内质网应激的发生及其与多囊卵巢综合征的关系

内质网(endoplasmic reticulum,ER)是最大的细胞器之一,是细胞膜所有组件、蛋白、脂类和类固醇合成的部位.当未折叠/错误折叠蛋白在内质网内堆积时将导致内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS).ERS是ER生理功能发生紊乱的一种病理状态,是机体的一种自我防御机制,持久而强烈的ERS可引起细胞不可逆损伤甚至凋亡,因此其是促细胞凋亡的一条重要途径.多囊卵巢综合征患者卵巢窦卵泡颗粒细胞异常凋亡,表明ERS介导的颗粒细胞凋亡可能与多囊卵巢综合征的发生有关.     

镉对体外大鼠卵巢颗粒细胞凋亡影响

镉(cadm ium)是一种有毒的重金属元素,美国毒物管理委员会(ATSDR)已将其列为第6位危害人类健康的有毒物质^[1].它在生活环境和作业场所广泛存在,能引起人体及动物多器官和系统损害,半衰期较长.研究显示,镉对雌性哺乳动物的生殖系统具有明显毒性作用^[2-4].本研究采用卵巢颗粒细胞培养体外染毒方法,观察镉对卵巢颗粒细胞凋亡的影响,并进一步探讨其可能作用机制.1材料与方法1.1实验动物22~27日龄健康雌性SD大鼠(南京中医药大学动物实验中心).层流柜饲养,温度(24±2)℃,湿度60%,普通饲料喂养,自由饮水.     

一次性腹腔内铅染毒对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响

为探讨铅对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率的影响,本研究将72只25日龄SPF级ICR雌性小鼠随机分为1和2mg/kg乙酸铅染毒组和对照组(生理盐水),每组24只.预饲2 d后,每只小鼠腹腔注射8 IU囊泡包埋的促卵泡素(FSH).48 h后,腹腔注射染毒乙酸铅,染毒剂量为0.2 ml/只.分别于染毒后48和96 h用流式细胞仪测定卵巢颗粒细胞凋亡率.结果 显示.染毒48 h后,对照组和1、2mg/kg乙酸铅染毒组颗粒细胞凋亡率分别为(7.6666±1.9675)%,(6.1000±0.435 9)%,(6.833 3±1.238 7)%,3者间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).染毒96 h后,1、2 mg/kg乙酸铅染毒组颗粒细胞凋亡率分别为(16.9000±2.433 8)%和(22.933 3±4.543 3)%.均高于对照组[(8.2000±1.50444)%1,差异有统计学意义(P＜0.05).与染毒48 h比较.染毒96 h后各乙酸铅染毒组的细胞凋亡率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).表明铅对卵巢颗粒细胞凋亡的促进作用具有时间依赖性和一定的剂量相关性.     

芹菜素对雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡影响

目的 探讨芹菜素(apigenin,Api)对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 选情前期成年雌性SD大鼠20只,取卵巢颗粒细胞进行原代细菌培养,贴壁后随机分为4组(对照组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组),加入处理因素.培养结束后,收集各组培养卵巢颗粒细胞,经苏木精-伊红染色和吖啶橙染色观察颗粒细胞形态,经MTT法及流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡率,观察Api对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响.结果 MTT法检测对照组,Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组A值分别为(0.87±0.059)、(0.29±0.057)(0.49±0.03)、(0.63±0.035);实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞数量减少,出现凋亡细胞;流式细胞仪检测对月强组、Api 10-4M组、Api 10-5M组、Api 10-6M组的颗粒细胞凋亡率分别为(3.63±0.37)%、(36.37±2.28)%、(34.67±1.96)%、(30.92±1.65)%,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),提示实验组颗粒细胞凋亡率明显增高.结论 Api能抑制卵巢颗粒细胞的增殖,并促进其凋亡.     

内障丸对多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:探讨内障丸对多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法:将60只24日龄雌性SD大鼠随机分为6组,分别为内障丸低剂量组、内障丸中剂量组、内障丸高剂量组、36日模型组、67日模型组和正常对照组。从36日造模成功后开始给药,连续30天。采用TUNEL法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡情况。结果:内障丸高剂量组大鼠与67日模型组相比卵巢颗粒细胞凋亡明显减少。结论:内障丸可抑制多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,改善卵巢功能。     

十溴联苯醚诱导小鼠海马神经元细胞氧化应激和凋亡的机制

目的探索十溴联苯醚(PBDE-209)诱导小鼠海马神经元细胞凋亡的潜在机制。方法原代海马神经元细胞和海马神经元细胞系HT-22用0、6.25、12.5、25、50和100μg/mL PBDE-209处理24 h。检测原代海马神经元细胞SOD活性,MDA、NO和GSH的含量,用Annexin V/PI双染法检测海马神经元细胞系HT-22细胞凋亡情况,用免疫蛋白印迹Western blot检测Bax、Bcl-2、CHOP、GRP78、PERK和Caspase-12蛋白表达水平。结果染毒组原代海马神经元细胞和HT-22细胞系细胞存活率显著降低(P0.05)。原代海马神经元细胞MDA、NO含量显著升高(P0.05),GSH含量、SOD活性显著降低(P0.05);原代海马神经元细胞的Bax/Bcl-2比值、CHOP、Caspase-12蛋白表达水平升高(P0.05)。HT-22细胞系GRP78、PERK、Caspase-12表达水平和细胞凋亡率升高(P0.05)。结论氧化应激和内质网应激可能参与PBDE-209诱导的海马神经元细胞凋亡过程。     

