β-榄香烯逆转K562/ADM细胞MDR机制的探讨

目的:探讨β-榄香烯(β-elemene)对多药耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转及作用机制。方法:MTT法检测抗药性逆转,免疫组化检测Bcl-2及P-gp蛋白的表达,流式细胞术对凋亡百分率及Bcl-2、P-gp蛋白的表达进行定量检测。结果:非细胞毒性浓度的β-elemene(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P<0.01),逆转倍数为2.18倍;明显增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,凋亡率由(1.88±0.11)%上升至(3.93±0.06)%(P<0.01);降低耐药细胞Bcl-2及P-gp的表达,Bcl-2的表达率由(94.8±1.9)%降至(66.7±0.9)%,P-gp的表达率由(98.7±2.1)%降至(76.8±1.4)%。结论:β-榄香烯可部分逆转K562/ADM细胞的耐药性,其逆转机制具有异质性,主要以抑制Bcl-2的表达从而诱导细胞凋亡来逆转MDR,同时兼具降低P-gp表达的作用。     

川芎嗪与β-榄香烯联合应用诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的实验研究

目的:探讨不同作用机制的川芎嗪(Tetrainethylpyrazine,TMP)与β-榄香烯(β-elemene)联合应用,从多环节逆转耐药细胞K562/ADM的多药耐药(multidrug resistance,MDR),以期进一步提高逆转效果.方法:采用MTT法检测细胞的药敏性及抗药性逆转,流式细胞术及透射电镜检测细胞凋亡,应用SPSS(10.0 Production Pacility)软件包对实验结果进行统计学处理.结果:1)非细胞毒性浓度的TMP(350μg/ml)及β-榄香烯(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),逆转耐药倍数分别为2.03倍及2.18倍.β-榄香烯(4.0μg/ml)具有诱导该细胞凋亡的作用.2)上述两种药物以非细胞毒性浓度联合应用,对ADM的逆转倍数为4.65倍,明显高于二者单独应用,而且也高于两者单独应用之和.其主要逆转机制是两药的联合应用通过升高细胞内ADM的浓度,诱导该细胞凋亡的途径,实现提高逆转效果的目的.结论:TMP和β-e榄香烯联合应用能明显逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性和诱导该细胞的凋亡.     

β-榄香烯抗肿瘤及逆转耐药机制的研究进展

β-榄香烯是国产抗癌药,主要通过直接杀伤肿瘤细胞、诱导细胞凋亡、诱导分化、细胞周期阻滞、抑制信号转导及抑制血管生长等方式参与抗肿瘤。近年有学者提出β-榄香烯可有效逆转化疗药物耐药,与放化疗联合增敏等功效,且因其广谱、安全、有效、价廉等突出优点而具有良好的应用前景。现就β-榄香烯抗肿瘤及逆转耐药机制的相关研究作一综述,为榄香烯更好地应用于临床提供理论基础。     

β-榄香烯联合紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的体外研究

目的:观察联合β-榄香烯和紫杉醇对诱导胃癌细胞凋亡以及对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:β-榄香烯和紫杉醇单独及联合作用于胃癌SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印记检测凋亡相关蛋白的表达。结果:单药β-榄香烯作用SGC7901细胞24、48和72小时的IC50值分别为(52.56±6.26)、(28.69±2.36)和(13.33±0.64)μg/ml。单药紫杉醇作用24、48和72小时的IC50值为(7.23±1.98)、(1.72±0.76)和(0.22±0.19)μg/ml。选用低浓度药物(10μg/ml的β-榄香烯和2μg/ml的紫杉醇)联合处理SGC7901细胞24小时,与相应浓度β-榄香烯、紫杉醇单药组相比,两药联合组对SGC7901的增殖抑制率显著增强(P<0.05),细胞凋亡率显著提高。进一步研究发现β-榄香烯和紫杉醇联合后,诱导了PARP裂解以及显著下调了Bcl-2与Bax的比值。结论:β-榄香烯和紫杉醇联合用药后,可能通过下调Bcl-2与Bax的比值诱导PARP裂解,进而抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

