漆黄素通过调控TLR4/NF-κB通路减轻大鼠肝细胞缺氧/复氧损伤北大核心CSCD

目的探讨漆黄素对大鼠肝细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法构建BRL-3A大鼠肝细胞H/R模型,并给予漆黄素处理。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,微板法检测细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的水平,实时定量PCR检测BRL-3A细胞Toll样受体4(TLR4)、核因子κBp65(NF-κBp65)mRNA水平,Western blot法检测TLR4、NF-κBp65蛋白水平。结果 H/R处理的BRL-3A细胞存活率下降,细胞凋亡增多,培养细胞上清中ALT、AST水平和IL-1β、TNF-α升高;漆黄素处理可提高细胞存活率,减少细胞凋亡,降低ALT、AST水平,抑制IL-1β、TNF-α的释放,同时抑制H/R诱导的TLR4、NF-κBp65水平升高。结论漆黄素可能通过调节TLR4/NF-κB信号通路减轻大鼠肝细胞H/R损伤。     

人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究

目的　研究人白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制。方法　以逆转录病毒为载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )细胞。台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL 4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c fos、c jun、c myc表达的变化。流式细胞仪AnnexinⅤ /PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p5 3、bcl 2的蛋白表达。结果　 (1)人IL 4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0 /G1期阻滞 ,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c fos、c jun、c myc表达降低 (P <0 .0 0 1)。细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化 ;(2 )较空载体修饰及野生型HepG2细胞 ,IL 4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪亦检测到 18.5 %± 4.7%的凋亡细胞 ;(3)人IL 4基因修饰增加p5 3而抑制bcl 2表达 (P <0 .0 5 )。结论　人IL 4基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化 ,诱导凋亡细胞可能与上调p5 3蛋白及抑制bcl 2蛋白表达有关。     

中成药甘舒胶囊对抗氧化应激诱导的肝细胞损伤

目的探讨中药甘舒胶囊对抗氧化应激损伤的肝细胞保护作用。方法在Chang肝细胞建立氧化应激(H2O2)损伤的实验模型,应用甲氮甲唑蓝(MTT)检测法。PI染色流式细胞仪(FCM)及Hoechst 33258染色法等检测甘舒对抗H2O2诱导Chang肝细胞的细胞毒性及凋亡的细胞保护作用。结果H2O2呈浓度依赖性地降低Chang肝细胞的存活率;在自身不影响Chang肝细胞存活率的浓度(1～100μg/ml)范围内,甘舒呈浓度依赖性地对抗300μmol/L和400μmol/LH2O2对肝细胞存活率的抑制作用;另方面,在0～800μmol/L浓度范围内,H2O2呈浓度依赖性地增加Chang肝细胞的凋亡率;100μg/ml、500μg/ml和1mg/ml的甘舒本身不影响肝细胞的凋亡率,但却能显著地抑制300μmol/LH2O2诱导的肝细胞凋亡。结论中药甘舒胶囊具有抗氧化应激作用,可显著对抗氧化应激(H2O2)诱导的肝细胞损伤。     

金属硫蛋白降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡

目的 研究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)在金属硫蛋白(MT)减轻大鼠砷中毒肝细胞凋亡中的作用.方法 建立MT治疗亚砷酸钠(NaAsO2)诱导的大鼠砷中毒肝损伤模型,用MT治疗2周,以TUNEL法检测肝细胞凋亡,免疫组化法、Western blot检测大鼠肝脏GRP78、CHOP蛋白表达.结果 砷中毒模型组大鼠肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达较对照组显著升高(P＜0.05),MT治疗组肝细胞凋亡、肝组织GRP78和CHOP蛋白表达明显回降(P＜0.05),但仍然高于对照组(P＜0.05).结论 MT可通过降低GRP78和CHOP蛋白表达减轻大鼠砷中毒所致的肝细胞凋亡.     

