AngⅡ诱导的肾损伤大鼠肾脏组织中SSeCKS的表达研究

目的 建立由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾损伤大鼠模型,观察受损肾脏组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达情况.方法 26只Wistar大鼠随机分为模型组(n=10)、假手术组(n=10)和正常对照组(n=6).模型组和假手术组大鼠经皮下埋置药物缓释泵分别向体内灌注AngⅡ和等量生理盐水,释放速度均为200 ng/(kg·min);正常对照组大鼠不予任何处理.各组大鼠均于埋泵后第3天收集24 h尿样后处死,留取肾皮质组织.采用磺基水杨酸法进行24 h尿蛋白定量检测;透射电子显微镜观察大鼠肾脏组织超微结构变化;免疫荧光染色法观察和分析SSeCKS在大鼠肾脏组织中的表达部位及荧光强度;采用RT-PCR技术检测各组大鼠肾脏组织中SSeCKS mRNA的表达.结果 模型组大鼠24 h尿蛋白定量明显高于假手术组和正常对照组(P＜0.05).透射电子显微镜观察发现模型组大鼠肾小球内皮细胞皱缩、剥脱.免疫荧光染色分析结果显示:SSeCKS表达主要定位于肾小球基膜和部分系膜细胞区,模型组大鼠肾脏组织荧光强度显著高于假手术组和正常对照组.模型组大鼠肾脏组织中SSeCKS mRNA表达明显高于假手术组和正常对照组.结论 通过皮下埋置AngⅡ药物缓释泵成功制作大鼠肾损伤模型,受损肾脏组织中SSeCKS的表达明显上调.     

miR-34a靶向调控SOX7表达抑制垂体腺瘤细胞增殖

探讨miR-34a通过靶向调控SOX7表达对垂体腺瘤细胞增殖的影响。结果显示,miR-34a mimics转染组和siRNA-SOX7组细胞活力、S期、G2期分别低于NC-miR-34a转染组和NC-SOX7转染组,细胞凋亡率和G1期分别高于NC-miR-34a转染组和NC-SOX7转染组。miR-34a mimics转染组SOX7 mRNA、SOX7蛋白的相对表达量低于NC-miR-34a转染组。结果表明,miR-34a可以通过靶向抑制SOX7表达抑制垂体腺瘤细胞增殖。     

Effect of VEGF overexpression on angiogenesis in pituitary adenomas

目的 探讨过表达血管内皮生长因子(VEGF)对垂体瘤微血管生成的影响.方法 用携带VEGF165基因的腺病毒质粒转染垂体瘤MMQ细胞,并建立稳定的过表达VEGF165的MMQ细胞株.制备鸡胚尿囊膜血管生成模型(CAM),观察过表达VEGF165 MMQ细胞的上清液对CAM血管生成的影响.分别接种过表达VEGF165 MMQ细胞、空载体细胞和正常MMQ细胞于裸鼠皮下并形成皮下移植瘤.CD31免疫荧光法检测过表达VEGF基因对裸鼠皮下MMQ细胞移植瘤微血管密度的影响.结果 大部分转染组细胞镜下呈现绿色荧光,RT-PCR和Western blot证实转染携带VEGF165基因的腺病毒质粒(Adv-GFP-VEGF165)的MMQ细胞中目的 基因能够有效表达.VEGF过表达能够诱导CAM局部血管生成,并显著增加MMQ细胞裸鼠皮下移植瘤的微血管密度.结论 VEGF在垂体瘤血管生成过程中起重要作用.     

