布氏锥虫未知CCCH-型锌指蛋白TbZC3H8功能特性的初步分析

目的 通过RNAi和蛋白复合物鉴定来初步分析布氏锥虫未知锌指蛋白TbZC3H8的特性及功能.方法 运用蛋白数据库和分析软件对TbZC3H8进行序列分析和结构域预测;构建RNAi诱导表达细胞株分析TbZC3H8经RNAi敲低后对锥虫生长的影响,并通过RT-QPCR和Western blot检测RNAi干扰效率;构建异位融合表达myc-TAP标签的TbZC3H8细胞株,采用串联亲和纯化合并质谱鉴定其蛋白复合物组成;采用免疫荧光分析蛋白定位.结果 TbZC3H8的CCCH结构域在动基体原虫中高度保守;RNAi下调TbZC3H8后明显抑制了锥虫复制;TbZC3H8蛋白复合物中包含多种未知蛋白和两种RNA结合蛋白;TbZC3H8蛋白定位于胞质中,血清饥饿和热刺激对其定位无影响.结论 TbZC3H8是锥虫生长必需的,TbC3H8与RNA结合蛋白的相互作用暗示其可能在RNA加工代谢中发挥着作用.     

一个新的C2H2型锌指蛋白cDNA基因的克隆

目的：从K562细胞中克隆新的锌指蛋白cDNA基因片段。方法：提取K562细胞中总RNA,逆转录后,用CX2C和H－C Link引物进行加端PCR,扩增产物经限制性内切酶酶切后,重组至pGEMTZf( )载体,用末端终止法测定插入片段的序列。结果：测出五个插入片段的序列。与GenBank核酸数据库中的已知序列进行同源性比较分析,发现一个序列为新的cDNA基因片段。该基因编码产物至少含有五个C2H2型锌指结构。结论：从K562细胞中克隆出一个新的C2H2型锌指蛋白cDNA基因片段,为测定该基因的全序列和功能研究奠定了基础。     

锌指基因ZFP580在大鼠心肌缺血损伤中的表达

【目的】观察大鼠ZFP580基因在急性心肌缺血的不同时期的表达变化,以初步探讨锌指基因ZFP580在心肌缺血损伤中的作用。【方法】腹腔注射异丙肾上腺素（ISO）建立大鼠急性心肌缺血模型,分别于ISO注射后1h、24h取材,对照组腹腔注射等量生理盐水。观察心肌形态学改变,检测血清中乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶（CK）的含量,半定量RT—PCR及免疫组化方法分析ZFP580 mRNA及蛋白水平的表达变化。【结果】ISO处理组大鼠心肌组织广泛缺血损伤,血清LDH、CK含量明显升高（P〈0．05）,心室肌ZFP580 mRNA表达下调（P〈0．05）,免疫组化染色阳性细胞百分率明显降低,以ISO注射1h后变化更为明显。【结论】ZFP580是心肌缺血损伤的早期调控基因之一,其表达下调可能参与了心肌缺血损伤的形成。     

苦参素型锌指蛋白4在甲状腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺癌组织中苦参素型锌指蛋白4(ZMAT4)基因的表达及临床意义。方法利用癌症基因图谱数据库(TCGA)检索包含ZMAT4 mRNA表达值与对应生存预后资料的497例甲状腺癌患者的信息,在线利用UALCAN数据库检索ZMAT4在甲状腺癌中的表达数据,分析ZMAT4 mRNA水平在甲状腺癌组织与对应的正常甲状腺组织中的表达差异,并分析甲状腺癌组织中ZMAT4 mRNA表达与相应临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier生存分析比较甲状腺癌患者不同临床病理参数下ZMAT4 mRNA表达与总生存期(OS)的关系;并根据临床病理特征分析不同亚组中ZMAT4 mRNA表达与OS的关系。结果 TCGA数据库分析结果显示,甲状腺癌组织中ZMAT4 mRNA的相对表达量显著低于正常甲状腺组织(P <0. 01)。甲状腺癌组织中ZMAT4 mRNA的表达与组织学类型、TNM分期、T分期、N分期有关(χ~2=59. 604、10. 705、8. 535、31. 234,P <0. 01),与患者的性别、年龄、M分期、肿瘤多灶性、肿瘤大小、根治程度无关(χ~2=0. 000、2. 851、0. 016、0. 374、0. 221、4. 330,P> 0. 05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,ZMAT4 mRNA高表达组患者的OS低于低表达组(Log Rank=8. 767,P <0. 05); TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、Ⅲ+Ⅳ期患者中,ZMAT4 mRNA高表达组患者的OS低于低表达组(Log Rank=10. 291、6. 148,P <0. 05);在乳头状癌、N0分期患者中,ZMAT4 mRNA高表达组患者的OS低于低表达组(Log Rank=11. 586、11. 807,P <0. 05)。结论 ZMAT4低表达与甲状腺癌的发生、发展相关,是候选的抑癌基因。ZMAT4基因的表达与甲状腺癌的OS关系密切。     

