蝙蝠葛活性成分对人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用

[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外人白血病K562及肺癌A549细胞株的抑制增殖作用.[方法]利用倒置显微镜及HE染色方法观察给予20mg/L蝙蝠葛活性成分处理后的体外人白血病K562细胞株的形态学变化;采用血清药理学实验方法观察含药(20mg/L蝙蝠葛活性成分)血清对体外人肺癌A549细胞株的抗增殖作用.[结果]倒置显微镜观察结果显示,给予20mg/L蝙蝠葛活性成分后早期K562细胞出现凋亡形态学变化,细胞膜鼓泡,凋亡小体形成,晚期K562细胞出现膜破裂坏死.HE染色结果显示,给予20mg/L蝙蝠葛活性成分后,K562细胞出现典型凋亡形态学变化,凋亡小体形成,细胞核浓缩呈蓝黑色,胞浆呈淡红色,核染色质浓缩呈碎块状.血清药理学实验结果显示,终质量分数分别为10%,20%,25%的灭活的含药大鼠血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制率分别为29.03%,30.55%,41.67%,与空白对照组比较明显增高(P<0.05).[结论]蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡的作用;含蝙蝠葛活性成分血清对体外人肺癌A549细胞株具有抑制增殖作用.     

蝙蝠葛活性成分对Hela细胞株的抑制增殖作用

[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株的抑制增殖作用.[方法]应用MTT法检测蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株增殖抑制作用及其细胞毒活性;分别采用倒置显微镜、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色观察Hela细胞处理前后的形态学变化;采用流式细胞仪检测Hela细胞株的细胞周期分布相;应用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原Ki-67、细胞周期蛋白CyclinD1及候选抑癌基因Syk的表达情况.[结果]MTT比色法观察结果表明,蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的抑制增殖作用,且呈现明显的质量浓度和时间依赖性.倒置显微镜、AO/EB染色观察见,蝙蝠葛活性成分处理的Hela细胞出现一系列典型的凋亡细胞特征.流式细胞仪检测结果显示,蝙蝠葛活性成分作用后加药组出现G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期和G2/M期细胞比例则明显下降(P<0.01),将细胞阻滞在G0/G1期;免疫细胞化学观察结果表明,蝙蝠葛活性成分作用后加药组Syk表达增加,Ki-67和CyclinD1蛋白表达降低,与对照组相比较差异均有统计学意义(P<0.01).[结论]蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的生长抑制作用,并可导致G0/G1期阻滞.G0/G1细胞周期阻滞可能是蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用的机制之一.     

地衣活性化合物C11H12O5体外抗肿瘤作用

目的 研究地衣活性化合物C11H12O5对人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG2及人肺腺癌细胞株A-549的体外抗癌作用, 观察其体外抗癌的剂量-效应关系和时间-效应关系.方法 采用体外细胞培养方式, 以MTT法检测OD值, 计算不同处理浓度和处理时间下肿瘤细胞的增殖抑制率.结果 化合物C11H12O5在剂量2、4、8、16和32μg/m L时, 对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制率分别为14.19%、13.84%、28.90%、59.50%、80.29%, IC50为12.43μg/m L;对人肝癌细胞株HepG2的抑制率分别为3.89%、11.09%、21.66%、46.27%、66.69%, IC50为18.88μg/m L;人肺腺癌细胞株A-549的抑制率分别为14.13%、11.09%、45.98%、86.19%、99.02%, IC50为6.21μg/m L.结论 地衣活性化合物C11H12O5对人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG2、人肺腺癌细胞株A-549均有显著体外抗肿瘤作用, 存在明显的剂量-效应关系, 其中A-549对该化合物最敏感.对A-549体外抑制作用时间-效应关系不明显.     

