IFN-γ对球后成纤维细胞增殖的影响

目的:研究IFN-γ对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响。方法:用MTT法测定rhIFN-γ对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响。结果:经0.05,0.1,0.2,0.4,1.0MU/L的rhIFN-γ作用48h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.221±0.013,0.260±0.016,0.274±0.022,0.299±0.016,0.288±0.012与对照组0.181±0.010相比,差异有统计学意义(P<0.05);经0.05,0.1,0.2,0.4,1.0MU/L的rhIFN-γ作用48h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.231±0.017,0.269±0.010,0.291±0.020,0.318±0.019,0.303±0.016与对照组0.189±0.012相比,差异有统计学意义(P<0.05);在一定范围内有浓度依赖性,并且以0.4MU/L的浓度刺激球后成纤维细胞的作用最强。结论:rhIFN-γ有促进正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖的作用。     

吲哚美辛体外对球后成纤维细胞增殖的影响

目的:研究吲哚美辛对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响。方法:用MTT法测定吲哚美辛对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响。结果:经100,200,400,800μmol/L吲哚美辛作用24h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.219±0.015,0.201±0.026,0.129±0.013,0.112±0.012与对照组0.252±0.017相比,差异有统计学意义(P<0.01);经100,200,400,800μmol/L吲哚美辛作用24h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.225±0.022,0.197±0.011,0.138±0.019,0.121±0.023与对照组0.267±0.031相比,差异有统计学意义(P<0.01);在一定范围内有浓度依赖性,并且以800μmol/L的浓度抑制球后成纤维细胞的作用最强。结论:吲哚美辛有抑制正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖的作用,以800μmol/L抑制作用最强,在一定范围内有浓度依赖性。     

CD40在人球后成纤维细胞的表达

目的:探讨rhIFN-γ作用下,正常人和TAO患者球后成纤维细胞(RF)CD40 mRNA的表达情况.方法:用RT-PCR法,对rhIFN-γ诱导正常人和TAO患者RF CD40的mRNA进行半定量分析.结果:经100,200,400,1 000kU/L rhIFN-γ作用48h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.483±0.095和0.476±0.051,0.647±0.034和0.659±0.083,0.849±0.017和0.852±0.024,0.891±0.082和0.894±0.041与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P≤0.01);两者同一浓度相比差异无统计学意义(P＞0.05).经400kU/L rhIFN-γ作用12,24,48,72h后,正常人和TAO患者RF CD40的吸光度比值分别为0.331±0.047和0.329±0.025,0.668±0.067和0.683±0.104,0.849±0.017和0.852±0.024,0.865±0.021和0.876±0.014与各自对照组0.203±0.032和0.213±0.020相比,差异有统计学意义(P＜0.05),两者同一时间相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:rhIFN-γ可上调正常人和TAO患者RF CD40mRNA的水平,呈浓度和时间依赖.     

脂多糖诱导炎症反应对TAO眼眶成纤维细胞环氧合酶-2及前列腺素E_2表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）对甲状腺相关眼病（TAO）眼眶成纤维细胞环氧合酶-2（COX-2）表达及前列腺素E2（PGE2）分泌的影响。方法眼眶组织分别取自3例3眼因眼球萎缩行义眼台植入（正常对照组）和4例4眼因TAO行开眶减压术（TAO组）的患者。细胞原代培养采用组织块法。将体外培养的2组眼眶成纤维细胞,分别采用0、10、100、1000μg/L的LPS作用24h,或1000μg/LLPS分别作用0、4、8、12、24h。半定量逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测各组COX-2mRNA的表达,ELISA法检测上清液中PGE2的表达。结果组织块培养法第3天即有成纤维样细胞自组织块边缘游出,细胞呈长梭形和多角形。10、100、1000μg/LLPS作用后,与未用LPS刺激时相比,正常对照组和TAO组眼眶成纤维细胞COX-2mRNA的表达均增强,PGE2的分泌增加。与正常对照组相比,1000μg/LLPS作用时间相同时,TAO组COX-2mRNA表达及PGE2的分泌增加更为明显（P〈0.05）。结论 COX-2通路可能参与了活动期TAO的炎症过程;在疾病的活动期,采用抑制COX-2的治疗,可减轻局部炎症反应,可能对活动期TAO的治疗有效。     

