影响愈伤组织中次生代谢产物含量的因素研究进展

次生代谢产物是植物在长期进化过程中与生物和非生物因素相互作用的结果,在植物生长、发育和生理功能方面发挥着重要作用。药用植物的有效成分通常都是细胞次生代谢产物,其合成受环境等多种因素影响。利用愈伤组织培养获得目标产物,具有成本低、不受自然条件影响的优势。药用植物愈伤组织中次生代谢产物的积累量不仅受光照、温度、pH等环境因素的影响,而且,种质本身、植物生长调节剂和诱导子的使用亦会对其积累产生较大影响。该文就如何提高药用植物愈伤组织中次生代谢产物含量的影响因子进行综述,以期为进一步研究提供参考。     

龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的含量测定

目的:寻找可以作为评价龙葵药材质量的指标成分,提高龙葵药材的质量标准。方法:采用柱层析方法分离化学成分,应用光谱法进行结构鉴定,用高效液相色谱法测定其在龙葵药材不同部位的含量。结果:从龙葵药材中分离并鉴定了2个含量较高的甾体类生物碱苷澳洲茄碱(solasonine)和澳洲茄边碱(solamar-gine);建立了龙葵药材中澳洲茄碱、澳洲茄边碱的HPLC含量测定方法。结论:这两种生物碱在龙葵药材中含量较高,可用于龙葵药材的质量控制。     

诱导培养条件显著改变甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性

采用化学分析和高效液相色谱（HPLC）相结合的方法评价典型愈伤组织诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响,这些诱导培养条件包括甘草种属（胀果甘草和光果甘草）、外植体（胚轴和子叶）、光照条件（24 h 光照和24 h黑暗）和2种激素组合。以化学成分总黄酮为指标,采用单因素方差分析法（One-way ANOVA）评价不同诱导培养条件下获得的甘草愈伤组织的总黄酮含量,结果显示甘草种属、外植体和光照条件对甘草愈伤组织中总黄酮的含量影响显著（P<0.05）。采用HPLC指纹图谱的差异度评价不同诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响发现：诱导培养条件对愈伤组织的次生代谢产物的多样性有显著影响,激素组合（差异度=0.37）和光照条件（差异度=0.45）对甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性影响最大。上述结果对选择合适的愈伤组织和细胞系培养生产甘草药用次生代谢产物或活性组分具有重要的指导意义。     

丹参愈伤组织中次生代谢产物形成的研究

目的：研究诱导培养基中所含激素对丹参愈伤组织中次生代谢产物形成的影响。方法：将丹参外植体培养在含不同激素配比的诱导培养基上，并对其愈伤组织中所含次生代谢产物进行分析。结果与结论：２，４-Ｄ抑制水溶性总酚的形成，ＫＴ能提高总丹参酮的含量。     

钙离子对药用植物生长和次生代谢产物积累作用的研究进展

钙是植物生长发育必需的营养元素,也是细胞信号转导的第二信使。其不仅可以满足植物正常生长发育需求,还可以调控植物代谢。钙可以通过稳定细胞壁和细胞膜、提高离子吸收、参与信号转导等方式直接参与植物抗寒、抗热、抗旱、抗重金属毒害和抗盐胁迫等。但是,每种植物对钙的敏感程度不同,缺钙会影响植物的正常生长,适宜浓度的钙能促进植物生长,而钙浓度过高会对植物形成胁迫,抑制植物的生长发育、降低作物的产量。因此,保持植物体内钙离子含量的平衡对植物的正常生长发育具有重要意义。对钙离子对药用植物生长发育、生理生化特性和次生代谢产物积累影响的研究进行总结,探究药用植物与钙离子之间的关系,为药用植物资源开发提供参考。     

龙葵药材质量标准

目的:修订和完善龙葵药材的质量标准.方法:依据2010年版《中国药典》附录药品标准研究方法对龙葵药材进行显微、薄层鉴别,对10批龙葵药材的水分、灰分、酸不溶性灰分进行检查,并测定其有效成分含量.结果:确定了龙葵药材的显微特征,并建立了其TLC鉴别方法;水分不得＞10.0％,酸不溶性灰分不得＞3.0％;澳洲茄碱进样量在1.002～20.04μg内呈良好线性关系,澳洲茄边碱进样量在1.023 ～20.46 μg内呈良好线性关系.结论:不同产地所含澳洲茄碱与澳洲茄边碱的总量差异较大,建立的方法能准确反映龙葵的内在质量,可作为龙葵药材质量标准的修订内容.     

反相高效液相色谱法同时分析龙葵中3种甾体生物碱

目的:利用反相高效液相色谱法快速测定龙葵中3种甾体生物碱的含量.方法:采用Agilent Zorbax SB-C1s(4.6mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-1%磷酸为流动相,流速1.0 mL·min-1,进样量20μL,柱温30℃,205 nm条件下检测,以梯度洗脱方式在30 min内分离了澳洲茄碱、澳洲茄边碱和khasianine 3种生物碱.结果:澳洲茄碱含量测定的线性范围为0.860～10.320μg(r=0.999 7);澳洲茄边碱含量测定的线性范围为0.726～8.710μg(r=0.999 7);khasianine含量测定的线性范围为0.696～8.352μg(r=0.9998).方法的平均回收率分别为100.18%,99.08%,99.88%.结论:方法简便快速、准确度高,可用于龙葵药材的质量评价.     