葫芦素B对大鼠肝细胞凋亡的保护作用

目的观察葫芦素B对脂多糖(LPS)所致大鼠肝细胞凋亡的保护作用.方法用光镜、TUNEL染色和流式细胞仪(FCM)检测肝细胞凋亡.结果LPS1.4mg/kg,ip后8h出现凋亡细胞增多,16h达到高峰,24h降低.凋亡细胞主要分布在中央静脉周围及肝包膜下.葫芦素B0.1mg/kg或0.2mg/kg在给LPS后立即sc能明显减少凋亡细胞数,以0.2mg/kg组作用最显著.结论葫芦素B可通过抑制肝细胞凋亡产生保肝作用.     

肝细胞生长因子对过氧化氢诱导肝细胞凋亡的影响

背景：肝细胞生长因子对多种细胞具有保护作用。 目的：观察肝细胞生长因子对过氧化氢诱导肝细胞凋亡的保护作用及其机制。 方法：采用人LO2肝细胞系,随机分成3组：正常对照组为正常培养的LO2细胞;模型组加入100 mmol/L过氧化氢作用LO2细胞4 h;肝细胞生长因子组加入50 mg/L 肝细胞生长因子预处理LO2细胞24 h,再加入100 mmol/L过氧化氢继续培养4 h后处理细胞。 结果与结论：体外培养的LO2细胞经100 mmol/L过氧化氢作用4 h后,LO2细胞可出现明显的凋亡现象,表现为细胞存活率降低(P < 0.01),Caspase-3蛋白表达增加(P < 0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.01)。给予质量浓度50 mg/L 肝细胞生长因子预处理24 h后再加入100 mmol/L过氧化氢继续培养4 h,LO2细胞的凋亡被显著抑制(P < 0.01),说明肝细胞生长因子可通过增加LO2细胞Bcl-2的表达来抑制过氧化氢诱导的LO2细胞凋亡。     

姜黄素对ERS诱导NASH大鼠肝细胞保护作用的研究

目的:探讨姜黄素是否通过抑制内质网应激(ERS)来减轻非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝细胞凋亡,从而发挥对肝脏的保护作用。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=10)及姜黄素组(n=10)。模型组和姜黄素组采用高脂饮食喂养4周以建立NASH模型。继续喂养4周,姜黄素组每日给予姜黄素(200 mg/kg)灌胃,模型组与正常对照组给予等量生理盐水。4周后处死大鼠,留取血液及肝脏组织,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;HE染色观察肝组织病理学变化;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达;TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清ALT和AST水平均显著升高,姜黄素组大鼠血清ALT和AST较模型组显著降低(P0.05);同时,姜黄素组大鼠的肝细胞脂肪变性及炎性程度均较模型组减轻,未见明显坏死灶。模型组GRP78和CHOP蛋白的表达水平均较正常对照组显著增加,姜黄素组GRP78和CHOP的表达水平较模型组显著降低(P0.01)。TUNEL结果表明,模型组大鼠肝组织内凋亡细胞较正常对照组增多,姜黄素组大鼠的凋亡肝细胞较模型组减少。结论:高脂饮食能诱发肝脏细胞发生过度ERS,从而启动细胞凋亡,导致NASH的发生。姜黄素减轻肝细胞凋亡的作用机制可能与其抑制ERS有关。     

匹诺塞林缓解大鼠肝细胞系BRL-3A低氧/复氧损伤

目的探讨匹诺塞林(PIN)对低氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将大鼠肝细胞(BRL-3A细胞系)分为正常对照组、PIN实验组、低氧复氧损伤模型组和PIN预处理组。CCK-8检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞计量术检测细胞凋亡;检测细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)活性;ELISA检测TNF-α和IL-1β含量;Western blot检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65蛋白水平;RT-q PCR检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65mRNA表达。结果在H/R条件下细胞存活率明显降低(P0.01),细胞凋亡率增高(P0.001),ALT活性升高(P0.01),IL-1β和TNF-α含量增多(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平显著提高(P0.01)而IκB-α降低(P0.05);经PIN预处理后,细胞存活率显著提高(P0.01),细胞凋亡率显著减小(P0.001),ALT活性降低(P0.01),IL-1β和TNF-α含量降低(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平明显降低(P0.01)而IκB-α升高(P0.05)。结论 PIN对H/R诱导的BRL-3A肝细胞的损伤具有保护作用,且该作用可能是通过TLR4/NF-κB信号通路实现的。     

