CD_3AK细胞的培养与抗肿瘤活性研究

目的体外扩增经ＣＤ３单抗（ＣＤ３ＭｃＡｂ）活化的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ），并测定其抗肿瘤细胞作用和表型变化。②方法取１３例肺癌和２例肝癌病人外周血，经密度梯度离心获取淋巴细胞，以ＣＤ３ＭｃＡｂ和ＩＬ－２作为诱导剂，采用液相三步扩增方法扩增培养，并分别用ＭＴＴ和ＩＦＡ法与自体ＬＡＫ对照细胞比较细胞动力学、细胞毒作用和表型变化。③结果ＣＤ３ＡＫ细胞扩增速度、数量和抗肿瘤活性均优于自体ＬＡＫ细胞，其表型为ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８和ＣＤ１６的特殊异源淋巴细胞群。其中ＣＤ４亚群表型数量随培养时间延长明显升高（χ２＝７．６６，Ｐ＜０．０１），而ＣＤ１６则明显下降（χ２＝５．２３，Ｐ＜０．０５），该亚群表型变化可能与培养时间有关。④结论ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的杀肿瘤细胞作用，同时也可作为基因治疗的理想载体细胞。     

LAK细胞对有丝分裂期肿瘤细胞的杀伤作用

为了提高淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）临床应用的疗效，采用抗肿瘤化疗药物长春新碱诱导人肺腺癌细胞Ａｎｉｐ９７３进入有丝分裂期，研究了ＬＡＫ细胞对有丝分裂期肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明，肿瘤细胞进入有丝分裂期后，形态学上发生了明显的变化，ＬＡＫ细胞对有丝分裂期肿瘤细胞的杀伤作用明显增高。电镜下，ＬＡＫ细胞与有丝分裂期的肿瘤细胞以绒毛相接触，呈犬牙交错状，靶细胞的死亡形式是溶解坏死和凋落。     

MtbAK细胞与CD3AK、LAK细胞体外增殖和杀瘤活性比较

目的:比较结核杆菌抗原激活的杀伤细胞(Mtb AK)、CD3AK及LAK细胞的体外增殖能力和杀瘤活性.方法:分别用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)、CD3 mAb和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC),在含rIL-2的RPMI 1640培养液中诱导扩增MtbAk、CD3AK和LAK细胞,用计数法动态观察细胞扩增情况,在流式细胞仪上分析MtbAK中的γδ T细胞比例,以MTT法检测三种扩增细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性.结果:与CD3AK和LAK细胞相比,MtbAK细胞具有更强的增殖能力和较高的细胞毒活性.结论:MtbAK细胞在体外更易于扩增,具有较高的杀瘤活性,有可能应用于肿瘤患者的临床过继免疫治疗.     

静注CD_3AK细胞治疗晚期肝癌的初步观察

用培养７ｄ以上的ＣＤ３单抗激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）加ｒＩＬ－２静注治疗晚期肝癌２１例，其中ＣＲ１例，ＰＲ５例，临床有效率以ＣＲ＋ＰＲ计为２８．９％，明显高于ＬＡＫ细胞抗肝癌疗效。治疗后大多数病人临床症状改善，生活质量提高，外周血ＣＤ３＋、ＣＤ４＋升高，ＣＤ８＋下降，ＣＤ４＋／ＣＤ８＋升高，统计学检验均有显著差异。患者血清ＳＩＬ－２Ｒ水平明显降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：静脉注射ＣＤ３ＡＫ细胞可以降低肝癌患者机体瘤负荷，增强机体免疫力，从而对晚期肝癌产生较好的治疗效果。     

淋巴因子激活的杀伤细胞对有丝分裂期细胞的杀伤作用

为提高淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）临床应用的疗效，采用抗肿瘤化疗药物长春新碱诱导人肺腺癌细胞Ａｎｉｐ９７３进入有丝分裂期，研究ＬＡＫ细胞对有丝分裂期肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明，肿瘤细胞进入有丝分裂期后，形态上发生明显的变化，ＬＡＫ铎有丝分裂期肿瘤细胞的杀伤作用明显增高，电镜下，ＬＡＫ细胞与与有丝分裂期肿瘤细胞以绒毛相接触，呈犬牙交错状，靶细胞死亡形式是溶解坏死和凋亡。     

NK/LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

目的明确免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性是否与肿瘤的耐药性相关。方法采用连续形态学观察及MTT比色法,研究淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞及自然杀伤(NK)细胞,对人口腔癌耐药细胞株KBV200耐药性逆转前后及亲本敏感株KB的杀伤活性。(1)在肿瘤细胞与LAK细胞共育后3 h内连续在倒置显微镜下观察LAK细胞对上述3者的杀瘤效应;(2)采用MTT比色法检测NK及LAK对3株细胞的杀伤率。结果与KB细胞组相比,在KBV200和KBV200 维拉帕米组,LAK细胞出现在靶细胞周围的时间早、数量多,伸出伪足的LAK细胞比率高,出现集落样细胞团块时间亦早。NK、LAK细胞对KBV200细胞株耐药性逆转前后的杀伤率均明显高于敏感株KB(P<0.05),而对耐药株耐药性逆转前后的杀伤率无统计学差异(P>0.05);LAK对各株的杀伤活力均明显强于NK细胞(P<0.05)。结论免疫活性细胞对KBV200细胞株有较强的杀伤作用,逆转耐药性不降低免疫活性细胞杀伤活力,提示细胞过继免疫治疗可能成为控制化疗耐药病人病情发展的一个有效手段。     