环孢素A对人Tenon''''s囊成纤维细胞增殖及TGF-β1分泌的影响

目的 观察环孢素A(CsA)对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞(HTFs)增殖及其转化生长因子β1(TGF-β1)分泌的影响。方法 以体外培养的人HTFs为实验对象，分别加入0．00l～10μg／mL CsA作用48h，细胞计数观察CsA对细胞增殖的影响。收集0．00l～5μg／mL CsA处理后细胞培养上清液，采用ELISA方法检测细胞TGF-β1的分泌量。光镜及透射电镜观察细胞的结构变化。结果 CsA在.1～10μg/mL范围内以质量浓度依赖方式抑制人HTFs的增殖，IC50为0．55μg／mL，并在0．01～5μg／mL范围内刺激细胞TGF-β1的分泌。CsA作用后细胞形态学改变的主要特征为胞浆内大量空泡形成。结论 一定质量浓度的CsA可能通过直接的细胞损伤作用在促进TGF-β1分泌的同时仍显著抑制人HTFs的增殖。     

汉防己甲素抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用并探讨其机制,寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物.方法:(1)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Tet作用下,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞形态的变化,并与丝裂霉素(Mitomycin,MMC)进行比较.(2)MTT比色法测定不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用,并与MMC进行比较.(3)流式细胞仪检测不同浓度的Tet作用48h,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞细胞周期的变化.结果:(1) Tet作用下,细胞胞体收缩,变圆,间隙增宽,药物浓度高时,细胞碎裂,浮起.0.1,0.2g/L MMC作用下大量细胞碎裂,溶解.(2)不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.01);0.1g/L与0.2g/L MMC、4×10-5 mol/L Tet与0.2g/L MMC对翼状胬肉成纤维细胞活性的影响无显著性差异(P＞0.05).Tet的IC50接近10-5mol/L(为0.848×10-5mol/L).(3)Tet作用下,翼状胬肉成纤维细胞周期中S期细胞增多,浓度越高,作用越明显.结论:汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,细胞分裂被阻止在S期(DNA合成期).可望用于对翼状胬肉的治疗.     

甲状腺相关眼病患者及正常人眼眶成纤维细胞的培养和鉴定

目的:体外培养甲状腺相关眼病患者和正常人的眼眶成纤维细胞,并进行比较、观察及鉴定。方法:采用组织块培养法,体外培养甲状腺相关眼病患者和正常人的眼眶成纤维细胞,并进行细胞形态观察及免疫组织化学鉴定。结果:甲状腺相关眼病患者与正常对照的眼眶成纤维细胞形态区别不明显,Vimentin染色均呈阳性,而Desmin,S-100,CK均呈阴性。结论:甲状腺相关眼病患者与正常人的眼眶成纤维细胞体外培养的形态及免疫组织化学鉴定无明显差异。     

美伐他汀对甲状腺相关眼病眶前脂肪细胞分化及炎症反应的抑制作用

背景脂肪增生和炎症反应是甲状腺相关眼病（TAO）活动期的两大主要病理过程,美伐他汀被证明有抑制前脂肪细胞分化的作用。目的观察美伐他汀对TAO来源眼眶前脂肪细胞分化的作用,及对环氧合酶-2（COX-2）与过氧化物酶体增生物激活受体-γ（PPAR-γ）表达的影响,探讨其对脂多糖（LPS）诱导炎症反应及TAO眼眶前脂肪细胞分化的调控作用。方法从4例TAO患者眼眶减压术中获取眼眶球后脂肪组织,用组织块培养法体外培养TAO眼眶成纤维细胞,为观察美伐他汀对TAO炎症反应过程中COX-2的作用,将培养细胞分为5个组,A组用1000μg／L的LPS,B、C、D组采用1000μg／LLPS分别联合5、10、20μmol／L美伐他汀,E组不加任何干预药物作为对照,均作用8h。观察美伐他汀对眶脂肪细胞分化后的作用,将A组再亚分为A1-A6组,1000μg／LLPS作用8h后,加入诱导液诱导各组细胞向脂肪细胞分化,A,组不加任何干预药物,A2、A3、A4组分别在分化全程中加入5、10、20μmol／L美伐他汀,A5、A6组分别在分化的第4天与第8天加入10μmol／L美伐他汀直至分化结束。采用油红O染色法测定分化后脂肪细胞的相对含量,应用Western blot法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测成纤维细胞中COX-2和PPAR—v蛋白及其mRNA的表达,用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中前列腺素E2（PGE,）的表达。结果B、C、D组眶成纤维细胞中COX-2蛋白及其mRNA的表达和PGE,的分泌水平均较A组明显降低（P〈0．05）。随着美伐他汀浓度的升高,COX-2蛋白及其mRNA的表达和PGE2的分泌水平均逐渐降低,各组间总体差异均有统计学意义（F=228．380、101．745、1586．881,P〈0．05）。E组COX-2蛋白及其mRNA的表达和PGE,的分泌水平较A、B、C组明显减弱,差异均有统计学意义（P〈0．05）,但与D组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。A1、A2、A3、A4组前脂肪细胞分化后吸光度（A492）值逐渐下降,分化后的细胞PPAR-γ蛋白及其mRNA表达均依次下降,组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;A1与A6组间的A492值、PPAR-1蛋白及其mRNA的表达差异均无统计学意义（P〉0．05）;A1、A5、A3组的A492值及PPAR-γ蛋白及其mRNA表达均依次下降,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论美伐他汀以剂量依赖的方式抑制LPS激活的TAO眼眶成纤维细胞中COX-2表达、TAO眼眶前脂肪细胞的分化、PPAR-γ的表达和PGE2的分泌,前脂肪细胞分化的早期抑制作用更强。     

