沉默环状RNA hsa_circ_0011021表达对宫颈癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

【摘要】 目的 探讨环状RNA（circRNA）hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和细胞株中的表达变化及其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 选取河南科技大学第一附属医院就诊的15例宫颈癌患者,取15对宫颈癌组织和癌旁组织。qRT PCR实验检测hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌癌旁组织（Hela和SiHa）细胞中的相对表达水平;CCK 8和克隆形成实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞活性和克隆形成能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织的相对表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）;hsa_circ_0011021在Hela和SiHa细胞中的相对表达水平明显高于人永生化表皮细胞HaCaT（P＜0.05）。在Hela细胞沉默hsa_circ_0011021,Hela细胞的活性和克隆形成能力显著降低,迁移距离明显减少,侵袭能力也明显下降（P＜0.05）。结论 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌细胞（Hela和SiHa）中的表达水平明显升高;沉默hsa_circ_0011021显著抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭。     

TRIM14对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭及上皮——间充质转化的影响及其作用机制

目的：探讨三结构域蛋白14(TRIM14)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮—间充质转化（EMT）的影响及相关作用机制。方法：收集40例宫颈癌患者的宫颈癌组织及癌旁正常宫颈组织标本，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测TRIM14基因表达。体外培养宫颈癌HeLa细胞，将TRIM14小干扰RNA(si-TRIM14)转染至HeLa细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖，划痕实验检测细胞迁移，Transwell小室法检测细胞侵袭，Western blotting法检测EMT相关蛋白和单磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（m TOR）信号通路相关蛋白表达。结果：宫颈癌组织中TRIM14 mRNA表达水平显著高于癌旁正常宫颈组织（P<0.05）。与si-NC组比较，si-TRIM14组细胞增殖活性、细胞迁移率、侵袭细胞数目均降低，E-cadherin蛋白表达量升高，N-cadherin、Vimentin、Snail1蛋白表达量均降低（P<0.05）。si-TRIM14组细胞中p-AMPK/AMPK比值高于si-NC组，pmTOR/mTOR比值低于si-NC组（P&l...     

JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响

目的分析JMJD2B、HPIP对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响。 方法将Hela细胞分为si-NC组、si-JMJD2B组和si-HPIP组。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞中JMJD2B、HPIP mRNA表达水平。Western blotting检测宫颈癌细胞和人正常宫颈上皮细胞JMJD2B、HPIP蛋白表达水平。CCK-8检测Hela细胞增殖能力。Transwell检测Hela细胞迁移和侵袭能力。 结果JMJD2B、HPIP蛋白在宫颈癌细胞中表达高于人正常宫颈上皮细胞(P＜0.05)。与si-NC组比较,si-JMJD2B组和si-HPIP组JMJD2B、HPIP mRNA和蛋白表达、细胞增殖、迁移细胞数量、侵袭细胞数量均明显减少(P＜0.05)。 结论JMJD2B和HPIP表达可能调节宫颈癌Hela细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为。     

miR-21、miR-126、miR-143和miR-373在正常宫颈组织、宫颈癌组织及Hela细胞中的表达差异

目的研究miR-21、miR-126、miR-143和miR-373在正常宫颈组织、宫颈癌组织及Hela细胞中的表达差异,探讨microRNAs(miRNAs)对宫颈癌发生的调控作用。方法荧光实时定量检测20例良性肿瘤患者的正常宫颈组织,20例宫颈癌组织及Hela细胞中miR-21、miR-126、miR-143和miR-373的表达。结果 miR-21在宫颈癌组织及Hela细胞系中高表达,在正常宫颈标本中低表达,在宫颈癌组织中相对定量为正常宫颈组织的11.3196倍(P<0.05);miR-143、miR-373在宫颈癌组织及Hela细胞中均低表达,在正常宫颈标本中高表达,miR-143、miR-373在宫颈癌组织中相对定量分别为正常宫颈组织的0.1553倍和0.4907倍(P<0.05);miR-126的表达无明显变化。结论 miRNAs与宫颈癌的发生和调控密切相关。在宫颈癌组织和Hela细胞中,miR-21表达上调,可能在宫颈癌的发生过程中发挥癌基因的作用;miR-143、miR-373表达下调可能发挥抑癌基因的作用;miR-126表达无差异,与宫颈癌无明显关系。     

