Iloprost液4℃保存兔胎脑皮层组织的实验研究

选择４℃条件，以生理盐水、ｉｌｏｐｒｏｓｔ液、改良ｉｌｏｐｒｏｓｔ液为保存液，对兔胎脑皮层组织进行保存的研究。从台盼蓝染色、碘化丙啶染色经流式细胞分析及光镜、电镜检查方面判定保存后的活性。结果表明，改良的ｉｌｏｐｒｏｓｔ液能较好地保存组织活性及正常的神经结构。     

Iloprost及其改良液4℃保存兔胎脑皮层组织时的腺苷酸含量变化

本实验以生理盐水、ｉｌｏｐｒｏｓｔ及其改良液为保存液，在４℃保存兔胎脑皮层组织，以高效液相色谱分析仪（ＨＰＬＣ）测定在保存过程中的腺苷酸含量变化，以了解胎脑组织在４℃保存时的能量代谢情况。结果显示，在生理盐水组及ｉｌｏｐｒｏｓｔ液组，随保存时间延长，胎脑组织中的三磷酸腺苷（ＡＴＡＴＰ）含量、能量负荷（ＥＣ）水平明显下降（Ｐ＜０．０１），在保存２小时接近耗竭，且两组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）；而改良ｉｌｏｐｒｏｓｔ液组的ＡＴＰ含量及ＥＣ水平在保存２小时却略高于保存１小时（Ｐ＞０．０５）。此结果表明，要改进４℃保存的效果，不仅需应用细胞保护剂，还应考虑如何延缓能量衰竭的发生。本实验通过在ｉｌｏｐｒｏｓｔ液中加入ＡＴＰ等物质，获得了较ｉｌｏｐｒｏｓｔ液更好的保存效果。     

Iloprost及其改良液4℃保存兔胎脑皮层组织时的…

本实验以生理盐水，ｉｌｏｐｒｏｓｔ及其改良液为保存液，在４℃保存兔胎脑皮质组织，效液相色谱分析仪测定在保存过程中的腺苷酸含量变化，以了解胎脑组织在４℃保存时的能量代谢情况。结果显示，在生理盐水组及ｉｌｏｐｒｏｓｔ液组，随保存时间延长，胎脑组织中的三磷酸腺苷含量，能量负荷水平明显下降，在保存２小时接近耗竭，且两组间无明显差异。     

碱性成纤维细胞生长因子联合透明质酸钠对角膜保存液中内皮细胞的作用*★

背景：作者前期将透明质酸钠和碱性成纤维细胞生长因子分别加入基础培养基，制成改良角膜保存液并证实其对角膜内皮细胞活性的保存作用。 目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠在角膜中期保存液中的作用及其有效浓度，评价该两种物质联合对角膜内皮细胞的保护作用。 方法：在以基础培养基 MEM、M-199为主要成分，添加 6%葡聚糖、HEPES缓冲系、抗生素等制成角膜保存液的基础上，加入不同浓度的透明质酸钠和碱性成纤维细胞生长因子，并设立未加透明质酸钠及碱性成纤维细胞生长因子的对照组。各组于4 ℃下保存新西兰大白兔角膜片，于3，5，7，10，14 d，行裂隙灯检查、锥虫蓝-茜素红染色、角膜组织病理切片及扫描电镜观察检测角膜内皮细胞活性，评价保存质量。 结果与结论：加入碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠的中期角膜保存液保存的角膜片其透明度、内皮细胞活性、显微结构、超微结构均明显优于未加组，各实验组同期比较，浓度较高组效果优于浓度较低组。碱性成纤维细胞生长因子及透明质酸钠同时加入基础保存液中能够对角膜内皮细胞进行有效的保护，其效果与浓度有关。     