二十碳五烯酸协同长春瑞滨对人肺癌A-549细胞的作用

[目的]探讨二十碳五烯酸(EPA)联合长春瑞滨(NVB)对人肺癌A-549细胞株的增殖、凋亡及细胞周期的影响.[方法]选用人肺癌A-549细胞株进行体外培养.应用倒置显微镜、HE染色、AnnexinⅤ-PI双染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化.应用流式细胞仪检测EPA和NVB联合作用于人肺癌A-549细胞株后细胞凋亡情况.[结果]在倒置显微镜下,用EPA处理的A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞膜起泡形成凋亡小体,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱.HE染色:在倒置显微镜下,EPA处理组A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞核脱落,有的细胞膜起泡形成凋亡小体.MTT实验结果表明,EPA在15～45 mg/L范围内,于24,48,72h对肺癌A-549细胞株均有抑制生长作用且与NVB有协同作用,并表现出质量浓度、时间依赖性关系.在An-nexinⅤ-PI双染色荧光显微镜下,实验组A-549肿瘤细胞核染色质呈红色或A-549肿瘤细胞呈绿色,细胞周围可见亮绿色荧光的凋亡小体.流式细胞仪检测结果发现,EPA联合NVB组的凋亡率较单用NVB组明显增加.[结论]EPA与NVB对人肺癌A-549细胞的抑制具有协同作用,与单用NVB相比,联合应用可减少NVB的用药剂量.     

异叶天南星氯仿萃取物对肝癌HepG-2细胞的凋亡作用

[目的]探讨异叶天南星氯仿萃取物对肝癌HepG-2细胞的凋亡作用.[方法]采用MTT法测定不同质量浓度的异叶天南星氯仿萃取物对肝癌HepG-2细胞生存抑制率的影响,并利用HE染色法观察各组肝癌HepG-2细胞形态学的变化.[结果]MTT检测结果显示,异叶天南星氯仿萃取物可明显抑制肝癌HepG-2细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),且抑制作用随给药时间的延长及药物质量浓度的增加而明显增强;当异叶天南星氯仿萃取物质量浓度为100mg/L,作用时间为48h时,对肝癌HepG-2细胞的抑制率为54.33%,接近IC50.HE染色结果显示,经异叶天南星氯仿萃取物处理的HepG-2细胞表现出细胞间距增大,细胞核固缩、深染,细胞浓缩、碎裂、形成凋亡小体等一系列凋亡形态,且凋亡程度随药物质量浓度的增加及给药时间的延长而增强.[结论]异叶天南星氯仿萃取物可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡.     

鼠尾藻多酚的抗肿瘤活性研究

目的 研究鼠尾藻Sargassum thunbergii多酚对肺癌A-549细胞和肝癌BEL-7402细胞体外增殖的抑制作用.方法 采用有机溶剂提取、透析法获得鼠尾藻多酚STK1(相对分子质量＞1×104)和STK2(相对分子质量＜1×104),采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法检测体外细胞增殖抑制率.结果 STK1在质量浓度为87.5μg/mL时,对A-549和BEL-7402细胞增殖的抑制率分别为90.7%和89.3%;STK2在质量浓度为340μg/mL时,对A-549和BEL-7402细胞增殖的抑制率分别为89.9%和90.1%.在相同质量浓度下STK1比STK2活性强.结论 鼠尾藻多酚化合物(STK1和STK2)对人肺腺癌A549细胞、人肝癌BEL-7402细胞均有较强的抑制作用,相对分子质量高的STK1具有更强的抑制活性.     

原白头翁素衍生物对人肝癌HepG-2细胞的诱导凋亡作用

[目的]观察原白头翁素衍生物对人肝癌HepG-2细胞的诱导凋亡作用.[方法]应用MTT法、HE染色及AO/EB荧光染色方法观察原白头翁素衍生物对人肝癌HepG-2细胞形态的影响.[结果]原白头翁素衍生物对人肝癌HepG-2细胞增殖抑制作用呈质量浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05,P<0.01).倒置显微镜下见,给予原白头翁素衍生物5.0 mg/L后早期细胞出现凋亡,晚期细胞发生碎裂坏死;HE染色和AO/EB荧光染色观察见细胞出现典型凋亡形态学变化.[结论]原白头翁素衍生物对人肝癌HepG-2细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用.     