基于TLR4信号通路研究调控miR-217对脓毒症所致肺损伤模型大鼠的干预作用

目的:探究基于Toll样受体4(TLR4)信号通路调控微小RNA-217(miR-217)对脓毒症所致肺损伤模型大鼠的作用。方法:选择75只SD健康雄性大鼠(SPF级),随机分为正常组、假手术组、模型组、miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组各15只,模型组、miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组大鼠采用公认的盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症肺损伤模型,miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组尾部静脉注射10μL miR-217 mimics control、10μL miR-217 mimics,正常组、假手术组、模型组尾静脉注射等体积生理盐水。评价各组大鼠病理组织变化、肺湿重/干重(W/D)、动脉血气、TNF-α、IL-6、IL-1β、MPO、PMN细胞计数、miR-217、TLR4信号通路蛋白表达量。结果:miR-217 mimics组病理学评分、W/D、pH、BE均低于miR-217 mimics control组,PaO_2高于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-217 mimics组血清、肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β、MPO水平低于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-217 mimics组肺泡灌洗液中蛋白含量、PMN细胞计数低于miR-217 mimics control组,差异有统计学差异(P<0.05)。miR-217 mimics组肺组织中miR-217表达量高于miR-217 mimics control组,肺组织中TLR4信号通路蛋白表达量低于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-217过表达通过抑制TLR4信号转导通路,阻断炎症反应,改善脓毒症所致的肺损伤,保护肺组织。     

调控microRNA-99b表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用

 [目的] 探讨上调microRNA-99b(miR-99b)表达对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用及可能的机制。[方法] 宫颈癌SiHa细胞分正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组。利用siPORT NeoFX Transfection Agent，阴性对照组细胞转染Cy3 dye labeled PremiR Negative Control，miR-99b调控组细胞转染Pre-miR-hsa-miR-99b miRNA Precursor。实时定量PCR方法检测miR-99b表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测靶基因细胞分裂周期25A（CDC25A）蛋白表达。[结果] 实时定量PCR结果显示，miR-99b调控组细胞，miR-99b表达增加107.23倍。正常对照组、阴性对照组和miR-99b调控组细胞增殖率分别为（3.26±0.44）%、（3.65±0.47）%和（2.24±0.45）%，细胞凋亡率分别为（8.12±1.54）%、（8.75±1.67）%和（14.26±1.70）%，细胞CDC25A蛋白表达分别为0.50±0.06、0.59±0.05和0.31±0.05。与正常对照组和阴性对照组比较，miR-99b调控组细胞增殖率、凋亡率和CDC25A蛋白表达差异均有统计学意义（P＜0.05）。[结论] 上调miR-99b表达可通过降低靶基因CDC25A表达，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，miR-99b可能成为宫颈癌治疗的靶基因。     

微小RNA-7-5p调控三叶因子3对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究三叶因子3（TFF3）基因在宫颈癌组织和正常组织中的表达情况,同时探讨微小RNA-7-5p（miR-7-5p）调控TFF3对人宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 实时聚合酶链反应检测TFF3在30例宫颈癌及其邻近正常组织中的表达;采用脂质体转染法将TFF3-siRNA、miR-7-5p转染入宫颈癌HeLa及SiHa细胞中。采用CCK-8、Transwell实验和平板克隆实验检测瞬时转染TFF3-siRNA及miR-7-5p mimics对宫颈癌细胞增殖、迁移及克隆形成能力的影响;并利用双荧光素酶报告实验检测miR-7-5p与TFF3的相互关系。结果 TFF3在73.33%（22/30）宫颈癌组织中表达量明显高于其邻近正常组织（P＜0.001）。与阴性对照组比较,TFF3 siRNA转染宫颈癌细胞株HeLa和SiHa 3～5d后,细胞增殖明显受到抑制（P＜0.05）。Transwell细胞迁移实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组迁移细胞分别为（170±15）个/高倍镜视野和（155±10）个/高倍镜视野,TFF3干扰组迁移细胞分别为（70±20）个/高倍镜视野和（54±8）个/高倍镜视野,迁移能力被显著抑制（P＜0.05）。克隆形成实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组克隆形成数分别为（160±34）个和（183±17）个,TFF3干扰组细胞克隆数分别为（45±15）个和（33±12）个,形成能力明显减弱（P＜0.05）。荧光素报告系统表明miR-7-5p可抑制含野生型TFF3 3′UTR序列的荧光素酶活性（P＜0.01）,但对含突变型TFF3 3′UTR的荧光素酶活性影响不显著（P＞0.05）。与阴性对照组比较,miR-7-5p mimics转染宫颈癌细胞株HeLa和SiHa 4～5d后,增殖明显受到抑制（P＜0.05）。Transwell细胞迁移实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组迁移细胞为（364±48）个/高倍镜视野和（411±27）个/高倍镜视野,miR-7-5p mimics转染组迁移细胞为（165±15）个/高倍镜视野和（100±208）个/高倍镜视野,迁移能力被显著抑制（P＜0.05）。克隆形成实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组克隆形成数为（83±11）个和（129±21）个,miR-7-5p mimics转染组细胞克隆数为（25±7）个和（14±8）个,形成能力明显减弱（P＜0.05）。结论 TFF3基因的异常高表达可能会对宫颈癌的发生发展起促进作用,miR-7-5p抑制宫颈癌细胞TFF3的表达或可为将来宫颈癌的靶向治疗提供一定的实验基础。     

