曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖和诱导凋亡的研究

目的观察曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)体外抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU参入法观察TSA对血清诱导的VSMC增殖的抑制作用;采用流式细胞仪和检测细胞周期蛋白表达的方法观察TSA对VSMC细胞周期的影响;采用测定DNA片段和活化caspase-3表达的方法观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果小剂量TSA抑制血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,大剂量TSA激活caspase-3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓血清诱导VSMC进入S期,此效应与抑制cyclinD1和cyclinA表达有关。结论TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖,使VSMC停滞于静止期,大剂量条件下诱导VSMC凋亡。TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的新策略。     

血清总唾液酸水平检测在肺癌临床诊断中的意义

血清总唾液酸(Total sialic acid简称TSA)是一种糖类物质,多数唾液酸与糖蛋白及糖脂结合,存在于真核细胞表面,癌变细胞此类糖蛋白和糖脂脱落增加,故引发血清中唾液酸含量增高,F-8836即为一种检测血清TSA的专用试剂,它是成都军区总院在Katopdis、Horgan等前人研究的基础上,在国内首次研究成功的一种通过血清学化学比色来检测恶性肿瘤的新方法,具有操作简便、试剂费低廉、检测“广谱”性等优点,对诊断恶性肿瘤有较高价值。本文采用此方法评价了血清TSA测定对肺部恶性疾病辅助诊断价值。TSA数值在分光光度仪上以吸光度(A)表示。 1 资料和方法     

血清总唾液酸水平检测在肺癌临床诊断中的意义

血清总唾液酸(Total sialic acid简称TSA)是一种糖类物质,多数唾液酸与糖蛋白及糖脂结合,存在于真核细胞表面,癌变细胞此类糖蛋白和糖脂脱落增加,故引发血清中唾液酸含量增高。F-8836即为一种检测血清TSA的专用试剂,它是成都军区总院在Katopdis、Horgan等前人研究的基础上,在国内首次研究成功的一种通过血清学化学比色来检测恶性肿瘤的新方法,具有操作简便、试剂费低廉、检测“广谱”性等优点,对诊断恶性肿瘤有较高价值。本文采用此方法评价了血清TSA测定对肺部恶性疾病辅助诊断价值。     

妇科盆腔肿瘤患者血清总唾液酸的测定

唾液酸(Sialic Acid)简称 SA,是一族化合物的总称,大多数以结合形式存在于糖蛋白、糖酯分子的糖链以及一些寡糖中,是糖链非还原端的组成成分。近年来,有关血清总唾液酸(TSA)用于肿瘤诊断,恶性程度判定等方面的研究报道越来越多。作者自1991—01～1992—01,对38例妇科盆腔肿瘤患者进行了血清 TSA 的测定,现报告如下。1 材料和方法:①对象:恶性肿瘤组:经手术和病理证实的原发性卵巢癌患者8例,子宫     

曲古菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPK1基因表达的影响

目的 探讨曲古菌素A(TSA)体外抑制人胃癌SOC-7901细胞凋亡及其死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因表达的影响.方法 体外培养的胃癌细胞以不同浓度的TSA(37.5、150、600ng/ml)处理后.用Annexin V/PI检测细胞凋亡率.RT-PCR、Western blot分别检测DAPK1 mRNA和蛋白表达水平.结果 AnnexinV/PI检测发现,不同浓度TSA可显著诱导SOC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性(P<0.05);TSA干预前SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平很低,不同浓度TSA处理SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平明显上调,呈溶度及时间依赖性(P<0.05).结论 TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与DAPK1基因的低乙酰化状态逆转有关.     

曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol.L-1培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC50。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～48 h,Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～12 h,检测胱天蛋白酶3活性。TSA 0.4μmol.L-1与PANC-1培养24 h,实时定量PCR检测c-myc,p53,Bcl-2,Bax,存活素,基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)和Notch-1基因的表达。TSA 0.4和0.6μmol.L-1与PANC-1培养24 h,细胞免疫化学方法检测Notch-1蛋白的胞内活性形式NICD表达。结果TSA可以明显抑制PANC-1细胞增殖,12,24和48 h的IC50值分别为0.42,0.32和0.19μmol.L-1,具有量效(r=0.640,P=0.01)和时效(r=0.768,P=0.002)关系。Hoechst 33258染色结果表明,TSA 0.4μmol.L-1增加PANC-1细胞核的蓝色荧光并出现凋亡特征。TSA 0.4μmol.L-1作用4,8和12 h后,胱天蛋白酶3的活性分别为正常对照组的1.62±0.12,2.68±0.17和(3.92±0.23)倍。PCR结果显示,TSA 0.4μmol.L-1作用24 h后,p53,c-myc和存活素mRNA表达下降,分别为对照组的(18.3±5.1)%,(24.2±0.9)%和(15.8±1.0)%,Bcl-2和Notch-1 mRNA未见明显变化,而Bax,MMP1和TIMP-1 mRNA升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低到正常对照组的(13.0±2.8)%。Notch-1活性分子NICD明显升高(P<0.05)。结论TSA可通过线粒体途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,而且使Notch-1激活,促进转移相关基因表达。     

曲古抑菌素A对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法建立PC12细胞缺糖/缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤模型,1-640 nmol.L-1TSA处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测对PC12细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst33258染色检测细胞凋亡与坏死,荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量。结果与模型组相比,80 nmol.L-1TSA可明显提高ODG PC12的细胞存活率,降低细胞内的ROS含量(P<0.05)。结论 TSA对OGD损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过增加细胞内能量代谢中各种酶的乙酰化水平来应对缺血损伤。     

三种不同分型方法检测丙型肝炎病毒结果比较

目的：探讨用三种不同分型方法检测丙型肝炎病毒结果。方法：分别应用聚合酶链反应(PCR)产物酶切分型法(酶切法)、型特异引物分型PCR法及血清丙型肝炎病毒(HCV)型特异性抗体酶联免疫测定法(EIA)。对120例抗-HCV阳性患者血清进行HCV分型检测。结果：酶切法与PCR法均成功地对96例(80％)进行分型，其中Ⅱ型86例(89．6％)，Ⅲ型8例(8．3％)，Ⅱ／Ⅲ型混合感染2例(2．1％)，两种方法的结果完全一致。EIA法检测出型特异性抗体78例(65％)，其中血清I型(相当于基因I、Ⅱ型)68例(87．2％)，血清2型(相当于基因Ⅲ、Ⅳ)6例(7.7％)，血清l、2型双阳性4例(5．1％)。结论：EIA法与酶切法和PCR法的符合率达97．0％。表明三种分型方法的结果高度一致。     

荧光定量检测HBV DNA与ELISA法测两对半相关性分析

目的 探讨荧光定量检测HBV DNA与乙肝两对半之间的关系及临床意义。方法 运用荧光定量PCR(FQ—PCR)与ELISA两种方法同时检测242份血清，对其结果加以对比分析。结果 51例乙肝大三阳患者血清HBV DNA检出率100％(51／51)；60例乙肝小三阳患者血清HBV DNA检出率51．7％(31／60)；9例HBsAg( )、抗—HBs( )、HBeAg( )血清HBV DNA检出率100％(9／9)；5例HBsAg( )、HBeAg( )、抗—HBe( )血清HBV DNA检出率100％(5／5)；11例抗—HBs( )及31例抗—HBs( )、抗—HBe( )、抗—HBc( )血清HBVDNA检出率o；38例抗—HBs( )、抗—HBc( )患者血清HBVDNA检出率7．9％；17例HBsAg( )、抗—HBc( )血清HBV DNA检出率58．8％；20例抗—HBc( )血清HBV DNA检出率10％。结论 荧光定量PCR检测HBV DNA具有准确、灵敏、特异等优点，对于乙肝患者临床诊断、疗效观察及预后判断具有重要的临床意义。     

血清CA19-9放射免疫测定

碳水化合物抗原19-9(Carbohydrate Antigen19-9简称CA19-9)放射免疫测定,是新近用于消化系恶性肿瘤体外实验检查的一种方法。本文采用美国CENTOCOR放射免疫分析药盒,对40例确诊的癌症病人和17例健康献血员的血清进行定量测定,同时用上海化学试剂研究所提供的癌胚抗原(CEA)放射免疫测定药盒作对比性检测,获得满意的结果。 CA19-9是夹心法固相放射免疫分析,以鼠抗CA     