锌指蛋白23在卵巢癌中的表达

目的:分析ZnF23 mRNA在卵巢癌组织和细胞中的表达情况,以探讨其与细胞凋亡的关系.方法:采用实时荧光定量RT-PCR法检测22例卵巢癌患者癌组织和其癌旁正常组织中ZnF23表达水平.结果:22例卵巢癌患者癌组织及其癌旁正常组织标本中ZnF23相对表达量(ZnF23/GAPDH)分别为(0.2±0.15)和(1.0±0.1),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:卵巢癌患者中ZnF23蛋白表达水平显著下降,可能与卵巢癌的发生发展有密切的关系.     

锌指蛋白与肝细胞癌的研究进展

由于肝细胞癌的发生与发展机理复杂,目前还未充分揭示.作为人体基因组中规模最大的转录因子家族,锌指蛋白现已证实在包括肝癌在内的许多癌症中起到了关键性作用,现将对探讨锌指蛋白的构成、类型,以及在肝细胞癌中的作用机制方面进行综述.     

CXXC锌指蛋白1在恶性肿瘤中的研究进展

CXXC锌指蛋白1(CXXC finger protein-1,CFP1)是一种表观遗传调控因子,在哺乳动物细胞内参与DNA甲基化和组蛋白修饰.研究表明CFP1的失调影响细胞的基因表达、DNA损伤修复、信号转导、增殖、分裂、分化等,与恶性肿瘤的发生发展、治疗及不良预后密切相关.本文简要综述CFP1的基本功能及在恶性肿瘤...     

锌指蛋白502在肺腺癌中的表达及作用机制

目的 探讨锌指蛋白502 (ZNF502)在肺腺癌中的表达情况、临床意义及分子机制。方法 通过肿瘤基因组图谱（TCGA）分析ZNF502在肺腺癌中的mRNA表达,以及与生存危险因素的相关性。采用Kaplan-Meier法分析ZNF502与患者预后的关系。通过linkedomics网站对ZNF502的下游差异基因进行基因集富集分析（GSEA）,并采用Western blotting对下游关键分子进行验证。运用免疫荧光实验确定ZNF502蛋白在肺腺癌细胞株的定位。MTS细胞增殖实验、克隆形成实验和EdU实验检测ZNF502过表达对肿瘤细胞增殖能力的影响。结果 ZNF502在肺腺癌组织中呈显著低表达（P <0.05）,主要定位于细胞核,且与肺腺癌患者的良好预后呈正相关。富集分析结果显示,ZNF502负调控细胞增殖和G2/M检查点相关通路,导致细胞周期阻滞。ZNF502过表达显著抑制肺腺癌细胞增殖能力,并下调G2/M检查点关键蛋白的表达。结论 ZNF502在肺腺癌中低表达,其通过调控细胞周期抑制肺腺癌细胞的增殖,延缓肿瘤发生发展。     

过表达microRNA-29a上调锌脂蛋白91对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡的影响

目的  建立高感染效率、稳定过表达microRNA-29a（miR-29a）的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）,探索miR-29a对PC12细胞凋亡的影响。方法  将miR-29a前体表达载体、空白对照载体进行慢病毒包装,用病毒上清感染PC12并进行抗性筛选。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-29a的表达,流式细胞术检测miR-29a稳定过表达组、空质粒对照组以及未感染组PC12细胞的凋亡情况,利用TargetScan 6.0数据库预测miR-29a的关键靶点,RT-qPCR以及Western blot检测预测的miR-29a下游靶基因mRNA以及蛋白表达的变化。结果  经抗性筛选后获得稳定表达miR-29a的PC12细胞系,荧光显微镜下观察各组PC12细胞的感染效率均达80%以上,miR-29a过表达组凋亡率为（5.1±0.92）%,空质粒对照组为（1.832±0.26）%,未感染组为（1.667±0.185）%,miR-29a过表达促进PC12细胞凋亡（P <0.01）,空质粒对照组与未感染组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义;RT-qPCR检测miR-29a过表达时锌指蛋白91（ZFP91）的表达量升高,miR-29a过表达组ZFP91 mRNA的表达量是空质粒对照组的1.835倍（P =0.000）,空质粒对照组与未感染组ZFP91 mRNA的表达量比较差异无统计学意义;Western blot检测的ZFP91蛋白表达量与空质粒对照组比较也升高。结论  在PC12中miR-29a过表达促进PC12细胞凋亡,过表达miR-29a也促进ZFP91表达,其机制仍待进一步阐明。

