人类斯钙素蛋白1对肾癌细胞中STC-1、HIF-1α及Ca2+影响的研究

目的:探讨STC-1、HIF-1α是否通过调节细胞内Ca2+含量参与到肾癌细胞的发生机制。方法:使用不同剂量外源性人类STC-1蛋白干预肾癌细胞(GRC-1),并设对照组;应用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR检测细胞内HIF-1α、STC-1的表达,荧光探针检测细胞内Ca2+水平。结果:与对照组相比,外源性STC-1蛋白可刺激GRC-1细胞的增殖,但对增殖率的促进作用却随着外源性STC-1蛋白给药浓度的升高而逐渐降低(P<0.05);外源性STC-1蛋白可降低GRC-1细胞内HIF-1α、STC-1的表达和Ca2+水平,此作用与STC-1浓度呈正相关(P<0.05)。结论:STC-1、HIF-1α可能通过相互之间的抑制作用和调节细胞内Ca2+水平参与到肾癌的发生机制中。     

槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖及HIF-1α、VEGF的影响

 目的 探讨槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖能力、HIF-1α以及VEGF表达的影响及其可能机制。方法 实验的细胞分为正常对照组、缺氧组、槲皮素+缺氧组,采用CoCl₂法诱导缺氧环境。采用MTT 法检测各组细胞增殖能力,实时定量PCR 及Western blot检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α 和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力降低(P<0.05),与缺氧组比较,槲皮素+缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力显著降低(P<0.05),正常组在24、48、72 h的光密度值分别为0.640±0.016、1.287±0.025、1.738±0.027,缺氧组的光密度值分别为0.551±0.021、0.851±0.028、1.268±0.018,槲皮素+缺氧组的光密度值分别为0.435±0.023、0.717±0.013、0.984±0.037。与正常对照组比较,缺氧组细胞HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),而槲皮素可下调缺氧细胞中VEGF mRNA及蛋白表达,对HIF-1α mRNA及蛋白表达无影响(P>0.05):正常对照组HIF-1α、VEGF的mRNA表达均为1.000±0.000,蛋白表达分别为0.616±0.016、0.831±0.034,缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达分别为2.298±0.031、2.065±0.090,蛋白表达分别为1.385±0.047、2.022±0.076,槲皮素+缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达2.326±0.027、0.990±0.077,蛋白表达分别为1.406±0.029、1.137±0.054。结论 槲皮素可抑制缺氧肝癌细胞HepG2 增殖能力,这可能与槲皮素下调细胞中VEGF表达有关。     

Ca2+、Mg2+对心肌肌球蛋白ATP酶活性的影响

目的研究Ca2 +、Mg2 +对心肌肌球蛋白ATP酶活性的影响。方法采用一种简便、快速的方法从心肌组织中提取肌球蛋白 ,根据酶反应ATP分解释放的无机磷含量检测Ca2 +、Mg2 +激活肌球蛋白ATP酶的Km值及最大反应速度Vmax,以及不同浓度的Ca2 +、Mg2 +、pH值对肌球蛋白ATP酶活性的影响。 结果Ca2 +、Mg2 +-肌球蛋白ATP酶Km值为 5 .2 7± 2 .1 0mmol、7.0 4± 2 .0 6mmol,Vmax分别为 :1 .1 0± 0 .1 3μmol·mg- 1 ·min- 1 、0 .61 7± 0 .0 9μmol·mg- 1 ·min- 1 ;Ca2 +较Mg2 +具有较大的酶激活能力 (P <0 .0 1 ) ,但Mg2 +的浓度影响着肌球蛋白ATP酶对Ca2 +的敏感性 ,当Mg2 +浓度大于 6mmol/L时 ,酶对Ca2 +的存在无反应 ;不同的pH值 ,对Mg2 +激活的酶反应影响较小。结论Ca2 +、Mg2 +对肌球蛋白ATP酶的作用机理不同 ,Mg2 +是维系肌球蛋白具有酶活性构象所必需 ,而Ca2 +在肌肉收缩过程中可能主要充当的是信号传导功能及调控功能     

