NF-κB参与小鼠β-防御素3基因急性时相表达的转录调节

目的分析急性时相反应时调节小鼠β-防御素3基因表达的转录因子.方法通过腹腔注射外源性脂多糖(LPS)建立小鼠急性时相反应,经Northern blot方法检测mBD3mRNA在组织中的表达;EMSA和Southwestern blot分析细胞核蛋白中的转录因子.结果内毒素注射后仅在肝脏组织中检测到mBD3mRNA;肝脏细胞核蛋白中有与mBD3基因调节区特异DNA片段结合的转录因子,分子量在(43.0～66.2)×103之间.结论小鼠急性时相反应时NF-κB参与β-防御素3基因在肝脏中表达的转录调节.     

X染色体连锁凋亡抑制蛋白的研究进展

X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）是凋亡抑制蛋白（IAPs）家族中的重要一员,其主要由N末端3个杆状病毒IAP重复序列（BIR）和c末端一个锌指结构域组成,其主要通过与caspase相互作用抑制细胞凋亡,此外XIAP还可通过核因子KB途径和参与信号转导途径抑制细胞凋亡。XIAP的正向调节主要是在翻译过程中实现的,而负向调节则主要由Smac、转化生长因子B信号通路中的凋亡相关蛋白、HtrA、XIAP相关因子1凋亡抑制蛋白1等XIAP抑制分子实现。XIAP与肿瘤治疗研究方面,反义寡核苷酸技术、XIAP小分子抑制剂、RNA干扰技术等为治疗肿瘤提供了新的研究方向。     

早幼粒白血病在银屑病病人外周血淋巴细胞中的表达及其与p53和bcl-2家族的相关性

目的研究早幼粒白血病(promyelocytic leukaemia,PML)、p53、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bcl-2 associated X protein,bax)在银屑病外周血淋巴细胞中的表达,并评估上述因子之间的相关性。方法分离25例银屑病病人和20例健康对照的外周血淋巴细胞,通过qRT-PCR和流式细胞学分别检测PML、p53、bcl-2和bax在外周学淋巴细胞中mRNA和蛋白的表达水平。采用Pearson相关性分析评估PML与上述因子之间的相关性。结果与健康对照相比,银屑病病人外周血淋巴细胞中PML和p53的mRNA及蛋白表达增加,bcl-2的mRNA及蛋白表达下降,bax的mRNA表达下降但蛋白表达增加。PML蛋白表达与p53、bcl-2以及bax蛋白表达呈相关性。结论 PML可能参与了银屑病发病过程。     

端粒酶逆转录酶（hTERT）的分子调节机制

人端粒酶逆转录酶（hTERT）是端粒酶成分中的限速亚单位,是端粒酶活性调节的主要部分,细胞通过调节c-Myc、SP1、Mad、锌指蛋白2（MZF－2）、甲基化等调节hTERT的转录水平,或通过hTERT mRNA的不同剪切方式、分子之间相互作用、磷酸化和脱磷酸化等转录后途径调节hTERT。     

原位逆转录PCR检测千细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性.方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达.结果直接法和间接法原位RT-PCR均可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达,而常规的原位杂交则为阴性.结论(1)干细胞因子在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达,但是表达量较低,应用原位RT-PCR可进行检测;(2)在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR.     

CV-1细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA稳定性及蛋白表达的影响

[目的]探讨在CV-1细胞中固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA稳定性和蛋白表达的影响.[方法]利用DNA克隆技术,将SREBP-1c和其阴性表达体(ADDN)DNA序列重组到表达载体pSV-sport上.用SREBP-1c转染CV-1细胞,应用Northern Blot方法观察SREBP-1c对Ⅰ型葡萄糖载体mRNA的表达及其稳定性的影响,应用Western Blot方法观察SREBP-1c对Ⅰ型葡萄糖载体蛋白表达的影响.[结果]SREBP-1c可增加Ⅰ型葡萄糖载体的mRNA表达水平及稳定性,可提高Ⅰ型葡萄糖载体的蛋白表达水平.[结论]SREBP-1c可增强Ⅰ型葡萄糖载体的蛋白表达,可能通过调节Ⅰ型葡萄糖载体的表达水平而参与胰岛素对血糖的调节过程.     