异种肝移植的排斥机制

背景：寻找一种同种异体组织保存液,使保存的肌腱具有最大程度的生物活性。 目的：使用无水甘油在常温下对兔子肌腱进行保存,观察不同时间点的细胞形态和肌腱活性。 方法：使用特殊的方法处理兔肌腱,并常温避光密封保存在无水甘油中,在保存2,4,7,12个月使用苏木精-伊红染色石蜡切片、透射电镜观察肌腱组织结构及细胞形态,使用超氧化物歧化酶酶学实验观察肌腱的生物学活性。 结果与结论：2,4,7,12个月苏木精-伊红染色石蜡切片示大部分细胞细胞膜完整,细胞核规则,肌腱组织结构存在。透射电镜结果示细胞呈静止状态,核形态正常。超氧化物歧化酶酶学实验示肌腱具有超氧化物歧化酶酶活性。结果说明使用特殊的方法处理兔肌腱并在无水甘油中常温避光保存12个月,肌腱的组织结构、大部分细胞的细胞形态和肌腱生物活性得以保存。     

自制低钾右旋糖苷改良液用于保存犬肺移植离体肺的最长时间

背景：低钾右旋糖苷液用于肺移植,灌注保存效果较好,但有效供肺保存时间仍较短,价格较昂贵。 目的：观察改良自制低钾右旋糖苷液保存供肺不同时间供肺变化,评价改良自制低钾右旋糖苷液的供肺保存期限。 方法：成年家犬32只,随机分成对照、实验两组。对照组采用低钾右旋糖苷液作为供肺灌注保存液,实验组采用改良自制低钾右旋糖苷液。比较两组供肺组织灌注前、灌注后、保存4,8,12,24 h的髓过氧化物酶、丙二醛、湿干比、病理光镜检查、透射电镜检查结果。 结果与结论：两组离体肺组织的髓过氧化物酶、丙二醛和湿干比值随着保存时间的延长呈渐增趋势,髓过氧化物酶值在保存12 h以后与灌注前有显著差异,丙二醛和湿干比值保存8 h后与灌注前有显著差异。保存8 h后,实验组肺组织结构和超微结构的变化仍然可逆,较对照组变轻,但保存4,12,及24 h两组变化基本相似。结果提示,在实验条件下,供肺在改良自制低钾右旋糖苷液中保存8 h后开始出现显著变化,保存12 h后开始出现不可逆变化。     

保存人鼻中隔软骨活性的3种体外方法比较*★

背景：软骨损伤后难以自身修复，以活性软骨进行修复效果较好，但活性软骨的可靠来源尚未根本解决。 目的：以3种不同方法体外保存成人鼻中隔软骨块的活性比较。 设计、时间及地点：单一样本观察，实验于2007-06/2008-03在解放军第四军医大学唐都医院耳鼻喉科实验室及西京医院全军耳鼻咽喉-头颈外科中心实验室完成。 材料：材料为临床常规手术中切除的成人正常鼻中隔软骨20块，按国务院2006年《医疗机构管理条例》规定，已与患者签订知情同意书。 方法：将所取软骨，块剪成大小约15 mm×10 mm×2 mm软骨块，分别置于4，-20，-80 ℃ 冷冻及RPMI-1640液于37 ℃培养保存，于保存24 h，7，14，21 d和30 d时取样品。 主要观察指标：以苏木精-伊红、AB/PAS及Masson 三色染色和锥虫蓝排斥试验检测软骨活性。 结果：用RPMI-1640培养液保存的成人鼻中隔软骨，在整个保存期中均能保持较好活性，软骨细胞活性率保持在80%左右。以-80 ℃冷冻保存7 d及-20 ℃保存14 d时，软骨基本失去活性, 当4 ℃保存在21 d时，软骨可保持较好活性，保存30 d时，软骨活性明显降低。 结论：与低温保存方法相比，用组织培养法保存成人软骨块能较好地保持其活性，有望为临床治疗提供一种取材方便、新型有效的软骨修复材料。     

固定剂对细胞色素氧化酶组织化学染色的影响

细胞色素氧化酶 (CytochromeOxidase ,CO)是呼吸链上的最后一个酶 ,是细胞能量产生和传递的关键组成部分。在中枢神经系统中 ,区域性CO活性反映了局部组织能量代谢变化 ,这种变化与神经元的功能尤其是神经元突触和自发性电活动的能量需求密切相关。CO的组织化学染色方法已被广泛用于反映中枢神经系统CO的活性。为了成功地进行CO的组织化学染色 ,适中的组织固定是关键。固定剂的组成必须考虑既要保持良好的组织结构又要保持较高的酶活性。通常使用多聚甲醛和戊二醛混合固定液。本实验选用不同浓度的多聚甲醛和戊二醛固定组织 ,做CO组织化学染色 ,并进行光镜和电镜观察 ,发现 1%多聚甲醛和 2 %戊二醛混合固定既可保存良好的组织结构又可获得较高的CO活性。     