单克隆抗体对LAK细胞抗胰腺癌作用的影响

本文介绍了淋巴因子活化的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞），在ＹＰＣ３抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ｍＡｂ）的介导下，对体外、体内人胰腺癌细胞生长的影响。体外４ｈ５１Ｃｒ释放试验表明，特异性识别Ｃａｐａｎ－２人胰腺癌细胞的ＹＰＣ３ｍＡｂ能通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）显著增强ＬＡＫ细胞对Ｃａｐａｎ－２细胞的杀伤作用，这种作用随ｍＡｂ的浓度增加而加强，５０μｇ／ｍｌ的ＹＰＣ３ｍＡｂ提高ＬＡＫ细胞杀伤率约６０％。对照ｍＡｂ无此作用。裸鼠体内实验发现，ＹＰＣ３ｍＡｂ与ＬＡＫ细胞联合应用能完全阻止Ｃａｐａｎ－２胰腺癌移植瘤的生长，优于ＬＡＫ细胞、新鲜脾淋巴细胞和ＹＰＣ３ｍＡｂ的单独作用（成瘤率分别为２５％、１００％和１００％）。ＹＰＣ２ｍＡｂ增强ＬＡＫ细胞的抗肿瘤作用可以为胰腺癌的生物学治疗提供一个新方法。     

鼠淋巴因子诱导的细胞毒细胞对带瘤宿主的保护作用

用小剂量白细胞介素2(IL 2),加细胞毒细胞分化因子(CCDF),激活淋巴因子诱导的细胞毒细胞(LICC)。结果发现:IL 2与CCDF在诱导LICC中有协同作用,CCDF不同于IL 2、IL 1。LICC对肿瘤细胞的杀伤无主要组织相容性复合体和组织来源的限制性,既能杀伤自然杀伤细胞(NK)敏感的靶细胞,也能杀伤与NK相抵抗的靶细胞,不损伤正常淋巴母细胞。不同NK活性小鼠中诱导的LICC无明显差别。LICC与L_(783)肿瘤细胞混合接种小鼠能明显延长患鼠的生存时间。     

四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

目的：比较四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备LAK细胞，并与临床常用的外周血、胎脾及胸腺LAK细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果：脐带血的扩增能力显著高于其余3种LAK细胞（P＜0．01），每份脐带血LAK细胞总数可增殖至2．5×1010；抗肿瘤活性以脐带血LAK对SMMC-7221肝癌细胞出现最早（第3d）、活性最强（85％±3％），明显强于其余三者（P＜o．01）；对K562的杀伤作用仍属脐带血LAK最强；而胸腺LAK的活性最弱。结论：脐带血LAK细胞体外增殖快，杀伤活性强，可用于肿瘤的过继性免疫治疗。     

CD3AK细胞抗肿瘤作用与MHC限制性关系

目的 研究抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3McAb activated killer cells,CD3AK细胞)杀伤肿瘤细胞作用与MHC限制性的关系。方法 采用微量淋巴细胞毒实验方法测定CD3AK细胞及肿瘤细胞MHC表型，用MTT法测定CD3AK细胞杀伤活性。结果 (1)不同人来源的CD3AK细胞，其MHC表型不同，但对同种肿瘤传代细胞都有很强的杀伤作用，且不同人来源的CD3AK细胞间杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(2)同一来源CD3AK细胞对不同肿瘤传代细胞株(MHC表型不同)的杀伤作用差异无显著性(P＞0．05)；(3)人外周血诱导的CD3AK细胞对鼠肿瘤细胞株(Yac—1)与对人肿瘤传代细胞株(K—562，Raji)一样具有很强的杀伤作用。结论 CD3AK细胞杀伤肿瘤的作用是非MHC限制的，在临床应用中可用正常人外周血诱导得到的CD3AK细胞体外培养增殖后输给肿瘤病人进行治疗。该效应细胞来源方便，可用于肿瘤术后清除残留肿瘤细胞，具有重要应用价值。     

各淋巴细胞亚群杀伤肿瘤细胞的初步研究

应用单克隆抗体分离主要的淋巴细胞亚群NK、CD_+~4、CD_8~+、B细胞,分别测定其对K_(562)瘤细胞的杀伤活性及各亚群细胞的协同作用。本实验结果表明,除NK细胞外,CD_4~+、CD_8~+、B细胞均能单独杀伤肿瘤细胞,各亚群的对比无显著差异。淋巴细胞中除某一亚群的混合细胞杀伤力大于该亚群本身,并提示T细胞系统在肿瘤免疫中的重要作用。     