廿烷五烯酸对人肺癌A-549细胞株的凋亡作用及细胞周期的影响

[目的]观察廿烷五烯酸诱导人肺癌A-549细胞株的凋亡作用及其对A-549细胞周期的影响.[方法]用人肺癌A-549进行体外培养,分为对照组和小、中、大剂量廿烷五烯酸组,分别给予蒸馏水及15,30,60 mg/L廿烷五烯酸,培养48h,观察细胞变化.对照组加入培养液500μL,实验步骤相同.应用FCM进行定量检测细胞凋亡并作细胞周期分析.[结果]对照组细胞培养48 h,凋亡率仅为0.14%±0.05%,未见亚二倍体峰;用15,30,60 mg/L廿烷五烯酸处理48 h时,细胞出现凋亡峰,凋亡率分别为10.50%±0.56%.19.87%±1.34%,30.12%±1.78%,不同质量浓度凋亡率间差异有统计学意义,廿烷五烯酸质量浓度在15～60 mg/L时,G0/G1期和G2/M期细胞百分比下降,S期细胞百分比上升,阻滞周期于S期.[结论]体外实验中,廿烷五烯酸通过干扰细胞周期抑制人肺癌A-549细胞的生长,主要阻滞干S期;抑制肿瘤细胞增殖可能是廿烷五烯酸抗肺癌作用的机制之一.     

小白菊内酯对人肺癌A-549细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用

[目的]探讨小白菊内酯(Par)对人肺癌A-549细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用及其机制.[方法]应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察Par作用前后人肺癌A-549细胞的形态学变化;应用流式细胞术(FCM)检测Par作用之后肿瘤细胞周期分布及诱导凋亡的情况;应用免疫细胞化学技术检测Par作用前后蛋白阳性表达变化情况,并观察Par对人肺癌A-549细胞株抑制增殖及诱导凋亡的作用机制.[结果]倒置显微镜观察结果显示,实验组细胞体积缩小、变圆,核染色质聚集成团,细胞之间的连接疏松,贴壁不牢,易脱落.HE染色光学显微镜观察结果显示,实验组细胞体积变小,数目减少,可见部分细胞核固缩碎裂,部分细胞凋亡.AO/EB双染色荧光显微镜观察结果显示,对照组细胞呈绿色荧光,而实验组中早期凋亡细胞呈黄绿色荧光,随着Par作用时间延长,可见呈橘红色荧光的晚期凋亡细胞及坏死细胞.流式细胞术检测结果显示,G0/G1期细胞数量减少,而S期和G2/M期细胞数量明显增多(P<0.05).免疫细胞化学技术检测结果显示,实验组细胞Bcl-2,Ki-67,Livin,Survivin及核转录因子kappa B(NF-κB)表达明显降低(P<0.05).[结论]Par对人肺癌A-549细胞有明显的抑制增殖作用,其机制可能与细胞周期发生S期和G2/M期阻滞有关.Par作用于人肺癌A-549细胞株后,可诱导细胞凋亡,其机制是通过死亡受体通路及线粒体通路来完成的,NF-κB可能参与Par诱导人肺癌A-549细胞凋亡的作用.     

5-溴甲基-2(5H)呋喃酮诱导人肝癌HepG-2细胞株凋亡的作用机制

[目的]研究5-溴甲基-2(5H)呋喃酮诱导人肝癌HepG-2细胞株凋亡的作用机制.[方法]应用细胞体外传代培养方法培养人肝癌HepG-2细胞;利用四唑盐比色(MTT)法检测5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞株的抗增殖及细胞毒作用;采用流式细胞术检测癌细胞周期分布及药物对细胞凋亡的影响;采用免疫细胞化学技术检测5-溴甲基-2(5H)呋喃酮作用前后细胞凋亡相关基因Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Survivin,Livin,NF-κB,Bcl-2,Bax,Fas蛋白的表达情况,并探讨其诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用机制.[结果]MTT检测结果显示,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞的抑制作用表现出质量浓度和时间依赖性,IC50值为5 mg/L,48 h.流式细胞仪检测结果显示,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮5 mg/L作用于人肝癌HepG-2细胞24,48,72 h后可见典型的亚二倍体峰,且G1期细胞数量增多,48 h时对照组G0/G1期细胞占40.30%,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮组占46.21%,提示细胞阻滞在G0/G1期;对照组细胞凋亡率为0.02%,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮组为19.74%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).免疫细胞化学检测结果显示,与对照组比较,5-溴甲基-2(5H)呋喃酮组Survivin,Livin,NF-κB,Bcl-2蛋白的阳性表达率明显减少(P<0.05),Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Fas及Bax蛋白的阳性表达率明显增加(P<0.05).[结论]5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞株具有明显的抑制增殖作用,且呈量-效和时-效关系,并将细胞阻滞于G0/G1期.5-溴甲基-2(5H)呋喃酮对人肝癌HepG-2细胞株有明显的诱导凋亡作用,作用机制可能是通过死亡受体途径和线粒体途径共同介导的.     

蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC-3增殖的影响

目的观察蝙蝠葛酚性碱（PAMD）在体外的广谱抗肿瘤作用。方法采用MTT比色法测定不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱对体外处理白血病细胞株（K562）、人胰腺癌细胞株（BXPC-3）24h的存活率,同时测定药物处理不同细胞株的细胞增殖抑制率和IC50及IC90。实验设立阴性空白对照组和氟尿嘧啶阳性对照组。结果不同质量浓度蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC-3细胞株的细胞增殖具有抑制作用,抑制作用均与质量浓度呈梯度关系。结论蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有明显的抑制和杀伤作用,揭示其具有细胞毒效应,蝙蝠葛酚性碱产生抗肿瘤生物学效应的机理有待进一步研究。     

蝙蝠葛酚性碱对人肿瘤细胞PC-3、BT5637增殖的影响

目的 观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)体外抗肿瘤作用.方法 采用MTT比色法测定不同浓度的蝙蝠葛酚性碱对体外处理PC-3(前列腺癌)和BT5637(膀胱癌)细胞株24h的存活率.同时测定药物处理不同细胞株的细胞增殖抑制率和IC50及IC90.实验设立阴性空白对照组和氟尿嘧啶阳性对照组.结果 不同浓度蝙蝠葛酚性碱对PC-3和BT5637细胞株的细胞增殖具有抑制作用,抑制作用呈浓度依赖关系,与空白对照组比较具有统计学意义.结论 蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有明显的抑制和杀伤作用,显示其具有细胞毒效应.     

七叶皂苷对人肝癌HepG-2细胞增殖与凋亡的实验研究

目的：观察研究七叶皂苷对人肝癌HepG-2细胞的增殖周期及凋亡的影响,探讨七叶皂苷抗肿瘤作用的机制。方法：噻唑蓝（MTT）法检测七叶皂苷对人肝癌HepG-2细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析七叶皂苷对人肝癌HepG-2细胞周期及凋亡的影响。结果：七叶皂苷对人肝癌HepG-2细胞的增殖有明显的抑制作用,并随着作用浓度的增大,抑制作用逐渐增强。流式细胞仪检测可见亚二倍体峰,提示七叶皂苷有诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用。七叶皂苷可通过诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡并将细胞阻滞在G0~G1期,使细胞不能进入S期进行DNA合成,最终使瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论：七叶皂苷抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,使细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡,七叶皂苷可能在其抗肝癌作用中具有重要意义。     

新型噁二唑并[3,4-d]嘧啶苷衍生物诱导HepG-2细胞自噬

目的:从一系列新合成的噁二唑并[3,4-d]嘧啶苷衍生物(oxadiazolo[3,4-d]pyrimidine nucleoside derivatives)中筛选出能够有效抑制肿瘤细胞增殖的化合物,并研究其对人肝癌HepG-2细胞的毒性作用及可能机制.方法:将新化合物以不同的浓度作用于HepG-2、A549、Eca...     

腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义RNA抑制肺癌A-549细胞的实验研究

目的：探讨鸟氨酸脱羧酶（ODC）和S－腺苷甲硫氨酸脱羧酶（AdoMetDC）双反义重组腺病毒（Ad-ODC-AdoMetDCas）介导的ODC和AdoMetDC反义RNA对肺癌A 549细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法：采用FACS检测Ad-GFP感染细胞中GFP表达,以测定不同MOI的腺病毒对肺癌A-549细胞的基因转染效率;应用MTT法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,并应用TUNEL标记检测法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌细胞凋亡的影响。结果：基因转染效率结果显示,以50 MOI的Ad-GFP感染肺癌细胞48h后,大约有75% 肺癌A-549细胞GFP表达阳性;Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖有明显抑制作用。Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制肺癌细胞中ODC和AdoMetDC基因表达 ,基因抑制率大于60％（P＜0.05）。HPLC结果显示,肺癌A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量都明显降低（P＜0.05）。TUNEL标记检测结果证实,Ad-ODC-AdoMetDCas可引起肺癌A-549细胞明显凋亡。结论：ODC和AdoMetDC双反义腺病毒具有显著抑制肺癌增殖和侵袭的作用,对于肺癌的防治研究具有一定的意义,有望成为治疗肺癌的基因药物。     

结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞的生长抑制作用

目的探索结核分枝杆菌RelE毒素蛋白是否对肺癌A-549细胞有生长抑制作用。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌RelE、RelB、RelBE基因,分别构建真核质粒PcDNA3.1-RelE、PcDNA3.1-RelB和PcDNA3.1-RelBE。经酶切分析和DNA测序证实重组质粒构建成功后,采用脂质体转染方法分别转入肺癌A-549细胞,经RT-PCR鉴定后,建立稳定表达相关蛋白的细胞株。通过细胞生长曲线、活细胞蛋白含量测定、MTT细胞增殖实验、HE染色观察细胞凋亡、流式细胞术检测瞬时转染细胞的凋亡率等,观察结核分枝杆菌RelE毒素蛋白是否对肺癌A-549细胞具有生长抑制和促凋亡的作用。结果结核分枝杆菌RelE毒素蛋白组的肺癌A-549细胞增殖速度低于其他各组,对营养缺乏更为敏感,相同范围视野下凋亡细胞多于其他各组,瞬时转染细胞的凋亡率也高于其他组(P<0.05)。结论结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞具有生长抑制和促凋亡的作用。     

槲皮素对人肺癌细胞株A-549细胞增殖的抑制作用

目的：观察槲皮素对人肺癌细胞株A-549细胞增殖和凋亡的影响。方法以不同浓度槲皮素培养人肺腺癌细胞株A-549细胞后,采用MTT法检测槲皮素对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化;通过倒置显微镜、Heochst33258荧光染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变;Western blot方法检测凋亡抑制蛋白Survivin的表达情况。结果不同浓度槲皮素作用于人肺腺癌细胞株A-549细胞24h后,细胞存活率显著降低,且与剂量呈依赖关系。15、30、60μmol/L的槲皮素作用于人肺腺癌细胞株A-549细胞24h后,细胞阻滞发生在G2/M期;凋亡率分别为（7.24±1.73）%、（12.57±2.7）%和（26.02±1.67）%,与浓度为0的凋亡率[（2.67±2.32）%]比较,差异均有统计学意义（均P＜0.01）;从形态学上观察到肺癌细胞发生凋亡或坏死。通过Western blot检测发现,随着槲皮素作用浓度的增加Survivin蛋白的表达逐渐降低。结论槲皮素对人肺癌细胞株A-549细胞株有抑制其增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞周期阻滞及抑制凋亡抑制蛋白Survivin的表达有关。     

结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞成瘤性的抑制作用

目的探索结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对动物体内的肺癌A-549细胞的成瘤性的影响,以及因此产生的对动物免疫功能的作用。方法构建BALB/C小鼠的免疫抑制模型,通过接种稳定表达结核分枝杆菌RelE毒素蛋白、RelB抗毒素蛋白和RelBE毒素-抗毒素蛋白的肺癌A-549细胞株,含空质粒PcDNA3.1（＋）的A-549细胞株,以及正常的肺癌A-549细胞,构建BALB/C小鼠荷瘤模型,观察各组小鼠的肿瘤生长情况,并测定各组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性以及血清IFN-γ和IL-2的浓度。结果接种了表达RelE毒素蛋白的A-549细胞的小鼠组,肿瘤生长较其它实验组慢,肿瘤结节的瘤体体积和数量都较其它实验组有明显差异（P〈0.05）。对各组小鼠免疫功能变化的研究发现,各实验组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性以及血清IFN-γ和IL-2的浓度的差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞的成瘤性有抑制作用。