黄芩苷对T淋巴细胞增殖与活化的影响

目的:研究黄芩苷对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并探讨其免疫调节机制。方法:以刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA) 离子霉素(ionomycin,Ion)诱导小鼠淋巴细胞中T细胞增殖,用MTT法测定细胞增殖;利用ConA或PMA诱导T细胞激活,流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子与CD25分子表达情况。结果:在ConA或PMA Ion刺激48h后,小鼠淋巴细胞MTT吸光度显著高于对照组(P<0.01)。黄芩苷(10~40uM)显著降低了ConA或PMA Ion引起的MTT吸光度增加(P<0.01)。在ConA或PMA刺激18h后,小鼠T细胞CD69表达率显著提高(P<0.01),ConA或PMA刺激36小时后,T细胞CD25表达率显著提高(P<0.01),黄芩苷(10~40uM)能显著降低活化(P<0.01)。结论:黄芩苷可以显著抑制多克隆刺激剂ConA或佛波醇酯(PMA)介导的小鼠T细胞的活化和增殖。     

淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果MTT法检测淫羊藿提取物在50mg/L时细胞存活率达52.36%。ConA作用6h后,对照组CD69 表达率为(4.61±0.85)%,ConA组CD69 T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L时均抑制ConA诱导的CD3 T淋巴细胞CD69的表达(P<0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%。培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01),48h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01。结论淫羊藿提取物能明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性。     

黄芩苷对小鼠肠道微生态的影响

目的分析黄芩苷对小鼠肠道微生态的影响。方法40只NIH小鼠,雌雄各半,随机平均分为4组,即生理盐水组、林可霉素组、低剂量黄芩苷组(1.25mg/mL)和高剂量黄芩苷组(2.5mg/mL)。每组小鼠相应灌胃14d后,对各小鼠肠道粪便的细菌群落进行细菌培养分析和PCR-DGGE(PCR-变性梯度凝胶电泳)分析。结果低剂量黄芩苷组的细菌物种丰度、多样性指标以及乳杆菌数目都高于其他各组。生理盐水组、林可霉素组和低剂量黄芩苷组的肠道细菌种群表现为组内相似性较高,组间差异性较大。结论低剂量黄芩苷能促进某些细菌、很可能是乳杆菌的生长;低剂量黄芩苷还可调节肠道形成新的、更稳定的细菌群落结构。     

酒黄芩与生黄芩不同提取工艺对黄芩苷煎出量的影响

<正> 据文献记载黄芩的根为清热解毒常用中药,从中分离出的黄酮类化合物有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等20多种成分。其中黄芩苷是主要有效成分,具有抗菌、消炎作用。与黄芩中有效成分黄芩苷共存的有黄芩酶,其在适宜条件下可酶解黄芩中的苷,而导致黄芩苷含量下降。在制剂工艺中由此而导致的含量不合格屡见不鲜。为验证酒炙黄芩在制剂提取工艺中的投料方法,我们制备了酒黄芩、生黄芩热水投料、冷水投料的样品,采用高效液相色谱法对其黄芩苷含量进行了研究,为制剂中的煎煮工艺提供依据。     

HPLC法测定不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量

目的考察4种不同规格并头黄芩的药用价值和黄芩苷提取条件。方法采用HPLC法测定不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量。结果4种不同规格并头黄芩中黄芩苷含量依次为12.89%、13.82%、11.75%和10.85%,汉黄芩苷含量依次为0.28%、0.22%、0.24%和0.27%;随提取溶剂中醇浓度的增加,黄芩苷提取率先增高后降低,碱性条件降低黄芩苷提取率。结论4种不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量差异不大,且黄芩苷含量均高于《中华人民共和国药典》要求;提取条件为50%中性乙醇提取最佳。     

诱导子对黄芩毛状根生长及黄芩苷合成的影响

目的 考察诱导子对黄芩毛状根生长和黄芩苷生物合成的影响.方法 用非生物诱导子(Ca2+、Mg2+和Co2+)和从黑曲霉Aspergillus niger、米曲霉A.oryzae、蜜环菌Armillaria mellea中提取的真菌诱导子,与黄芩毛状根共培养;HPLC法测黄芩苷的量.结果 各诱导子对黄芩毛状根生长和黄芩苷合成有不同影响:黑曲霉诱导子和米曲霉诱导子质量浓度为40和20 mg/L时,CO2+浓度为1.53×10-4 mmol/L时,黄芩苷的量从7.64%分别增至9.18%、8.81%和8.62%.结论 诱导子对黄芩毛状根次生代谢产物具有特异性,可选择性地促进某一类次生代谢产物的合成.试验证实黑曲霉诱导子、米曲霉诱导子和Co2+是适合黄芩毛状根代谢黄芩苷调控的诱导子.     