过表达VEGF对垂体瘤血管生成的作用研究

目的探讨过表达血管内皮生长因子(VEGF)对垂体瘤微血管生成的影响。方法用携带VEGF165基因的腺病毒质粒转染垂体瘤MMQ细胞,并建立稳定的过表达VEGF165的MMQ细胞株。制备鸡胚尿囊膜血管生成模型(CAM),观察过表达VEGF165 MMQ细胞的上清液对CAM血管生成的影响。分别接种过表达VEGF165 MMQ细胞、空载体细胞和正常MMQ细胞于裸鼠皮下并形成皮下移植瘤。CD31免疫荧光法检测过表达VEGF基因对裸鼠皮下MMQ细胞移植瘤微血管密度的影响。结果大部分转染组细胞镜下呈现绿色荧光,RT-PCR和Western blot证实转染携带VEGF165基因的腺病毒质粒(Adv-GFP-VEGF165)的MMQ细胞中目的基因能够有效表达。VEGF过表达能够诱导CAM局部血管生成,并显著增加MMQ细胞裸鼠皮下移植瘤的微血管密度。结论 VEGF在垂体瘤血管生成过程中起重要作用。     

miR-200b靶向VEGF抑制肺癌细胞侵袭

目的 探讨miR-200b是否通过靶向调控血管内皮生长因子(VEGF)抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭,以揭示miR-200b的抑瘤机制。方法运用qRT-PCR检测miR-200b在非小细胞肺癌和癌旁正常肺组织中的表达;将非小细胞肺癌A549细胞分为miR-200b mimics组、miR-200b inhibitors组、scramble组、VEGF-siRNA组和control-siRNA组,分别将miR-200b mimics、miR-200b inhibitors、scramble、VEGF-siRNA、control-siRNA转染于A549细胞;采用Western blot检测A549细胞中VEGF蛋白表达,采用Transwell侵袭实验分别检测A549细胞侵袭能力。结果qRT-PCR检测结果显示,miR-200b在A549、16HBE细胞的表达分别为0.704±0.053、1.582±0.071,两者比较,差异有显著性(P<0.01);Western blot结果显示,外源过表达miR-200b或沉默VEGF能明显下调A549细胞中VEGF蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验显示,转染miR-200b mimics或沉默VEGF 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(127±6)和(136±8),与对照组(189±14)比较能明显抑制A549细胞的穿膜能力(P<0.05),而转染miR-200b inhibitors可拮抗VEGF-siRNA对A549细胞的侵袭抑制作用。结论miR-200b通过靶向调控VEGF抑制人非小细胞肺癌细胞侵袭。     

siRNA沉默PTTG表达对子宫内膜癌细胞生长及放疗敏感性的影响

目的:观察垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰对子宫内膜癌细胞HEC-1A的生长及放疗敏感性的影响?方法:构建PTTG干扰载体(pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA),利用脂质体将其转染至HEC-1A细胞,Western blot检测PTTG蛋白表达水平,筛选干扰效果最强的序列?另用2Gy X线作用于转染PTTGsiRNA的HEC-1A细胞,同时设不予任何处理的对照组?只转染PTTGsiRNA的处理组?只用X线处理的放疗组?MTT检测细胞生长状况,流式细胞仪检测细胞凋亡?结果:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体?MTT实验结果显示,与对照组相比,放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA联合放疗组细胞增殖抑制率分别为(31.39 ± 5.62)%?(38.37 ± 5.48)%?(54.65 ± 6.27)%?流式细胞仪检测显示细胞凋亡率在对照组? 放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA转染联合放疗组中分别为(6.53 ± 0.80)%?(32.72 ± 4.56)%?(38.96 ± 4.37)%?(64.76 ± 6.53)%?PTTGsiRNA转染组或放疗组与对照组比较,细胞凋亡率及细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P < 0.01),而PTTGsiRNA转染联合放疗组的凋亡率及细胞增殖抑制率较PTTGsiRNA转染组或放疗组明显增高,组间比较差异均有统计学意义(P < 0.01)?结论:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体,PTTG siRNA可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖,诱导其凋亡,增强其对放疗的敏感性?     