急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20表达及其与TNF-α和IL-6的相关性

目的 调查急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达及其与血液TNF-α和IL-6水平的相关性,初步探讨锌指蛋白A20在急性脑梗死缺血性炎症损伤中的作用.方法 采用流式细胞学分析技术和适时荧光定量PCR技术分别测定42例急性脑梗死患者外周血单核细胞锌指蛋白A20的表达,并用ELISA技术测定血液TNF-α和IL-6浓度,与50例同期健康对照组进行比较.结果 急性脑梗死组患者外周血单核细胞锌指蛋白A20表达水平较健康对照组明显增高,且以发病后第1天锌指蛋白A20表达水平最高(P＜0.01),之后快速降低,与血液TNF-α和IL-6浓度呈现正相关关系.结论 锌指蛋白A20可能参与了急性脑梗死缺血性炎症损伤的自我保护过程,其机制可能是抑制核转录因子NF-κB和NF-IL-6,进而下调促炎细胞因子的表达干预脑组织的炎症损伤.     

miR-223与恶性肿瘤

microRNA是一类19～25个核苷酸组成的非编码的微小RNA,广泛存在于各种真核细胞中,参与调节细胞的生长、发育、分化和凋亡。microRNA是基因表达的重要调节因子,通过其"种子序列"与靶mRNA的不完全互补结合,导致mRNA降解或抑制蛋白翻译。研究发现[1],microRNA的异常表达与恶性肿瘤的发生有关。miR-223在骨髓中显著高表达并参与造血系统分化过程使其备受关注,其异常表达会     

ZB TB 32生物学功能的研究进展

锌指蛋白家族是真核生物中重要的转录因子家族之一,参与调控多种生物学功能,其包含多个亚家族。ZBTB（zinc finger and BTB domain‐containing protein）属于其中的 POK （POZ and Krüppel）蛋白家族。该亚家族成员在 N 末端有一个B T B／POZ （Broad‐complex ,Tramtrack ,Bric‐a‐brac／Pocvirus and zinc fingers ）结构域,在哺乳动物中高度保守,主要介导蛋白与蛋白之间的相互作用。C末端有数个C2H2锌指结构域,介导蛋白与DNA 序列间的识别以此来发挥转录调节作用,3％的人类基因通过C2H2结构介导转录调节［1‐3］。ZBTB亚家族成员通常作为转录抑制子调节基因表达,该家族成员的生物学功能一直受到广泛关注与研究。     

锌指转录因子Gli1在胰腺癌组织中的表达及其意义

目的:探讨Sonic hedgehog信号通路中锌指转录因子Gli1在胰腺癌组织中的表达及其意义。方法:收集56例手术切除的新鲜胰腺癌及癌旁胰腺组织,应用免疫组化S-P法及RT-PCR方法检测癌组织和癌旁胰腺组织Gli1蛋白及Gli1 mRNA的表达情况。结果:Gli1蛋白和Gli1 mRNA在癌旁胰腺组织中不表达或弱表达,在胰腺癌组织中的表达分别为85.7%和73.2%,两者在胰腺癌组织和癌旁胰腺组织中表达率差异有显著性。Gli1蛋白和Gli1 mRNA阳性表达率与胰腺癌的分化程度有关,与肿瘤大小及有无淋巴结转移无关。结论:Gli1的异常表达与胰腺癌的发生发展密切相关,针对的干预治疗有可能成为治疗胰腺癌的一种新的策略。     