肝细胞生长因子在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下对原代肝星状细胞增殖及凋亡的影响**☆

背景：活化的肝星状细胞是肝纤维化的关键因素,研究表明肝细胞生长因子能促进星状细胞凋亡,其具体机制可能与增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导星状细胞凋亡有关。 目的：观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下,肝细胞生长因子对原代肝星状细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其可能机制。 方法：将SD大鼠原代肝星状细胞复苏、传代,细胞增殖明显时用于实验。实验分为4组：空白对照组为单纯肝星状细胞培养;肝细胞生长因子组：将100 μg/L肝细胞生长因子作用于肝星状细胞;TRAIL组：将2 mg/L的TRAIL作用于肝星状细胞;肝细胞生长因子+TRAIL组：将肝细胞生长因子预先刺激肝星状细胞24 h,再加入2 mg/L TRAIL。 结果与结论：MTT检测显示肝细胞生长因子及TRAIL分别在50~200 μg/L、0.5~1.5 mg/L各浓度下对肝星状细胞增殖抑制率无影响,TRAIL在2 mg/L作用下对肝星状细胞有抑制作用。流式细胞仪检测肝细胞生长因子+TRAIL组的中晚期凋亡率明显高于空白对照组及肝细胞生长因子组(P < 0.05);肝细胞生长因子+TRAIL组DR5荧光强度明显高于其他3组(P < 0.01)。提示在TRAIL作用下,肝细胞生长因子能促进肝星状细胞的凋亡、抑制其增殖。可能与肝细胞生长因子上调活化肝星状细胞表面DR5表达有关。      

肝细胞生长因子拮抗放线菌素D诱导的肝细胞凋亡及机制探讨

目的： 探讨肝细胞生长因子（HGF）对放线菌素D (ActD)诱导HL7702肝细胞凋亡的拮抗作用及可能机制。 方法： 本实验采用HL7702正常人肝细胞株，MTT法检测ActD对肝细胞存活力的影响；Hoechst33342进行凋亡形态学染色；DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡数量；Western blotting方法检测细胞总Akt及磷酸化Akt蛋白的表达。 结果： ActD可以诱导HL7702肝细胞凋亡，其浓度在0.25-8 mg/L范围内呈现剂量效应关系；PI3K特异性抑制剂wortmannin能够增强ActD诱导的肝细胞凋亡作用；肝细胞生长因子(HGF)对ActD诱导的肝细胞凋亡有拮抗作用，在一定剂量范围内呈现剂量效应关系；并且HGF能够激活PI3K/Akt信号转导途径；进一步用wortmannin阻断PI3K/Akt信号途径后，HGF的拮抗凋亡作用被抑制。 结论： 一定剂量的ActD可以诱导肝细胞凋亡；wortmannin能够增强ActD诱导肝细胞凋亡的作用；HGF对ActD诱导的这种细胞凋亡有明显的拮抗作用，并且HGF的抗凋亡作用与其激活细胞内PI3K/Akt信号转导通路有关。     