miR-105-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖迁移的影响

目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(control)组、转染miR-105-5p阴性对照(miR-NC)组、转染miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimics)组、转染沉默CDC5L阴性对照(si-NC)组、转染沉默CDC5L(si-CDC5L)组、共转染miR-105-5p mimics及pcDNA(pcDNA)组以及共转染miR-105-5p mimics及pcDNA-CDC5L(miR-105-5p mimics+pcDNA-CDC5L)组。qRT-PCR检测胶质瘤组织、正常脑组织及各组U251细胞中miR-105-5p及CDC5L mRNA的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot法检测CDC5L、细胞周期蛋白(CyclinDl)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及细胞周期蛋白依赖性激...     

miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的 观察miRNA-381 对胃癌细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 和正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 中miRNA-381 的表达;将AGS 细胞系分成两组,阴性对照组和miRNA-381 模拟物组,采用Lipofectamine TM 2000 分别转染miRNA-381 scramble 及mimics,采用CCK-8、Transwell 实验测定两组细胞增殖和侵袭的影响,Western blot 检测两组细胞肝受体类似物1（LRH-1）和扭曲相关蛋白1（Twist1）表达水平。结果 胃癌细胞系AGS、MGC-803、Hs746T 及BSG823 中miRNA-381 相对表达量较正常胃黏膜上皮细胞系RGM-1 为低。miRNA-381 模拟物组在转染后72 和96 h OD 450 nm 值低于阴性对照组（P <0.05）;阴性对照组侵袭细胞数为（79.6±7.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数为（31.70±4.2）个,miRNA-381 模拟物组侵袭细胞数少于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量为（0.39±0.04）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组LRH-1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）;miRNA-381 模拟物组Twist1蛋白相对表达量为（0.51±0.05）,阴性对照组为1.0,miRNA-381 模拟物组Twist 1 蛋白相对表达量低于阴性对照组（P <0.01）。结论 miRNA-381 低表达于胃癌细胞系,miRNA-381 过表达可抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与下调LRH-1 和Twist1 的表达有关。     

miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞系SLK细胞迁移、侵袭的影响

目的 通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法 应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用MTT测定细胞增殖曲线,应用流式细胞仪行检测细胞周期。利用Transwell小室试验后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果 miR-181b-5p模拟物促进细胞增殖,促进S期的转变,加速细胞周期进程;miR-181b-5p抑制物抑制细胞增殖,诱导细胞发生G₀/G₁期阻滞,延缓细胞周期进程。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目151±11个相比,miR-181b-5p模拟物组184±9个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目35±6个相比,miR-181b-5p模拟物组48±5个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高(P<0.05)。结论 miR-181b-5p在SLK细胞中高表达,其对SLK细胞的增殖、侵袭和迁移能力可能存在正向调控作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。     

MiR-203抑制食管鳞癌Eca109细胞的增殖及侵袭

目的探讨microRNA分子miR-203对食管鳞癌Eca109细胞增殖及侵袭能力的影响。方法根据人源miR-203序列,设计并合成其双链模拟物。通过脂质体转染将miR-203模拟物分子导入食管鳞癌Eca109细胞中,转染无关microRNA模拟物作为对照。测定2组细胞的细胞倍增时间、细胞凋亡率以及侵袭细胞率,观察miR-203对Eca109细胞增殖及侵袭能力的影响。结果Eca109细胞转染miR-203后其细胞倍增时间为(26.1±0.5) h,较对照组(24.2±0.6) h明显延长(P<0.01);其凋亡细胞比例较对照组增加\[(4.5±0.4)% vs (3.7±0.4)%,P<0.05\];Transwell小室侵袭实验显示转染miR-203模拟物后,该组的侵袭细胞率明显低于对照组\[(39.2±5.8)% vs (49.5±6.8)%,P<0.05\]。结论miR-203能抑制Eca109细胞的增殖和侵袭能力,提示miR-203可能是食管鳞癌生物治疗的潜在靶点。     