膜辅助蛋白致宫颈癌细胞免疫逃逸机制探讨

目的:探讨膜辅助蛋白(membrane cofactor protein,MCP)与宫颈癌细胞免疫逃逸之间的关系,揭示MCP在宫颈癌发生?发展中的作用?方法:以宫颈癌细胞系ME180?宫颈癌组织和癌旁正常组织为材料,采用real-time PCR和Western blot检测MCP基因mRNA和蛋白质表达水平;利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默MCP基因表达后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检查宫颈癌细胞的增殖,以Transwell评估宫颈癌细胞的迁移能力?结果:MCP的表达在宫颈癌组织中明显高于其配对的癌旁正常组织,抑制MCP基因的表达能显著降低ME180细胞的增殖?迁移能力?结论:MCP在宫颈癌细胞中的高表达可能是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制,在宫颈癌的发生发展中发挥重要作用?     

circRNA＿0031269调控miR-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨circRNA＿0031269调控mi R-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移。方法 选取深圳市南山区前海蛇口自贸区医院2020年3月—2021年4月妇科肿瘤专科收治的40例宫颈癌患者,经手术治疗切除的癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitativereal-time PCR,q RT-PCR）检测不同组织中circ RNA＿0031269和mi R-127-3p的相对表达;双荧光素酶报告基因检测观察circRNA＿0031269和miR-127-3p的靶向关系。采用MTT、Transwell细胞实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移能力。结果 癌组织中circ RNA＿0031269表达高于癌旁组织,mi R-127-3p表达低于癌旁组织（P<0.05）;miR-127-3p过表达可降低WT-circ RNA0031269的荧光酶活性,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;anti-miR-127-3p过表达可抑制He La细胞增殖、迁移,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑...     

过表达Hsa-miR-133a-2对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探究hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞表型的影响及其在宫颈癌细胞增殖与侵袭中的潜在分子机制。方法 通过癌症基因组图谱-宫颈鳞癌和腺癌(The Cancer Genome Atlas-Cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma, TCGA-CESC)验证宫颈癌组织和癌旁组织中hsa-mir-133a-2的表达情况；对TCGA-CESC中提取的307例高表达和低表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者的临床信息进行K-M生存分析以评估其预后价值；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术对正常宫颈细胞和宫颈癌细胞中hsa-mir-133a-2的表达进一步检测；采用细胞计数试剂盒-8(CKK8)和transwell法检测hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。结果 与宫颈癌癌旁组织细胞和正常宫颈细胞相比，hsa-mir-133a-2在宫颈癌细胞中表达水平均显著下调(P<0.05);K-M生存分析结果表明，高表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者具有相对较...     

Hes-6在宫颈癌中的表达和功能鉴定

目的:研究人宫颈癌组织中Hes-6(Hairy and enhancer of split 6)的mRNA变化以及Hes-6对宫颈癌Hela细胞的生长以及侵袭性的影响。方法:收集临床获得的宫颈癌组织标本,研究正常组织和宫颈癌组织中Hes-6mRNA表达差异;构建含有Hes-6基因片断的真核表达质粒,转染Hela细胞后,检测Hes-6的mRNA和蛋白表达;通过MTT实验检测过表达Hes-6后,Hela细胞的生长;并通过小室迁移实验检测质粒转染后Hela细胞的迁移功能的改变。结果:本研究发现,与正常组织相比较,Hes-6mRNA高表达于宫颈癌组织。将pcDNA3.1-Hes-6转染Hela细胞后,MTT实验结果显示,Hes-6过表达组Hela细胞570nm吸光值显著高于对照组细胞(转染组0.923±0.154,对照组0.695±0.117;小室迁移实验结果显示,Hes-6过表达组Hela细胞迁移能力显著高于对照组细胞(转染组153.5±21.2,对照组98.8±17.6。结论:Hes-6mRNA在宫颈癌组织中表达上调,且该蛋白不仅可促进Hela细胞的生长,还可以增加其侵袭性。     