组织型纤溶酶原激活物及其抑制物与脑血管疾病

组织型纤溶酶原激活物 (ｔｉｓｓｕｅｐｌａｓ ｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ ,ｔ -ＰＡ)及其抑制物(ｔｉｓｓｕｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ -1,ＰＡＩ - 1)是纤溶系统的二个重要组成部分。目前对二者的结构、特性以及与脑血管疾病的关系尚未完全阐明。缺血性脑血管病患者血浆中二者的活性、抗原含量测定甚至出现了矛盾的结果。1　ｔ -ＰＡ、ＰＡＩ- 1在纤溶系统中的作用　　纤溶酶原激活物 (ＰＡ)即组织型纤溶酶原激活物 (ｔ -ＰＡ)和尿激酶型纤溶酶原激活物 (ｕ -ＰＡ)以及它们的抑制物在纤维蛋白…     

Alzheimer病患者海马中神经元退变与钙—钙调素的变化

为了探讨Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者海马神经元退变与钙－钙调素的关系，以尸检人脑海马组织为研究对象，根据患者年龄分为青年组，老年组和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病组。在钙ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ法染色后，借助显微分光光度计观察海马神经元中钙离子的变化，在荧光染色后通过显微荧光光度计了解钙调素的相对活性。     

固定剂对细胞色素氧化酶组织化学染色的影响

细胞色素氧化酶(Cytochrome Oxidase,CO)是呼吸链上的最后一个酶,是细胞能量产生和传递的关键组成部分.在中枢神经系统中,区域性CO活性反映了局部组织能量代谢变化,这种变化与神经元的功能尤其是神经元突触和自发性电活动的能量需求密切相关.CO的组织化学染色方法已被广泛用于反映中枢神经系统CO的活性.为了成功地进行CO的组织化学染色,适中的组织固定是关键.固定剂的组成必须考虑既要保持良好的组织结构又要保持较高的酶活性.通常使用多聚甲醛和戊二醛混合固定液.本实验选用不同浓度的多聚甲醛和戊二醛固定组织,做CO组织化学染色,并进行光镜和电镜观察,发现1%多聚甲醛和2%戊二醛混合固定既可保存良好的组织结构又可获得较高的CO活性.     

自制新型多器官保存液低温保存小型猪肾

背景：在前期实验的基础上,此次实验成功配制了含聚乙二醇的新型上海多器官保存液。 目的：以普通器官保存液为对照,验证自制含聚乙二醇的上海多器官保存液低温保存小型猪肾的效果。 设计、时间及地点：随机分组,对照实验观察,2006-05/2007-07在解放军器官移植研究所移植实验室完成。 材料：健康成年实验用巴马小型猪12头。自制新型新型上海多器官保存液,主要含聚乙二醇,相对分子质量20 000。pH7.43±0.10,渗透压825~900 kPa,UW液,购自美国Bristol-Myers Squibb公司。 方法：巴马小型猪肾分别以4 ℃器官保存液或上海多器官保存液原位灌注后离体保存24,48,72 h。保存终点测保存液pH值及乳酸脱氢酶含量,左肾取标本行组织学检查,右肾采用体外非循环猪肝/肾灌注系统灌注30,60,120 min测灌注液乳酸脱氢酶含量。灌注终点取肾皮质标本测丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。 主要观察指标：光镜、电镜观察肾冷保存后的形态学变化;灌注液及保存液乳酸脱氢酶含量;肾皮质标本测丙二醛浓度和超氧化物歧化酶活性;肾组织细胞凋亡指数。 结果：保存48,72 h后,器官保存液组保存液pH值高于上海多器官保存液组(P < 0. 05)。保存72 h终点保存液及再灌注30,60,120 min灌注液中乳酸脱氢酶活性器官保存液组高于上海多器官保存液组(P < 0.05)。同时间点两组肾组织光镜、电镜下形态学改变、肾皮质凋亡指数、超氧化物歧化酶、丙二醛含量差异均无显著性。 结论：新型上海多器官保存液对小型猪肾脏低温保存效果与普通器官保存液基本一致,对缺氧代谢器官细胞内酸中毒的缓冲能力以及对低温和缺血再灌注损伤的保护作用优于普通器官保存液。     