miRNA-30b对抑制胃癌细胞增殖及侵袭的作用研究

目的研究miRNA-30b在胃癌癌组织中的表达水平及对癌细胞增殖侵袭的影响,探讨miRNA-30b在胃癌中的临床意义及可能的分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miRNA-30b在胃癌及癌旁组织中的表达情况;用miRNA-30b模拟物及抑制物转染人胃癌HGC-27细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,Transwell 小室法检测细胞侵袭情况,Western blot 检测RAB22A 和USP47 蛋白表达。结果miRNA-30b在胃癌组织中表达水平低于对应癌旁组织（P <0.05）,且miRNA-30b 低表达与胃癌分期及肿瘤大小有关（P <0.05）;与转染阴性对照细胞比较,转染miRNA-30b模拟物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力均受到抑制（P <0.05）,RAB22A和USP47 蛋白表达水平降低（P <0.05）;而转染miRNA-30b 抑制物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力则增强（P <0.05）,RAB22A 和USP47 蛋白表达水平升高（P <0.05）。结论miRNA-30b 在胃癌组织中表达下调,且miRNA-30b 可能通过调节RAB22A 和USP47 的表达从而影响胃癌细胞的增殖及侵袭。     

白藜芦醇通过下调microRNA-151表达抑制肝癌细胞株HepG2细胞活性的研究

目的 研究白藜芦醇（Res）对肝癌细胞株HepG2宿主基因黏着斑激酶（FAK）和内含子miR-151表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法 分别以50、100、150、200 μmol/L Res作用于体外培养的HepG2细胞24、48和72 h.CCK-8法检测细胞增殖;Real-Time PCR检测细胞FAK mRNA和miR-151表达.利用miR-151模拟物转染获得miR-15过表达HepG细胞株（miR-151过表达组）,流式细胞仪和Hoechst 33342染色观察过表达miR-151对HepG2细胞周期及凋亡的影响.以转染模拟物突变体细胞作为阴性对照,未转染细胞作为空白对照.结果 Res对体外培养HepG2细胞的增殖活性及FAK mRNA和miR-151表达具有显著抑制作用,并在一定范围内呈现浓度和时间依赖性.miR-151过表达组HepG细胞miR-151表达明显高于阴性对照组和空白对照组（P＜0.001）;流式细胞仪检测和Hoechst 33342染色观察结果显示,miR-15过表达使HepG细胞G0/G1期缩短,细胞周期进程加快,并能抑制细胞凋亡.结论 Res可能通过下调miR-151表达,抑制肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡.     

白藜芦醇通过下调microRNA-151表达抑制肝癌细胞株HepG2细胞活性的研究

目的 研究白藜芦醇(Res)对肝癌细胞株HepG2宿主基因黏着斑激酶(FAK)和内含子miR-151表达的影响,探讨其抗肿瘤的可能作用机制.方法 分别以50、100、150、200 μmol/L Res作用于体外培养的HepG2细胞24、48和72 h.CCK-8法检测细胞增殖;Real-Time PCR检测细胞FAK mRNA和miR-151表达.利用miR-151模拟物转染获得miR-15过表达HepG细胞株(miR-151过表达组),流式细胞仪和Hoechst 33342染色观察过表达miR-151对HepG2细胞周期及凋亡的影响.以转染模拟物突变体细胞作为阴性对照,未转染细胞作为空白对照.结果 Res对体外培养HepG2细胞的增殖活性及FAK mRNA和miR-151表达具有显著抑制作用,并在一定范围内呈现浓度和时间依赖性.miR-151过表达组HepG细胞miR-151表达明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.001);流式细胞仪检测和Hoechst 33342染色观察结果显示,miR-15过表达使HepG细胞G0/G1期缩短,细胞周期进程加快,并能抑制细胞凋亡.结论 Res可能通过下调miR-151表达,抑制肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡.     

MicroRNA-150-5p对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的  研究microRNA-150-5p（miR-150-5p）在人正常肝细胞和肝细胞癌细胞中的表达，及其对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及潜在机制。方法  通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各处理组细胞中的miR-150-5p的表达水平；MTT法检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞增殖的影响；流式细胞术检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞凋亡和周期的影响；荧光素酶报告基因实验检测锌指蛋白609是否为miR-150-5p的直接靶基因。结果  miR-150-5p在肝细胞癌细胞系中的表达较人正常肝细胞细胞系降低，miR-150-5p可抑制肝细胞癌细胞的增殖，促进肝细胞癌细胞的凋亡，并阻滞细胞周期于G1期。miR-150-5p在肝细胞癌中发挥肿瘤抑制分子作用的潜在机制为直接靶向抑制ZNF609的表达。结论  miR-150-5p在肝细胞癌细胞中表达降低，并可通过调控ZNF609的表达而调控肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期。

     

MiR-194对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究miR-194对人恶性黑色素瘤细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测miR-194在原代正常人皮肤黑色素细胞系PIG1 和5种恶性黑色素瘤细胞系（A375、SK-MEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28）中的相对表达量。利用Lipofectamine TM 2000分别将A375 细胞系转染miR-194 mimics 和阴性对照质粒,从而将A375 细胞系分为miR-194 模拟物组和阴性对照组;应用MTT法和流式细胞术分别测定miR-194 模拟物组和阴性对照组细胞的增殖能力及凋亡率,蛋白印迹（Western blot）分别检测miR-194 模拟物组和阴性对照组的细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达情况。结果miR-194 在5 种黑色素瘤细胞系A375、SKMEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28中的表达水平低于正常人皮肤黑色素细胞系PIG1,依次分别是正常细胞系的（0.18±0.03）、（0.25±0.05）、（0.37±0.03）、（0.39±0.04）及（0.45±0.03）倍（均p<0.05）。转染后第0、1、2、3、4 及5 天,miR-194 模拟物组vs阴性对照组的OD 值分别为：（0.18±0.02）vs（0.19±0.03）（p >0.05）、（0.29±0.02）vs（0.27±0.03）（p >0.05）、（0.42±0.08）vs（0.45±0.07）（p >0.05）、（0.63±0.09）vs（1.17±0.12）（p <0.05）、（1.05±0.15）vs（2.15±0.21）（p <0.05）及（1.87±0.23）vs（3.18±0.27）（p <0.05）。miR-194 模拟物组和阴性对照组的细胞凋亡率分别为24.2%和9.3%（p <0.05）。Cyclin D1 和Cleaved Caspase-3 蛋白在miR-194模拟物组中的表达量分别是阴性对照组的（0.36±0.04）和（3.2±0.28）倍（均p<0.05）。结论miR-194 在黑色素瘤细胞中低表达,miR-194表达上调可促进黑色素瘤细胞凋亡并抑制黑色素瘤细胞的增殖,其机制可能为下调Cyclin D1 蛋白及上调Cleaved Caspase-3 蛋白表达。     

MicroRNA-27b在高血压脑出血大鼠脑组织中的表达及对星形胶质细胞生物学功能的影响

目的 探讨microRNA-27b(miR-27b)在高血压脑出血（HICH）大鼠脑组织中的表达及对星形胶质细胞生物学功能的影响。方法 选取15只健康WKY大鼠作为对照组,15只自发性高血压大鼠作为HICH组。HICH组通过自体血脑内注射法复制HICH大鼠模型,对照组进行假手术但不注射自体血。HE染色和TUNEL染色检测大鼠脑组织损伤和凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-27b mRNA相对表达量。将星形胶质细胞分为NC组、miR-27b mimic组及miR-27b inhibitor组,分别转染miR-27b mimic和miR-27b inhibitor质粒,过表达和抑制miR-27b水平。qRT-PCR检测各组细胞miR-27b mRNA相对表达量,CCK-8法检测各组细胞增殖及凋亡情况。结果 HICH组大鼠出血脑组织出现显著损伤,凋亡指数（35.91±3.24）高于对照组（2.75±0.36）(P <0.05);HICH组miR-27b mRNA相对表达量（3.45±0.48）高于对照组（1.00±0.12）(P <0.05);miR-...