IFN-γ、IL-6对眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病（TAO）眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞，在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6，用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TAO患者和正常对照眼眶成纤维细胞均表达ICAM-1，患者的表达量高于正常对照者，具有显著统计学差异（P〈0．05）。IFN-γ以剂量依赖方式上调ICAM-1的表达水平，对患者的上调作用更强；IL-6对眼眶成纤维细胞表达ICAM-1没有明显影响。结论IFN-γ通过诱导眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达在TAO的病理发生中起重要作用。     

植物凝集素诱导甲状腺相关眼病患者外周单核细胞与眼眶成纤维细胞共培养体系分泌IL-6、IL-17A的研究

背景 甲状腺相关眼病(TAO)的致病机制尚未明确,目前认为其是一种自身免疫性疾病,研究证实白细胞介素-17A(IL-17A)在多种自身免疫性疾病的发生和发展中起着重要作用,但其是否参与TAO的发病过程目前尚不明确. 目的 探讨培养外周血单个核细胞(PBMCs)与眼眶成纤维细胞(OFs)共培养体系中分泌的IL-17A是否参与TAO的发病过程及其可能的作用机制. 方法 采集2014年4-12月在中南大学湘雅医院确诊的12例TAO患者的外周血及眼眶结缔组织作为TAO组,并采集同期因先天性眼球萎缩行义眼台植入术的8例患者外周血及眼眶结缔组织作为对照组,采用密度梯度离心法提取所有受试者血中PBMCs,采用组织块培养法培养OFs.采用流式细胞仪检测PBMCs中T淋巴细胞纯度,分别用Giemsa染色法和免疫组织化学法鉴定培养的OFs.以1∶20的比例将OFs与PMBCs在U型96孔板中共培养以建立共培养体系,分别在各组共培养体系中加入0、1.0、2.5、5.0、10.0 μg/ml植物凝集素(PHA)刺激72 h,用ELISA法检测共培养体系上清液中IL-6、IL-17A质量浓度以及共培养体系细胞膜中总IL-17A受体(IL-17RA)的质量浓度.比较不同质量浓度PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度的差异. 结果 TAO组和对照组PBMCs中T淋巴细胞的纯度分别为(81.10±0.21)％和(80.05 ±0.38)％,组间差异无统计学意义(t=0.923,P＞0.05).体外培养的OFs对Vimentin呈阳性反应,Giemsa染色阳性,证实为成纤维细胞.1.0 μg/ml PHA作用后共培养体系中PBMCs和OFs增生能力最强,PHA质量浓度＞1.0μg/ml时,PBMCs出现凋亡,OFs增生明显减弱,相同质量浓度PHA作用下,TAO组的PBMCs和OFs增生均较对照组快.不同质量浓度PHA作用下TAO组与对照组共培养体系IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度总体比较,差异均有统计学意义(IL-6:F分组=12.561,P=0.000;F质量浓度=23.356,P=0.001.IL-17A:F分组=12.037,P=0.000;F质量浓度=19.206,P=0.000.IL-17RA:F分组=16.216,P=0.000;F质量浓度=4.627,P=0.018).1.0μg/ml PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均达峰值,随着PHA质量浓度的增加,IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均逐渐下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05);相同质量浓度PHA作用下TAO组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 1.0 μg/ml PHA刺激可增强共培养体系中PBMCs和OFs的增生及免疫炎性因子的分泌,IL-17A能够放大细胞免疫反应和炎症反应,从而参与TAO的发病过程.     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.