人乳头瘤病毒E6蛋白通过上调氯离子蛋白通道5的表达促进宫颈癌细胞迁移

目的: 探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）E6蛋白与氯离子通道蛋白5（chloride voltage gated channel 5,CLCN5）之间的关系以及CLCN5对宫颈癌细胞迁移的影响。方法: 采用RNA干扰技术敲低HPV E6基因,实时荧光定量PCR（RT qPCR）和蛋白质印迹法检测敲低HPV E6后宫颈癌HeLa细胞中CLCN5 mRNA及蛋白的表达水平。通过PCR扩增CLCN5基因片段,并将其克隆至表达载体pCDNA3.1 3×Flag（简称pCDNA3.1）质粒中,构建重组质粒pCDNA3.1 CLCN5。将目的质粒pCDNA3.1 CLCN5及其对照pCDNA3.1质粒分别转染宫颈癌HeLa细胞,蛋白质印迹法检测CLCN5蛋白的表达。Transwell迁移实验检测过表达CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响。同时,将CLCN5的小干扰RNA及其阴性对照分别转染宫颈癌HeLa细胞,Transwell迁移实验检测敲低CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响。结果： RT qPCR和蛋白质印迹检测结果显示,敲低HPV E6可显著降低CLCN5的mRNA和蛋白表达水平。质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pCDNA3.1 CLCN5构建成功。蛋白质印迹检测结果显示CLCN5蛋白在宫颈癌HeLa细胞中被有效过表达或敲低。Transwell迁移实验结果表明,过表达CLCN5可促进宫颈癌细胞的迁移,敲低CLCN5可抑制宫颈癌细胞的迁移。 结论： HPV E6蛋白通过上调CLCN5的表达促进宫颈癌细胞迁移。     

长链非编码RNA FENDRR在子宫颈癌中的作用

目的：探讨长链非编码RNA FENDRR在子宫颈癌（下面简称宫颈癌）中的作用。方法：在宫颈癌细胞系中使用siRNA干扰技术特异性干扰FENDRR的表达,用qRT-PCR检测siRNA的干扰效率;运用CCK-8和Transwell实验分别检测干扰FENDRR表达对宫颈癌细胞体外增殖和运动能力的影响;运用裸鼠成瘤实验验证干扰FENDRR表达对宫颈癌细胞体内成瘤能力的影响。结果：siRNA转染使FENDRR在SiHa和HeLa细胞中的相对表达量分别由（1.013±0.120）、（1.001±0.025）降为（0.226±0.024）、 （0.099±0.010）,差异均有统计学意义（P＜0.01）;干扰FENDRR后宫颈癌细胞系的增殖能力明显增强（P＜0.01）,迁移和侵袭能力也显著增强（P＜0.01）;干扰FENDRR后宫颈癌细胞HeLa在裸鼠体内的成瘤能力明显增强,与对照组相比肿瘤体积从（853.2±59.4）mm3增加到（1 155.0±51.5）mm3（P＜0.01）,肿瘤的质量从（0.544±0.053）g增加到（0.814± 0.061）g（P＜0.05）。结论：干扰FENDRR的表达明显增强宫颈癌细胞的体外增殖和运动能力以及体内成瘤能力,FENDRR可能在宫颈癌的进展中发挥重要的抑癌作用。     

姜黄素抑制肺癌细胞A549上皮间质转化的机制研究

目的 探讨姜黄素对肺癌细胞A549上皮间质转化的影响。方法 姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h,CCK-8法检测A549细胞活性,Transwell实验检测A549细胞迁移、侵袭的能力,Western blotting检测上皮间质转化标志蛋白的相对表达量,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测HOTAIR、E-cadherin、N-cadherin及Snail mRNA的相对表达量,测序方法检测姜黄素诱导后lncRNA表达的变化,实验验证介导姜黄素发挥作用的具体非编码RNA,分析HOTAIR与临床病理参数之间的关系。结果 CCK-8法检测结果显示,姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h后,不同浓度组肺癌细胞A549的OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）,随着姜黄素浓度的升高,OD值降低。Transwell结果显示,姜黄素诱导肺癌细胞A549 24 h后,姜黄素诱导组抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移,与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）。Western blotting和qRT-PCR检测结果显示,姜黄素诱导组的间质表型基因和蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Snail）与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,N-cadherin、Snail相对表达量下降,E-cadherin相对表达量升高。癌旁正常组和肺癌组中HOTAIR的相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,肺癌组高于癌旁正常组。测序检测和qRT-PCR结果显示,姜黄素抑制HOTAIR的表达。分析HOTAIR在肺癌组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系显示,HOTAIR的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关。对照组、姜黄素诱导组、姜黄素诱导+HOTAIR过表达组A549细胞OD值比较,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 姜黄素有效抑制肺癌细胞A549的增殖、侵袭及迁移,姜黄素抑制lncRNA HOTAIR表达,姜黄素抑制肺癌细胞A549上皮间质转化是通过HOTAIR实现的。     

