病理学评分、W/D比值和细胞凋亡率降低,LPS、IL-6和TNF-α水平下降,IL-10水平升高,TLR4、MyD88、p65、p-IκB和cleaved Caspase-3蛋白表达下降(P0.05)。结论 SST可以抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低肺组织炎症反应,减轻内毒素诱导感染性休克大鼠肺损伤。     

LL-37诱导人鼻黏膜上皮细胞凋亡的潜在机制研究

目的 研究抗菌肽LL-37对人鼻黏膜上皮细胞凋亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。 方法 体外培养人鼻黏膜上皮细胞,用不同浓度的LL-37处理细胞后,CCK-8法鼻黏膜上皮细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)和Bax蛋白表达水平,ELISA法检测细胞培养上清中细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的分泌量。 结果 与0 μg/ml组细胞比,添加LL-37能够抑制鼻黏膜上皮细胞增殖,且呈浓度依赖性,诱导鼻黏膜上皮细胞发生凋亡,上调鼻黏膜上皮细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的表达,有效降低鼻黏膜上皮细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的分泌,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 LL-37能够在体外抑制鼻黏膜上皮细胞增殖,诱导细胞凋亡,其可能的作用机制与上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平,促进细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的分泌有关。     

米诺环素对海湾战争综合征模型大鼠海马细胞凋亡的影响

目的探讨米诺环素对海湾战争综合征(GWS)模型大鼠海马CA1区细胞凋亡和caspase-3表达的影响,为GWS的防治提供实验依据。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分4组:对照组、GWS模型组、米诺环素低剂量组〔15 mg/(kg·d)〕和高剂量组〔45 mg/(kg·d)〕。参照AbdelRahman法建立GWS大鼠模型。实验28 d结束后断头取脑。采用TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡,采用免疫组化方法检测同部位的caspase-3蛋白表达。结果对照组海马CA1区TUNEL阳性细胞数为每高倍视野(3.5±1.1)个,caspase-3蛋白积分光密度值为4.03±1.15;GWS模型组TUNEL阳性细胞数为(11.0±1.4)个,caspase-3蛋白积分光密度值为33.16±1.85,均明显高于对照组(P0.01)。低剂量和高剂量米诺环素组海马CA1区TUNEL阳性细胞数分别为(7.5±1.1)个和(7.7±1.2)个,caspase-3蛋白积分光密度值分别为15.12±1.10和16.98±1.15,均明显低于GWS模型组(P0.01)。高剂量和低剂量米诺环素组间差异无显著性(P0.05)。结论米诺环素可能通过下调caspase-3表达,对GWS大鼠海马神经细胞起到保护作用。     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H₂O₂诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。方法通过检测caspase(半胱天冬酶)-6和caspase-9活性水平考察C3G对损伤细胞的影响,并采用Western blot法检测cleaved caspase-3、cleavedPARP、Bcl-2和Bax的蛋白表达量变化。结果 H₂O₂损伤细胞后,凋亡相关蛋白酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L C3G预处理损伤细胞后,caspase-6和caspase-9活力显著低于损伤组(P<0.05),并呈浓度依赖性降低,cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白表达量均呈浓度依赖性下调,显著低于损伤组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较损伤组比显著提升(P<0.05)。结论矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H₂O₂诱导的HEK-293细胞损伤具有抗凋亡作用,其作用机制可能是通过调控caspa...     

HIF-1α及caspase-3在特发性胎儿生长受限胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨特发性胎儿生长受限(IFGR)患者胎盘组织中HIF-1α及caspase-3的表达及在发病机制的作用。方法:选取郑州大学第三附属医院2010年7月～2011年3月剖宫产分娩的IFGR孕妇30例作为实验组,同期因社会因素剖宫产分娩的正常足月孕妇30例作为对照组。采用免疫组化SP法检测两组胎盘组织中HIF-1α、caspase-3的表达。结果:①实验组及对照组的胎盘组织中均有HIF-1α、caspase-3蛋白不同程度的阳性表达。②HIF-1α、caspase-3在胎盘合体滋养细胞上的表达,实验组高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:①胎盘组织中HIF-1α、caspase-3表达增加可能是IFGR发病机制中的关键环节之一。②本结果为临床上应用干预手段预防或治疗IFGR提供依据。     

吲哚美辛对COPD大鼠TNF-α与Bcl-2和Bax表达的影响

目的:探讨吲哚美辛对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠趾长伸肌TNF-α及Bcl-2和Bax表达的影响.方法:100只健康Wistar大鼠随机分为模型组和对照组(A组).模型组采用熏香烟和气管内滴注猪胰蛋白酶(PEE)法建立COPD模型大鼠,以低于A组大鼠平均体重的90％判断发生营养不良的标准,将模型组大鼠分为COPD营养正常组(B组)和COPD营养不良组,COPD营养不良组随机化原则分为COPD营养不良生理盐水组(C组)、吲哚美辛1组(D组)、吲哚美辛2组(E组)、吲哚美辛3组(F组).A、B、C三组灌注等量生理盐水,D、E、F组给予不同剂量吲哚美辛(IND)灌胃干预.TUNEL法测定趾长伸肌细胞凋亡率,免疫组织化学法测定Bcl-2、Bax蛋白表达,双抗体夹心法测定血清及趾长伸肌肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度.结果:吲哚美辛干预后,E组趾长伸肌细胞凋亡率、Bcl-2、Bax的蛋白表达、趾长伸肌匀浆和吲哚美辛干预后血清TNF-α浓度低于C、D、F组,但高于A、B组,P＜0.05;E组趾长伸肌Bcl-2蛋白表达高于C、D、F组,低于A、B组,P＜0.05,结论:Bcl-2、Bax及TNF-α参与COPD模型大鼠趾长伸肌细胞凋亡,适当剂量的吲哚美辛可改善COPD营养不良模型骨大鼠趾长伸肌的凋亡.     

蒺藜果皂苷对大鼠脑缺血后神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的观察蒺藜果皂苷对大鼠脑缺血后的细胞凋亡率和相关蛋白（Bcl-2、Bax）的表达,探讨蒺藜果皂苷对大鼠脑缺血损伤的保护作用。方法60只Wistar大鼠随机分成5组：空白对照组、模型对照组、阳性药物舒血宁组、蒺藜果皂苷高剂量组和蒺藜果皂苷低剂量组。线栓法阻断一侧大脑中动脉,缺血24h制成脑缺血模型。流式细胞仪检测细胞凋亡率和蛋白的表达水平。结果模型组的细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显高于阳性药物组和蒺藜果皂苷高、低剂量组,而模型组的Bcl-2蛋白表达明显低于阳性药物组和蒺藜果皂苷高、低剂量组（P〈0.05）。结论蒺藜果皂苷能够抑制细胞凋亡,增加Bcl-2蛋白的表达而降低Bax蛋白的表达水平。