脑复合剂对脑损伤大鼠Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Ca2+调控的影响

目的 观察刨伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)大鼠脑组织匀浆及线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性、神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织钙调蛋白(CaM)表达的动态变化,探讨脑复合剂脑保护作用的分子生物学机制.方法 建立大鼠TBI模型,分别设立假手术组、TBI组及中药治疗组.中药治疗组给予脑复合剂10 g·kg-1·d-1,假手术组及TBI组给予同等剂量等渗盐水,2次/d,连续7 d.分别于TBI后24 h、72 h、1周等3个时相点处死大鼠,动态定量分析各组大鼠脑组织匀浆及线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性、神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达的变化.结果 TBI组各时相点大鼠脑组织匀浆及线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均明显降低,于TBI后72 h后逐渐恢复,1周时仍明显低于假手术组.中药治疗组大鼠脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性显著增加(P＜0.05);TBI组各时相大鼠脑组织神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达均有不同程度增高,于伤后24 h达高峰,持续至72 h仍高于假手术组.而中药治疗组各时相大鼠神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达明显低于TBI组(P＜0.05).结论 脑复合剂的脑保护作用可能与增加脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性,从而减轻TBI后脑细胞的能量代谢障碍,降低神经细胞内游离Ca2+浓度及脑组织CaM表达,减轻Ca2+超载所导致的继发性脑损伤有关.     

低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡及HIF-1α、bax、bcl-2表达的影响

目的:观察低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡及HIF-1α、bax、bcl-2表达的影响,为探讨低氧训练适应机理提供依据。方法:60只SD大鼠按体重随机分为6组,每组10只,即:常氧组(C)、高住8h组(8hHi)、高住12h组(12hHi)、常氧运动组(T)、高住低练8h组(8hHiLo)和高住低练12h组(12hHiLo)。T、8hHiLo、12hHiLo组大鼠每天在坡度为0的动物跑台上以25m/min的速度训练1h。训练后,将8hHi、8hHiLo组和12hHi、12hHiLo组分别放入氧浓度为12.5%(相当于海拔4000m)的低氧舱内8h和12h,5d/周。实验周期为4周。最后一次实验结束后24小时取材,采用HE染色、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)及蛋白免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织细胞凋亡和HIF-1α、bcl-2、bax表达,分析各指标之间的相关关系。结果:(1)与常氧组相比,高住12小时组、常氧运动组及高住低练组凋亡指数均显著增加(P<0.05);与常氧运动组比较,12小时高住低练组凋亡指数增加,具有统计学意义(P<0.05);8小时高住低练组凋亡指数比8小时高住组显著增加(P<0.05),12小时高住低练组凋亡指数比12小时高住组显著增加(P<0.05);与8小时高住低练组相比,12小时高住低练组凋亡指数显著增加(P<0.05)。(2)高住组、常氧运动组及高住低练组与常氧组相比HIF-1α、bcl-2、bax、bax/bcl-2均具有显著性差异(P<0.05);8小时和12小时高住低练组与常氧运动组相比,bcl-2、bax、bax/bcl-2亦具有显著性差异(P<0.05);12小时高住低练组bcl-2、bax、bax/bcl-2比12小时高住组显著增加(P<0.05),与8小时高住低练组相比,12小时高住低练组bcl-2、bax、bax/bcl-2显著增加(P<0.05);(3)凋亡指数与bax及bax/bcl-2、HIF-1α与bax呈正相关(P<0.05)。结论:(1)低氧训练可诱导大鼠肾组织HIF-1α、bcl-2以及bax蛋白表达,细胞凋亡指数及病理损伤与运动时低氧刺激有关,以高住低练12小时组最明显。(2)bcl-2与bax参与调控肾组织细胞的凋亡;HIF-1α的表达可能协同bcl-2家族凋亡相关因子的表达,在低氧训练导致的肾组织细胞凋亡中发挥双重效应。     

FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺癌中的表达及临床意义

 目的 探讨叉头框转录因子M1(FOXM1)、Polo样激酶1(PLK1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化法检测FoxM1、PLK1、HIF-1α及EZH2蛋白在803例乳腺浸润性导管癌和癌旁乳腺组织中的表达情况及其与乳腺癌组织临床病理特征间的关系。结果 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率分别为59.78%、27.90%、43.96%和60.40%,显著高于其在癌旁乳腺组织中的表达(29.89%、0%、3.86%、20.92%),差异具有统计学意义(P<0.05)。FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2的表达与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期相关,与患者年龄、是否绝经及肿瘤大小无关(P>0.05)。PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均与ER呈负相关关系,FOXM1和EZH2蛋白的表达与HER-2呈正相关关系(P<0.01)。FOXM1、PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均具有正相关关系(P<0.01)。结论 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2可能协同参与了乳腺癌的发生、发展,并可能成为乳腺癌预后评估的重要指标。     

膀胱移行细胞癌E-钙粘附蛋白和α连接素表达的定量研究

目的:定量地检测E-钙粘附蛋白(E-cad)及α-连接素(α-CTN)在膀胱移行细胞癌的表达,并探讨它们与肿瘤生物学行为的关系.方法:应用流式细胞术,检测30例膀胱癌冰冻组织的E-cad和α-CTN的表达量.结果:肿瘤细胞E-cad(0.5677±0.3194),α-CTN(0.5726±0.2895)的表达量(荧光指数,FI)均明显低于正常粘膜(P<0.01).浸润型肿瘤二者表达量低于表浅型肿瘤(P<0.01),复发者E-cad表达量低于初发者(P<0.05).E-cad和α-CTN表达量呈正相关(P<0.01).结论:膀胱移行细胞癌E-cad和α-CTN表达均下调,并以浸润型肿瘤为显著,肿瘤复发后,其E-cad表达量降低.E-cad和α-CTN表达量呈正相关.二者下调可能具有因果关系.     

不同海拔缺氧对大鼠心肌HIF-1α的影响研究

目的：探讨不同海拔（2 500m以内）条件下对大鼠心肌的损伤作用及NO、MDA与HIF-1α的关系.方法：实验Wistar雄性大鼠18只,分为A组（海拔55m）,B组（海拔1 520m）及C组（海拔2 260m）三组.在各海拔处标准饲养3日后处死取心脏,试剂盒测定低氧诱导因子（HIF-1α）,丙二醛（MDA）,一氧化氮（NO）.结果：C组与A组相比,HIF-1α、MDA明显增加（P＜0.01）,而NO明显降低（P＜0.05）;B组与A组相比,HIF-1α、MDA并无显著差异（P＞0.05）.结论：不同海拔对大鼠心肌的影响不同,在2 260m海拔缺氧条件下,大鼠心肌确实能形成一定程度的氧化损伤,同时自由基的增加及NO的减少能在一定程度上促进HIF-1α的稳定性.     

乳腺癌组织中HIF-1α、Twist及E-钙粘蛋白表达及临床意义

目的检测乳腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白和Twist蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关因子E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况,探讨三者与乳腺癌临床病理学指标之间的关系。方法应用免疫组织化学方法(SP法)检测60例乳腺浸润性导管癌组织和30例乳腺癌旁正常组织中HIF-1α、Twist及E-cadherin蛋白的表达情况,并分析其与乳腺癌临床病理学指标的关系。结果 HIF-1α、Twist及E-cadherin在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为81.7%、63.3%、71.6%,而其在癌旁正常组织中的阳性表达率分别为23.3%、16.7%、90.0%,3种蛋白在两种组织中的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性检验示,HIF-1α蛋白与Twist蛋白表达呈正相关,此两种蛋白均与E-cadherin蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。HIF-1α、Twist及E-cadherin蛋白的表达与患者年龄、肿块大小均无明显相关性(P>0.05),而与临床分期、组织学分级和淋巴结转移具有显著相关性(P<0.05)。结论在乳腺癌组织中,HIF-1α蛋白与Twist蛋白均高表达,上皮间质化相关因子E-cadherin表达降低,与乳腺癌临床分期、组织学分级和腋窝淋巴结转移情况具有相关性,且Twist和HIF-1α在乳腺癌中的表达呈显著正相关,与E-cadherin表达负相关,提示HIF-1α可能通过上调Twist的表达,促进上皮间质转化现象的发生,成为促进乳腺癌浸润、转移的可能途径之一,Twist蛋白与HIF-1α蛋白可在一定程度上预测乳腺癌的进展和肿瘤预后的判断。     

