SOX4调控Wnt信号通路影响骨肉瘤细胞增殖侵袭的实验研究

目的探讨性别决定区Y框蛋白4(SOX4)调控Wnt信号通路对骨肉瘤细胞增殖侵袭能力的影响。方法RT-PCR和Western blot检测收集的骨肉瘤组织及对应的瘤旁组织中SOX4的表达水平。体外培养骨肉瘤细胞F5M2,细胞转染SOX4小干扰RNA1(干扰1组)和SOX4小干扰RNA2(干扰2组)、小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC组),同时以未转染的细胞为对照组。RT-PCR和Western blot检测各组细胞中SOX4表达水平,筛选出干扰效果较好的干扰2组继续研究。噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸化的糖原合成激酶3β(pGSK-3β)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达水平。结果骨肉瘤组织中SOX4的表达水平明显高于瘤旁组织(P0.05)。干扰1组和干扰2组细胞中SOX4的表达水平明显低于对照组(P0.05),后续选用干扰2组细胞继续研究。干扰2组细胞存活率、侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、β-catenin表达水平均明显低于对照组(P0.05),而pGSK-3β表达水平明显高于对照组(P0.05)。siRNA-NC组细胞中SOX4表达水平、细胞存活率、侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、β-catenin、pGSK-3β表达水平与对照组比较均无显著差异(P0.05)。结论干扰SOX4后能够抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,作用机制可能与抑制Wnt信号通路有关。     

昆布多酚通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖侵袭的研究

目的 研究昆布多酚是否通过调控Wnt/β-catenin通路影响人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖和凋亡。方法昆布多酚提取物分别配制成高剂量组（100μg/mL）、中剂量组（50μg/mL）、低剂量组（25μg/mL）与MCF-7细胞株共培养48h后,采用MTT法检测昆布多酚对MCF-7增殖抑制率;TUNEL法检测昆布多酚对MCF-7细胞凋亡指数的影响;Transwell侵袭小室实验、划痕实验观察MCF-7侵袭迁移能力;Western blot检测MCF-7细胞中增殖、凋亡相关总蛋白和核蛋白的表达量。结果 MTT结果显示,昆布多酚提取物显著抑制人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖（P<0.05）,且呈剂量依赖;TUNEL结果显示,昆布多酚促进MCF-7凋亡,凋亡指数随着昆布多酚提取物剂量的增加而递增（P<0.05）;Transwell侵袭小室实验、划痕实验结果显示昆布多酚显著抑制MCF-7侵袭和迁移（P<0.05）;Western blot结果显示,随着昆布多酚浓度的增加,总蛋白β-catenin表达不受影响（P>0.05）,细胞核中β-catenin表达逐渐减少（P...     

MAPK信号通路调控子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1-B,采用MTT法检测增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell试验检测细胞侵袭能力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测细胞中磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达水平的影响。结果:p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对子宫内膜癌细胞HEC-1-B的增殖具有抑制作用,且随着作用浓度的升高抑制作用增强(P0.05)。与对照组比,施加抑制剂SB203580能够导致G0/G1期HEC-1-B细胞比例增多,S期和G2/M期细胞比例减少,细胞侵袭抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞中p-p38MAPK, PCNA,MMP-2蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P0.05)。且抑制剂SB203580组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:抑制MAPK信号通路能够抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与下调细胞中PCNA,MMP-2蛋白表达有关。     

熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂影响急性白血病细胞增殖和凋亡的实验研究

目的采用前瞻性研究探讨熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂对急性白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的熊果酸作用急性白血病细胞U937后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,计算半数抑制浓度。U937细胞分为对照组、熊果酸组、抑制剂组和联合组,联合组细胞用半数抑制浓度的熊果酸和Wnt信号通路抑制剂FH-535共同处理,熊果酸组用半数抑制浓度的熊果酸处理,抑制剂组用Wnt信号通路抑制剂FH-535处理,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(c-myc)蛋白水平。结果 0、4、8、16、32μmol/L的熊果酸作用后的U937细胞存活率依次降低。熊果酸组、抑制剂组、联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于对照组,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于熊果酸组和抑制剂组,而凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于熊果酸组和抑制剂组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论单纯使用熊果酸或者Wnt信号通路抑制剂均能够抑制白血病细胞增殖,促进急性白血病细胞凋亡,并且熊果酸和Wnt信号通路抑制剂联合使用对白血病细胞增殖抑制作用和凋亡促进作用更大。     