β-榄香烯诱导K562白血病细胞凋亡

目的 探讨β-榄香烯诱导人红白血病K562细胞株凋亡作用的机制。方法 采用Hoechst33342和PI荧光染色电镜、DNA电泳、免疫组化以及流式细胞术分析法,对K562细胞凋亡的定性与定量以及凋亡抑制基因编码蛋白bcl-2在肿瘤细胞内的表达进行检验。结果 经β-榄香烯处理的K562细胞出现核固缩,染色质边集, 凋亡小体形成,琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA梯状带,凋亡细胞发生率与药物浓度和作用时间呈正相关,即药物浓度为40ug/ml(48h),凋亡细胞的发生率从2.3%上升至58.4%,经β-榄香烯处理的K562细胞的bcl-2表达较对照组降低。结论 β-榄香烯对肿瘤细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡,其抑制细胞内Bcl-2的表达,是诱发肿瘤细胞凋亡的主要机制之一。     

β-榄香烯逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

目的　探讨 β 榄香烯 (β ELE)逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对阿霉素 (ADM)的耐药性。方法　采用MTT法测定β ELE对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞药物敏感性的影响。经荧光分光光度法检测 β ELE对细胞内化疗药物ADM积累的影响 ,应用流式细胞术观察耐药细胞的凋亡抑制蛋白bcl 2改变。结果　β ELE对MCF 7/ADM的耐药性有明显逆转作用 ,非细胞毒性剂量 (6 μg/ml)及低毒剂量 (13μg/ml)的 β ELE逆转倍数分别为 1.4倍及 2 .2倍。β 榄香烯作用后 ,MCF 7/ADM的细胞内ADM浓度明显增加 (P <0 .0 1) ,bcl 2由 90 .2 %降至 70 .0 % (P <0 .0 5 )。结论　β ELE可部分逆转MCF 7/ADM细胞的耐药性 ,逆转机制与增加细胞内药物积累及降低bcl 2的表达有关。     

β-榄香烯对肾细胞癌的抗肿瘤作用及机制研究

目的:探讨β-榄香烯对肾细胞癌786-0细胞的抗肿瘤作用及机制.方法:浓度为50,100,150,200和250 μg/ml β-榄香烯作用于肾癌786-0细胞24、48和72h,MTT法检测细胞活力.50,150μg/ml β-榄香烯作用于786-0细胞24h,流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡和周期分布,免疫印迹法检测PARP裂解和凋亡相关蛋白的表达.结果:β-榄香烯对肾癌786-0细胞的抑制作用随着浓度和时间的增加而增强.流式细胞术结果提示β-榄香烯可诱导细胞凋亡,而对细胞周期分布无明显影响.β-榄香烯可裂解PARP,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达.结论:β-榄香烯可能通过诱导细胞凋亡发挥对肾癌786-0细胞的抗肿瘤作用.     

β-榄香烯对肾细胞癌的抗肿瘤作用及机制研究

目的：探讨β-榄香烯对肾细胞癌786-0细胞的抗肿瘤作用及机制。方法：浓度为50,100,150,200和250μg/mlβ-榄香烯作用于肾癌786-0细胞24、48和72h,MTT法检测细胞活力。50,150μg/mlβ-榄香烯作用于786-0细胞24h,流式细胞术碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡和周期分布,免疫印迹法检测PARP裂解和凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对肾癌786-0细胞的抑制作用随着浓度和时间的增加而增强。流式细胞术结果提示β-榄香烯可诱导细胞凋亡,而对细胞周期分布无明显影响。β-榄香烯可裂解PARP,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达。结论：β-榄香烯可能通过诱导细胞凋亡发挥对肾癌786-0细胞的抗肿瘤作用。     

ERK信号传导通路在β-榄香烯诱导肾癌细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨ERK信号传导通路在β-榄香烯诱导肾癌细胞凋亡中的作用.方法:以人肾透明细胞癌786-0细胞为研究对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡;蛋白印迹法检测细胞内磷酸化ERK及总ERK的表达水平.为研究ERK通路活性对β-榄香烯抗肿瘤作用的影响,将实验分为空白对照组,β-榄香烯单药组( 160μg/mL)、ERK抑制剂组(PD98059,20μmol/L)和联合用药组(PD98059+β-榄香烯).结果:40、80、160及320 μg/mL的β-榄香烯作用于786-0细胞24 h,细胞生存率逐渐下降,分别为(83.20±4.63)％、(74.29±3.50)％、(49.75±3.08)％和(16.99±4.73)％,相邻浓度间P均＜0.05.随着浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加.进一步研究发现,β-榄香烯可明显抑制细胞内磷酸化ERK的水平.同β-榄香烯单药组相比,联合用药组的细胞活力明显降低,差异有统计学意义[(52.73±6.36)％vs (39.24±3.24)％],P＜0.05.结论:β-榄香烯可能通过抑制ERK通路活性发挥对肾癌细胞的抗肿瘤作用.     

不同剂型β-榄香烯类药物抗癌疗效及其机制的研究

目的观察不同剂型β-榄香烯类药物的抗癌疗效及其作用机制。方法本实验采用MTT方法、流式细胞术分析法,检测二者对人红白血病K562细胞生长抑制的影响。结果β-榄香烯乳剂和β-榄香烯吗素均能明显抑制K562细胞生长,其作用机制主要是诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期(G1期细胞升高,S期细胞下降)。结论β-榄香烯乳剂和β-榄香烯吗素抗癌疗效及其作用机制相似。     

β-榄香烯诱导人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡及自噬的实验研究

目的 探讨β-榄香烯在骨肉瘤中诱导自噬发生的信号通路及其对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响.方法 以不同浓度(0、10、20、50、100、150μg/ml)的β-榄香烯处理人骨肉瘤143B细胞24、48 h后,应用CCK-8法检测细胞存活率;用0、20、50μg/mlβ-榄香烯处理143B细胞48 h后,应用流式细胞仪使用A...     

β-榄香烯体外逆转人肺腺癌细胞PC9耐吉非替尼的研究

[目的]探讨β-榄香烯体外逆转人肺腺癌细胞PC9耐吉非替尼的作用及其机制.[方法]噻唑蓝(MTT)比色法测定吉非替尼对PC9/ZD的耐药性,计算耐药倍数.MTT法检测无细胞毒的β-榄香烯浓度,并检测此浓度逆转PC9/ZD的作用,计算逆转倍数.Western Blot检测耐药相关蛋白P-gp、survivin的表达情况.[结果]吉非替尼对PC9细胞的IC50为0.21 μmol/L,对PC9/ZD细胞的IC50为5.45μmol/L,耐药倍数为25.9.当β-榄香烯浓度低于10μg/ml时,对PC9及PC9/ZD的抑制率均小于10％,没有细胞毒性.β-榄香烯10μg/ml可逆转PC9/ZD对吉非替尼的耐药性,逆转倍数为2.68,同时细胞内P-gP及survivin的表达水平明显降低.[结论]β-榄香烯具有逆转PC9/ZD细胞耐吉非替尼的作用,可能与下调耐药细胞内P-gp、survivin表达水平相关.     

β－榄香烯诱发肿瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨β－榄香烯的抗癌疗效及其作用机制。方法：采用ＭＴＴ方法、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２和ＰＩ荧光染色法、电镜及流式细胞术分析法,发现β－榄香烯乳对Ｋ５６２细胞生长的影响。结果：β－榄香烯明显抑制Ｋ５６２细胞的生长,对Ｋ５６２细胞的半数生长摇抑制剂量（ＩＣ５０）为１７．１４μｇ／ｍｌ。其抑制细胞生长能力主要是诱导细胞凋亡,并且呈浓度和时间依赖性。在影响细胞周期方面,主要使Ｇ、期细胞数目增多,Ｓ期     

β-榄香烯联合照射对肺腺癌A549细胞凋亡及Livin基因表达的影响

目的:检测β-榄香烯乳对肺腺癌A549细胞株放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法:四氮唑蓝比色分析法(MTT法)检测β-榄香烯乳对A549细胞增殖的半数抑制浓度(IC50);将细胞分为对照组(C)、照射组(R)、β-榄香烯乳组(0.1×IC50、0.2×IC50)及β-榄香烯乳联合照射组(0.1×IC50+R、0.2×IC50+R),用不同浓度的β-榄香烯乳处理细胞24h后照射,流式细胞仪检测细胞凋亡率。实时定量PCR技术(real-time PCR)检测细胞Livin基因mRNA表达量。结果:MTT法测得β-榄香烯乳对A549细胞增殖的IC50值为115μg/ml;流式细胞仪检测β-榄香烯乳联合照射组细胞凋亡率明显高于单纯照射组及β-榄香烯乳组(P<0.05);β-榄香烯乳联合照射组细胞Livin基因mRNA表达量较照射组明显下降(P<0.01)。结论:β-榄香烯乳可抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡和抑制Livin基因mRNA表达,其放射增敏机制可能与这些作用有关。     

β-榄香烯乳联合照射对肺腺癌A549 细胞凋亡及KU70基因表达的影响*

目的:检测β- 榄香烯乳对肺腺癌A549 细胞株放射增敏作用,探讨β- 榄香烯乳影响细胞凋亡及KU70基因mRNA 表达的放射增敏机制。方法:四氮唑蓝比色分析法（MTT 法）检测β- 榄香烯乳对A549 细胞的半数抑制浓度（IC 50）;将细胞分为对照组（C）、照射组（IR）、β- 榄香烯乳组（0.1 ×IC50、0.2 ×IC50）及β- 榄香烯乳联合照射组（0.1 ×IC50+IR、0.2 ×IC50+IR）,不同浓度的β- 榄香烯乳处理细胞24h 后照射,通过克隆形成实验计算细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期与凋亡率;逆转录PCR 技术（RT-PCR）检测细胞KU70基因mRNA 表达量。结果:MTT 法测得β-榄香烯乳对A549 细胞的IC 50值为120 μ g/mL;克隆形成实验证明β-榄香烯乳对A549 细胞有放射增敏作用;β- 榄香烯乳联合照射组细胞G2/M期比率及凋亡率明显高于单纯照射组及β- 榄香烯乳组（P<0.05）;β- 榄香烯乳联合照射组细胞KU70基因mRNA 表达量较照射组明显下降（P<0.05）。 结论:β- 榄香烯乳可促进A549 细胞凋亡和抑制KU70基因mRNA 表达,诱导凋亡同时抑制KU70参与的双链损伤修复途径可能是其放射增敏的机制。      

原代乳腺癌细胞对β-榄香烯体外敏感性研究

目的:探讨β-榄香烯在乳腺癌临床治疗中的作用。方法:采用手术切取的乳腺癌组织制备原代乳腺癌细胞悬液,MTT法体外药敏实验检测原代乳腺癌细胞对β-榄香烯及数种临床常用化疗药的不同敏感性,并进行比较分析。结果:原代乳腺癌细胞对β-榄香烯的敏感性低于5-FU、ADM及MMC,且有显著性差异(P<0.01);乳腺癌细胞对β-榄香烯具有中度敏感性而与常用化疗药物相近,且无显著性差异(P>0.05)。结论:β-榄香烯对乳腺癌的临床治疗具有中度敏感性可作为二线药。     

β-榄香烯抑制HepG2细胞侵袭及转移的作用机制

目的:研究β-榄香烯（β-elemene）对体外培养的人肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法:细胞分为试验组和对照组,试验组细胞给予β-榄香烯处理,对照组细胞不添加任何药物。采用MTT法检测HepG2细胞的活力;分别采用划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验测定HepG2细胞的体外迁移、侵袭和黏附能力;采用明胶酶谱法及western blot检测HepG2细胞MMP-9酶活性及蛋白表达;采用免疫荧光染色及western blot检测HepG2细胞NF-κB p65核转位的情况。结果:划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验表明试验组细胞的迁移、侵袭和黏附能力均明显低于对照组（P＜0.05）,呈浓度依赖性;明胶酶谱法及western blot表明β-榄香烯能明显降低MMP-9的酶活性及其蛋白表达,呈浓度依赖性;免疫荧光染色及western blot表明与对照组相比,β-榄香烯可以明显抑制HepG2细胞NF-κB p65的核转位,从而抑制其活化,呈浓度依赖性。结论:一定量的β-榄香烯在体外可以抑制HepG2细胞迁移、侵袭和黏附,其机制可能与其通过抑制NF-κB p65活化从而抑制MMP-9的表达有关。     