多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞凋亡研究进展

多囊卵巢综合征（PCOS）是一种以内分泌紊乱为主、多种代谢异常导致的异质性临床综合征。PCOS患者双侧卵巢有大量窦卵泡存在,但是不能周期性产生成熟卵泡,其病理机制尚不清楚。目前认为原发性、内在性卵泡生长异常可能是引起PCOS不排卵及临床内分泌改变的病理基础。研究表明,内在性的卵泡发育异常可能与卵巢颗粒细胞的凋亡调控失常有关。通过对PCOS患者卵巢颗粒细胞凋亡的研究,为PCOS病理机制研究提供相关的理论依据,为临床治疗提供新的方向和途径。     

多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞凋亡研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种以内分泌紊乱为主、多种代谢异常导致的异质性临床综合征.PCOS患者双侧卵巢有大量窦卵泡存在,但是不能周期性产生成熟卵泡,其病理机制尚不清楚.目前认为原发性、内在性卵泡生长异常可能是引起PCOS不排卵及临床内分泌改变的病理基础.研究表明,内在性的卵泡发育异常可能与卵巢颗粒细胞的凋亡调控失常有关.通过对PCOS患者卵巢颗粒细胞凋亡的研究,为PCOS病理机制研究提供相关的理论依据,为临床治疗提供新的方向和途径.     

毒死蜱对小鼠卵巢的毒性及其凋亡基因表达水平的影响

目的研究毒死蜱对小鼠卵巢的生殖毒性及对相关凋亡基因表达水平的影响。方法将40只健康6周龄无生育史清洁级ICR雌性小鼠按体重随机分为4组,分别为阴性对照(玉米油)组和7.5、15.0、30.0 mg/kg毒死蜱染毒组(采用灌胃方式染毒,染毒容量为10 ml/kg,每天1次,每周连续染毒6 d),每组10只。染毒时间为2周。统计各期卵泡构成和颗粒细胞凋亡情况,检测相关凋亡基因的表达水平。结果与阴性对照组比较,15.0、30.0 mg/kg毒死蜱染毒组原始卵泡以及30.0 mg/kg毒死蜱染毒组闭锁卵泡的构成比均较高,15.0、30.0 mg/kg毒死蜱染毒组生长卵泡以及30.0 mg/kg毒死蜱染毒组成熟卵泡的构成比均较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着毒死蜱染毒剂量的升高,原始卵泡的构成比呈上升趋势,成熟卵泡的构成比呈下降趋势,生长卵泡的构成比呈先上升后下降的趋势,而闭锁卵泡的构成比呈先下降后上升的趋势。仅30.0 mg/kg毒死蜱染毒组卵巢颗粒细胞凋亡指数显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着毒死蜱染毒剂量的升高,小鼠卵巢颗粒细胞凋亡指数呈上升趋势。15.0、30.0 mg/kg毒死蜱染毒组小鼠卵巢组织中mch3 mRNA的表达增高,bcl-2 mRNA的表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着毒死蜱染毒剂量的升高,小鼠卵巢组织中mch3 mRNA的表达呈上升趋势,bcl-2 mRNA的表达呈下降趋势。结论毒死蜱具有雌性生殖毒性,通过上调mch3的表达和下调bcl-2基因的表达,促进颗粒细胞凋亡,诱导卵泡闭锁,引起卵巢损伤,造成小鼠生育力降低。     

卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响

目的:探讨卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响。方法:收集2016年5月—2017年4月因输卵管性不孕行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的80例患者的卵巢颗粒细胞,根据妊娠结局分为临床妊娠组40例、未妊娠组40例。采用免疫细胞化学、蛋白质印迹(Western blotting)方法检测2组患者颗粒细胞GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测2组患者GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达,并进行相关性分析。结果:GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3在2组颗粒细胞中均有表达,其中临床妊娠组GOLPH3、Bcl-2的表达高于未妊娠组(P0.05),而Bax、Caspase-3的表达低于未妊娠组(P0.05)。相关性分析显示,GOLPH3表达与Bcl-2表达呈显著正相关(P0.001),与Bax、Caspase-3表达呈显著负相关(均P0.001),与优质胚胎数、优质囊胚数、可利用胚胎数呈显著正相关(均P0.001)。结论:卵巢颗粒细胞中GOLPH3表达水平可能通过Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡信号转导通路调控颗粒细胞凋亡作用,并进而对卵母细胞的发育潜能产生影响。     