阿魏酸钠调控JAK2/STAT3信号通路对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

目的 探究阿魏酸钠调控JAK2/STAT3信号通路对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响.方法 胶质瘤细胞系U251经过培养、干预分为阿魏酸钠低浓度组、中浓度组、高浓度组和空白组、阴性对照组.在培养72 h后观察细胞生物学行为,并检测细胞JAK2/STAT3通路蛋白表达情况.结果 阿魏酸钠LC50=0.3075 mg/mL...     

沉默RORα通过Wnt信号通路促进人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的:在构建沉默RORα人胃癌MGC803细胞的基础上,观察沉默RORα对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法:软琼脂集落形成实验、流式细胞术、细胞迁移和侵袭实验检测RORα沉默对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。RT-PCR与Western blot检测RORα、Wnt1、MMP-9与TIMP3 m RNA与蛋白表达。结果:集落形成实验显示,沉默组的集落形成率128.1%明显高于对照组和空载体组(P0.05)。流式细胞术显示,沉默组S期细胞百分率39.9%较对照组26.1%和空载体组27.4%明显增加(P0.05)。迁移实验显示,沉默组迁移距离(1.76±0.19)mm明显高于对照组(1.32±0.14)mm和空载体组(1.29±0.17)mm(P0.05)。侵袭实验显示,沉默组穿膜细胞(172±27)个明显多于对照组(147±17)个和空载体组(149±14)个(P0.05)。RT-PCR与Western blot表明,沉默RORα可显著上调Wnt1与MMP-9 m RNA与蛋白与下调RORα与TIMP3 m RNA与蛋白。结论:沉默RORα可通过Wnt信号通路上调MMP-9和下调TIMP3促进MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

丹皮酚通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制人卵巢癌A2780细胞增殖的实验研究

目的探讨丹皮酚对人卵巢癌A2780细胞的生长抑制及诱导凋亡作用,揭示Wnt/β-catenin信号转导通路分子机制。方法对数生长期人卵巢癌A2780细胞分为对照组(0mmol/L丹皮酚)和0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组,采用CCK-8法检测丹皮酚作用24、48、72h时人卵巢癌A2780细胞增殖活性;丹皮酚作用48h后,应用流式细胞仪检测人卵巢癌A2780细胞周期,采用Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、β-catenin和c-Myc蛋白表达水平;丹皮酚作用0、24、48h,采用划痕实验检测人卵巢癌A2780细胞迁移能力。结果丹皮酚作用24、48、72h,人卵巢癌A2780细胞增殖活性在对照组为(100.00±3.28)%、(100.00±2.34)%、(100.00±2.89)%,在0.4 mmol/L丹皮酚组为(93.26±4.21)%、(80.23±5.43)%、(72.04±4.89)%,在0.8mmol/L丹皮酚组为(81.25±3.13)%、(71.65±4.78)%、(62.32±4.39)%,在1.6mmol/L丹皮酚组为(60.85±2.35)%、(45.89±5.34)%、(35.74±3.19)%,除0.4mmol/L丹皮酚组作用24h外,0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组不同作用时间人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于对照组(P0.05),0.8 mmol/L丹皮酚组作用24h,1.6mmol/L丹皮酚组作用24、48、72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于0.4 mmol/L丹皮酚组(P0.05),1.6mmol/L丹皮酚组作用24、48、72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性均低于0.8 mmol/L丹皮酚组(P0.05),0.4、0.8、1.6mmol/L丹皮酚组作用72h人卵巢癌A2780细胞增殖活性低于24h(P0.05);丹皮酚作用48h,0.4、0.8、1.6mmol/L组G1期细胞比例(73.08%,68.46%、52.95%)低于对照组(78.30%),S期细胞比例(19.61%、26.11%、39.05%)高于对照组(17.48%)(P0.05);丹皮酚作用48h,0.4、0.8、1.6mmol/L组Bax蛋白表达明显高于对照组,0.8、1.6mmol/L组Bcl-2、β-catenin和c-Myc蛋白表达明显低于对照组(P0.05);划痕实验结果表明,细胞迁移能力随丹皮酚浓度增加和作用时间延长明显下降(P0.05)。结论丹皮酚可抑制人卵巢癌A2780细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