     

锌指蛋白A20对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用研究

目的 探讨锌指蛋白A20对小鼠实验性内毒素性肝损伤的保护作用.方法 以内毒素血症小鼠为动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法 ,观察A20转基因处理对内毒素血症小鼠肝组织内TNF-α、IL-1β水平以及肝脏病理损伤的保护.结果 A20组LPS注射24h后肝组织匀浆TNF-α表达水平为(923.2±11.97)pg/ml、IL-1β为(996.43±15.32)pg/ml,与LPS对照组比较,t检验显示P值均＜0.05,A20组与LPS对照组之间TNF-α和IL-1β水平差异有统计学意义.病理分析提示A20组24h后小鼠肝脏病理损伤明显较LPS对照组轻.结论 A20能够明显抑制内毒素血症小鼠肝组织的炎症反应,减轻肝组织炎症损伤.     

急性脊髓损伤时小鼠肺组织锌指蛋白A20表达

目的：研究急性脊髓损伤和（或）内毒素攻击时小鼠肺组织中锌指蛋白A20的表达规律.方法：将昆明种小白鼠220只随机分为对照组（N组,n=10）、脊髓损伤组（A组,n=70）、内毒素组（B组,n=70）和脊髓损伤合并内毒素组（AB,n=70）.以免疫组织化学（IHC）,RT-PCR和HE染色分别检测肺组织中A20蛋白、mRNA和病理损害.结果：IHCN组A20蛋白微量表达（0.142±0.012）;A组4～48h较N组显著升高（P〈0.05）;B组0.5h就出现高表达（0.202±0.020）,0.5～24h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～8h较A组显著升高（P〈0.05）;AB组表达最强,0.5～48h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～8h较A组显著升高（P〈0.05）,8～48h较B组显著升高（P〈0.05）.RT-PCRN组A20mRNA微量表达（0.883±0.033）;A组4～24h较N组显著升高（P〈0.05）;B组0.5～24h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～4h较A组显著升高（P〈0.05）;AB组表达最强,0.5～48h较N组显著升高（P〈0.05）,0.5～24h较A组显著升高（P〈0.05）,4～48h较B组显著升高（P〈0.05）.HEAB组：0.5～4h肺组织病理损害重,出现肺组织间质中性粒细胞浸润,上皮肿胀等,8h以后病理损害较前有所减轻,但仍比N组重.结论：在脊髓损伤的早期肺组织即出现锌指蛋白A20表达增高,合并感染时尤其明显.说明在脊髓损伤（或合并感染）情况下,锌指蛋白A20表达增加可能对机体内源性调控过度的炎症具有重要意义.     

锌指蛋白A20及其相关炎症因子在椎间盘髓核细胞退变前后的表达变化

目的 检测椎间盘髓核细胞退变前后锌指蛋白A20及其相关炎症因子的表达变化.方法 获取我院骨科患者术中切除的椎间盘组织,分为正常组和退变组,采用阿辛蓝染色观察人椎间盘髓核细胞的退变情况,免疫组化观察人椎间盘髓核细胞A20、TNF-α、IL-1β及NF-κB p65蛋白的表达.体外培养胚胎小鼠髓核细胞,分为对照组(只加入等量的PBS)、内毒素(LPS)刺激组和NF-κB抑制组,分别以Real-time PCR检测LPS刺激细胞和加入NF-κB抑制剂后,A20、TNF-α、IL-1β、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMST-4)、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMST-5)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达变化;Western blot检测A20、TNF-α、IL-1β、ADAMTS4、ADAMTS-5、MMP-13、p65、磷酸化p65(p-p65)的表达变化.结果 退变组髓核细胞数量显著少于正常组,并有明显的聚集现象;退变组髓核细胞中A20、TNF-α、IL-1β、p65蛋白表达明显高于正常组;LPS刺激胚胎小鼠髓核细胞后,LPS刺激组A20、TNF-α、IL-1β、ADAMST-4、ADAMST-5、MMP-13mRNA与蛋白的表达均高于NF-κB抑制组与对照组(P＜0.05),A20、TNF-α、IL-1 β、ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-13、p65、p-p65蛋白含量也较NF-κB抑制组与对照组显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 髓核细胞炎症反应与椎间盘退变的发生、发展密切相关,A20可能通过NF-κB信号通路对抑制髓核细胞退变时炎症反应起到关键作用.     