HIF-1α对人脑胶质瘤SHG44细胞恶性度的影响及其机制

 目的 探究过表达低氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor 1α, HIF-1α)对人脑胶质瘤SHG44细胞恶性度的影响及其可能机制。方法 体外培养SHG44细胞,转染过表达HIF-1α入SHG44细胞,评估HIF-1α转染效率;对比分析HIF-1α过表达对SHG44细胞的增殖、干性、迁移和侵袭的影响;ELISA法检测肿瘤相关炎性反应因子(TNF-α,IL-10,IL-17和IL-1β),Western blot检测SHG44细胞焦亡相关蛋白[炎性小体3(inflammasome3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、GSDMD、GSDME和转化生长因子-β₁(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)]的表达,明确HIF-1α对焦亡的关系。结果 HIF-1α过表达后SHG44细胞明显肿胀增多,细胞的增殖、干性、迁移和侵袭能力较对照组明显增强,与对照组相比肿瘤炎性因子(TNFα,IL-10和IL-1β)表达水平均明显升高,而肿瘤炎性反应抑制因子IL-17表达水平明显下降;HIF-1α过表达后焦亡相关蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、GSDME和TGF-β₁)表达明显上调(P<0.05)。结论 HIF-1α过表达可能通过促进焦亡提高SHG44细胞的增殖、干性、迁移和侵袭能力。     

三七总皂甙对颅脑损伤后Ca2+、CaM含量影响的实验研究

探讨三七总皂甙对颅脑损伤后脑组织中Ｃａ＾２＋、ＣａＭ含量的影响及其对颅脑损伤后的治疗效应。方法干湿法测定脑组织含水量,放免法,原子吸收分光光度法测定血及脑组织中Ｃａ＾２＋、ＣａＭ含量;分析ＰＮＳ对上述指标的影响。     

RNA干扰HIF-1α对人肺腺癌细胞SPCA-1摄取18F-FDG的影响

目的探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人肺腺癌细胞SPCA-1摄取18F-脱氧葡萄糖(FDG)的影响.方法构建干扰HIE-1α质粒pSUPER-HIF-1α,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰后HIF-1α的变化,用γ计数仪检测其对SPCA-1细胞摄取18F-FDG的影响.结果RNA干扰HIF-1α,在乏氧和常氧状态下致mRNA表达分别下降76%和64%,空载体对照组分别为5%和0%;在乏氧状态下,蛋白质的表达下降,SPCA-1细胞对18F-FDG的摄取明显降低(P＜0.05).结论在乏氧状态下,RNA干扰HIF-1α明显降低SPCA-1细胞对18F-FIDG的摄取.     

喉鳞状细胞癌中C-erbB-2和E-钙粘附素蛋白表达及其意义

目的：探讨癌基因c—erbB-2蛋白和黏附分子E-钙黏蛋白（E—cad）表达与喉鳞状细胞癌（LSCC）的发生、发展和生物学意义。方法：应用免疫组织化学方法，检测45例LSCC组织和15例声带息肉（VCP）组织中c—erbB-2和E—cad蚤白表达水平。结果：在LSCC组织中c—erbB-2和E—cad表达阳性率分别为75．6%（34／45）和62．2％（28／45）。LSCC中，c—erbB-2表达阳性率高于VCP（0／15，0．0%,40，X^2=22．12，P＜0．01），而E—cad表达阳性率低于VCP（15／15，100％，X^2=4．73，P〈0．05）。c—erbB-2高表达和E—cad低表达与LSCC分级和淋巴结转移相关（P〈0．05）。LSCC中c—erbB-2表达与E—cad表达呈负相关（r=-0．30）。结论：c—erbB-2和E—cad表达水平可作为判断LSCC分级和淋巴结转移和预后的重要参考指标。     