南方红豆杉愈伤组织生长动力学及紫杉醇代谢动力学研究

目的通过愈伤组织细胞生长及其紫杉醇代谢动力学的研究,筛选确定南方红豆杉愈伤组织培养生产紫杉醇的最佳培养基配方与最佳收获期。方法以改良MS为基本培养基添加不同质量浓度的IBA、6-BA、GA3组合诱导培养南方红豆杉愈伤组织,通过测定愈伤组织鲜质量进行生长动力学研究,采用HPLC法检测不同生长阶段愈伤组织中紫杉醇的积累量,进行紫杉醇代谢动力学研究。结果改良MS+0.2 mg/L IBA+0.05 mg/L 6-BA+0.3 mg/L GA3、MS+0.2 mg/L IBA+0.01mg/L 6-BA+0.7 mg/L GA3及MS+0.2 mg/L IBA+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3培养条件均较有利于南方红豆杉愈伤组织的诱导培养,且紫杉醇的积累量也较高,最高可达0.037 76%。结论在添加IBA及6-BA的基础上适当增补GA3可使南方红豆杉愈伤组织诱导提前启动,缩短出愈时间,促进生长,降低褐变程度,增加愈伤组织中紫杉醇的积累量。愈伤组织的生长曲线呈S型,紫杉醇的积累呈线型增加,是一个逐渐积累的过程,但积累到一定程度就不再增加,且伴随着愈伤组织不断褐变。     

独一味幼苗生理特性和次生代谢产物对遮阴的响应

目的:研究遮阴处理对独一味幼苗生长和化学成分的影响,探索独一味对光照环境变化的适应机制,为幼苗期合理管理提供科学依据。方法:以二年生独一味幼苗为研究对象,测定遮阴处理处理后幼苗形态指标(叶面积、根长),生理指标[丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)活性等]和主要次生代谢产物8-O-乙酰山栀苷甲酯和山栀苷甲酯含量。结果:遮阴处理显著降低了独一味幼苗根长、单株叶片数目、叶面积、生物量和根冠比(P0.05),并显著增加了地上叶部分的生物量分配,全光照使更多的生物量分配至地下根。遮阴处理不仅显著降低了独一味叶片中叶绿素、脯氨酸和可溶性糖的含量(P0.01),还极显著地增加了叶片中过氧化物酶的含量(P0.01)。遮阴处理显著降低了独一味根及地上部分中8-O-乙酰山栀苷甲酯的含量及山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯总含量(P0.05)。结论:遮阴管理显著增加了独一味地上即药用部位的生物量;高原光照可能为独一味带来逆境效应,有利于独一味生物量积累,并促进2种环烯醚萜苷化合物的代谢,因此育苗管理应注意控制遮阴强度和时间。二年生独一味幼苗中化学成分含量符合2015年版《中国药典》规定,表明通过栽培可以满足资源供给。     

基于多指标结合化学计量学的龙葵果质量评价研究

目的 采用多指标结合化学计量学的方法综合分析龙葵Solanumnigrum果质量及关键指标,为其质量评价提供科学依据。方法 采用HPLC法建立龙葵果特征指纹图谱及澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量测定方法,并测定浸出物含量,使用SAS 14.0、SIMCA14.1软件对上述指标进行聚类分析（hierarchical clustering analysis,HCA）、主成分分析（principal component analysis,PCA）及偏最小二乘判别分析（discriminant analysis of partial least squares analysis,PLS-DA）,通过对吉林产地25批不同产区、不同采收期药材的分析,综合评价龙葵果质量及标志性成分。结果 建立的特征指纹图谱及澳洲茄碱、澳洲茄边碱含量测定方法稳定性较好。HCA分析可将25批样品聚为2大类,分类主要与产区有关,I类药材为铁东区及梨树县的孤家子、榆树台产区;II类药材为梨树县的杏山、北夏家、泉眼沟、獾子洞产区。用3个主成分对龙葵果药材进行综合评价,结果表明I类药材综合得分及排名较高,质量较优。根据PLS-DA分析...     

Inhibitory effect of Solanum nigrum on thioacetamide-induced liver fibrosis in mice

AIM: Solanum nigrum (Solanaceae) has been used in traditional folk medicine for its hepatoprotective agent. The purpose of this study was to investigate the effects of Solanum nigrum extract (SNE) on thioacetamide (TAA)-induced liver fibrosis in mice. MATERIALS AND METHODS: Hepatic fibrosis was produced by TAA (0.2g/kg, i.p.) three times a week for 12 weeks. Mice in the three TAA groups were treated daily with distilled water and SNE (0.2 or 1.0g/kg) via gastrogavage throughout the experimental period. RESULTS: SNE reduced the hepatic hydroxyproline and alpha-smooth muscle actin protein levels of TAA-treated mice. SNE inhibited TAA-induced collagene (alpha1)(I) and transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) mRNA levels in the liver. Histological examination also confirmed that SNE reduced the degree of fibrosis caused by TAA treatment. CONCLUSION: Oral administration of SNE significantly reduces TAA-induced hepatic fibrosis in mice, probably through the reduction of TGF-beta1 secretion.     