p53与主反应基因Egr-1物理相互作用的研究

目的:肿瘤抑制因子p53和主反应基因Egr-1是细胞核转录因子,在介导细胞增殖、分化及细胞凋亡和生长停止的信号传导通路中扮演调控的角色。我们试图证明在体内、外这两种调控蛋白间有一种物理上的联系。方法:体内实验中,用免疫沉淀法和Western blot3分析含有高水平Egr-1活性的细胞裂解物的血清和过度表达Egr-1和突变型p53的人肺癌细胞株中两种蛋白间的相互作用。结果:p53突变在154密码子时与Egr-1没有联系,而当p53蛋白突变点在156,246,247和273殖基则与此锌指转录因子有联系。p53结合全长的Egr-1和1个Egr-1缺失5'活化范围的Egr-1突变体,但不能结合1个缺少包含头两个锌指区的内部片断的Egr-1蛋白,说明结合需要完整的锌指基序存在。肺成纤维细胞系MRC-9表达不同大小的Egr-1蛋白,该蛋白也同样与p53结合。结论:两种调控蛋白之间存在联系,它们之间的相互作用可能改变了它们的多种生物学活性尤其是关于转录控制的特性。     

白血病患者血小板凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达的研究

目的探讨白血病患者血小板凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达情况。方法采集自2015年1月~2017年年1月我院收治的60例白血病患者作为研究对象,同时选取同期的60例健康体检者作为对照组。探讨两组患者血小板凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达情况。结果与对照组相比,试验组PLT水平降低(P0.05),PDW水平升高(P0.05),MPV水平升高(P0.05)。试验组Bax m RNA相对表达量升高(P0.05),Caspase-3 m RNA相对表达量升高义(P0.05)。试验组Bax蛋白相对表达量升高(P0.05),Caspase-3蛋白相对表达量升高(P0.05)。结论白血病患者的血小板功能低下,并且存在血小板凋亡现象,血小板凋亡可能Bax、caspase-3表达升高有关。检测白血病患者的血小板相关指标水平变化,对临床上白血病患者病情的评估具有重要意义。     

急性白血病患者bcl-2,c-myc基因的表达及两者之间的关系

目的 :探讨急性白血病 (AL)患者bcl 2和c myc基因的表达和两者之间的关系。方法 :原位分子杂交法检测bcl 2和c mycmRNA ;细胞免疫化学方法检测bcl 2 ,c myc蛋白表达。结果 :AL患者bcl 2 ,c mycmRNA和蛋白质均明显增加 ;急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病bcl 2 ,c mycmRNA和蛋白质无明显差别 ;bcl 2mRNA与蛋白质 (r =0 .784,P <0 .0 1) ,c mycmRNA与蛋白质 (r =0 .887,P <0 .0 1) ;bcl 2mRNA与c mycmRNA (r =0 .888,P <0 .0 1) ,以及bcl 2蛋白与c myc蛋白 (r=0 .735 ,P <0 .0 1)均呈直线正相关。结论 :bcl 2 ,c myc基因在急性白血病的发生发展中起着重要作用。     

锌指蛋白23在卵巢癌中的表达

目的:分析ZnF23 mRNA在卵巢癌组织和细胞中的表达情况,以探讨其与细胞凋亡的关系.方法:采用实时荧光定量RT-PCR法检测22例卵巢癌患者癌组织和其癌旁正常组织中ZnF23表达水平.结果:22例卵巢癌患者癌组织及其癌旁正常组织标本中ZnF23相对表达量(ZnF23/GAPDH)分别为(0.2±0.15)和(1.0±0.1),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:卵巢癌患者中ZnF23蛋白表达水平显著下降,可能与卵巢癌的发生发展有密切的关系.     

急性白血病患者bcl—2，c—myc基因的表达及两者之间的关系

OBJECTIVE: This paper was to explore the expressions of bcl-2, c-myc genes and the relationship between them in bone marrow from patients with acute leukemia (AL). METHODS: In situ hybridization was used to detect bcl-2 and c-myc mRNA. Immune cytochemistry was used to detect bcl-2 and c-myc protein. RESULTS: The expressions of bcl-2, c-myc mRNA and proteins were significantly increased in AL; There were not significant differences in bcl-2 mRNA and protein, c-myc mRNA and protein between the patients with acute lymphocytic leukemia and acute nonlymphocytic leukemia; There were linear correlations between bcl-2 mRNA and bcl-2 protein, between c-myc mRNA and c-myc protein, between bcl-2 mRNA and c-myc mRNA, between bcl-2 protein and c-myc protein. CONCLUSION: bcl-2 and c-myc genes play an important role in pathogenesis and the development of AL.     