4-HNE通过抑制TNF-α介导的NF-κB活化诱导酒精性肝损伤

 目的：通过体外细胞及体内动物实验,研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的4-羟基壬烯酸（4-HNE）致敏肝细胞发生死亡的作用及机制。方法：以人肝细胞株HepG2及小鼠原代肝细胞为细胞模型,通过乳酸脱氢酶（LDH）释放及MTT比色法检测4-HNE对TNF-α诱导的肝细胞死亡的作用,利用Western blotting技术检测细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平,通过Western blotting和ELISA技术检测细胞核内NF-κB（p65）的表达及其与DNA结合活性。以C57BL/6小鼠为动物模型,利用HE染色、ELISA、Western blotting及TUNEL等技术,检测长期摄入酒精前后动物肝组织形态、甘油三酯（TG）水平、4-HNE水平、TNF-α水平及血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的变化。结果：（1） 4-HNE可以显著增加HepG2细胞及小鼠原代肝细胞对TNF-α杀伤作用的敏感性,从而使TNF-α诱导4-HNE致敏的肝细胞死亡。（2） 4-HNE可显著提高HepG2细胞内4-HNE-蛋白质加合物的水平。（3） 4-HNE抑制HepG2细胞内TNF-α介导的NF-κB活化。（4） 长期摄入酒精导致小鼠肝细胞内4-HNE和TNF-α水平升高,引起肝细胞内TG水平升高,血浆ALT活性升高,肝细胞死亡增多。结论：长期摄入酒精使肝细胞发生氧化应激,其产物4-HNE可作为一种肝细胞致敏因子,通过抑制肝细胞内TNF-α介导的NF-κB抗细胞凋亡信号通路,诱导酒精性肝损伤。这可能是一种新的酒精性肝病发病机制。     

紫草素对非酒精性脂肪性肝炎的影响及分子机制研究

目的 探究紫草素对非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)是否具有改善作用及其作用机制.方法 给予C57BL/6小鼠胆碱和蛋氨酸缺乏(methionine choline deficient,MCD)饮食诱导NASH模型,检测小鼠体质量、血清转氨酶、血脂以及肝脏中脂质含量...     

脂氧素A4对肝细胞生长因子诱导HepG2肝癌细胞血管生成相关细胞因子表达的影响

目的: 探讨脂氧素A₄(LXA₄)对肝细胞生长因子(HGF)诱导的HepG2肝癌细胞血管生成相关细胞因子表达的影响。方法: 体外培养HepG2肝癌细胞,实验分为空白组、HGF处理组、HGF+LXA₄处理组、HGF+脂氧素受体激动剂BML-111处理组。RT-PCR检测脂氧素受体(ALX)表达情况,Western blotting检测COX-2、MMP-2、MMP-9、IκBα和NF-κB p65的表达量,ELISA检测TNF-α、IL-1β、VEGF和TGF-β分泌水平, 荧光素酶报告质粒检测NF-κB转录活性。结果: HepG2肝癌细胞表达ALX,LXA₄和BML-111下调COX-2、 MMP-2和MMP-9,抑制TNF-α、IL-1β、VEGF和TGF-β分泌,并且干扰NF-κB转位及其转录活性。结论: 脂氧素抑制HGF诱导HepG2肝癌细胞表达血管生成相关细胞因子,包括VEGF、COX-2、TNF-α、IL-1β、TGF-β、MMP-2及MMP-9,此效应可能通过干扰NF-κB活化实现。     

包载人基质金属蛋白酶组织抑制因子1重组腺病毒微球的制备及其表征

背景：高分子载药微球可控释药物,易于实现靶向给药,是近年发展快速的的新剂型。 目的：制备携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子1的重组腺病毒微球,并进行表征分析。 方法：采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇包被携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子1基因的重组腺病毒制成微球,体外检测其形态大小、包封率、载病毒率及释放规律。重组腺病毒微球感染人肝癌细胞株HepG2,检测感染效率,明胶酶谱分析测定微球对HepG2分泌TIMP-1的影响,Western blot检测人基质金属蛋白酶组织抑制因子1蛋白的表达,MTT实验检测细胞增殖率,体外侵袭小室实验检测细胞侵袭力。 结果与结论：构建的包载人基质金属蛋白酶组织抑制因子1重组腺病毒的PELA微球直径约1.965 μm,包封率为60.0%,载病毒率为10.5×10⁸/mg,在120 h内释放病毒量接近60%,总释放时间长于240 h。腺病毒微球感染HepG2细胞,当微球> 10 mg时,感染效率可达90%以上。微球感染HepG2细胞后经Western blot检测可见人基质金属蛋白酶组织抑制因子1蛋白的表达。MTT实验及体外侵袭实验结果均提示重组腺病毒微球对HepG2细胞的体外增殖和侵袭有抑制作用,腺病毒微球组细胞增殖率较低(P < 0.05),腺病毒微球感染的HepG2细胞体外侵袭力明显降低(P < 0.01)。结果证实,制备的人基质金属蛋白酶组织抑制因子1重组腺病毒微球,高效缓释,可明显抑制肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭。     