MiR-218在宫颈癌组织中的表达及对HeLa细胞凋亡及转移的影响

目的 探讨miR-218在宫颈癌组织中的表达,以及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测23 例正常子宫颈组织和114 例宫颈癌组织中miR-218 mRNA的表达,分析与临床病理特征的关系;HeLa细胞分为3组:对照组（细胞不转染）、转染空脂质体阴性对照组(NC组)和 转染miR-218类似物 (miR-218M组)。MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移; qRT-PCR和Western blot分别检测Bcl-2、Bax、NF-κB和E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果 miR-218 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,在宫颈癌不同病理类型、分期分级、有无淋巴结转移及间质浸润深度间表达差异有统计学意义（P Bax mRNA和蛋白表达水平上调, E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,NF-κB mRNA和蛋白表达下调。结论 MiR-218低表达可能与宫颈癌的病理分级分期等生物学行为有关,上调miR-218表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭转移。     

HOX 转录反义RNA 表达对胸腔镜食管癌切除术后风险的预测价值研究

目的 探讨HOX 转录反义RNA 表达对胸腔镜食管癌切除术后风险的预测价值。方法 收集该院接受胸腔镜食管癌切除术患者92 例,采用RT-PCR 检测术后组织中HOX 转录反义RNA 表达情况,分析HOX 转录反义RNA 表达与食管癌术后复发、生存状况之间的关系。结果 RT-PCR 显示,癌组织HOTAIR 相对表达量为（0.673±0.076）,而癌旁组织为（0.387±0.058）,两组比较差异有统计学意义（P <0.05）。HOTAIR 对术后复发诊断的曲线下面积为0.727（95%CI ：0.684,0.884）,对术后生存诊断的曲线下面积为0.769（95%CI ：0.692,0.901）。术后3 年内,HOTAIR 相对表达量≤ 0.5 组复发率低于HOTAIR 相对表达量>0.5 组（P <0.05）。Cox 模型分析显示,分化程度、临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移及HOTAIR 为预后的危险因素,而术后辅助放、化疗为预后的保护因素。结论 HOTAIR 为胸腔镜食管癌切除术后复发、生存状况的影响因素,通过对HOTAIR 的检测可以为临床选择合理的治疗方案提供参考依据。     

长链非编码 RNA HOTAIR 对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨长链非编码 RNA(LncRNA) HOTAIR 对肾癌细胞系786-O 和 ACHN 增殖和凋亡的影响。方法两种细胞系转染针对 HOTAIR 的小干扰 RNA(siRNA),利用qRT-PCR 检测干扰效率,再分别以噻唑蓝(MTT)法、ELISA法和 Hochest 染色法检测 HOTAIR 表达降低后786-O 和ACHN 细胞在增殖和凋亡方面的变化。结果 siRNA 可有效降低 HOTAIR 表达(P <0．05);减少 HOTAIR 含量可显著抑制两种细胞的增殖(P <0．05),同时增加细胞凋亡(P <0．05)。结论 HOTAIR 具有促进肾癌细胞生长的作用。     

顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和凋亡

目的：探讨顺铂对HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2蛋白表达及核转位的影响,并观察细胞自噬和凋亡的变化。方法：使用不同浓度的顺铂(0、2.5、5、10μmol/L)干预HeLa人宫颈癌细胞,MTT法检测细胞活性,Transwell实验观察细胞迁移能力,mCherry-GFP-LC3B融合蛋白腺病毒转染HeLa细胞观察自噬水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫蛋白印迹检测Nrf2在细胞质和细胞核内的表达情况,免疫荧光法观察Nrf2的核转位情况。结果：与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可抑制HeLa细胞的活性及细胞迁移能力(P<0.05),且随着药物浓度增高抑制作用增强(P<0.05)。与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可促进HeLa细胞中LC3B的表达、细胞凋亡及Nrf2的核转位(P<0.05),降低细胞质中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05),并升高细胞核中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05)。结论：顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和细胞凋亡,并抑制细胞的活性和迁移能力。     

三氧化二砷对乳腺癌细胞长链非编码RNA HOX转录反义RNA的作用

目的：探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA（ HOTAIR）在乳腺癌组织和细胞中的表达情况及三氧化二砷（ As2 O3）对HOTAIR基因表达的影响。方法：实时定量PCR检测在乳腺癌癌旁组织与癌组织中长链非编码RNA HOTAIR mRNA的表达,筛选高表达HOTAIR的乳腺癌细胞株,检测 As2 O3对 HOTAIR mRNA 表达的作用。先观察比较乳腺癌与癌旁组织中HOTAIR的表达,再检测乳腺癌细胞株中HOTAIR的表达,以及As2 O3作用后MCF-7细胞中HOTAIR的表达变化。结果：乳腺癌组织中HOTAIR mRNA表达量为0.011±0.005,癌旁组织未见表达;乳腺癌细胞株SKBR-3和MAD-MB-231细胞均未表达HOTAIR mRNA,MCF-7细胞株高表达HOTAIR mRNA（1±0.236）;在As2O3作用下,MCF-7细胞中HOTAIR mRNA表达较空白组明显下降（P〈0.01）。结论：HOTAIR与乳腺癌的发展可能相关,As2O3可以抑制其表达。     

阿魏酸通过调控线粒体凋亡抑制宫颈癌HeLa细胞侵袭迁移功能

目的：探讨阿魏酸（FA）对宫颈癌HeLa细胞株凋亡调控作用及其可能机制。方法：体外培养HeLa细胞，将其分为control组和FA处理组（1、2 和4 mmol/L）。细胞计数试剂盒8（CCK-8）和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力，Transwell实验检测细胞的侵袭能力。实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测不同浓度FA处理后HeLa细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3的表达，免疫荧光检测HeLa细胞中线粒体的表达数量及状态。结果：RT-qPCR结果显示，与control组相比，随着FA浓度增高，HeLa细胞中Bcl-2基因表达逐渐降低，而Bax和Cleaved-caspase-3 基因表达逐渐增强（P ＜0.05）。免疫荧光示，与control组相比，HeLa细胞中的线粒体含量逐渐减少且功能逐渐减弱（P ＜0.05）。Transwell以及划痕实验结果显示，与control组相比，不同浓度FA可使HeLa细胞的侵袭细胞数以及迁移细胞数减少且呈剂量依赖性（P ＜0.05）。结论：FA通过Bcl-2家族蛋白途径抑制HeLa细胞的增殖、侵袭及迁移，诱导线粒体介导的细胞凋亡。     

NF-κB信号通路介导楤木皂甙抗宫颈癌作用及机制研究

目的 探讨楤木皂苷对人宫颈癌细胞HeLa细胞增殖和迁移的抑制作用,揭示核因子-κB(NF-κB)在楤木皂苷抑癌过程中的分子机制.方法 以体外培养的人宫颈癌细胞HeLa系为研究对象,实验分为对照组、楤木皂苷(200μg/mL)处理组(观察组),48 h后观察两组HeLa细胞增殖能力的改变.运用Western blot检测NF-κB的表达及酵母自噬基因Atg5/Vps30的同源基因(Beclin 1)、自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的改变.结果 楤木皂苷能够显著抑制HeLa细胞的增殖;楤木皂苷能够抑制NF-κB信号通路及促进自噬相关蛋白Beclin 1、Atg 5、LC3B的表达.结论 楤木皂苷能够抑制NF-κB信号通路,进而诱导自噬的发生影响宫颈癌细胞HeLa的增殖和迁移.