ZNF207在肝细胞癌中的表达及意义

目的：研究锌指蛋白207(zinc finger protein 207,ZNF207)在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中 的表达情况,分析其与HCC临床病理特征及预后的相关性。方法：选择10对新鲜的冰冻HCC组织及相应癌旁肝组 织标本,采取real-time PCR检测其中ZNF207 mRNA的表达;另随机选择135例有完整资料的HCC石蜡标本,采用免 疫组织化学检测其中ZNF207蛋白的表达;统计分析ZNF207的表达与HCC临床病理特征及预后的关系。结果：在新 鲜冰冻HCC组织中ZNF207 mRNA的表达水平明显高于相应的癌旁肝组织(P<0.01);免疫组织化学结果显示HCC组 织中ZNF207呈显著高表达;且ZNF207的表达与肝硬化、结节数目、肿瘤包膜、微血管侵犯以及TNM分期明显相关 (P<0.05);生存分析显示ZNF207高表达组HCC患者总生存率、无瘤生存率较ZNF207低表达组明显下降(P<0.01);单多因素回归分析显示ZNF207是HCC患者总生存率及无瘤生存率的独立危险因素(P<0.05)。结论：ZNF207在HCC中呈高 表达,与HCC不良临床病理特征密切相关,并预示不良预后。     

人工锌指蛋白真核表达载体的构建及表达

目的 构建人工锌指蛋白ZFP基因的真核表达载体,检测其在真核细胞的表达情况,从而探讨人工锌指蛋白作为人工转录因子DNA结合域的可能性.方法 全基因合成人工锌指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的核酸序列并克隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通过酶切、菌落PCR及测序来鉴定重组载体的正确性.脂质体DOTAP体外转染重组质粒于COS-7细胞中,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达.结果 正确构建了pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重组表达质粒,并且在COS-7细胞中成功进行了人工锌指蛋白ZFP的表达.结论 采用生物信息学手段获得的假定的锌指蛋白基因序列可以在真核细胞内正常表达.     

儿童急性淋巴细胞白血病单个核细胞转铁蛋白受体2表达及其意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿单个核细胞转铁蛋白受体2(TFR2)基因表达情况,分析其与儿童ALL不同预后因素的相关性.方法 采用荧光定量逆转录聚合酶链反应法测定56例新发ALL患儿和15例对照患儿骨髓或外周血单个核细胞TFR2相对表达量.结果 泼尼松敏感组患儿TFR2相对表达量(中位数为0.0848)显著高于泼尼松不敏感组(中位数为0.0126,P=0.038).低危组、中危组和高危组TFR2相对表达量的中位数分别为0.1677、0.0728和0.0125.差异具有统计学意义(P=0.003).初诊时外周血白细胞(WBC)计数WBC<50×109/L、(50～100)×103/L和≥loo×103/L 3组患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0974、0.0294和0.0078,差异也具有统计学意义(P=0.013).另外,B细胞ALL,和T细胞ALL患儿TFR2相对表达量的中位数分别为0.0636和0.0065,B细胞型TFR2表达水平显著高于T细胞型(P=0.004).秩相关统计分析表明,ALL患儿单个核细胞TFR2表达量与初始外周WBC总数、外周血幼稚细胞比例、幼稚细胞绝对计数的秩相关系数分别为-0.398、-0.307、-0.421,具有负相关关系(P分别为0.003、0.022、0.001).结论 TFR2可能为儿童ALL一个新的分子生物学预后因素,在ALL患儿预后评估和指导个体化治疗方面可能具有临床应用价值.