Cathepsin B knockout mice are resistant to tumor necrosis factor-alpha-mediated hepatocyte apoptosis and liver injury: implications for therapeutic applications.

Tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) contributes to liver injury by inducing hepatocyte apoptosis. Recent evidence suggests that cathepsin B (cat B) contributes to TNF-alpha-induced apoptosis in vitro. The aim of the present study was to determine whether cat B contributes to TNF-alpha-induced hepatocyte apoptosis and liver injury in vivo. Cat B knockout (catB(-/-)) and wild-type (catB(+/+)) mice were first infected with the adenovirus Ad5I kappa B expressing the I kappa B superrepressor to inhibit nuclear factor-kappa B-induced survival signals and then treated with murine recombinant TNF-alpha. Massive hepatocyte apoptosis with mitochondrial release of cytochrome c and activation of caspases 9 and 3 was detected in catB(+/+) mice 2 hours after the injection of TNF-alpha. In contrast, significantly less hepatocyte apoptosis and no detectable release of cytochrome c or caspase activation occurred in the livers of catB(-/-) mice. By 4 hours after TNF-alpha injection, only 20% of the catB(+/+) mice were alive as compared to 85% of catB(-/-) mice. Pharmacological inhibition of cat B in catB(+/+) mice with L-3-trans-(propylcarbamoyl)oxirane-2-carbonyl-L-isoleucyl-L-proline (CA-074 Me) also reduced TNF-alpha-induced liver damage. The present data demonstrate that a cat B-mitochondrial apoptotic pathway plays a pivotal role in TNF-alpha-induced hepatocyte apoptosis and liver injury.     

Endoplasmic reticulum stress, hepatocyte CD1d and NKT cell abnormalities in murine fatty livers

The liver regulates lipid homeostasis and is enriched with natural killer T (NKT) cells that respond to lipid antigens. Optimal maturation and activation of NKT cells requires their interaction with lipid antigens that are presented by cluster of differentiation-1 (CD-1) molecules on antigen-presenting cells. Hepatocytes express CD1d and present lipid antigens to NKT cells. Depletion and dysregulation of hepatic NKT cells occurs in mice with fatty livers. Herein, we assess whether reduced CD1d content on steatotic hepatocytes contributes to fatty liver-associated NKT cell abnormalities. We show that despite expressing normal levels of CD1d mRNA, fatty hepatocytes from ob/ob mice have significantly less CD1d on their plasma membranes than normal hepatocytes. This has functional significance because ob/ob hepatocytes are less able to activate CD1d-restricted T-cell responses in vitro, and CD1d-reactive NKT cells are reduced in ob/ob livers. Events in the endoplasmic reticulum (ER) normally regulate CD1d trafficking to plasma membranes. Hepatic steatosis has been associated with ER stress. To determine if ER stress reduces CD-1 accumulation on hepatocytes, we evaluated hepatic ER stress in ob/ob mice and treated cultured hepatocytes and lean mice with tunicamycin to induce ER stress. Lipid accumulation and ER stress occurred in the livers of both ob/ob and tunicamycin-treated mice. Tunicamycin caused dose-dependent decreases in hepatocyte CD1d, inhibited hepatocyte activation of CD1d-restricted T-cell responses, depleted liver populations of CD1d-reactive NKT cells and promoted Th-1 polarization of hepatic cytokine production. In conclusion, ER stress-related decreases in hepatocyte CD1d contribute to NKT cell dysregulation in fatty livers.     