Phytochemical study of Solanum lycocarpum (St. Hil) unripe fruit and its effects on rat gestation

Solanum lycocarpum, St. Hil (Solanaceae) is a common native shrub in the Brazilian cerrado. The fruits are used in folk medicine as a hypoglycaemic agent in the management of diabetes, obesity and to decrease cholesterol levels. In this study the glycoalkaloids, solamargine and solasonine, were isolated from unripe fruits of S. lycocarpum. To evaluate the effects of the fruits on gestation, pregnant rats (n=25) were fed from day 6 to 22 with chow containing 10% of dried and ground unripe fruits. The control group (n=21) received regular chow. During and after the treatment period the dams showed reduced body weight and slower body weight gain, even with no change in food and water intake, evidencing mild maternal toxicity. Gestation was not significantly impaired, although experimental fetuses presented reduced body length at birth. Also, 20% of the treated dams showed one or two dead pups at birth. On day 22 of gestation and on post-natal day 1, the levels of metabolites of the sex hormones oestradiol, progesterone and testosterone were measured in faeces by radioimmunoassay. On post-natal day 1, tissue portions from the dams were collected for histopathological evaluation. No alterations were detected in either study. The results suggest that S. lycocarpum fruit did not impair gestation, however, it did promote mild maternal toxicity and mild fetotoxic effects if ingested as a food source during the gestation period. This study has implications for pregnant women, who employ phytotherapeutic formulations under the impression that they are harmless.     

龙葵的研究进展

龙葵作为一种传统中药,在临床应用已久,文章从其化学成分、药理作用、临床应用等方面来阐述近年龙葵的研究成果,为深入研究该中药提供进一步参考.     

龙葵中澳洲茄边碱的提取工艺

目的:研究龙葵药材中澳洲茄边碱的最佳提取工艺。方法:以澳洲茄边碱提取率为指标,采用L9(34)正交试验,考察乙醇体积分数、料液比、提取时间及提取次数对提取率的影响,优选出最佳的提取工艺。用高效液相法测定澳洲茄边碱的含量。结果:优选出的澳洲茄边碱最佳提取工艺为用80%乙醇20倍量回流提取2次、每次4 h。结论:提取工艺合理可行,适用于龙葵中澳洲茄边碱的提取。     

澳洲茄边碱提取纯化工艺及其抗肿瘤作用的研究

目的:从龙葵中提取纯化澳洲茄边碱,并探讨其抗肿瘤活性.方法:龙葵药材粗粉80％乙醇回流提取,以硅胶柱色谱和重结晶的方法纯化澳洲茄边碱,最后鉴定结构和检查纯度;MTT法筛选澳洲茄边碱对人肿瘤细胞的体外生长抑制作用,并研究其对肝癌H22和EAC小鼠移植瘤的作用.结果:澳洲茄边碱含量达到97.9％;体外对6种肿瘤细胞均具有明显抑制作用,并且在2.4 mg· kg-1的给药剂量下对肝癌H22和EAC小鼠移植瘤具有明显的抑制作用.结论:澳洲茄边碱具有较好的抗肿瘤效果.     

高效液相色谱法测定龙葵中澳洲茄碱的含量

目的:建立测定龙葵中澳洲茄碱含量的HPLC分析方法。方法:采用Agilent Zorbax SB-C18(4.6×150mm,5μm)色谱柱,以乙腈-1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长205nm,柱温30℃。结果:澳洲茄碱在0.812-8.120μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,r=0.9998;样品的平均加样回收率为100.22%;方法精密度及重现性良好。结论:方法简便、准确,结果稳定、重现性好。     

基于DNA条形码的龙葵系统发育及变异位点分析

目的对来自主要龙葵产区龙葵种质资源的转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)和trn H-psb A基因间隔区序列进行系统发育学分析,为龙葵资源的合理利用和道地性评价提供理论基础。方法用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法扩增龙葵ITS区和trn H-psb A的DNA序列,并与美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库进行比对获取ITS1+ITS2和trn H-psb A的DNA序列。用邻接法(Neighbor joining,NJ)和最大简约法(maximum parsimony,MP)构建系统发育树,用Kimura two-parameter(K2-P)模型分析遗传距离,用Clustal X和DNAman软件进行多重比对。结果 17个龙葵样品的ITS1序列长度均为230 bp,ITS2序列长度均为206 bp,trn H-psb A序列长度为446 bp或447 bp,3个序列分别存在7个、2个和3个变异位点。系统发育的方法将中国龙葵种质资源聚为3个类群,这些类群与其所处的纬度存在一定的相关性。遗传距离的分析结果显示来自广东梅州的样品与来自北京和河北等地的样品存在最大的遗传距离。结论系统发育和变异位点的分析为中国龙葵资源的利用和进化研究,以及龙葵资源的道地性评价提供了理论基础,变异位点的分析还可应用于相关种质资源的鉴定。