高压氧加尼莫地平对脑多梗死性痴呆患者血小板选择素CD62p、红细胞内Ca2+、血清Ca2+和红细胞变形指数的影响

目的观察高压氧(HBO)加尼莫地平对脑多梗死性痴呆(MID)患者血小板选择素CD62p(platelet-selectin-CD62p,简称CD62p)、红细胞内钙(intraerythrocytic-calcium,简称IECa2+)、血清钙(serum-calcium,简称SCa2+)和红细胞变形指数(deformity-index,简称DI)的影响,并进一步探讨HBO在缺血性脑血管疾病(ICVD)治疗中的作用及机制.方法采用流式细胞免疫技术,以抗血小板单克隆抗体及钙离子荧光剂为分子探针,用激光衍射红细胞变形仪,对43例MID患者予HBO加尼莫地平治疗(HBO组)和对38例MID患者予常规药物治疗(对照组),均于治疗前后检测CD62p、IECa2+、SCa2+及DI变化,并进行对比分析.结果 HBO组治疗后CD62p、IECa2+含量明显降低,DI明显增加(P＜0.01),SCa2+明显升高(P＜0.05),与对照组比差异显著(P＜0.05).IECa2+随着CD62p含量的降低而降低,两者呈正相关(r＝0.351,P＜0.05);而SCa2+则随着IECa2+含量的降低而升高,两者呈负相关(r＝-0.326,P＜0.05).结论 HBO加尼莫地平治疗可使CD62p、IECa2+降低,DI增强,对MID的恢复有益.     

低氧诱导肾细胞癌786-O细胞HIF-1α的表达变化及意义

目的探讨缺氧条件下肾透明细胞癌786-O细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达变化及意义。方法786-O细胞在缺氧条件下培养不同时间（0、8、16、24h）后,RT-PCR法检测HIF-1α mRNA的转录情况;Western blot法检测HIF-1α蛋白表达变化。结果常氧状态下HIF-1α mRNA和蛋白均有一定表达。缺氧处理一定时间（8、16、24h）后786-O细胞HIF-1α mRNA表达没有明显改变（P〉0．05）,而HIF-1α蛋白表达水平显著升高（P〈0．01）。结论缺氧条件下786-O细胞HIF-1α表达变化主要在翻译水平而非转录水平。在蛋白水平对HIF-1α表达进行调控可作为肾透明细胞癌治疗的新靶点。     

斯钙素1在氟中毒大鼠肾损伤中的作用及其与高钙的关系研究

目的观察斯钙素1(STC1)在大鼠氟中毒肾损伤中的作用,并探讨高钙对大鼠肾脏STC1的影响。方法 42只雄性SD大鼠按体重分层分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组、低氟加钙组、中氟加钙组、高氟加钙组,每组6只。对照组按体重比注射5ml/kg生理盐水,低、中、高氟组按体重比分别给予5、10、20mg/kg的氟化钠腹腔注射,每48h注射1次,常规自由饲食(含钙量0.87%);低、中、高氟加钙组除按以上方法染氟外,给予高钙饮食(含钙量5.49%)。建模16周后处死动物,肾脏取材,行免疫组化及RT-PCR检测STC1的定位及表达,以荧光探针标记后采用荧光分光光度仪检测肾细胞内[Ca2+]i水平,并检测肾组织脂质过氧化产物的活力。结果 STC1主要定位于肾脏皮髓交界的近曲小管,染氟大鼠的STC1表达量及肾细胞[Ca2+]i水平显著高于对照组。高钙可增强STC1的表达,使谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)值上升,并抑制[Ca2+]i水平,使丙二醛(MDA)含量下降,且上述改变随染氟剂量增加更加明显。结论氟中毒肾损伤时STC1可反应性增高,高钙能拮抗氟中毒肾损伤,并促进STC1的表达。STC1可能参与了氟中毒大鼠的肾损伤机制。     

非小细胞肺癌CT灌注参数与VEGF、HIF-1α、Ki-67的相关性研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中CT灌注成像(CTPI)参数与Ki-67、VEGF和HIF-1α的相关性,为肺癌分子靶向治疗的动态监测提供帮助.方法:搜集行CT胸部灌注扫描并经病理证实为NSCLC的患者24例,图像后处理分析得到灌注值(Perfusion)、血容量(BV)、强化峰值(PEI)及达峰时间(TTP)四...