人CTLA4Ig腺病毒载体的构建及其生物学功能研究

目的：通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体。研究其生物学活性，并用于基因治疗诱导心脏移植耐受。方法：通过基因重组技术，将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中，然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组，经过293细胞包装，构建CTLA4Ig腺病毒载体，用RT-PCR，SDS-PAGE及Western blot等技术，检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌，通过体外实验，观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应（MLR）的抑制作用，通过大鼠体内实验，检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后，CTLA4Ig在体内的表达及分泌，通过体外实验，观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应（MLR）的抑制作用，通过大鼠体内实验，检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后，CTLA4Ig在体内的表达。结果：CTLA4Ig腺病毒载体构建成功，体外实验证实，CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液，能够抑制异基因脾细胞的单向MLR，体内实验表明，经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体，能够诱导移植耐受，延长心脏移植物的存活。结论：构建的CTLA4Ig腺病毒载体，体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白，该蛋白可抑制T细胞的活化，CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受。     

Differential TM4SF5‐mediated SIRT1 modulation and metabolic signaling in nonalcoholic steatohepatitis progression

Nonalcoholic fatty liver disease is a chronic condition involving steatosis, steatohepatitis and fibrosis, and its progression remains unclear. Although the tetraspanin transmembrane 4 L six family member 5 (TM4SF5) is involved in hepatic fibrosis and cancer, its role in nonalcoholic steatohepatitis (NASH) progression is unknown. We investigated the contribution of TM4SF5 to liver pathology using transgenic and KO mice, diet‐ or drug‐treated mice, in vitro primary cells, and in human tissue. TM4SF5‐overexpressing mice exhibited nonalcoholic steatosis and NASH in an age‐dependent manner. Initially, TM4SF5‐positive hepatocytes and liver tissue exhibited lipid accumulation, decreased Sirtuin 1 (SIRT1), increased sterol regulatory‐element binding proteins (SREBPs) and inactive STAT3 via suppressor of cytokine signaling (SOCS)1/3 upregulation. In older mice, TM4SF5 promoted inflammatory factor induction, SIRT1 expression and STAT3 activity, but did not change SOCS or SREBP levels, leading to active STAT3‐mediated ECM production for NASH progression. A TM4SF5‐associated increase in chemokines promoted SIRT1 expression and progression to NASH with fibrosis. Suppression of the chemokine CCL20 reduced immune cell infiltration and ECM production. Liver tissue from high‐fat diet‐ or CCl₄‐treated mice and human patients exhibited TM4SF5‐dependent steatotic or steatohepatitic livers with links between TM4SF5‐mediated SIRT1 modulation and SREBP or SOCS/STAT3 signaling axes. TM4SF5‐mediated STAT3 activation in fibrotic NASH livers increased collagen I and laminin γ2. Both collagen I α1 and laminin γ2 suppression resulted in reduced SIRT1 and active STAT3, but no change in SREBP1 or SOCS, and abolished CCl₄‐mediated mouse liver damage. TM4SF5‐mediated signaling pathways that involve SIRT1, SREBPs and SOCS/STAT3 promoted progression to NASH. Therefore, TM4SF5 and its downstream effectors may be promising therapeutic targets to treat nonalcoholic fatty liver disease. © 2020 The Pathological Society of Great Britain and Ireland. Published by John Wiley & Sons, Ltd.     

腺病毒载体介导的RNAi对SK-BR-3细胞c-Met表达的影响

目的:通过腺病毒载体介导的RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HGF受体c-Met的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至SK-BR-3细胞;RNA狭缝杂交检测SK-BR-3细胞c-Met mRNA水平,Western印迹检测c-Met蛋白水平。结果:获得了带有人U6启动子及c-Met反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshmet1和rAdUshmet2。转导了重组腺病毒的SK-BR-3细胞的c-Met mRNA和蛋白相对表达量均有所下降。结论:腺病毒载体rAdUshmet通过抑制HGF受体c-Met表达,能在一定程度上阻断HGF-c-Met信号转导通路,有可能成为对乳腺癌进行基因治疗的有效载体。