ZNF262在常染色体显性多囊肾病患者肾组织中的表达及意义

目的:检测锌指蛋白262(ZNF262)在正常肾组织及不同发病阶段多囊肾组织中的表达,并以增殖细胞核抗原(PCNA)为对照,初步探讨ZNF262在常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)中的作用.方法:根据肾小球滤过率(GFR)大小对ADPKD(n=8)进行分期,观察其影像学、常规病理检查结果,采用半定量RTPCR方法检测人正常肾组织(n=8)、早期多囊肾组织(n=4)、晚期多囊肾组织(n=4)中ZNF262和PCNA的表达,并对上述组织中ZNF262和PCNA的表达进行相关性分析.结果:与正常肾组织相比,ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾组织中的表达均显著增多(P＜0.01),且晚期多囊肾组织表达高于早期多囊肾组织(P＜0.05).ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾及正常肾组织中的表达存在显著的相关性(r1=0.842 6,r2=0.902 1,r3=0.883 5,均P＜0.05).结论:与正常组织相比,ZNF262不仅在ADPKD高表达,并且随着病程进展表达逐步增高,这与PCNA的表达具有显著的相关性.提示ZNF262可以作为检测ADPKD的指标,并有助于临床进展分期的判别.     

新的锌指蛋白Mip1的DNA结合序列的筛选

目的 筛选一个新的锌指蛋白Mipl的DNA结合位点。方法 将Mipl cDNA全长克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1构建了Mipl的原核表达质粒pGEX—Mipl。用谷胱甘肽亲和层析纯化GsT—Mipl融合蛋白。通过固定化的GST-Mipl,从寡核苷酸文库中俘获Mipl的结合的寡核苷酸片段;将所得寡核苷酸片段插入T-载体,通过测序、序列比对得到DNA结合位点。结果锌指蛋白Mipl的融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达,能与固定化还原性谷胱甘肽很好地亲和而得到纯化;用固定化的Mipl融合蛋白俘获到了其结合的寡核苷酸序列,通过测序、序列比对,得到了Mipl的DNA结合位点。结论Mipl的DNA结合位点的核心序列为G／TCCTA,Mipl的DNA结合位点的成功确定为Mipl功能的深入研究打下了基础。     

锌指转录因子Snail在结直肠癌中的表达及其意义

目的 确定锌指转录因子Snail与结直肠癌发生发展及演进的相关性.方法 应用免疫细胞化学及免疫荧光细胞化学方法分析Snail在结直肠癌细胞株SW480与SW620内的表达情况,同时以结直肠癌组织68例及对应癌旁组织68例、腺瘤组织33例、淋巴结转移癌35例为研究对象,运用免疫组织化学方法分析Snail在这些组织中的表达情况.结果 Snail在结直肠癌细胞株SW620、SW480中的表达较强,Snail定位在结直肠癌细胞株SW620、SW480的细胞核里;Snail在正常结直肠粘膜、腺瘤、癌及淋巴结转移癌组织中的表达明显不同(X2=92.852,P=0.000);两两比较发现,腺瘤Snail表达比正常结直肠黏膜组织强(P＜0.01),淋巴结转移灶中癌组织Snail表达比原发结直肠癌组织强(P＜0.01),而原发结直肠癌组织Snail表达比腺瘤组织强(P＜0.01).结论 锌指转录因子Snail与结直肠癌发生、演进及转移相关.     

锌指蛋白217 在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测锌指蛋白217（ZNF217）在非小细胞细胞癌中的表达,探讨其与非小细胞肺癌患者 临床病理特征的关系,并分析其与非小细胞肺癌患者生存及预后的关系。方法 利用实时荧光定量聚合酶链 反应（qRT-PCR）检测非小细胞肺癌组织及对应癌旁组织中ZNF217 的表达水平,并利用统计学软件分析 ZNF217 的临床相关性。结果 ZNF217 在非小细胞肺癌组织中的表达水平高于癌旁组织。非小细胞肺癌组 织中ZNF217 的表达水平与非小细胞肺癌患者TNM 分期及淋巴结转移情况呈正相关,与其他临床病理特征 无相关。Kaplan-Meier 生存曲线结果发现ZNF217 表达与患者术后5 年总体生存率及无进展生存率均呈负相 关。Cox 风险比例模型结果发现ZNF217 可作为判断非小细胞肺癌预后独立的预测指标。结论 ZNF217 在 非小细胞肺癌组织中表达升高,并可作为判断非小细胞肺癌患者生存及预后的指标。