局灶性脑缺血和再灌注期一氧化氮合成酶的活性和局部脑血？…

研究局灶性脑缺血和再灌注期一氧化氮合酶的活性和局部脑血流量的动态变化。用改良Ｋｏｉｚｕｍｉ’ｓ大鼠局灶性脑缺血和再灌注模型及改良Ｂｒｅｄｔ和Ｓｎｙｄｅｒ’ｓ法测定了缺血和再灌注期缺血侧脑组织一氧化氮合成酶总活性，并同步以激光多普勒血流仪对缺血周边区局部脑血流量进行了测定。     

自制PV液对大鼠肝脏低温保存的实验研究

【摘要】 目的 探讨自制PV液对大鼠肝脏低温保存的效果。方法 Wistar大鼠90只随机分成三组：UW液组、PV液组和生理盐水（NS）对照组，采用大鼠肝脏非循环离体灌注模型，每组对大鼠肝脏保存0h、6h、12h、18h、24h，每个亚组6只大鼠。测定保存不同时间段后肝脏酶学变化（ALT、AST、LDH）、灌注流出液中氧自由基代谢产物（MDA、SOD）的含量，观察胆汁分泌量及镜下肝脏形态学变化。结果 PV液组与UW液组比较，灌注流出液中ALT、AST、LDH、SOD含量相近，无显著差异（P>0.05）；保存6h后，PV液组TNF-α值较UW液组升高明显（P<0.05）；保存12h后UW液组MDA含量升高较PV液组明显（P<0.05)；保存18h后PV液组胆汁分泌量低于UW液组（P<0.05）；两组光镜、电镜下组织形态改变相似。结论 PV液与UW液对Wistar大鼠肝脏功能具有保护作用，两者短时间保存效果相似，在抗氧化及清除氧自由基方面，PV液略优于UW液。     

脑血栓形成患者血浆组织型纤溶酶原激活物及其快速抑制物的变化 …

目的 观察急性动脉硬化性脑血栓形成患者血浆组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＡＰ）及其快速抑制物（ＰＡＩ－１）的变化规律，探讨血浆纤溶活性在脑血栓发生，发展及转归中的作用；同时测查恢复期或后遗期脑血栓形成患者血浆ｔ－ＰＡ及ＰＡＩ－１的变化规律，了解此类患者再发生血栓的危险性。方法 采用美国Σ９６０酶标读数仪，用发色底物法对２５例急性脑血栓形成患者血浆ｔ－ＰＡ及ＰＡＩ－１活性进行动态测查（发病后１、３、７、     

Alzheimer病患者海马中神经元退变与钙－钙调素的变化

为了探讨Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者海马神经元退变与钙－钙调素的关系，以尸检人脑海马组织为研究对象，根据患者年龄分为青年组、老年组和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病组（前两组为对照组）。在钙ｖｏｎＫｏｓｓａ法染色后，借助显微分光光度计观察海马神经元中钙离子的变化，在荧光染色后通过显微荧光光度计了解钙调素的相对活性。结果显示与对照组比较，钙离子在老年组和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病组中增高，尤其是在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病组；钙调素相对活性则明显增加，且有统计学意义。老年人和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者钙沉积增加，提示体内钙平衡有一定变化，钙调素相对活性增加，提示神经元退变的过程可能同时伴随钙相对调节功能的增加，钙的内环境稳定和钙调素的相对活性的变化在某种程度上，可能对Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病神经元退变起一定的作用。     