生黄芩与酒黄芩不同提取方法对黄芩苷煎出量的影响

目的:研究生黄芩与酒黄芩用不同提取方法对有效成分黄芩甙煎出量的影响。方法:对生黄芩与酒黄芩分别用热冷水投料煎煮,用高效液相色谱法测定煎煮液中黄芩甙含量,将相关数据进行对比。结果:在制剂时,酒黄芩冷水投料后煎煮液中黄芩甙没有过多损失。结论:在制剂中,酒黄芩可用冷水投料。     

黄芩苷对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究黄芩苷对小鼠急性肝损伤的保护作用.方法 给动物灌胃给药,用CCl4、D-半乳糖制作小鼠急性肝损伤模型,用比色分析法测定小鼠血清天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase, ALT)、丙氨酸转氨酶(alanine transaminase, AST)的活性;测定小鼠血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione perioxidase, GSH-Px)的活性及丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量.结果 黄芩苷能显著降低因CCl4、D-半乳糖所致急性肝损伤小鼠血清ALT,AST的升高;对急性肝损伤小鼠血清SOD、GSH-Px的活性有明显的升高作用及降低MDA的含量.结论 黄芩苷对CCl4、D-半乳糖所致小鼠急性肝损伤有保护作用.     

黄芩苷体外对白念珠菌凋亡的影响

目的探讨中药有效成分黄芩苷对白念珠菌凋亡的影响。方法采用Hoechst33258染色荧光显微镜检测白念珠菌细胞凋亡的形态;Rh123染色流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;DHR染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 1 000,100μmol/L的黄芩苷能诱导白念珠菌细胞核固缩与碎裂,并降低白念珠菌MMP;1 000,100,10μmol/L的黄芩苷均能提高细胞内ROS水平。结论黄芩苷可通过线粒体途径诱导白念珠菌凋亡。     

黄芩苷及黄芩水提液对体外培养的滋养细胞生长的影响

目的:体外分离、培养人早孕绒毛细胞滋养层细胞(cytotrophoblast,CTB),并对其进行鉴定。研究黄芩苷及黄芩水提液对CTB细胞活力的影响。方法:复合酶消化法分离、培养CTB,HE染色及免疫细胞化学鉴定细胞,选取不同浓度的黄芩苷及黄芩水提液作用于CTB,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验分析TNF-α对CTB细胞活力的影响。结果:黄芩苷和黄芩水提液作用后的滋养细胞活性(A值)高于空白对照组,两药组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芩苷和黄芩水提液对滋养细胞的生长增值有促进作用,黄芩苷明显优于黄芩水提液。     

天花粉多糖对人外周血单个核细胞的免疫活性作用

目的:建立天花粉多糖促人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)淋巴细胞增殖的方法,了解天花粉多糖对淋巴细胞增殖、活化作用,对T淋巴细胞亚群分群的影响和诱导产生TNF-α,IL-6水平的差异。方法:制备天花粉多糖提纯液。健康人PBMC作为药物筛选的靶细胞;采用MTT法测定不同浓度天花粉多糖(0.5,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0 mmol.L-1)的促人PBMC淋巴细胞增殖作用;采用流式细胞术和ELISA法分别检测药物作用后人PBMC中T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+T细胞)的表达和诱导人PBMC分泌产生TNF-α,IL-6水平。结果:1.0~50.0 mmol.L-1天花粉多糖对人PBMC具有明显促增殖作用(P0.05);经5.0,10.0 mmol.L-1天花粉多糖刺激后的人PBMC中,CD3+,CD4+,CD8+T细胞的含量明显高于对照组(P0.05),1.0,5.0,10.0 mmol.L-1天花粉多糖刺激人PBMC 8 h后,TNF-α,IL-6水平显著升高(P0.05)。结论:天花粉多糖对人PBMC有明显促增殖和活化作用,不同程度地上调T淋巴细胞亚群中CD3+,CD4+,CD8+T细胞的含量,并可诱导人PBMC高水平分泌产生TNF-α,IL-6,为阐明天花粉多糖的免疫活性和作用机制奠定基础。     

三黄喷雾剂体外透皮吸收

目的:考察三黄喷雾剂小鼠体外经皮渗透规律.方法:采用垂直式改良Franz扩散池装置进行试验,以黄芩苷和盐酸小檗碱含量为考察指标,HPLC测定接受液中指标成分含量.结果:黄芩苷、盐酸小檗碱的透皮速率分别为42.35,49.99 μg·cm-2·h-1;黄芩苷、盐酸小檗碱6h平均累积透过率分别为19.51％,7.17％.结论:三黄喷雾剂小鼠体外透皮吸收效果理想,透皮行为符合零级方程.     

黄芩苷微囊的制备及体外评价

目的:以明胶为囊材,优选黄芩苷微囊的制备工艺。方法:采用单凝聚法,以载药量为评价指标,利用均匀设计法优选微囊的最佳制备条件。结果:囊心囊材比为1∶2,温度45℃,转速550 r.min-1。结论:微囊制备工艺稳定、粒径分布及溶出符合要求。     

倒千里光碱对小鼠体外培养胚胎的发育毒性研究

目的 探讨倒千里光碱的胚胎发育毒性.方法 采用小鼠全胚胎培养模型,将8.5d小鼠胚胎在含有倒千里光碱的即刻离心血清中培养48 h(倒千里光碱的终浓度分别为12.5,25,50,100 mg·L-1),观察倒千里光碱对胚胎生长发育(卵黄囊直径、颅臀长、头长、体节数)和组织器官形态分化(卵黄囊循环、尿囊、翻转、心、脑、尾神经管、视听嗅系统、腮弓、颌突、肢芽)的影响.结果 倒千里光碱对胚胎的生长发育和形态分化均具有明显的毒性影响.随倒千里光碱浓度的增加,胚胎的生长发育和组织器官形态分化指标影响越来越严重,其中听嗅系统、腮弓、上下颌突、前后肢芽的影响最为明显.结论 倒千里光碱对体外培养的小鼠胚胎有明显的毒性作用,提示妊娠期暴露于该化合物对胎儿具有潜在的毒性.     

应用全胚胎培养方法研究野百合碱对 小鼠胚胎发育的影响

目的:探讨野百合碱的胚胎发育毒性.方法:采用小鼠全胚胎培养模型,将8.5 d小鼠胚胎在含有野百合碱的即刻离心血清中培养48 h(野百合碱的终浓度分别为100,50,25,12.5 mg·L-1),观察野百合碱对胚胎生长发育(卵黄囊直径、颅臀长、头长、体节数)和组织器官形态分化(卵黄囊循环、尿囊、翻转、心、脑、尾神经管、视听嗅系统、腮弓、颌突、肢芽)的影响.结果:随野百合碱浓度的增加,胚胎的生长发育和组织器官形态分化受到的影响越来越严重,其中以视听系统、颌突、肢芽等项的影响最为明显.结论:野百合碱对体外培养的小鼠胚胎有明显的毒性作用,提示妊娠期暴露于该化合物对胎儿具有潜在的毒性.     

黄芩苷对非白念珠菌生物膜抑制作用的研究

目的:研究黄芩苷对光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌等非白念珠菌生物膜的影响.方法:96孔微量培养板上构建4种非白念珠菌生物膜;微量稀释法检测黄芩苷对4种非白念珠菌最低抑菌浓度(MIC);XTT减低法评价黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜SMIC及菌细胞黏附性的影响.结果:4种非白念珠菌在96孔板中可形成成熟的生物膜;黄芩苷对4种非白念珠菌MIC分别是125,250,125,62.5 mg·L~(-1);黄芩苷对4种非白念珠菌生物膜的SMIC50分别是＞1 000,500,125,250 mg·L~(-1);SMIC80均大于或等于1 000 mg·L~(-1).黄芩苷对4种非白念珠菌的黏附有一定的抑制效应.结论:黄芩苷对近平滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌生物膜有较强的抑制作用.     

酚-黄复方微乳的体外透皮特性考察

目的:制备酚-黄复方微乳并考察其体外透皮扩散特性。方法:以油酸乙酯为油相,聚山梨酯-80(tween-80)为乳化剂,聚乙二醇-400(PEG-400)为助乳化剂,水相逐步加入到含药混合溶液中,制备酚-黄复方微乳。测定微乳的外观形态、粒径分布及稳定性。采用Franze扩散池法,考察补骨脂酚、黄芩苷在溶液和微乳中经皮渗透特性。结果:制备的微乳澄清透明,呈近球形,平均粒径(17.30±0.17)nm,稳定性较好。黄芩苷在溶液和微乳中24 h累积透过量(Q24 h)分别为(208.80±5.26),(232.38±15.07)μg·cm-2,经皮渗透特性无显著性差异。补骨脂酚24 h累积透过量由溶液中(324.81±56.63)μg·cm-2增加至微乳中的(721.30±108.88)μg·cm-2,增加了2.22倍,稳态渗透速率和表观渗透系数为溶液组的5.0倍,均有显著提高。结论:微乳经皮给药系统具有很好的促透作用,为酚-黄复方皮肤给药新制剂的设计提供实验依据。     

杨桃根多糖体外抗氧化作用的研究

目的:探讨杨桃根多糖(Yangtaogen polysaccharide,YTGP)的抗氧化活性。方法:邻苯三酚自氧化法和邻二氮菲-Fe2+/H2 O2体系研究YTGP对自由基的作用,用硫代巴比妥酸法测小鼠肝中丙二醛(MDA)含量。在体外化学模拟条件下测定杨桃根多糖的总还原能力。结果:YTGP能有效抑制MDA的产生,能明显地抑制.OH和O2-的生成。结论:YTGP在体外有明显的抗氧化作用。     

槐胺碱对皮肤移植大鼠T淋巴细胞的影响

目的：研究槐胺碱（SA）对移植排斥反应的影响并探讨其发生机制。方法：以同种皮肤移植大鼠作为动物模型,免疫荧光浊测定T淋巴细胞及克亚群数量;MTT比色法测定T淋巴细胞增殖反应。结果：SA减少CD3、CD4细胞数、降低CD4／CD8,抑制T淋巴细胞的增殖,延长移植物存活时间。结论SA对移植排斥反应有抑制作用,此作用与其减少T淋巴细胞数量并抑制T淋巴细胞功能有关。