miR-21靶向调控PTEN/PI3K/AKT通路对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 检测微小核糖核酸（micro RNA, miR）-21在人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中的表达,并探讨miR-21对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR, qRT-PCR)检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中miR-21的表达。选择MG-63细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染空白对照（control）、阴性对照miR-21-NC及抑制剂组（miR-21-inhibitor）,再通过qRT-PCR法验证转染后MG-63细胞中miR-21表达。CCK-8法检测MG-63细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制miR-21表达对MG-63细胞凋亡的影响;Transwell实验检测对MG-63细胞侵袭能力的影响以及采用Western blot检测抑制miR-21表达对MG-63细胞中PTEN,PI3K,AKT及p-AKT蛋白表达的影响。结果 人骨肉瘤细胞系Saos-2,U2OS和MG-...     

顺铂影响骨肉瘤143B细胞Notch信号通路的实验研究

目的研究不同浓度顺铂对骨肉瘤143B细胞Notch通路的影响。方法不同浓度顺铂(2μM、4μM、6μM、8μM、10μM)处理不同时间(1 d、2 d、3 d、4 d、5 d))后,细胞增殖与活性检测(CCK-8法)测定顺铂对骨肉瘤细胞增殖抑制率的影响;实时定量PCR(qRT-PCR)分析Notch目的基因的相对表达量;Western blot及免疫荧光法半定量分析Notch目的基因的相对表达量。结果顺铂给药后143B细胞增殖受抑制,尤其是当浓度大于4μM时;qRT-PCR、Western blot及免疫荧光结果显示当顺铂浓度较低时(≤4μM),Notch信号通路激活,而浓度较高时(≥6μM)时则受抑制。结论顺铂对骨肉瘤Notch信号通路的影响具有剂量依赖性和时间依赖性,且必须在处理48 h后才能发挥其效应。     

MUC16对骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨黏蛋白16(MUC16)对人骨肉瘤细胞系U2OS增殖和侵袭能力的影响。方法 将U2OS细胞按转染序列的不同分为sh-MUC16组（转染MUC16干扰序列）、sh-Control组（转染阴性对照序列）和空白组（不处理）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测各组MUC16 mRNA表达,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法检测细胞中MUC16、上皮型钙黏蛋白（E-Cad）和神经型钙黏蛋白（N-Cad）表达。结果 sh-MUC16组MUC16 mRNA相对表达量显著低于shControl组和空白组（P<0.05）,sh-Control组与空白组之间差异无统计学意义（P>0.05）。sh-MUC16组培养24、48、72和96h时细胞增殖活性低于sh-Control组和空白组（P<0.05）。sh-MUC16组迁移和侵袭细胞数均低于sh-Control组和空白组（P<0.05）。sh-MUC16组MUC16和N-Cad相对表达量均低于sh-Control组和空白组（P<0.05）,E-Cad相对...     

胰岛素影响白血病细胞增殖信号通路研究的新进展

胰岛素在肿瘤发生发展中的作用日益得到肯定,而胰岛素受体(IR)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在结构上具有高度同源性,它们在白血病细胞中表达增高.研究证实,胰岛素能促进白血病肿瘤细胞增殖,其机制可能是通过结合IR、IGF-1R或IR-IGF-1R杂合受体,激活PI3K/Akt信号通路而起作用.然而,大剂量胰岛素有可能抑制白血病细胞增殖,其机制不清楚.通过阻断IR、IGF-1R可抑制白血病细胞增殖,因而IR、IGF-1R有可能成为白血病靶向治疗的新靶点.本文主要对胰岛素影响白血病细胞增殖信号传导通路的最新进展做一综述.     