低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义

目的 了解低水平血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人群分布及其相关乙肝病毒血清标志物模式特征，方法固相放射免疫标记技术测定2140例住院患血清HBsAg及其表面抗体(抗-HBs)、乙肝病毒e抗原及其e抗体(HBeAg、抗-HBe)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)，确定浓度在5μg/L以下的HBsAg阳性例数，并分析相关乙肝病毒(HBV)血清标志物模式，结果共检HBsAg阳性198例，HBsAg浓度在5Mg／L以下的有43例，占总数的2．01％，占HBSAG阳性人群的21．72％。对上述低水平HBsAg人群的5项HBV血清标志物检测获得5种模式，以“HBsAg、抗-HBc、抗-HBe阳性”，“HBeAg和抗-HBs阴性”模式为主(74．4％)．结论低水平血清HBsAg人群不可忽视。提高HBsAg检测灵敏度有重要意义，同时检测相关HBV血清标志物。对确定上述人群有帮助。     

TSA对胆道癌细胞系生长的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体外和体内对胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系生长的影响,并探讨其临床应用价值。方法:用组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)作用于胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ),用MTT法检测TSA对这些细胞系生长的影响。将Mz-ChA-1接种裸鼠皮下建立胆囊癌裸鼠种植模型,观察TSA处理前后体内种植瘤生长的变化。结果:TSA可以抑制Mz-ChA-1和QBC939、KMBC、OZ的增殖,以上作用与药物浓度在一定范围内呈正相关。成功建立胆囊癌裸鼠体内种植模型,TSA处理后裸鼠体内种植瘤生长受抑制。结论:TSA在体外能抑制胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系的增殖;TSA在体内能抑制胆囊癌细胞系的增殖。     

曲古菌素A诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86。方法:流式细胞仪检测TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单个核细胞表达共刺激分子CD80和CD86及细胞活力;RT-PCR法分析CD80和CD86 mRNA的表达情况;75Gy(gray,Gy)照射TSA诱导的HL-60细胞后,采用CCK-8法检测共刺激分子表达增高后,HL-60细胞对健康人单核细胞的增殖作用。结果:TSA使HL-60细胞CD86的表达上调,也可急性髓性白血病患者单核细胞CD86的表达上调,TSA诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,可促进健康人单核细胞的增殖。结论:TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单核细胞共刺激分子CD86表达增高,促进健康人单核细胞的增殖。     

ELISA法检测结核菌糖脂（TBGL）抗体对结核病血清学诊断的研究

目的 研究抗结核菌糖脂抗原(TBGL抗原)的抗体在结核病血清学诊断中的意义。方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者及正常人血清中的抗TBGL抗体。结果 经过对99例结核病患者，包括85例肺结核，14例肺外结核，以及23例正常人和12例非结核肺部疾病患者血清TBGL抗体的检测，99例结核患者TBGL抗体总阳性率为62．6％，其中肺结核病人的阳性率为63．5％，肺外结核病人阳性率为57．1％，两组间无差异，但与正常组阳性率(17．4％)及非结核肺部疾患组阳性率(16．7％)相比差异均显著(P＜0．05)。结论 利用本法检测结核病患者血清中TBGL抗体，可以作为结核病(包括肺结核与肺外结核)实验室辅助诊断方法，也可以用于肺结核与其它肺部疾病的鉴别诊断。     

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A, TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol·L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果 TSA对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,AnnexinV/PI双染色法检测凋亡显示,600 nmol·L-1TSA作用48 h后,细胞凋亡率为42·6%。600 nmol·L-1TSA作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降到1·95 ±0·25、1·73 ±0·12和1·52 ±0·09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论 TSA抑制HL-60细胞中端粒酶活性,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