β-榄香烯对人乳头状甲状腺癌细胞生物学行为的影响及其作用机制

目的:研究β-榄香烯对人乳头状甲状腺癌（PTC）的治疗作用并探讨其作用机制。方法:选择人PTC中TPC-1、K1细胞系为研究对象,以不同浓度β-榄香烯分别作用于两个细胞系。采用CCK-8比色法分析细胞增殖情况;流式细胞仪检测对细胞凋亡和周期的影响;Transwell小室法观察细胞侵袭性的变化。结果:经β-榄香烯处理后,TPC-1和K1细胞增殖被抑制,且呈时间-浓度依赖性。当β-榄香烯浓度分别为40、60 μg/ml时,TPC-1细胞凋亡比例升高,且差异有统计学意义（P<0.05）;当β-榄香烯浓度分别为20、40 μg/ml时,K1细胞凋亡比例升高,且差异有统计学意义（P<0.05）。当β-榄香烯浓度为60 μg/ml时,TPC-1细胞在G1期所占比例显著增高（P<0.05）;当β-榄香烯浓度为10、20和40 μg/ml时K1细胞在G2/M期所占比例显著增高（P<0.05）。经β-榄香烯处理后,TPC-1、K1细胞穿过基质胶的细胞数均明显减少（P<0.05）。结论:β-榄香烯对PTC有抗肿瘤作用,有潜力成为治疗PTC的一种化疗药物。     

β-榄香烯对人膀胱癌5637细胞凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯对人膀胱癌5637细胞的诱导凋亡作用。方法:常规培养人膀胱癌5637细胞,分别用15.0、30.0、45.0 mmol/L的β-榄香烯作用于细胞,以未加药组为对照组,流式细胞仪检测细胞凋亡百分比的变化。此外,对40只裸鼠以皮下注射膀胱癌5637细胞进行荷瘤造模,并随机分为3个β-榄香烯处理组(低剂量组50mg/kg、中剂量组100mg/kg、高剂量组200mg/kg)和1个空白对照组(生理盐水)。每组10只,连续用药20d后,测量各组裸鼠的移植瘤的大小,免疫组织化学法及Western blot检测各组裸鼠移植瘤组织caspase-3蛋白裂解片段的变化。结果:β-榄香烯可明显诱导体外培养细胞发生凋亡,在裸鼠移植瘤模型中发现β-榄香烯高剂量处理组中荷瘤的大小明显小于空白对照组,免疫组织化学法及Western blot检测结果显示β-榄香烯高剂量处理组中caspase-3蛋白裂解片段量明显高于空白对照组。结论:β-榄香烯对膀胱癌5637细胞具有生长抑制作用,并且通过caspase-3介导的细胞凋亡途径诱导膀胱癌细胞凋亡。     

β-榄香烯对人食管癌细胞 EC9706增殖、凋亡及 caspase-3的影响

目的：研究β-榄香烯对人食管癌细胞EC9706增殖、凋亡及caspase-3表达的影响。方法采用不同浓度的β-榄香烯（0、10、20、30、40、50μg／ml）处理细胞24 h,CCK-8测定细胞增殖活力。以50μg／mlβ-榄香烯处理细胞0、6、12、24 h,CCK-8测定细胞增殖活力。以不加β-榄香烯组作为对照组,选取50μg／mlβ-榄香烯处理细胞24 h,流式细胞术测定细胞凋亡率,分光光度法测定caspase-3活性。结果随着β-榄香烯浓度的增加,人食管癌细胞增殖活力逐渐下降,呈浓度依赖性（P＜0．05）。以50μg／mlβ-榄香烯处理细胞0、6、12、24 h,随着时间的增加,细胞增殖活力下降,呈现时间依赖性（P＜0．05）。相比对照组,50μg／ml β-榄香烯处理细胞24 h后细胞凋亡明显增加（P＜0．05）,caspase-3活性明显增加（P＜0．05）。结论β-榄香烯可抑制食管癌细胞增殖、诱导其凋亡,并且其诱导凋亡的作用机制可能与促进caspase-3活化有关。