卵巢颗粒细胞瘤的诊断和治疗研究进展

卵巢肿瘤种类繁多，而性索间质类肿瘤相对少见，约占卵巢肿瘤的5％，而颗粒细胞瘤（granulosa cell tumot，GCT）是性索间质肿瘤中最常见的一种。GCT呈低度恶性，大多数患者诊断时属手术病理分期Ⅰ期，5年生存率高达90％，但是易远期复发，20年生存率低于50％，近年来，随着人们对GCT认识地不断深入，其诊断和治疗有了一些新的进展。     

亚慢性甲苯染毒对大鼠卵巢的毒性作用

目的:探讨亚慢性甲苯染毒对大鼠卵巢的直接毒性作用。方法:将40只雌性大鼠随机分为对照组和甲苯染毒组。对照组给予1 ml不含甲苯的玉米油,染毒组甲苯剂量从低到高分别为35、70、330 mg/kg,连续染毒40～45天,观察甲苯对卵巢脏器系数、组织结构的影响;计数各级卵泡及黄体数目,用TUNEL法检测颗粒细胞凋亡率,并测血清E2、P的浓度。结果:①中、高剂量甲苯组卵巢脏器系数较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。②4组之间原始卵泡数目无显著改变,随着染毒剂量的增加,生长卵泡减少,闭锁卵泡增加,黄体数目减少,且中、高剂量组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。③中、高剂量甲苯组颗粒细胞凋亡率(26.6%,35.3%)高于对照组(10.9%),差异有统计学意义(P<0.001)。④中、高剂量甲苯组E2、P较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:亚慢性甲苯染毒对大鼠卵巢有毒性作用,且与甲苯剂量呈正相关。     

颗粒细胞在卵母细胞发育成熟中的作用

卵泡的发育是涉及多种细胞、多个阶段的复杂过程,其中颗粒细胞和卵母细胞是构成卵泡的重要细胞,卵泡的形成需要颗粒细胞与卵母细胞间密切的相互作用。在促性腺激素等多种激素和信号分子作用下,颗粒细胞增殖、分化,并通过间隙连接与周围的颗粒细胞、卵母细胞、膜细胞进行物质交换和信号传递,卵母细胞也可分泌多种因子反作用于颗粒细胞。颗粒细胞与卵母细胞间的相互作用涉及多条信号通路,这些信号通路间同样存在相互影响,决定卵泡的成熟或闭锁。当这些信号通路被过度激活或抑制时,可影响细胞因子的生成或传递,从而引起颗粒细胞或卵泡的凋亡,具体机制尚未明确。本文就卵泡的形成,颗粒细胞与卵母细胞、膜细胞在发育过程中的相互作用以及涉及的重要信号通路进行综述。     

DahlS高血压大鼠卵巢的细胞凋亡研究

目的　通过对DahlS高血压大鼠卵巢颗粒细胞及黄体细胞凋亡的初步研究 ,以期阐明高血压时卵巢的细胞凋亡特征。方法　以日本引进DahlS高血压大鼠为研究对象 ,选用生后 5周的DahlS雌性大鼠随机分为实验组、对照组 ,分别投予 8%食盐饲料、正常饲料 ,于 11、13、15周龄取材。应用光镜 ,电镜 ,原位末端标记试剂盒(TUNELBox) ,流式细胞等技术 ,对凋亡的颗粒细胞及黄体细胞进行定性、定位及定量。结果　随高血压病程延长、病情加重 :⑴光镜下观察实验组生长卵泡中颗粒细胞排列不整齐 ,松散 ,闭锁卵泡数目增多 ,黄体数目减少。⑵TUNEL染色可见凋亡在生长卵泡的颗粒细胞中均有发生 ,闭锁卵泡颗粒细胞凋亡最显著 ,黄体细胞未见TUNEL阳性细胞。⑶电镜下观察颗粒细胞及黄体细胞凋亡的特征为核周间隙增宽 ,核固缩 ,染色质边集 ,凝聚 ,线粒体嵴模糊紊乱 ,腔内出现高电子密度异常颗粒 ,滑面内质网减少 ,类脂呈板层状改变。⑷流式细胞检测显示卵巢细胞凋亡率逐渐上升 ,13、15周龄实验组凋亡率分别为 (6 4 2± 1 0 6 ) %、(6 6 7± 2 11) %均明显高于对照组(t =3 0 2 7、3 0 85 ,P <0 0 1)。⑸卵巢细胞凋亡率与血压升高呈正相关 (γ =0 76 8,P <0 0 1)。结论　高血压能加重卵巢的细胞凋亡并有可能导致生殖功能衰退     

穿心莲内酯诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制

目的:明确穿心莲内酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞株,经穿心莲内酯处理后MTS法检测细胞的增殖情况,荧光显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,蛋白印迹(Western blot)方法检测内质网应激相关蛋白CHOP、凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达变化.结果:穿心莲内酯可以剂量依赖地抑制HeLa细胞的增殖(P＜0.05),引起细胞凋亡相关的形态学变化,诱导细胞凋亡(P＜0.05),引起CHOP蛋白的表达上调,活化Caspase-3和Caspase-9蛋白.结论:穿心莲内酯可以通过内质网应激途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡.