内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建的影响

目的 探讨骨髓内皮祖细胞移植对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建的影响.方法 应用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,内皮祖细胞选择性培养液培养后移植到单侧输尿管梗阻大鼠.应用免疫组织化学半定量单侧输尿管梗阻大鼠肾间质微血管密度的改变.应用Western blot检测血管生成素-1(Ang-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达.结果 单侧输尿管结扎模型(UUO)组在术后14、21d肾小管周毛细血管指数较假手术组明显下降(P<0.05),毛细血管变形表现为明显的扭曲、萎缩或扩张.移植组在14、21d肾小管周毛细血管指数(PCI)显著低于假手术组(P<0.05),但高于同期较UUO组(P<0.05).与假手术组比较,UUO组、移植组Ang-1、VEGF表达第7天显著增加,随后迅速下降,而移植组各时相点均高于同期UUO组(P<0.05).结论 内皮祖细胞移植以旁分泌、自分泌机制参与单侧输尿管梗阻大鼠肾小管周毛细血管重建.     

环氧合酶在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的表达

目的　观察环氧合酶 (COX)的两种同工酶 ,即COX 1和COX 2在单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠术侧肾脏的表达情况。方法　建立左侧输尿管梗阻模型 ,设假手术组为对照。 4周后分别应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫组织化学方法检测COX 1、COX 2的mRNA水平及蛋白质表达 ,并采用放射免疫法测定术侧肾脏的残余尿液中血栓烷素B2 (TXB2 )浓度。结果　COX 1的mRNA和蛋白水平在两组间差异无显著性。病变组大鼠尿液中TXB2 的浓度急剧上升 ,COX 2的基因表达和蛋白质合成大幅增加 ,病理上呈现明显的肾小管间质纤维化。结论　COX 2参与UUO发生和发展的病理过程     

单侧输尿管梗阻再通模型的研究进展

间质纤维化是肾脏疾病进展的主要因素之一。一些动物模型可作为研究肾纤维化的对象。单侧输尿管梗阻(UUO)的出现成为一个研究肾纤维化机制的重要模型,对肾纤维化进展的分子和细胞水平机制提供有价值的观点。然而,无论是对肾脏功能的测定,还是对干细胞在肾脏的影响和药物的治疗评价均存在不足。UUO再通(RUUO)模型是建立在UUO模型的基础之上,弥补了上述的不足。     

低氧在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化中的作用初探

目的证实结扎致单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型梗阻侧肾脏是否存在低氧,不同时间点低氧的特点及低氧与肾间质纤维化的关系。方法选用180g左右的雄性SD大鼠,随机分为8组,即假手术组（Sham组）、单侧输尿管结扎术后12h、24h、48h、3d、5d、7d和10d组,每组4只。除Sham组外,均结扎左侧输尿管建立UUO模型。各组大鼠处死前1．5h腹腔麻醉后,经阴茎静脉注射低氧探针（Hypoxyprobe^TM-,ChemiconInternational,Inc．）60mg／kg,然后开腹取左肾。对各组肾脏Masson三色染色后,半定量分析肾小管间质纤维化程度;用RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学方法检测其转化生长因子（TGF）-β1表达,用免疫组织化学方法观察其低氧程度及分布。结果与Sham组比较,大鼠血肌酐自术后3d组即有不同程度的显著升高（P〈0．01）,血尿素氮自UUO后7d组出现显著升高（P〈0．01）,尿蛋白及血压则无显著差别。Masson染色显示肾小管间质纤维化的程度逐渐加重,术后10d组纤维化程度约增加了10倍。自术后48h组TGF-β1mRNA和蛋白水平均出现进行性上升,主要集中在小管上皮细胞。术后12h组,肾脏低氧的范围和程度有明显加重,免疫组织化学半定量分析表明在术后3d组达到高峰,并持续存在至10d组,主要集中在各种小管细胞。大鼠术后7d内,各组肾脏皮质区低氧程度与间质纤维化程度（r：0．821,P〈0．05）、TGF-β1mRNA（r：0．824,P〈0．05）、TGF-β1蛋白表达量（r：0．834,P〈0．05）之间存在显著相关性。结论UUO大鼠模型术后10d内梗阻侧肾脏持续存在低氧,很可能通过调节TGF-β1等细胞因子参与了梗阻侧肾脏间质纤维化的过程。     

建立大鼠单侧输尿管梗阻模型手术方式的选择

目的：选择一种简便、有效、快捷的手术方式，减少其感染的发生率。方法：采用入下腹结扎输尿管下段。结果：经下腹行输尿管下段结扎，单侧输尿管梗阻模型建立的成功率高于常规背部入腹行输尿管上段结扎的术式。结论：经下腹行输尿管下段结扎是一种建立大鼠单侧输尿管梗阻模型的较好术式。     

大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的观察单侧输尿管梗阻大鼠模型中肾功能、肾病理改变、肾组织-αSMA表达的变化,验证UUO制作RIF动物模型的可行性。方法将32只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组,每组16只。在术后3、10、203、0 d每组各处死4只,处死前1 d测定各组大鼠24 h尿蛋白定量,处死时抽取其腹主动脉血测定血清肌酐、尿素氮水平;左肾组织行HE染色,动态观察肾病理学变化,评定各组大鼠肾间质损害程度;免疫组化方法测定肾间质-αSMA,并分析其与肾间质损伤指数的相关性。结果各组大鼠24 h尿蛋白无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠血肌酐、尿素氮在第3天时无统计学意义(P>0.05)。模型组血清肌酐、尿素氮在10 d时高于假手术组(P<0.01),20d达到高峰,继之出现下降。模型组的肾间质损伤指数及-αSMA的表达明显高于假手术组(P<0.01),-αSMA表达的相对量与肾间质损伤指数呈正相关(r=0.92,P<0.001)。结论UUO可以快速建立RIF动物模型,并作为延缓肾功能损害治疗的理想模型。     

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的:动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠64只随机分为假手术组(n=16)、模型组(n=24)和依那普利治疗组(n=24).治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 nag/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃.分别于造模后第3,7,14,21天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Westem免疫印迹检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达逐渐增加.依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少,与模型组比较,差异在第3,7,14天有统计学意义(P<0.05),而在第21天无统计学意义(P>0.05).结论:依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其能抑制肾组织Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达有关.     

单侧输尿管部分梗阻对大鼠肾盂平滑肌功能的影响

目的测定大鼠单侧输尿管部分梗阻后肾盂平滑肌功能的改变。方法 80只雄性Wistar大鼠,其中40只作为对照组,另外40只大鼠建立单侧输尿管部分梗阻的动物模型作为实验组。模型建立成功后,分别于8周和16周分离取出肾盂进行离体肌条实验,测定肌条的收缩频率和收缩力。结果与对照组比较,实验组在8周时肾盂平滑肌收缩频率和收缩力均高于同期对照组（P〈0.05）,16周时均低于同期对照组（P〈0.05）。对照组8周和16周比较差异无统计学意义（P〉0.05）。实验组8周高于16周（P〈0.05）。结论单侧输尿管部分梗阻早期可能由于代偿作用,肾盂平滑肌自主收缩频率和收缩力均增加,但在晚期可能失去了代偿作用,肾盂平滑肌自主收缩频率和收缩力均降低。     

内皮祖细胞移植修复大鼠颈总动脉内皮损伤

 [目的]探讨内皮祖细胞修复动脉内皮损伤的作用.[方法]建立大鼠颈总动脉内皮损伤模型,16只大鼠随机等分为内皮祖细胞移植组和对照组.体外诱导大鼠外周血单个核细胞为内皮祖细胞.在动脉损伤后,将5-溴脱氧尿苷标记的内皮祖细胞注入损伤动脉段,14 d后取损伤动脉段和对侧正常动脉段.采用病理学方法、免疫组织化学和图像分析技术评价内皮祖细胞的修复效果.[结果]内皮祖细胞移植组的损伤动脉段5-溴脱氧尿苷免疫组化为阳性.内皮祖细胞移植组损伤动脉段的新生内膜厚度较对照组明显减轻（43.5±5.5）μm vs（90.7±12.7）μm,P＜0.05;内皮祖细胞移植组的再内皮化程度明显高于对照组77.8%±0.1%vs52.2%±0.1%,P＜0.05.[结论]内皮祖细胞具有修复动脉内皮细胞损伤的作用,内皮祖细胞可作为心血管疾病细胞移植疗法的种子细胞.     

缺氧诱导因子-1α在实验性大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的：观察单侧输尿管梗阻（ulilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型。肾组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达,探讨HIF-1α表达水平与肾小管间质纤维化的关系。方法：40只雌性SD大鼠随机分为2组,假手术组,UUO组（每组20只）。制备UUO大鼠模型,术后第7天、第14天处死大鼠,肾组织行HE和Masson染色,免疫组织化学和实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测HIF-1α,Ⅰ型胶原（collagenⅠ,ColⅠ）及α-平滑肌肌动蛋白（α—smooth muscle actin,α—SMA）在肾组织中的表达。结果：假手术组与UUO组各时间点肾小管间质纤维化评分比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。术后HIF-lαmRNA水平随梗阻时间延长而递增。UU0组HIF-1α蛋白表达量随着肾间质损害加重而增加,HIF-1α蛋白主要分布在肾小管,其中以近曲小管表达最明显。HIF—1α表达水平与肾小管间质纤维化评分,α-SMA和ColⅠ的表达水平均存在正相关（R值分别为0．71,0．68,0．82,P均〈0．05）。结论：HIF-1α在肾小管上皮细胞内高表达可能参与了肾间质纤维化发生和发展的过程。     

缬沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂(AT1RA)缬沙坦对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及其可能机制。方法35只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和缬沙坦组(n=10),建立大鼠UUO模型,于术后4周检测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿β2-微球蛋白(β2-MG);取梗阻侧肾组织,以H-E、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肝细胞生长因子(HGF)在肾间质的阳性染色,并进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组大鼠SCr、BUN、血浆AngⅡ,尿NAG、β2-MG水平以及α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,缬沙坦组大鼠SCr、BUN,尿NAG及β2-MG水平差异无统计学意义(P>0.05),但血浆AngⅡ及肾间质α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著降低,HGF表达则显著增高(P<0.01)...     

大鼠输尿管梗阻后肾组织骨形态发生蛋白-7的表达及意义

目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠中骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在肾小管间质中的表达部位、动态变化及其与肾小管间质损害的关系.方法60只Wistar大鼠随机分为正常大鼠组、假手术组和单侧输尿管梗阻组,分别于术后1、3、7、14 d处死,采用RT-PCR方法检测BMP-7 mRNA、TGF-β1mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测肾小管间质中BMP-7、TGF-β1的蛋白定位、表达及其与输尿管梗阻后肾小管间质损害的关系.结果与对照组相比,BMP-7 mRNA于术后第1天即出现表达下降并随梗阻时间延长递减,而TGF-β1mRNA随梗阻时间延长递增.BMP-7蛋白在对照组中高度表达,主要分布在肾小管及肾间质,肾小球内基本无表达.在梗阻组随着肾间质损害的加重,BMP-7蛋白表达呈进行性下降,而TGF-β1蛋白表达则逐渐增加.BMP-7与TGF-β1蛋白及mRNA表达均成显著负相关(r=-0.875;r=-0.843,n=20,P＜0.05).结论BMP-7于肾小管间质病变早期即出现表达下调,早于肾间质纤维化的出现,其表达量与肾间质TGF-β1表达负相关且随间质病变进展进行性下降.BMP-7表达下调可能参与介导肾小管间质损害的发生发展.     

Expression of BMP-7 and its receptors in renal tubolo-interstitial fibrosis induced with unilateral ureteral obstruction in rats

Objective:To study the changes of the expression of bone morphogenetic protein-7(BMP-7) and its receptors(BMPR- Ⅰ ,ALK2,ALK3 and ALK6) in the renal tubulointerstitial fibrosis induced with unilateral ureteral obstruction in rats. Methods: Sixty Wistar male rats were divided randomly into the normal control,sham-operation and unilateral ureteral obstruction(UUO) groups and the rats were killedon the 1^st , 3^rd, 7^th and 14^th postoperative days respectively. The mRNA level of BMP-7, BMPR- Ⅰ , ALK2, ALK3 and ALK6 was determined with RT-PCR. The site and level of protein expression of BMP-7 were observed with immunohistochemical staining. Results: The mRNA level of BMP-7, BMPR- Ⅰ ,ALK2 and ALK3 was significantly decreased in the rats of UUO group than in those of the sham-operation group but the mRNA level of ALK6 showed no obvious changes in all the rats. Immunohistochemical staining revealed that the protein of BMP-7 was mainly expressed in the renal tubules and interstitial tissue of the kidneys in normal rats but it was decreased gradually along with the unilateral ureteral obstruction. Conclusion: It is found that the loss of BMP-7 and its receptors including BMPR- Ⅰ ,ALK2 and ALK3 occursin the early phase of renal tubulointerstitial fibrosis before the appearance of other pathological changes in the kidney and may play an important role in the occurrence and progress of renal tubulointerstitial fibrosis.     

Arterially transplanted mesenchymal stem cells in a mouse reversible unilateral ureteral obstruction model: in vivo bioluminescence imaging and effects on renal fibrosis

Background Chronic kidney disease (CDK) is a worldwide health problem,but there is currently no effective treatment that can completely cure this disease.Recently,studies with mesenchymal stem cells (MSCs) on treating various renal diseases have shown breakthroughs.This study is to observe the homing features of MSCs transplanted via kidney artery and effects on renal fibrosis in a reversible unilateral ureteral obstruction (R-UUO) model.Methods Thirty-six Balb/c mice were divided into UUO group,UUO-MSC group,and sham group randomly,with 12 mice in each group.The MSCs had been infected by a lentiviral vector to express stably the luciferase reporter gene and green fluorescence protein genes (Luc-GFP-MSC).Homing of MSCs was tracked using in vivo imaging system (IVIS) 1,3,14,and 28 days after transplantation.Imaging results were verified by detecting GFP expression in frozen section under a fluorescence microscope.E-cadherin,α-SMA,TGF-β1,and TNF-α mRNA expression in all groups at 1 and 4 weeks after transplantation were analyzed by quantitative PCR.Results Transplanted Luc-GFP-MSCs showed increased Luciferase expression 3 days after transplantation.The expression decreased from 7 days,weakened thereafter and could not be detected 14 days after transplantation.Quantitative PCR results showed that all gene expressions in UUO group and UUO-MSC group at 1 week had no statistical difference,while at 4 weeks,except TGF-β expression (P＞0.05),the expression of E-cadherin,α-SMA,and TNF-α in the above two groups have statistical difference (P＜0.01).Conclusion IVIS enables fast,noninvasive,and intuitive tracking of MSC homing in vivo.MSCs can be taken home to kidney tissues of the diseased side in R-UUO model,and renal interstitial fibrosis can be improved as well.     

曲尼司特对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化调节作用的实验研究

目的　探讨曲尼司特 (Tranilast)对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法　将3 6只大鼠行右侧输尿管结扎 ,另 18只行假手术 (SIAM) ,结扎后大鼠随机分成模型组 (UUO)组和药物组 (Tranilast) ,用药组于术前一天开始给予Tranilast 2 0 0mg·kg-1·d-1,术后第 5、10及 15天分别处死各组大鼠中的 6只 ,用免疫组化方法测定肾间质转化生长因子 β(TGF -β) ,α 平滑肌动蛋白 (α SMA)及Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原 (coIⅠ .coIⅢ )的表达并行HE、MASSON染色 ,并观察肾脏病理变化。结果　Tranilast可显著减少TGF -β ,α SMA ,coIⅠ ,coIⅢ的表达 (P <0 0 5 ) ,有效地改善肾脏的病理学改变。结论　曲尼司特抑制输尿管梗阻后肌成纤维细胞 (MyoF)释放TGF -β而调节胶原的合成 ,减少肾间质Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原的沉积 ,从而改善UUO所致肾损伤 ,对实验性肾间质纤维化有一定的防止作用