CD3AK细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性的实验研究

本研究采用抗ＣＤ３单克隆抗体辅以少量的基因重组人白细胞介素２和植物血凝素诱导外周血淋巴细胞，成功地研制出具有抗瘤活性的ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞。     

抗CD_3单克隆抗体激活的杀伤细胞的细胞化学研究

采用抗ＣＤ_３单克隆抗体和重组白细胞介素２共刺激外周血单个核细胞并经重组白细胞介素２扩增制备抗ＣＤ３单克隆抗体激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）。细胞化学研究表明５６．５％的ＣＤ３ＡＫ为酸性非特异性酯酶阳性淋巴细胞，糖原过碘酸雪夫反应阳性细胞和酸性磷酸酶阳性细胞较对照增多。     

螺旋藻多糖对CD_3AK细胞增殖能力的影响

研究了螺旋藻多糖（PS）对CD3McAb激活的杀伤细胞（CD3McAbactivatedkillercells,CD3AKcells）增殖能力的影响。结果表明，当PS浓度为2．5μg／ml培养体系条件下，对CD3AK细胞具有明显的刺激细胞增殖作用（P＜0．02）；对培养长达23d的CD3AK细胞杀伤肿瘤细胞（K563细胞）的活性仍维持在较高的水平（46．5％～50％）。     

噻唑蓝法测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用

目的：探讨噻唑蓝法应用于测定免疫偶合物对肿瘤细胞的杀伤作用的可能性。方法：将被测试物与肿瘤细胞共同孵育2h后撤去测试物，加入新鲜培养液培养巩，然后加入噻唑蓝染液，4h后酶标仪测定。结果：所测试的两种免疫偶合物对靶肿瘤有较强的细胞毒作用，这种作用明显强予对非靶细胞的作用。结论：噻唑蓝法是一种敏感、简单、客观性强的测定免疫偶合物细胞毒作用的方法。所测定的两种免疫偶合物具有临床应用价值。     

CIK细胞及其抗肿瘤研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)是由多种细胞因子,如干扰素γ、重组白细胞介素2、抗CD3McAb等诱导而成的对多种肿瘤具有杀伤活性的细胞毒性T细胞,具有高效的非主要组织相容性复合物限制性溶瘤活性,被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的新希望。本文综述了CIK细胞的特点、杀瘤机制和临床应用现状。     

CD_(44)在肿瘤干细胞的研究进展

肿瘤干细胞是存在肿瘤组织中的少部分具有干细胞性质的细胞群。越来越多的证据表明肿瘤组织中存在肿瘤干细胞,并且其与肿瘤的增殖、转移、复发和对放化疗不敏感关系密切。近年来,CD44作为干细胞和多种肿瘤组织干细胞的表面标志分子被广泛研究。现对CD44分子的结构、功能及其在肿瘤干细胞研究领域的应用予以综述。     

正常鼠和免疫鼠CD3AK细胞和LAK细胞杀伤活性的比较研究

实验取正常鼠和Ｐ８１５肿瘤细胞致敏的免疫鼠脾细胞，经抗ＣＤ３抗体与低剂量ＩＬ－２或高剂量ＩＬ－２分别诱生为ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞，用改良的乳酸脱氢酶释放法以Ｐ８１５细胞和ＹＡＣ－１细胞为靶细胞，测定ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果表明：正常鼠ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性高于ＬＡＫ细胞，对ＹＡＣ－１细胞的杀伤活性低于ＬＡＫ细胞。免疫鼠ＬＡＫ细胞对Ｐ８１５细胞的杀伤活性明显增高，高     

小鼠类胚胎干细胞分离培养及用于制作嵌合体小鼠的实验研究

目的探讨分离小鼠囊胚内细胞群类胚胎干细胞及用于制作嵌合体小鼠的方法及应用价值。方法分离3.5d小鼠囊胚内细胞群的类胚胎干细胞作为供体细胞,通过显微注射方法将分离的类胚胎干细胞注射到供体小鼠的囊胚腔中,再将注射后的囊胚移植到假孕雌鼠的子宫中制作嵌合体小鼠。结果分离36枚囊胚的内细胞群类胚胎干细胞,注射256只昆明小鼠囊胚中,移植32只假孕雌鼠子宫中,获产崽2窝,共12只,其中2只获毛色嵌合体小鼠。结论采用该技术分离所获得的类胚胎干细胞作为供体细胞制作嵌合体小鼠获得成功,该方法为ES细胞介导的转基因动物制作增添了一条新的途径,在同种不同品系的动物改良及遗传病基因治疗中有一定的应用价值,尤其是对未能建立ES细胞系的大动物的遗传工程操作具有一定意义。