玻璃化法和低温冷冻法保存兔股动脉活性的差异

背景：异体血管保存常用的低温冷冻法会不可避免地形成大量冰晶，因此所保存的血管活性有限。玻璃化法可避免冰晶所造成的挤压损伤和冻融效应，尤其适合于活性组织的保存。 目的：比较玻璃化法和低温冷冻法保存兔股动脉组织结构和收缩舒张能力的差异。 设计、时间及地点：组织形态学及力学水平的随机对照实验，于2002-09/2006-08在解放军总医院骨科研究所完成。 材料：纳入新西兰兔18只，按随机数字法分为3组，玻璃化法保存组、低温冷冻法保存组及新鲜血管组各6只，每组取12条股动脉。 方法：切取股动脉标本，置于平衡液中备用。玻璃化法保存组血管在4 ℃条件下经25%，50%和100%梯度玻璃化溶液浸泡后，直接投入液氮中。低温冷冻法保存组血管由常温状态下，经过0，-20，-70 ℃梯度降温，平衡60 min，直接投入液氮中。将新鲜动脉作为对照，样本在液氮中保存14 d 以上。 主要观察指标：对动脉组织进行细胞培养和鉴定，测定动脉环张力随去甲肾上腺素和硝普钠剂量的变化。 结果：3组动脉培养均为平滑肌细胞，玻璃化法保存组生长速度与新鲜血管组相近，而优于低温冷冻法保存组。玻璃化法保存组与新鲜血管组动脉环最大收缩力差异无显著性意义（P > 0.05），玻璃化法保存组、新鲜血管组动脉环最大收缩力显著大于低温冷冻法保存组（P < 0.01）。当去甲肾上腺素剂量为10-6 mol/L时，动脉开始明显收缩；当去甲肾上腺素剂量为10-4 mol/L时，动脉收缩力达到最大。玻璃化法保存组、低温冷冻法保存组及新鲜血管组动脉环最大舒张程度差异无显著性意义（P > 0.05）。当硝普钠剂量为10-7 mol/L时，动脉开始产生明显的舒张反应；当硝普钠剂量为10-4 mol/L时，动脉基本达到最大舒张程度。 结论：玻璃化法保存的动脉较低温冷冻法具有更多的活性平滑肌细胞，尽管玻璃化法保存的动脉在对去甲肾上腺素的收缩能力方面优于低温冷冻法保存的动脉，但是对硝普钠的舒张能力上二者之间没有差别。     

大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型中Caspase-3的表达

目的 研究Caspase-3在缺血性脑损伤中的作用，进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制。方法 用Belayev改良的Longa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉(MCA)缺血／再灌注模型，TTC染色观察梗死灶的形成，分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中Caspase-3 mRNA与活性蛋白的表达。结果 缺血2小时再灌注24小时，TTC染色见明显的梗死灶形成，正常脑组织、假手术组及MCAO缺血对侧脑中有少量的Caspase-3 mRNA表达，但活性蛋白几无表达；再灌注24小时后，缺血侧脑中Caspase-3 mRNA表达明显增强，蛋白质活化增多，再灌注48小时进一步增加。结论 细胞凋亡机制参与了缺血后迟发性神经元死亡，Caspase-3在其中起重要作用。     

老年脑血栓患者血浆中t－PA、PAI的变化

本文采用发色底物显色法对３９例脑血栓患者血浆中组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）和纤溶酶原激活物抑制物（ＰＡＩ）进行检测。结果ｔ－ＰＡ活性下降，ＰＡＩ活性升高，与健康对照组相比有显著差异性（Ｐ＜０．０１），表明脑血栓患者纤溶活性降低，是产生血栓的因素之一。本栓测结果提示，测定ｔ－ＰＡ、ＰＡＩ有助于脑血栓的诊断。     

脑卒中患者急性期血浆t—PA和PAI活性的研究

脑卒中患者急性期血浆ｔ－ＰＡ和ＰＡＩ活性的研究张波张秋滨何宏刘滨唐强组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ），其抑制物（ＰＡＩ）是纤溶系统的关键酶，两者的相互作用调节纤溶系统的功能，我们对急性脑梗塞、急性脑出血的ｔ－ＰＡ和ＰＡＩ的活性进行了研究，现报道如下。...