曲古抑菌素A对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制药曲古抑菌素A(TSA)对肾癌GRC-1细胞生长的影响及其作用机制. 方法使用TSA处理GRC-1细胞. 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Western blot免疫印迹分析p53,p21和bcl-2表达. 结果 TSA能明显抑制GRC-1细胞的增殖,且具有明显的剂量依赖性;TSA处理72 h的GRC-1细胞早期凋亡率明显提高,G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低. TSA能够明显下调bcl-2的表达,上调p21的表达,而对p53的没有显著影响. 结论TSA可以通过诱导肾肿瘤细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2和上调肿瘤抑制基因p21的表达有关,TSA可能依赖非p53途径调控p21的表达.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素通过上调Slug促进结直肠癌细胞上皮-间质转化的研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)诱导结直肠癌细胞HCT116发生上皮-间质转化(EMT)的潜在分子机制.方法 TSA处理结直肠癌细胞HCT116,观察细胞形态变化;划痕实验观察细胞迁移侵袭能力的变化.实时定量PCR、Western blot检测HCT116细胞EMT标志物以及Slug的表达情况.siRNA敲除Slug表达,Western blot检测HCT116细胞EMT标志物表达变化,以及细胞形态变化.结果 TSA可以促进结直肠癌细胞HCT116的迁移能力,诱导HCT116细胞发生EMT转化,包括细胞形态改变,EMT标志物表达变化.TSA可以促进EMT关键转录因子Slug的表达,包括蛋白和mRNA水平;敲除Slug表达可以抑制TSA诱导的EMT转化过程.结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA通过上调Slug的表达促进结直肠癌细胞HCT116发生EMT转化,从而提高其迁移能力.     

柯萨奇病毒性脑膜炎病原学诊断方法的研究

为了探讨病毒性脑膜炎的快速、早期的病原学诊断方法，应用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测39例临床确诊的病毒性脑膜炎的脑脊液(CSF)和血清中柯萨奇病毒(CXV)的RNA，并以21例其它中枢神经系统疾病作为对照组。结果表明．39例病毒性脑膜炎中17例CSF用性，13例血清阳性；而对照组CSF均为阴性．血清有1例阳性。同时，用CXV引物扩增其它病毒与细菌．结果均为阴性；将CXV的RNA系列稀释后，即使只有1．0pg的RNA仍可被检测到。我们认为该方法有较高的特异性与灵敏度．可及时，准确地作出柯萨奇病毒性脑膜炎的病原学诊断。     

曲古抑菌素A对前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体的清除作用

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatinA,TSA)对前列腺癌细胞的抑制作用机理。方法:四甲基偶唑氮蓝(MTT)检测药物对肿瘤细胞增殖的影响;Hochest33342染色观察细胞凋亡的形态学变化;Western印迹分析雄激素受体(AR)蛋白的表达;反转录PCR检测AR转录水平的变化。结果:TSA在较低浓度即能有效抑制LNCaP细胞的增殖,EC50为125.9nmol·L-1,并诱导肿瘤细胞凋亡;药物处理后细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂p21表达增高,AR呈时间及剂量依赖性被清除。TSA对AR的清除是发生在蛋白水平的降解,而不影响其转录。结论:TSA能够清除对细胞生长具有重要作用的AR细胞信号通路,从而对前列腺癌LNCaP细胞发挥抑制作用。     

5-氮杂-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对胃癌细胞SGC-7901MGMT表达及NF-κB活性的影响

目的研究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)及曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、凋亡及移植瘤生长的影响,从体内、体外观察抑癌基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达,核转录因子NF-κB活性的改变,探讨5-Aza-dC联合TSA用于胃癌临床治疗的可行性。方法实验分对照组、5-Aza-dC组、TSA组和5-Aza-dC联合TSA组,利用CCK-8增殖试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡,RT-PCR检测各组MGMT mRNA表达,Western blot检测MGMT、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65的磷酸化水平。结果 5-Aza-dC、TSA单独处理均可抑制SGC-7901细胞的生长和促进其凋亡,联合用药后效果更明显(P<0.05);与对照组相比,单药组移植瘤变化没有统计学意义(P>0.05),而联合用药组较单药组移植瘤变小;5-Aza-dC、TSA单独或联合处理SGC-7901细胞和裸鼠移植瘤后,与对照组比较,MGMT基因mRNA及蛋白表达水平均上调,联合用药比单独用药升高明显,NF-κB p65在各处理组中的表达量未发生变化,但其磷酸化程度较对照组下降,联合用药较单药下降更明显(P<0.05)。结论 5-Aza-dC与TSA发挥抑制胃癌生长的作用可能是通过抑制NF-κB的活性,提高MGMT基因的转录和表达而实现的,两药联合使用的抗癌效果更加明显。