胰岛素影响白血病细胞增殖信号通路研究的新进展

胰岛素在肿瘤发生发展中的作用日益得到肯定,而胰岛素受体(IR)和胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在结构上具有高度同源性,它们在白血病细胞中表达增高。研究证实,胰岛素能促进白血病肿瘤细胞增殖,其机制可能是通过结合IR、IGF-1R或IR-IGF-1R杂合受体,激活PI3K/Akt信号通路而起作用。然而,大剂量胰岛素有可能抑制白血病细胞增殖,其机制不清楚。通过阻断IR、IGF-1R可抑制白血病细胞增殖,因而IR、IGF-1R有可能成为白血病靶向治疗的新靶点。本文主要对胰岛素影响白血病细胞增殖信号传导通路的最新进展做一综述。     

COL3A1对胃癌细胞增殖及侵袭影响的实验研究

目的 研究COL3 A1在胃癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中的作用.方法 以靶向COL3 A1的干扰慢病毒(3个靶点)及阴性对照慢病毒转染胃癌细胞株MGC803,嘌呤霉素筛选稳转细胞株.qRT-PCR验证转染后MGC803细胞中COL3A1的mRNA表达,筛选出2个转染效率最高的细胞株,再以Western blot法进一步...     

Wnt/β-catenin信号通路对肿瘤双相调控的研究进展

Wnt信号通路自20世纪80年代被发现以来,迅速成为细胞间信号传导领域研究的热点,随着研究的深入,该途径的异常激活与许多疾病的关联逐渐被人们认识,尤其是与恶性肿瘤的发生、发展及侵袭和转移的关系越来越多地引起人们的重视,通过     

RhoC调控骨肉瘤侵袭转移分子机制的研究

[目的]探讨RhoC在骨肉瘤发生侵袭转移中的作用和调控的分子机制.[方法]通过细胞培养技术培养不同转移潜能的骨肉瘤细胞株SOSP-9607H9(低侵袭能力组)及SOSP-9607E10(高侵袭能力组),应用RT-PCR和Western-blot方法在mRNA和蛋白水平检测RhoC的表达水平,进一步采用划痕愈合实验比较两种不同骨肉瘤细胞株的侵袭运动能力,分析骨肉瘤细胞侵袭运动能力与RhoC的表达水平的相关性;并通过质粒转染的方法从逆向验证RhoC的高表达调控骨肉瘤细胞的侵袭运动.[结果]两组细胞在开始接种时期无差异.当进入细胞对数生长期后,SOSP-9607 E10细胞增殖能力明显增强.在RhoCmRNA水平,高侵袭转移潜能SOSP-9607E10细胞中目的基因RhoCmRNA的表达高于低侵袭潜能组SOSP-9607H9细胞,差异有显著性(P＜0.05);在RhoC蛋白水平,高侵袭转移潜能SOSP-9607E10细胞中目的蛋白RhoC的表达高于低侵袭潜能组SOSP-9607H9细胞,差异有显著性(P＜0.05),SOSP-9607E10细胞的划痕愈合能力高于SOSP-9607H9细胞的划痕愈合能力.转染pcDNA3.1-RhoC质粒组SOSP-9607H9细胞中目的基因RhoCmRNA的表达高于转染pcDNA3.1空质粒细胞中RhoCmRNA的表达,差异有显著性(P＜0.05).转染pcDNA3.1-RhoC质粒后SOSP-9607E10细胞中目的蛋白RhoC的表达高于转染pcDNA3.1质粒SOSP-9607H9细胞,差异有显著性(P＜0.05).[结论]RhoC的差异表达可能是导致骨肉瘤细胞株SOSP-9607H9和SOSP-9607E10具有不同肿瘤细胞生物学行为和不同侵袭运动能力差异的原因之一;RhoC的过量表达在骨肉瘤侵袭转移中发挥关键性作用.     

