应用荧光定量PCR法检测金黄色葡萄球菌

目的建立一种简单、快速、准确、特异性强的能定量检测金黄色葡萄球菌的方法。方法以金黄色葡萄球菌FemB基因为靶序列,设计并合成引物和Taqman探针,优化引物与探针比例,调整镁离子浓度,对金黄色葡萄球菌进行荧光定量检测。结果引物与Taqman探针比例为1：4,镁离子为2.5mmol/L时本底最低,荧光信号最强;该法的灵敏度为1.0×103拷贝,能特异区分金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应能够对金黄色葡萄球菌准确快速及定量检测。     

食品中金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测法

目的建立一种简单、快速、准确、特异性强的能定量检测金黄色葡萄球菌的方法。方法以金黄色葡萄球菌FomB基因为靶序列，设计并合成引物和Taqman探针，优化引物与探针比例，调整镁离子浓度，对金黄色葡萄球菌进行荧光定量检测。结果引物与Taqman探针比例为1：4，镁离子为2．5mmol／L时本底最低，荧光信号最强；该法的灵敏度1．0×10^3拷贝，能特异区分金色葡萄球菌与其他葡萄球菌。结论使用Taqman探针技术的荧光定量聚合酶链反应能够对金黄色葡萄球菌进行准确快速及定量检测。     

TaqMan探针法荧光定量PCR检测食品中金黄色葡萄球菌

目的:建立食品中金黄色葡萄球菌快速、简便、准确、高效的检测方法。方法:以金黄色葡萄球菌FemB基因中保守序列为目标,设计并合成引物和Taqman探针,构建重组质粒作为标准阳性模板,建立荧光定量检测体系,并考察该方法的灵敏性、特异性和重复性。结果:该法的灵敏度60拷贝/反应体系,能特异区分金黄色葡萄球菌与其它类型的细菌,同时,具有良好的重复性。结论:使用Taqman探针法荧光定量PCR技术能够对金黄色葡萄球菌进行快速准确地定量检测。     

实时荧光定量PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立与应用评价

目的利用实时荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法以MRSA mecA基因为靶序列设计引物和探针,以自MRSA中提取的DNA为模板,优化引物、探针的浓度和退火温度,同时验证方法的特异性、敏感性、重复性、灵敏度和线性范围,并与K-B法和微量琼脂稀释法(MIC)相比较。结果建立的反应体系在上游引物、下游引物浓度为0.2 mmol/L、退火温度为55℃时,具有良好的特异性和敏感性,与大肠埃希菌等8种细菌均无交叉反应;对MRSA检测的灵敏度达到10 CFU/ml。结论建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对MRSA做出快速准确的报告,实现准确、快速和定量检测。     

脑膜炎奈瑟菌实时荧光定量PCR的检测方法建立及评估

目的 建立脑膜炎奈瑟菌实时荧光定量PCR的检测方法,为快速、准确检测脑膜炎奈瑟菌提供有效的手段.方法 选用脑膜炎奈瑟菌夹膜转运基因ctrA作为靶基因,设计合成引物和探针,建立脑膜炎奈瑟菌实时荧光定量PCR的检测方法.并对该方法的特异性、敏感性、可重复性等进行方法学评价.结果 采用该方法对流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺...     

实时荧光聚合酶链反应检测粪便标本中的金黄色葡萄球菌肠毒素A、D

目的:建立一种快速、准确、特异、定量检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素A、D的方法并探讨肠毒素在食物中毒引起腹泻中的意义。方法:选择femB、SEA和SED基因分别作为金黄色葡萄球菌菌株、肠毒素A、肠毒素D的靶序列,设计合成引物和探针;收集食物中毒导致腹泻患者粪便标本487份,并对其进行检测分析。结果:采用荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌和肠毒素A的灵敏度为1.0×102拷贝,而检测肠毒素D的灵敏度为1.0×103拷贝;487份粪便标本中检出金黄色葡萄球菌femB基因72例(14.8%),检出产肠毒素A菌株为11例(15.3%,11/72),产肠毒素D菌株为9例(12.5%,9/72),同时产肠毒素A、D菌株1例(1.4%,1/72)。结论:应用Taqm an探针实时荧光PCR技术能够快速、准确检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素,适合于大样本筛查。     

PCR技术在快速检测沙门氏菌中的应用分析

目的分析PCR技术在快速检测沙门氏菌中的应用,发掘PCR技术的价值和作用。方法采用Taqman探针实时荧光定量PCR技术,针对沙门氏菌吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白invA基因设计引物和Taqman探针,快速检测沙门氏菌。结果检测沙门氏菌时,PCR技术与传统的检测技术相比,不仅快速,而且准确,具有较高的实用的价值。结论采用PCR技术,有利于实现快速检测沙门氏菌。     

金黄色葡萄球菌荧光定量PCR计数法的建立

目的建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于对金黄色葡萄球菌计数。方法根据金黄色葡萄球菌nuc基因序列(GenBank:DQ399678.1),设计并合成引物和荧光标记探针,建立和优化反应体系,用已知浓度的金黄色葡萄球菌DNA模板作为外部参照,建立标准曲线。用加入金黄色葡萄球菌的模拟牛奶样品,把Baird-Parker平板计数结果和PCR定量检测结果进行比较,以评价体系性能。结果平板计数和荧光定量PCR的检测结果做比较,采用配对t检验,t=0.58,v=32,P0.05,其结果差异无统计学意义。结论所建立的金黄色葡萄球菌荧光定量PCR计数法,操作较传统的方法简单直接,能有效地缩短整个检测的时限,并有较好的灵敏度和特异性,与传统方法相比,有较明显的优势。     

荧光实时定量PCR检测溶藻弧菌方法的建立

目的 建立荧光实时定量PCR(qPCR)定量检测溶藻弧菌的方法,检测该方法的灵敏度并与传统细菌培养比较其特异性吻合率。方法 选择溶藻弧菌的鞭毛基因fliC为目的基因设计探针引物,建立Taqman探针qPCR体系。采用双盲法设计,分别用qPCR和Biolog Microstation System对溶藻弧菌和10株相关细菌进行鉴定,以考核qPCR检测体系的特异性。同时,通过梯度稀释和绘制标准曲线,评价利用qPCR检测溶藻弧菌的灵敏度。结果 本试验建立的qPCR方法能特异、准确、快速鉴定溶藻弧菌,敏感度达102CFU/ml。结论 qPCR方法能够有效快速检测溶藻弧菌。     

交叉引物恒温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

目的建立一种快速、特异、灵敏的交叉引物恒温扩增(crossing priming amplification,CPA)技术检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)耐热核酸酶基因(nuc)。方法从GenBank上下载多条金黄色葡萄球菌nuc基因序列,在其保守区域设计CPA引物及探针,建立CPA恒温扩增快速检测技术,并对反应条件进行优化,同时验证方法的特异性和敏感性。结果本方法对金黄色葡萄球菌检测具有高度特异性,对构建的阳性质粒DNA灵敏度达到1.0×10~1 copy/μl,对12份临床标本的检测阳性率与荧光PCR法相同,同时CPA法实验过程操作简便、反应迅速,且无需使用昂贵仪器,最快可在40 min内出检测结果。结论本研究建立的CPA法快速、简便、灵敏、特异,适用于金黄色葡萄球菌核酸快速检测。