Akt信号通路调控miR-193b抑制胃癌细胞增殖

目的研究胃癌相关miR-193b调控胃癌细胞增殖的功能作用,并通过研究其与Akt信号通路的关系探讨miR-193b的调控机制。方法在PTEN基因特异性敲除(PTEN~(-/-))小鼠胃癌组织中,Northern Blot法检测miR-193b的表达变化;在胃上皮正常细胞系GES-1和5种胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、N87、SNU-16中,Real-Time PCR和Western Blot分别检测miR-193b与p Akt、Akt的表达水平;激活或抑制胃癌细胞Akt信号通路,RealTime PCR检测miR-193b表达改变;在胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中过表达miR-193b,检测细胞的增殖变化。结果 miR-193b在Akt异常激活的小鼠胃癌组织中表达显著下调;胃癌细胞中Akt信号通路激活程度与miR-193b表达水平呈负相关,Akt信号通路抑制miR-193b表达;过表达miR-193b抑制胃癌细胞增殖。结论 miR-193b抑制胃癌细胞增殖并受Akt信号通路负向调节,其表达下调可能参与Akt信号通路调控的细胞增殖与胃癌发生。     

SFRP5调控Wnt/β-Catenin信号通路对子痫前期滋养细胞迁移和侵袭的作用机制研究

目的 探讨分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)在子痫前期(PE)患者中的表达水平及其对滋养细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 收集2020年1月到2021年10月在长治医学院附属和济医院产科收治的15例PE患者(PE组)和15例健康孕妇(正常组)剖宫产手术中获得的胎盘组织和血液样本;采用酶联免疫吸附试验法和免疫组化法分别检测血清和胎盘组织中SFRP5表达水平;体外培养人滋养层细胞系HTR8/SVneo,分别用重组人SFRP5蛋白、Dickkopf相关蛋白1(Dkk-1)和氯化锂(LiCl)处理细胞;采用划痕实验和基底胶Transwell实验检测HTR8/SVneo滋养细胞迁移和侵袭能力;明胶酶谱法检测HTR8/SVneo滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2/9的活性;蛋白免疫印迹法检测HTR8/SVneo滋养细胞中糖原合成酶-3β(GSK3β)和β-catenin蛋白的表达。结果 与正常组[(9.03±1.75)ng/mL)]相比,PE组血清SFRP5水平[(48.07±3.81)ng/mL]显著升高,差异有统计学意义(t=36.063、P<0.001)。与对照组相比,SFRP5组HT...     

Wnt信号通路在大鼠气管干细胞增殖分化过程中的时空表达

背景:实验前期项目己协同有关人员创立了体外观察气管干细胞的模型,并解决了气管干细胞的定位、分离及性状分析.但在气管干细胞的增殖分化过程中,究竟有哪些基因参与及其各自作用、气管干细胞可产生功能细胞的分化程序至今仍不清楚.目的:利用氟尿嘧啶诱发离体气管上皮损伤,检测气管干细胞增殖分化损伤重建过程中Wnt信号途径成员的时空表达变化.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-06/2007-06在沈阳医学院中心实验室完成.材料:清洁级2周龄Wistar大鼠18只,用于制备离体气管环.氟尿嘧啶由天津人民制药厂生产.方法:将镜下观察纤毛摆动情况良好的气管环分为两组:损伤组将气管环置于含12.5mg/L氟尿嘧啶的HamsF-12液中,作用12h后去除氟尿啼啶,换成新鲜的HamsF-12液继续培养,分别于3,6,12,24,48h取部分等量组织块.对照组用等体积HamsF-12液代替氟尿嘧啶,其余培养条件及取材时间同损伤组.主要观察指标:RT-PCR法检测气管上皮中Wnt-1、β-连环蛋白、T细胞因子、c-myc基因表达的变化.结果:氟尿嘧啶作用12h后,光镜下可见少数间隔分布、近于裸核的细胞,呈钉状位于基底膜上,前期实验己证明其为气管干细胞.RT-PCR结果显示,对照组气管上皮无Wnt-1和T细胞因子mRNA的表达,β-连环蛋白与c-myc mRNA轻度表达.损伤组经氟尿嘧啶作用后,可检测到Wnt-1 mRNA的表达,β-连环蛋白mRNA一时性轻度下降:Wnt-1、β-连环蛋白、T细胞因子、c-myc mRNA分别于去除氟尿嘧啶后3,6,12h达到高峰;24h后三者mRNA表达水平均下调:至48h Wnt-1 mRNA无表达,后三者mRNA少量表达.结论:在整个气管上皮重建过程中,Wntl、β-连环蛋白、T细胞因子和c-myc mRNA的表达变化基本遵循相似的规律,提示Wnt信号通路作为一个整体参与气管干细胞增殖分化过程的调控.